环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的 建立环磷酰胺致免疫低下模型,应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)细咆分化抗原CD69 /自然杀伤细胞G2D受体(NKG2D )和T淋巴细胞分化抗原CD69 /CD3 评价其免疫低下动物模型中的应用.方法 以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69 /NKG2D 和外周血T淋巴细胞CD69 /CD3 亚群,同时进行脾NK细胞活性测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细咆转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响.结果 环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和牌的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细咆转化增殖能力、脾NK细胞活性降低.结论 环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立长期免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

灵芝孢子粉增强免疫力模型的建立及流式细胞术检测的研究

目的:探讨环磷酰胺建立的免疫低下动物模型应用于保健食品增强免疫力检验的研究,并试图应用流式细胞术研究小鼠自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+和T淋巴细胞分化抗原CD69+/CD3+检测在免疫低下动物模型评价中的应用。方法:以环磷酰胺一次较大剂量造模、适时强化建立免疫低下模型,灌胃给予灵芝孢子粉,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+和外周血T淋巴细胞CD69+/CD3+亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果:灵芝孢子粉可使环磷酰胺降低的小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性增强。结论:灵芝孢子粉可有效增强小鼠细胞免疫功能,流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值。     

CD69+/NKG2D+比值在保健食品评价中应用

目的研究小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD 69+/NKG2D+检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用.方法以左旋咪唑25mg(kg·bw)连续灌胃3 d设立左旋咪唑阳性对照;进行小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+检测和脾NK细胞活性测定试验,观察0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉对小鼠NK细胞免疫功能的影响.结果与阴性对照组比较,左旋咪唑对照组和0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉剂量组外周血NK细胞CD69-/NKG2D+、CD69+/NKG2D+比值以及脾NK细胞活性均明显升高.结论外周血NK细胞CD69+/NKG2D+检测与传统的NK细胞免疫检测结果有较好一致性,且方法敏感性较好,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

乌龙茶多糖对糖尿病鼠免疫功能的影响

目的:研究乌龙茶多糖(OTPS)对糖尿病(DM)模型鼠免疫功能的影响。方法:以链脲佐菌素复制Balb/CDM小鼠和WistarDM大鼠模型,依据卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法,检测脏器/体重比值、迟发型变态反应(DTH)、半数溶血值(HC50)、腹腔巨噬细胞吞噬功能、自然杀伤细胞(NK)活性,血清IL-2,并用流式细胞仪(FCM)分析外周血免疫分子。结果:(1)OTPS能极显著提高DM小鼠NK细胞的活性,促进T细胞介导的DTH反应,增强巨噬细胞的吞噬功能以及提高血清HC50值,同时还能增加胸腺指数和脾指数。(2)FCM测试表明OTPS能降低DM鼠T淋巴细胞中毒性CD8T淋巴细胞比例,增加CD4T淋巴细胞,减少过度表达的NK细胞,降低活化的T淋巴细胞数量,从而减少IL-2的含量,纠正免疫功能紊乱现象。结论:OTPS对DM模型鼠有较好的免疫恢复功能。     

用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制动物模型

目的比较用环磷酰胺(CTX)诱导正常小鼠免疫抑制的两种方法,选择合适的免疫抑制动物模型以评价保健食品的安全性。方法以环磷酰胺为受试物,设立正常对照组、CTX-1组和CTX-2组;正常对照组每日灌胃蒸馏水,CTX-1组每日灌胃60mg/kg环磷酰胺,CTX-2组于试验结束前一天腹腔注射200mg/kg环磷酰胺,试验周期为30天。观察不同剂量及不同方式给予环磷酰胺后对小鼠各项免疫指标的影响。结果CTX-1组小鼠体重、脾脏重量、外周血淋巴细胞计数、NK细胞活性、细胞毒性T细胞活性、HC50均低于对照组(P0.05),CTX-2组小鼠外周血T淋巴细胞(%)、Th细胞(%)、Ts细胞(%)及Th/Ts比值较对照组增高(P0.001,P0.001,P0.05,P0.05,P0.001),其它各项指标均较对照组降低(P0.05)。结论灌胃给予60mg/kg环磷酰胺30天与一次性腹腔注射200mg/kg环磷酰胺均可建立小鼠免疫低下模型,但前者更适用于建立评价保健食品安全性的免疫低下模型。     

肺癌患者手术前后外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性分析及临床意义

目的探讨肺癌患者手术前后外周血Tc亚群及NK细胞活性检测意义。方法采用S·P法（链菌素亲生物素-过氧化物酶连接法）检测189例肺癌患者手术前、后外周血T淋巴细胞亚群（Tc）和自然杀伤细胞（NK）活性,并与50例健康对照组比较,同时根据TNM分期和病理类型不同的肺癌病人免疫功能的比较。结果与健康体检者比较,肺癌组外周血CD3^＋、CD4^＋、NK（CD（16＋57）^＋）百分率下降,CD4^＋／CD8^＋比较降低（P〈0．01）;CD8^＋百分率明显升高（P〈0．05）;T细胞亚群和NK细胞活性与肺癌的临床分期及病理学类型差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肺癌患者细胞免疫功能低下,检测患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性来监测患者的细胞免疫状态,为临床免疫辅助治疗及疾病诊断,预防估计提供参考依据。     

烹调烟雾职业暴露人群免疫功能的调查分析

目的：通过对烹调烟雾职业暴露人群外周血T、B淋巴细胞亚群分析、自然杀伤细胞（NK细胞）自然杀伤活性测定来了解烹调烟雾对机体免疫功能的影响。方法：利用直接荧光法,通过流式细胞仪分析了T细胞亚群、B淋巴细胞;采用MTT比色法检测NK细胞杀伤活性。结果：经成组t检验,暴露组CD3^ 细胞百分率、NK细胞杀伤率明显低于对照组,工龄7年以上被调查者中暴露组CD4^ CD8^-T细胞百分率、CD4^ /CD8^ 细胞比值明显低于对照组,而CD19^ 细胞百分率两组间差异无统计学意义;多因素逐步回归分析表明,暴露与否是影响CD3^ 细胞百分率、NK细胞杀伤活性的主要因素,同时CD3^ 细胞数还与工龄有关。结论：长期接触烹调烟雾对机体细胞免疫功能有一定抑制作用。     

蛹虫草对免疫低下小鼠红细胞免疫粘附能力影响

蛹虫草与天然冬虫夏草药理功效相似.研究表明,蛹虫草对特异性、非特异性免疫有明显增强作用[1].红细胞是非专职天然免疫细胞,在血循环中数量巨大.美国Siegel I[2]提出"红细胞免疫系统(RCIS)"新概念,认为红细胞是淋巴细胞活性调节器,通过调节红细胞免疫活性可改善T淋巴细胞活性,红细胞不但能免疫粘附酵母菌和肿瘤细胞,而且胞浆中具有含量丰富自然杀伤细胞(NK)增强因子(NKEF),可明显增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤[3].本研究以环磷酰胺为造模剂建立小鼠免疫功能低下模型,观察蛹虫草2种制剂对免疫功能低下小鼠红细胞免疫功能影响.     

CD+69/CD+3比值和左旋咪唑对照在评价保健食品免疫调节作用中的应用研究

〔目的〕研究左旋咪唑阳性对照和外周血T淋巴细胞CD 6 9 CD 3检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用。〔方法〕以左旋咪唑 ( 2 5mg kgbw)连续灌胃 3d的方法设立左旋咪唑阳性对照 ;进行外周血T淋巴细胞亚群CD 6 9 CD 3检测、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验、NK细胞活性测定、迟发型变态反应试验 ,观察低、中、高剂量 (分别为 3 .75、7.5 0、15 .0ml kgbw)参茸膏对小鼠细胞免疫功能的影响。〔结果〕与阴性对照组比较 ,左旋咪唑对照组各项试验指标均明显升高 ,参茸膏低、中剂量组T淋巴细胞转化增殖能力、各剂量组外周血T淋巴细胞CD 6 9 CD 3比值以及中剂量组迟发型变态反应能力均明显升高。〔结论〕左旋咪唑有明显增强小鼠细胞免疫功能的作用 ,可以作为保健食品免疫调节功能评价中的阳性对照 ;外周血T淋巴细胞CD 6 9 CD 3检测与传统的细胞免疫检测结果有较好一致性 ,且方法敏感性较好 ,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。     

流式细胞术在保健食品功能评价中的应用

目的 建立保健食品增强免疫力功能评价指标的流式细胞术检测方法,并初步评价其应用价值。方法 3种受试物蛋白粉、参茸膏和灵芝虫草菌丝体小鼠实验模型的实验剂量组均按人体推荐量的5、10、30倍进行灌胃,阴性及阳性对照组均给予等量纯净水,阳性对照组为给药结束前3d开始每天灌胃给予25mg／kg左旋咪唑,并于给药结束当天用2％绵羊红细胞进行免疫;大鼠实验模型采用拌饲法按人体推荐量的25、50倍给予受试物;实验结束后同步检测以下指标：（1）传统指标：包括刀豆素A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠脾自然杀伤（NK）细胞活性测定、绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。（2）流式细胞仪检测指标：小鼠外周血淋巴细胞计数,大、小鼠T、NK细胞表面活化抗原检测以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能。结果 给予受试物蛋白粉后,0．83、1．67、5．01g／kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞的相对比例和绝对数量与阴性对照组间差异无统计学意义;给予受试物参茸膏后,3．75、7．50和15．0ml／kg剂量组的小鼠外周血T淋巴细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,与其他传统检测指标有良好一致性;蛋白粉0．83、1．67g／kg剂量组小鼠外周血NK细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,且与NK细胞活性测定结果有良好一致性;给予1．50g／kg剂量灵芝虫草菌丝体的大鼠外周血NK细胞CD25表达阳性比例较阴性对照组升高;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验：传统检测方法未发现对照组与剂量组有明显差别,而流式细胞术检测结果显示：灵芝虫草菌丝体0．15、0．30和0．90g／kg剂量组总吞噬比例增加,0．30、0．90g／kg剂量组吞噬指数均提高。结论 应用流式细胞术检测保健食品增强免疫力功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性,且具有更高的敏感性,在检测和评价保健食品增强免疫力功能方面具有良好的应用价值,值得进一步研究和推广。     

建立小鼠免疫功能低下模型的研究

[目的]为满足保健食品功能评价体系的需要，建立一套抑制较浅、持续时间较长的免疫功能低下动物模型。[方法]采用一次给药，适时强化的方法建模，并用已通过审批的具有免疫调节作用的保健食品进行验证。分别进行血清溶血素检测、迟发型超敏反应、淋巴细胞增殖实验和NK细胞活性检测。[结果]血清溶血素和迟发型超敏反应组中，模型组小鼠的相应指标显著低于对照组，应用期给予保健食品的验证组，其受抑指标显著改善。模型组小鼠淋巴细胞增殖指标显著受抑，而验证组与模型组相比差异不明显。模型组小鼠NK细胞活性显著降低，验证组从造模第1天起给予保健食品，其NK细胞活性与模型组相比显著增高。[结论]采用合理的造模方法，可以建立一套适合保健食品评价体系需要的模型。     

卵巢癌细胞对CD8~+ T细胞活化分子CD69表达的影响

目的:探讨卵巢癌细胞对CD8+T细胞活化分子CD69表达的影响。方法:采用流式细胞术检测3株卵巢癌细胞(OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+T细胞表达早期活化分子CD69表达的百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ的水平。结果:与对照组比较,3株卵巢癌细胞培养上清液可对CD8+T细胞CD69的表达产生明显的抑制作用(F=29.90,P<0.01),CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平显著降低(F=16.31,P<0.01)。结论:卵巢癌细胞早期就能抑制CD8+T细胞的活化,CD69可作为评价免疫效应细胞功能的指标。     

Immunonutritional diet modulates natural killer cell activation and Th17 cell distribution in patients with gastric and esophageal cancer

Objective

Although randomized clinical trials have shown that immunonutrition results in the improvement of postoperative complications, the detailed mechanisms of its immunomodulation are still unclear. In the present study, we investigated if such immunonutrition could affect T-cell and natural killer (NK) cell functions, with particular focus on type 17 helper T (Th17) cells and NK cell-activating markers, in patients with esophageal and gastric cancer and in healthy volunteers.

Methods

Patients (n = 22) and healthy volunteers (n = 10) were orally administered an immunonutritional diet (Impact, 750 mL/d) in addition to a conventional diet for 5 d. The expression of NK cell-activation markers (NKG2D, CD16, CD107a, NKp30, NKp44, and NKp46), frequency of CD56^dim NK, Th17, and regulatory T cells, and trastuzumab-mediated antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity were analyzed before and after immunonutrition.

Results

Immunonutrition significantly enhanced antibody-dependent cell-mediated cytotoxic activity as an NK cell function, paralleling the upregulated expression of NKG2D and CD16 and increased frequency of CD56^dim NK cells. Furthermore, the immunonutrition significantly increased the frequency of Th17 cells.

Conclusion

Immunonutrition modulates NK and T-cell-mediated immunity.     

DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗对晚期卵巢癌患者疗效及血清CD133、DDX4水平的影响

目的:探讨DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌的临床疗效以及对患者血清CD133、DDX4水平的影响。方法:将60例晚期卵巢癌患者随机分为观察组(30例)和对照组(30例),对照组仅接受常规化疗,观察组采用化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗。比较两组患者的免疫功能、治疗效果、不良反应以及血清CD133、DDX4水平在治疗前后的变化情况。结果:观察组的客观缓解率(80.0%)高于对照组(50.0%);在治疗后和6个月随访时观察组CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+以及NK细胞的比值均高于对照组,CD4+CD25+、CD133、DDX4水平均低于对照组;且治疗前、治疗后、6个月随访后自身比较CD3+CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞比值均明显升高,CD133、DDX4水平均明显降低(均P<0.05);治疗后与6个月随访后免疫功能指标两组无差异(P>0.05),骨髓抑制和肝功能损害的发生率观察组低于对照组(P<0.05)。结论:应用DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌患者可提高临床治疗效果,增强患者免疫能力,更大幅度降低血清CD133、DDX4水平,减少不良反应的发生,值得临床探索应用。     

乳腺癌患者外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义

目的:检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞表达率的变化,探讨乳腺癌患者免疫状况与肿瘤分期的关系以及免疫指标变化在治疗前后的临床价值。方法 :采用荧光标记法与多参数流式细胞仪检测40例正常女性和120例乳腺癌患者的总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助/T诱导细胞(CD3+CD4+)、T抑制/细胞毒细胞(CD3+CD8+)、自然杀伤细胞(NK)、NK样T细胞(NKT)的表达率,并进行统计学分析。结果:无淋巴结转移组乳腺癌患者治疗前CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、CD4+/CD8+与对照组比较无统计学意义,NK、NKT显著低于对照组(P<0.05)。淋巴结转移组乳腺癌患者CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、NK、NKT表达率均明显低于对照组(P<0.05)。经过综合治疗后乳腺癌组各项免疫指标均恢复到正常值。结论:外周血T细胞亚群的检测对判断乳腺癌患者的病情、临床分期有一定意义;经过治疗后能够有效地改善乳腺癌患者的免疫状态。     

术后应用吲哚美辛栓对胃肠道肿瘤病人免疫功能的影响

目的:观察手术后应用吲哚美辛栓对胃肠道肿瘤病人免疫功能的影响. 方法:将42例胃癌和结肠癌病人随机分为吲哚美辛组(22例)和对照组(20例).两组病人行根治性手术治疗后24 h给予肠外营养支持7d.吲哚美辛组术后每24 h给予吲哚美辛栓100 mg,对照组给予安慰剂.分别测定治疗前后病人外周血淋巴细胞总数、T细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+、CD4+/CD8+比值)和NK细胞活性. 结果:两组病人术后第1天CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比值、外周血淋巴细胞总数和NK细胞活性较术前均有所下降.术后第8天两组病人CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值、外周血淋巴细胞总数和NK细胞活性均有所改善.两组间比较,吲哚美辛栓组术后免疫功能改善更为明显,各项指标均优于对照组(P＜0.05). 结论:胃肠道肿瘤病人术后应用吲哚美辛栓可改善细胞免疫功能.     

肺癌并发肺部感染患者外周血T淋巴细胞亚群水平研究

目的探讨肺癌并发肺部感染患者外周血T淋巴细胞亚群水平变化规律。方法选取2008年1月-2010年12月,在医院进行治疗的93例肺癌患者为研究对象,将其根据是否伴有肺部感染分为不伴有感染组(对照组)47例,伴有感染组(观察组)46例,将2组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK水平进行统计及比较。结果观察组的CD3+(60.82±5.96)%、CD4+(30.58±3.78)%、CD4+/CD8+(1.02±0.15)%、NK(19.20±5.97)%,对照组的CD3+(65.38±5.89)%、CD4+(37.85±3.69)%、CD4+/CD8+(1.43±0.18)%、NK(22.76±6.12)%,观察组均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组CD8+(29.75±2.66)%,对照组(25.76±2.58)%,观察组高于对照组差异有统计学意义(P<0.05),且不同分期患者中的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK水平均呈现这种规律。结论肺癌并发肺部感染患者免疫力更差,治疗过程中应引起重视。     

原发性肺部恶性肿瘤与COPD患者外周血淋巴细胞亚群和NK细胞水平测定的临床探讨

目的　探讨原发性肺部恶性肿瘤与慢性阻塞性肺部疾病 (COPD)患者外周血淋巴细胞亚群及NK细胞水平测定的临床价值。方法　应用单克隆抗体 -碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法 (APAAP法 )测定 60例COPD病人 ,5 0例原发性肺部恶性肿瘤病人和 40例正常对照组CD3 + ,CD4+ ,CD8+ ,CD19+ 及NK细胞的百分数 ,计算CD4+ /CD8+ 比值。结果　原发性肺部恶性肿瘤组、COPD组的CD3 + ,CD4+ ,CD4+ /CD8+ ,CD19+ 明显降低 ,而CD8明显增高 ,与对照组比较均有显著差异 (P <0 0 1) ;原发性肺部恶性肿瘤组的NK细胞的百分数降低 ,与对照组比较有显著差异 (P <0 0 1) ,COPD组NK表达与对照组比较无显著差异 (P >0 0 5 )。原发性肺部恶性肿瘤组与COPD组的CD3 + ,CD4+ ,CD8+ 均无明显差异 (P >0 0 5 ) ,而NK ,CD19+ 有差异 (P <0 0 1)。结论　原发性肺部恶性肿瘤组和COPD组存在细胞免疫功能紊乱和失调 ,临床上应不失时机的应用免疫调节剂     

雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响

目的：初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。方法：将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为空白（蒸馏水）对照组、纳米雄黄低中高剂量组,每天灌胃一次,分别在不同时间点采集血清和称重;在实验结束后,取外周淋巴结分离T细胞并体外培养;放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平;并计算各个观察点的小鼠死亡率。结果：雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长,差异有统计学意义（P〈0.05）;雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组,其中高剂量与低剂量比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化,从而减少抗ds-DNA抗体的分泌,减轻小鼠自身免疫反应损伤,延缓SLE疾病发展进程。