蟾酥适宜初加工方法研究

目的:通过评价不同的干燥方法对蟾酥药材质量的影响,确定蟾酥适宜初加工方法。方法:采用8种不同的干燥方法(17℃风干、60℃烘干、80℃烘干、105℃烘干、120℃烘干、阴干、晒干、冷冻干燥)处理鲜蟾酥样品,观察干蟾酥的外观色泽,同时利用HPLC对干蟾酥的沙蟾毒精、远华蟾毒精、蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基等指标进行测定。结果:热风干燥80℃以上能够显著降低蟾酥中沙蟾毒精的含量,同时随着温度升高,蟾酥颜色逐渐变深,但对远华蟾毒精、蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基没有显著影响。结论:综合考虑含量、外观色泽、加工效率等因素,蟾酥适宜初加工方法为60℃热风干燥,得到的干蟾酥质量好,加工效率也较高。     

温度、光照及pH对蟾酥提取液中指标成分稳定性的影响

目的:考察温度、光照及pH对蟾酥提取液中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺稳定性的影响。方法:采用HPLC测定蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量,检测波长296 nm,流动相乙腈-水(58∶42);利用UV测定蟾酥提取液中总蟾毒色胺的含量,检测波长559 nm。分别考察高温(60,40℃),强光照射[(4 500±500)Lx]及不同pH(40℃,pH分别为4.32,4.99,5.73,6.47,6.97,7.75)条件下蟾酥提取液放置0,5,10 d后华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺的含量变化。结果:60℃条件下放置10 d后3种指标成分降解率均5%;40℃及(4 500±500)Lx条件下华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的降解率均5%;总蟾毒色胺在上述条件下的降解率均5%。华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺分别在pH 5.73,6.47,6.47时降解最慢。结论:蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基受高温及强光照射的影响较小,总蟾毒色胺受高温及强光照射的影响较大;pH是影响蟾酥提取液中3种指标成分稳定性的主要因素,不同pH条件对3种指标成分的稳定性有不同程度的影响。     

产地对蟾酥药材质量的影响

目的: 建立蟾酥药材质量分析方法,并分析产地对其有效成分的影响。 方法: 以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基为对照,采用薄层色谱法和高效液相色谱法进行分析和含量测定。 结果: 不同产地蟾酥药材所含成分类型基本相似,但在成分含量上存在明显的差异,以脂蟾毒配基含量变化最为明显,其中产地山东的蟾酥的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量基本最高;成分差异在薄层色谱图谱中主要表现在斑点2(脂蟾毒配基)、斑点3(华蟾酥毒基)、斑点4、斑点6和斑点9上,在高效液相图谱中表现在3,4,6,7,8,9,14,15号峰上,且还可以看出7,8号峰的含量与14号(华蟾酥毒基)、15号(脂蟾毒配基)峰含量可能存在相关性。 结论: 不同产地蟾酥药材存在明显质量差异;本文方法稳定可行,重现性和专属性好,可用于蟾酥鉴别及质量分析。     

高效液相色谱法测定救心软胶囊中蟾酥的含量

目的建立救心软胶囊中蟾酥的主要成分华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),以C18为固定相,流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值为3.0)(45∶55),检测波长296nm。结果华蟾酥毒基和脂蟾毒配基与其他成分分离良好。华蟾酥毒基在进样量0~5.86μg(r=0.999 8),脂蟾毒配基在进样量0~5.88μg(r=0.999 97)线性关系良好,华蟾酥毒基和脂蟾毒配基加样回收率为99.81%,RSD为2.25。结论该法操作简便、准确、重现性好,可用于救心软胶囊中蟾酥的质量控制。     

蟾酥鲜浆中蟾毒配基类成分的动态变化规律探索

目的:研究蟾酥鲜浆在不同温度放置时蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基随放置时间延长的变化规律,以指导蟾酥的加工。方法:采用HPLC测定在常温、冷藏和冷冻条件下贮存不同时间的蟾酥鲜浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量。结果:常温和冷藏下贮存,3种成分的含量随放置时间的延长而升高,前24 h内升高的幅度较大,3种成分间的组成比例亦发生较大的变化。结论:蟾酥鲜浆加工成蟾酥前应先在常温下放置>24 h,再进行干燥加工。     

蟾酥中3种脂溶性有效成分提取工艺及含量测定方法

目的:优化蟾酥中脂溶性成分蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的提取工艺,并建立了测定蟾酥提取物中上述3种成分含量的HPLC方法。方法:以蟾酥中脂溶性成分蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基含量为指标,采用L9(34)正交试验对蟾酥提取工艺进行了优化;建立的HPLC法,Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(55:45),流速1.0mL.min-1,检测波长296 nm。结果:最佳提取工艺条件为A2B3C3D2,即75倍量95%乙醇80℃提取120 min;所建立的HPLC方法蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基均得到很好的分离,且重现性、精密度、线性关系良好,最小检测限分别为14.6,9.0,11.8ng.mL-1。结论:确定了蟾酥最佳提取条件,HPLC能准确测定蟾酥提取物中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的含量,方法简便,结果准确。     

产地对蟾酥鲜浆成分组成影响的研究

目的:研究不同产地蟾酥鲜浆中成分组成的差异,探讨蟾酥药材质量差异较大的原因。方法:采用高效液相色谱法测定不同产地的蟾酥鲜浆中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵3种蟾毒配基类成分的含量,比较不同产地蟾酥鲜浆液相色谱图谱的相似性。结果:不同产地蟾酥鲜浆中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵含量及三者之间的组成比例和液相色谱图谱有较大的差异。在不考虑加工过程对成分影响的前提下,只有山东、辽宁、安徽产的蟾酥符合《中国药典》的规定,且液相色谱图谱相似度较大。结论:不同产地的蟾酥鲜浆成分组成存在明显的差异,应完善蟾酥的质量控制体系,保证其用药的安全性和有效性。     

蟾皮药材质量标准研究

目的:对中药材蟾皮的水分、总灰分、酸不溶性灰分及有效成分等物质质量进行研究,建立蟾皮药材的质量标准。方法:按《中国药典》(2010年版)一部附录lX H中的烘干法测定水分、附录IX K灰分测定法测定灰分;采用薄层色谱法对蟾皮中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基进行定性鉴别;用高效液相色谱法对其有效成分进行含量测定。结果:蟾皮的水分含量平均为10.99%,总灰分含量平均为13.21%,酸不溶性灰分含量平均为4.58%。华蟾酥毒基和脂蟾毒配基分别在2.77～177.50μg.mL-1,1.68～107.50μg.mL-1范围内呈良好线性关系。结论:本研究为蟾皮药材标准的制订提供了参考。     

产地加工和炮制对蟾酥药材及饮片质量的影响

目的:评价不同干燥和炮制方法对蟾酥药材及饮片质量的影响.方法:每20 g鲜蟾酥分别采用下列干燥方法处理:105℃烘干,80℃烘干,60℃烘干,60℃减压干燥,冷冻干燥;同一干蟾酥药材采用酒制和乳制两种炮制方法制备相应饮片;HPLC法测定于蟾酥及其炮制品中5种吲哚生物碱和5种蟾毒配基的含量.结果:不同干燥方法得到的蟾酥5种生物碱总含量依次为17.57％ ±0.15％,20.01％ ±0.45％,19.99％ ±0.68％,19.85％ ±0.25％,20.12％ ±0.27％;5种蟾毒配基的总含量依次为19.91％ ±0.17％,20.20％ ±0.17％,19.96％ ±0.06％,20.24％ ±0.17％,21.05％ ±0.13％.炮制前、酒制和乳制后蟾酥中吲哚生物碱总含量分别为15.62％ ±0.29％,15.77％ ±0.24％,15.78％ ±0.27％;蟾毒配基总含量分别为20.69％±0.17％,20.74％±0.09％,22.12％ ±0.21％.结论:根据成分含量和样品外观色泽,冷冻干燥是最优的干燥方式;但综合考虑产地加工的相关因素(时间、成本和操作便利性等),60～80℃烘干也是一种经济实用的选择;酒制和乳制对蟾酥中5种吲哚生物碱和5种蟾毒配基类成分的含量基本无影响.     

不同品种及产地蟾皮中抗肿瘤活性成分含量比较

目的:对不同品种及不同产地蟾皮中所含抗肿瘤脂溶性活性成分酯蟾毒配基、华蟾酥毒基以及水溶性活性成分吲哚类生物碱的含量进行比较。方法:应用HPLC法测定广西、湖南、陕西产黑眶蟾蜍,江苏、安徽、河北、山东产中华大蟾蜍蟾皮中酯蟾毒配基、华蟾酥毒基的含量,并采用分光光度法,以5-羟色胺盐酸盐为对照测定其所含吲哚类生物碱的含量。结果:山东产蟾皮中酯蟾毒配基、华蟾酥毒基未检测到,其余6个产地蟾皮中酯蟾毒配基、华蟾酥毒基的含量分别在0.0612-0.5760、0.1163-0.4950mg/g,其中河北产蟾皮中酯蟾毒配基含量最高,江苏产蟾皮中华蟾酥毒基含量最高。7个产地蟾皮中吲哚类生物碱含量在0.5150-1.300mg/g,其中江苏产蟾皮中吲哚类生物碱含量最高,河北产含量最低。结论:不同品种蟾皮差异不大,但不同产地蟾皮中抗肿瘤活性成分的含量存在较大差异,因此在研发以蟾皮为主药的抗肿瘤制剂时,应建立蟾皮药材的质量控制标准,以保证制剂的质量。     

引种紫锥菊干燥方法的研究

目的:研究引种紫锥菊药材的最佳干燥方法。方法:分别采用晒干、阴干、烘干的方法对紫锥菊药材进行干燥,比较不同干燥方法处理的紫锥菊植株内菊苣酸和总多酚含量。结果:不同干燥方法对菊苣酸含量影响最大的为叶;地上部位中菊苣酸和总多酚含量从高到低均为:晒干>阴干>烘干;根部以阴干法菊苣酸含量最高。结论:为有效成分最大提取量与成本最低化,建议药材分为地上与地下两部分别干燥处理,并且地上部分采用晒干法,地下部分采用阴干法。     

蟾酥缓释注射液的制备及其局部麻醉作用研究

目的以泊洛沙姆407作为载体材料制备蟾酥缓释注射液,并评价其在体内局部麻醉作用效果。方法采用冷溶法制备蟾酥缓释注射液,以胶凝温度为指标筛选蟾酥缓释注射液最佳处方,采用豚鼠皮丘模型比较蟾酥缓释注射液和蟾酥溶液局部麻醉作用时间。结果蟾酥缓释注射液的最佳处方是泊洛沙姆407 15.5%、乙醇10%、蟾酥提取物0.5%,胶凝温度在33℃,体内局部麻醉作用时间可达6～7 h,而蟾酥溶液麻醉作用时间仅为2～3 h。结论蟾酥缓释注射液是一种长效制剂。     

蟾酥逆转大肠埃希菌耐药性的研究

目的：探讨蟾酥对耐药大肠埃希菌的体外抗菌效果及其逆转细菌耐药的部分机理。方法：分别检测水提蟾酥和醇提蟾酥对耐药大肠埃希菌的最小抑菌浓度（MIC）,采用PCR方法分别检测与低于一个MIC浓度梯度的水提蟾酥和醇提蟾酥作用前、作用1、5、10天的耐药大肠埃希菌耐药基因（TEM、SHV、DHA、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、OXA-2、OXA-10、oprD2）,同时采用RT-PCR方法检测阳性耐药基因mRNA的表达情况。结果：水提蟾酥和醇提蟾酥对耐药大肠埃希菌的最小抑菌浓度分别为1：4,1：8,耐药大肠埃希菌的TEM和CTX-M-9基因在蟾酥作用前后均为阳性,其余耐药基因在蟾酥作用前后均为阴性,蟾酥作用前及作用1天后,耐药大肠埃希菌的TEM和CTX-M-9的mRNA为阳性,而作用5天后,TEM和CTX-M-9的mRNA检测阴性。结论：耐药大肠埃希菌携带多种耐药基因,蟾酥具有逆转耐药大肠埃希菌的耐药性,其逆转机理可能与其抑制耐药基因表达有关。     

基于射干鲜药材的产地初加工工艺研究△

目的：研究不同干燥方式对射干有效成分含量的影响,确定最佳干燥方式,为建立射干鲜药材的产地初加工工艺提供依据。方法：采用HPLC法测定射干中次野鸢尾黄素的含量,对采收期的射干鲜药材进行晒干、阴干、55℃、85℃、105℃烘干5种干燥方式处理,比较不同干燥方式对指标成分含量的影响,确定射干最佳初加工工艺。结果：晒干、阴干样品中有效成分含量较鲜药材有所下降,晒干样品含量降低了27％,阴干样品含量降低了9％;三种烘干方式对射干中次野鸢尾黄素含量的影响较小,其中以105℃烘干2h效果为最佳,85℃次之。结论：研究表明105℃烘干2h为射干最佳干燥方式;不同干燥方式对射干中次野鸢尾黄素的含量有较大影响,为最大程度保留鲜药材有效成分及进一步探讨药材指标成分在不同初加工过程中的降解规律提供参考依据。     

高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析蟾酥有效成分

 目的采用高效液相色谱-高分辨电喷雾飞行时间质谱(HPLC-DAD/ESI-TOF-MS)联用技术,对蟾酥中的部分有效成分进行初步分析,探讨HPLC-DAD/ESI-TOF-MS联用技术作为蟾酥质量控制方法的可行性。方法采用Agilent C₁₈色谱柱,以乙腈和水(含体积比0.1%醋酸)为流动相,采用梯度洗脱,流速为0.8mL·min^-1,室温,DAD检测器检测波长为291nm,ESI-TOF-MS采用正离子模式。通过HPLC-ESI-TOF-MS在线测定部分化合物的精确分子量,结合文献报道,对蟾酥毒素进行鉴别。结果结合文献报道,在色谱峰当中对12个主要色谱峰进行鉴定。结论高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用技术是蟾酥质量控制的有效方法。     

博落回药材采收及初加工工艺研究△

目的：确定博落回根、叶、果的最佳采收期及最佳产地初加工工艺。方法：采用RP．HPLC法同时测定各指标成分的含量。结果：实验数据表明博落回根、叶、果的最佳采收期分别为5月下旬、6月及8月下旬至9月上旬,从综合利用资源的角度出发,可在采集叶、果后再采收根。除博落回根外,不同干燥方式处理的博落回叶、果中各指标成分的含量无明显差异。结论：本研究表明博落回根、叶、果的最佳产地初加工工艺流程：最佳或适宜采收期采摘→净选→清洗或擦净→根、果荚45℃～65℃烘干、晒干,叶45℃烘干、阴干、晒干。     

商品全瓜蒌的干燥加工试验

目的确定商品全瓜蒌的最佳干燥加工方法。方法分别采用阴干法、烘箱干燥法、烘房烘干法和煤炉烘烤法等对瓜蒌进行干燥加工,并考察干燥后瓜蒌的色泽、性状,水分、灰分和重金属含量指标。结果烘房烘干法的瓜蒌色泽最好,水分、灰分和重金属含量最低。结论烘房烘干法是方便、快速加工商品全瓜蒌的方法。     

蟾酥镇痛膏中蟾酥的提取工艺探索

目的：探索蟾酥镇痛膏中蟾酥最佳提取工艺。方法：采用理化鉴别和薄层色谱鉴别法对提取后的蟾酥残渣进行检查。结果：蟾酥最佳提取工艺为采用90％、80％乙醇依次提取。结论：蟾酥采用90％、80％乙醇依次提取，有效成分提取完全，提取工艺合理。     

蟾酥凝胶贴膏成型工艺的研究

目的:以蟾酥制备外用止痛的蟾酥凝胶贴膏,通过对蟾酥凝胶贴膏的空白基质进行优选,从而确定最佳的空白基质配比;对蟾酥凝胶贴膏中蟾酥的加入量进行考察,确定其最佳的载药量。方法:通过预试验确定蟾酥凝胶贴膏的基质组成,该凝胶贴膏的基质配方组成采用正交试验法进行优选,将剥离强度作为蟾酥凝胶贴膏的主要考察指标,将膏体的涂展性作为辅助的观察指标。在保证凝胶贴膏成型性良好的前提下,以每贴基质中蟾酥的最大含量作为该凝胶贴膏的载药量。结果:混合保湿剂组成为甘油-丙二醇(13∶1),基质配方确定为混合保湿剂、水、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、卡波姆,其比例为4.0∶3.0∶0.4∶0.1∶0.2∶0.25,在pH值为8时制备的蟾酥凝胶贴膏各种指标均较好。蟾酥凝胶贴膏载药量定为每贴50 mg。结论:确定的蟾酥凝胶贴膏基质配方和载药量制成的凝胶贴膏成型性和黏附性较好,载药量大,工艺合理可行,能适合生产的需要。     

不同干燥方法对栀子中主要有效成分含量的影响

目的:比较不同干燥方法对栀子中主要有效成分的影响。方法:采用高效液相色谱法测定栀子各干燥品中栀子苷、绿原酸、西红花苷Ⅰ的含量,以其为指标,对4种不同干燥方法进行考察。结果:采用烘干、真空干燥、微波干燥、晒干后栀子中栀子苷含量分别为5.49%、6.05%、4.36%、2.45%;绿原酸含量分别为0.0307%、0.0444%、0.0232%、0.00884%;西红花苷Ⅰ的含量分别为0.923%、1.23%、0.635%、0.507%。结论:4种干燥方法加工的栀子中主要有效成分的含量差异较大,其中50℃真空干燥方法最佳。