阿霉素损伤心肌细胞miRNA378＊与calumenin、GRP78、bax及bcl-2相关性研究

目的:研究阿霉素损伤心肌细胞miRNA378*与网腔钙结合蛋白(calumenin)、内质网应激伴侣蛋白GRP78、凋亡因子bax及bcl-2相关性。方法:实验分6组:对照组、阿霉素组、miRNA378*过表达对照组、miRNA378*过表达组、miRNA378*沉默对照组、miRNA378*沉默组。原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378*、calumenin、GRP78、bax及bcl-2mRNA表达。结果:1与对照组相比较,阿霉素组心肌细胞calumenin mRNA表达明显减少(P0.01),GRP78 mRNA表达增加(P0.01),bax mRNA表达增加(P0.01),bcl-2mRNA表达明显减少(P0.01)。2与阿霉素组相比较,miRNA378*过表达组心肌细胞calumenin mRNA表达增加(P0.01),bcl-2mRNA表达增加(P0.01),而GRP78mRNA表达减少(P0.01),bax mRNA表达减少(P0.01)。与阿霉素组相比较,miRNA378*沉默组GRP78、bax mRNA表达增加(P0.01),bcl-2mRNA表达减少(P0.01)。结论:阿霉素损伤可能引起心肌细胞calumenin表达减少进而发生内质网应激;上调miRNA378*表达会增加阿霉素损伤心肌细胞calumenin表达缓解内质网应激,进而抑制心肌细胞凋亡;而沉默miRNA378加重阿霉素损伤心肌细胞内质网应激及促进心肌细胞凋亡。     

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内质网应激及促凋亡信号因子作用

目的:研究黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94及促凋亡信号分子JNK、p-JNK、Caspase 12表达的影响。方法:实验分3组,对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞+柯萨奇B3病毒)、黄芪总黄酮组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+黄芪总黄酮)。采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心肌细胞α-SMA蛋白,采用Western blotting技术检测各组心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94、p-JNK、JNK及Caspase 12表达。结果:1与对照组比较,柯萨奇B3病毒感染组心肌细胞GRP78、GRP94表达增多(P0.01),黄芪总黄酮组心肌细胞GRP78、GRP94表达减少(P0.01)。与对照组比较,柯萨奇B3病毒感染组心肌细胞p-JNK及Caspase 12表达增多(P0.01),黄芪总黄酮组心肌细胞p-JNK及Caspase 12表达减少(P0.01)。各组心肌细胞JNK表达无差异(P0.05)。结论:柯萨奇B3病毒可引发心肌细胞内质网应激,并使促凋亡信号分子p-JNK、Caspase 12表达增多,引发心肌细胞凋亡;黄芪总黄酮抑制柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内质网应激,并抑制心肌细胞凋亡,该实验结果可能是其对病毒性心肌炎的作用机制之一。     

黄芪总黄酮通过抑制内质网应激对小鼠病毒性心肌炎保护作用的实验研究

目的:探讨黄芪总黄酮对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞内质网应激凋亡的作用。方法:将60只雄性Balb/c小鼠均分为病毒性心肌炎组、正常组及黄芪总黄酮组。病毒性心肌炎组与黄芪总黄酮组腹腔内无菌注射含0.1ml 10-9 50TCIDCVB3,正常组不注射CVB3病毒。黄芪总黄酮组小鼠每日腹腔注射20mg·L-1黄芪总黄酮0.2ml,观察小鼠的一般情况,7d时行血流动力学检查后处死取心脏标本,用TUNEL法检测各组小鼠心肌细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组小鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平。结果:1与正常组相比,病毒性心肌炎组小鼠血流动力学指标明显降低(P0.05);与病毒性心肌炎组小鼠相比,黄芪总黄酮组小鼠血流动力学指标有显著改善(P0.05)。2TUNEL染色显示,与正常组相比,病毒性心肌炎组小鼠心肌细胞凋亡明显增多(P0.05);与病毒性心肌炎组小鼠相比,黄芪总黄酮组小鼠心肌细胞凋亡显著减少(P0.05)。3与正常组相比,病毒性心肌炎组小鼠内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平均明显升高(均P0.05),且其变化趋势与心肌细胞凋亡数相似;与病毒性心肌炎组小鼠相比,黄芪总黄酮组小鼠内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平明显下降(均P0.05)。结论:黄芪总黄酮对病毒性心肌炎心力衰竭小鼠内质网应激介导的心肌细胞凋亡有保护作用,这可能是黄芪总黄酮改善病毒性心肌炎心力衰竭小鼠血流动力学的作用机制之一。     

阿霉素诱导的扩张型心肌病大鼠心律失常与内质网应激相关性研究

目的:研究阿霉素诱导的扩张型心肌病大鼠心律失常与内质网应激的关系。方法:30只Wister雄性大鼠分为对照组、阿霉素模型组(模型组),每组15只,对照组腹腔注射0.9%Nacl(10ml/kg),共3次(每周1次);模型组腹腔注射阿霉素2mg/kg,共注射3次(每周1次)。7周末2组大鼠行心电图检测心律失常发生率及心脏彩超检测左室舒张末径及左心室射血分数,2组大鼠处死后取左心室组织行苏木精-伊红、masson、VG染色,观察心肌病理改变,采用real time PCR及Western blotting技术检测2组大鼠心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78,GRP94表达。结果:与对照组大鼠比较,模型组大鼠心律失常发生率增多(P0.05),心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78,GRP94表达明显增多(P0.01)。结论:阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心律失常发生可能与心肌细胞内质网应激相关。     

磷酸肌酸钠对慢病毒介导Calumenin蛋白沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激信号通路的作用

目的:探讨磷酸肌酸钠对网腔钙结合蛋白(Calumenin)沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激信号通路作用。方法:培养乳鼠心肌细胞,构建稳定的慢病毒——Calumenin质粒,转染乳鼠培养心肌细胞,实验分为4组:对照组(正常细胞+3mg/L阿霉素)、模型组(慢病毒感染细胞+3mg/L阿霉素)、磷酸肌酸钠1组(正常细胞+阿霉素+磷酸肌酸钠)、磷酸肌酸钠2组(转染细胞+阿霉素+磷酸肌酸钠)。采用Western blotting技术检测各组心肌细胞Calumenin蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、PATF-4PERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达。结果:1与对照组比较,模型组及磷酸肌酸钠2组心肌细胞Calumenin蛋白表达明显减少(P0.01)。2与对照组相比,模型组内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PPERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达明显增多(P0.01)。3与模型组相比较,磷酸肌酸钠1组及磷酸肌酸钠2组内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子P-PERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达减少(P0.01)。结论:阿霉素损伤可能诱发ERS,并通过ERS凋亡信号通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF-4→CHOP/IRE1→CHOP引起心肌细胞凋亡;磷酸肌酸钠可抑制阿霉素损伤所诱导内质网应激介导的心肌细胞凋亡,这一作用机制可能是通过Calumenin蛋白抑制ERS及其凋亡信号通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF-4→CHOP/IRE1→CHOP实现的。     

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织连接蛋白43表达的影响

目的探讨黄芪总黄酮（TFA）对柯萨奇B3病毒性心肌炎（VMC）小鼠急性期心肌组织连接蛋白43（Cx43）表达的影响。方法Balb／c小鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒感染建立VMC小鼠模型,给予TFA40mg／L灌胃治疗,第14天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏。免疫组织化学法检测Cx43蛋白水平表达,并进行定量分析。结果①VMC组小鼠心室肌组织炎症病灶中变性、坏死周围心肌细胞Cx43表达明显减弱,甚至阴性,分布不规则,Cx43蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。@TFA组Cx43蛋白表达明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论VMC心肌炎小鼠急性期心肌组织Cx43蛋白表达下降。TFA能明显提高CVB心肌炎小鼠急性期心肌组织Cx43蛋白表达。     

氧化应激对乳鼠心肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号传导通路作用的研究

目的:研究氧化应激对原代培养乳鼠心房肌细胞网腔钙结合蛋白(calumenin)、内质网应激及信号传导通路作用,探讨氧化应激与心房肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激及其凋亡信号传导通路相关性。方法:实验分2组:对照组和氧化应激组。原代培养乳鼠心房肌细胞,氧化应激组在培养的原代心房肌细胞中加入终浓度为100μmol/L的H2O2培养2h,检测氧化和抗氧化指标的变化。ELASE法检测2组心房肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)含量。Western bloting检测2组心房肌细胞GRP78、GRP94、chop、IRE1及caspase-3、caspase-9、caspase-12表达。结果:1与对照组比较,氧化应激组心房肌细胞SOD活力下降,GSH含量下降,MDA含量增加(P0.01)。2与对照组比较,氧化应激组心房肌细胞calumenin表达减少(P0.01),而GRP78、GRP94、chop、IRE1及caspase-3、caspase-9、caspase-12表达增加(P0.01)。结论:氧化应激反应能引起心房肌细胞calumenin表达减少,这可能介导心房肌细胞内质网应激反应并激活其凋亡信号传导通路表达,导致心房肌细胞凋亡,参与心房结构重构引发房颤。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 在大鼠心肌细胞系H9c2中,观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激及其特异的凋亡分子表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ(AgⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的内质网应激机制.方法 H9c2在CO2孵箱37 ℃常规培养,同步化后进行实验.细胞分为4组.正常对照组.AgⅡ组:10-6 mol/L的AgⅡ孵育48 h.AgⅡ+0.5 μg/mL TSA组同时加入10-6 mol/L的AgⅡ和0.5 μg/mL TSA培养48 h.AgⅡ+1 μg/mL TSA组同时加入10-6 mol/L的AgⅡ和1 μg/mL TSA培养48 h.培养结束,收集细胞进行Hoechst染色检测细胞凋亡的发生,实时荧光定量PCR测定GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA的表达.结果浓度为1 μg/mL TSA可以显著抑制AgⅡ诱导的细胞凋亡(P<0.01).内质网应激通路分子GRP78、CHOP mRNA在给以AgⅡ培养48 h表达较正常培养细胞显著增加,而同时给以0.5 μg/mL TSA可以抑制表达增加(P<0.05),当TSA为1 μg/mL时,抑制作用更明显(P<0.01).结论 TSA可以抑制AgⅡ诱导的心肌细胞系H9c2的凋亡,以及AgⅡ诱导的GRP78,CHOP mRNA表达的增加.     

脂联素依赖p38-MAPK途径抑制衣霉素诱导的内质网应激致心肌细胞凋亡

目的通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立衣霉素心肌细胞内质网应激损伤模型,观察脂联素对心肌细胞内质网应激致细胞凋亡的作用及其机制。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定。选用原代培养3～4天的心肌细胞,随机分为五组:对照组、1 mg/L衣霉素组、1 mg/L衣霉素+100 mg/L脂联素组、1 mg/L衣霉素+3μmol/LSB203580组及1 mg/L衣霉素+3μmol/L SB203580+100 mg/L脂联素组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,通过流式细胞术检测心肌细胞凋亡,用qRT-PCR及免疫荧光法检测内质网应激指标GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,给予衣霉素后,细胞凋亡率显著增加,GRP78和CHOP的mR-NA及蛋白表达增加。脂联素预处理后给予衣霉素,可较大程度地逆转上述指标变化,细胞凋亡率显著下降,GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达减少;而加用p38-MAPK抑制剂SB203580后脂联素的保护作用明显减弱,凋亡率显著增加,GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达增高,但较单纯衣霉素处理组凋亡率低,GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达也减少。结论衣霉素可使GRP78和CHOP表达增强,启动内质网应激,导致心肌细胞凋亡,脂联素可以通过减轻内质网应激逆转衣霉素所致的心肌细胞凋亡作用,对心肌细胞有保护作用,且这种保护作用部分是通过p38-MAPK途径实现的。     

柯萨奇B病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织微小RNA1初始体和连接蛋白43的表达

目的观察柯萨奇B病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织微小RNA1初始体(pri-miRNA-1)和连接蛋白43(Cx43)表达变化,探讨病毒性心肌炎(VMC)室性心律失常发生机制。方法40只4周龄雄性Balb/c小鼠随机分为VMC组(n=20)和对照组(n=20)。VMC组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)Nancy株悬液0.1ml,对照组小鼠腹腔注射不含病毒的RPMI1640培养基0.1ml,分别于接种病毒后第14天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心室肌组织pri-miRNA-1的表达,免疫组织化学法检测Cx43蛋白水平表达,并进行半定量分析。结果①VMC组小鼠心室肌组织pri-miRNA-1表达量明显高于对照组(0.82±0.04vs0.63±0.07,P(0.01);②VMC组小鼠心室肌组织炎症病灶中变性、坏死周围心肌细胞Cx43表达明显减弱,甚至阴性,分布不规则,Cx43蛋白表达明显低于对照组(0.27±0.01vs0.42±0.02,P(0.01);③VMC组小鼠心室肌组织的pri-miRNA-1表达量与Cx43蛋白水平呈显著负相关(r=-0.868,P(0.01)。结论CVB心肌炎小鼠急性期心肌组织pri-miRNA-1表达上调,Cx43蛋白表达下降,miRNA-1可能通过抑制Cx43表达促进室性心律失常的发生。     

miRNA378*对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用

目的:探讨上调miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用。方法:实验分4组:对照组(正常细胞)、CVB3感染组(正常细胞+CVB3)、miRNA378*过表达对照组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*空表达质粒)、miRNA378*过表达组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*过表达质粒)。原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,除对照组外,其他各组心肌细胞感染CVB3,采用TUNEL技术检测各组心肌细胞凋亡率;用Western blotting技术检测各组心肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达。结果:与CVB3感染组比较,miRNA378*过表达组心肌细胞凋亡率明显减少,网腔钙结合蛋白表达增加,而GRP78、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达均减少(均P0.01),PERK表达差异无统计学意义。结论:上调CVB3感染心肌细胞miRNA378*表达可引起心肌细胞凋亡减少,网腔钙结合蛋白表达增多,进而缓解内质网应激,并抑制内质网应激凋亡信号通路因子表达。     

碱性成纤维细胞生长因子对柯萨奇病毒B3性心肌炎小鼠心肌氧化应激的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对柯萨奇病毒B_3(CVB_3)所致病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌氧化应激的影响。方法雄性Balb/c小鼠通过腹腔接种CVB_3复制VMC模型。75只雄性Balb/c小鼠随机分为5组(每组15只):正常对照组、VMC组及bFGF低、中、高剂量干预组(bFGF给药采用肌肉注射,bFGF低、中、高剂量干预组的bFGF剂量分别为1 000.0、2 000.0、4 000.0 IU·kg~(-1),1次/d,共6次;bFGF的首次给药为腹腔接种CVB_3的同时肌肉注射bFGF)。于腹腔接种CVB_3后第7天处死小鼠。用光镜观察心肌组织的病理变化;用分光光度法测定心肌组织的超氧阴离子(O_2~-)、过氧化氢(H_2O_2)、羟自由基(·OH)、丙二醛(MDA)含量;用酶联免疫吸附法测定心肌组织的金属硫蛋白(MT)含量及血清的心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量;用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应方法检测心肌组织的MT-ⅠmRNA、MT-ⅡmRNA表达。结果 VMC组心肌组织的O_2~-、H_2O_2、·OH、MDA含量及病理积分、血清cTnI含量明显高于正常对照组(P0.01),心肌组织MT-ⅠmRNA、MT-ⅡmRNA表达水平及MT含量明显低于正常对照组(P0.01);bFGF低、中、高剂量3个干预组心肌组织的O_2~-、H_2O_2、·OH、MDA含量及病理积分、血清cTnI含量明显低于VMC组(P0.01),心肌组织MT-I mRNA、MT-ⅡmRNA表达水平及MT含量明显高于VMC组(P0.01),且与bFGF的剂量呈量效关系。结论 bFGF抑制CVB_3导致心肌氧化应激而减轻CVB_3对心肌的损伤,与其拮抗CVB_3抑制心肌合成MT而增加心肌清除O_2~-、H_2O_2、·OH的能力有关。     

柯萨奇病毒B3感染培养大鼠心室肌细胞L-型钙通道mRNA表达的变化

目的:观察柯萨奇病毒B3感染对培养大鼠心室肌细胞L-型钙通道mRNA表达的影响。方法:用柯萨奇病毒B3感染原代培养新生大鼠心室肌细胞,合成大鼠心室肌细胞L-型钙通道各亚单位引物,通过逆转录-聚合酶链反应技术,以β-actin为内参照,测量钙通道各亚单位mRNA表达量在病毒感染前后的变化。结果:病毒感染组心室肌细胞L-型钙通道α_1(4.00±0.07 vs 2.21±0.41,p<0.01),β(2.06±0.06 vs 1.22±0.30,p<0.05)亚单位mRNA表达量较正常对照组显著增加,而α2/δ(4.12±0.19 vs 4.13±0.27,P>0.05)亚单位mRNA表达量变化无统计学意义。结论:柯萨奇病毒B3感染心室肌细胞钙通道mRNA表达量增加,可能是病毒介导心室肌细胞L-型钙电流变化的分子基础。     

白细胞介素-22对高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激的影响

目的观察IL-22对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠主动脉内质网应激的影响。方法 24只健康雄性ApoE~(-/-)小鼠(8周龄)被随机分为对照(Control)组、高脂(HF)组、HF+IL-22组,每组8只。Control组给予普通饲料,另外2组给予高脂饲料喂养12周。HF+IL-22组同时腹腔注射用PBS(含5%海藻糖)稀释的重组小鼠白细胞介素(rmIL-22)溶液0.1 mL/d,浓度200 ng/mL,其余小鼠腹腔注射等量的PBS溶液(含5%海藻糖)。实验12周后,检测各组小鼠血脂水平、主动脉内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白(GRP) 78、GRP94、C/EBP同源蛋白(CHOP)]mRNA及GRP78蛋白的表达水平。结果与Control组相比,HF组TC、HDL-C、TG和LDL-C水平显著升高(P0.05),GRP78、GRP94和CHOP的mRNA表达量亦显著升高(P0.05),GRP78蛋白表达量也显著升高(P0.01); HF+IL-22组较HF组TC和LDL-C水平显著降低(P0.05),GRP78、GRP94的mRNA表达量显著降低(P0.001),GRP78蛋白表达量也显著降低(P0.05),且HF+IL-22组较Control组LDL-C、TC、TG、HDL-C水平增高,GPP78、CHOP mRNA、GRP78蛋白表达增高,GRP94 mRNA水平降低(P0.05)。结论 IL-22能够改善高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激。     

丹参酮ⅡA对兔动脉粥样硬化病灶凋亡相关基因表达的影响

目的差异筛选丹参酮ⅡA诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡相关基因葡萄糖调节蛋白78(GRP78),观察其在动脉粥样硬化(AS)病灶中的表达情况,探讨丹参酮ⅡA抗AS的可能机制。方法建立同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度丹参酮ⅡA共同培养48 h后,MTT法检测细胞增殖能力;RT-PCR筛选差异基因片段,克隆、鉴定、测序,组织原位杂交观察该基因在正常及AS病变组织中的表达水平。结果不同浓度的丹参酮ⅡA都可抑制HCY所诱导的VSMC增殖;筛选出全长648 bp的基因片段与兔GRP78基因高度同源,组织原位杂交显示该基因在AS病灶VSMC胞质中高表达。结论 GRP78基因参与AS病变形成,上调其表达可能是丹参酮ⅡA诱导VSMC凋亡作用机制之一。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对缺血性心肌病心力衰竭患者血浆脑钠肽的影响

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠治疗缺血性心肌痛心力衰竭的疗效及血浆脑钠肽(BNP)的变化.方法 缺血性心肌痛心力衰竭患者60例,随机分为常规治疗组(对照组)和丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组(治疗组),各30例.治疗前后分别用ELISA法检测血浆脑钠肽(BNP)浓度.结果 治疗后两组BNP水平均下降,但治疗组血清BNP水平较对照组下降更显著(P<0.01).结论 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可改善缺血性心肌痛心力衰竭患者心功能,降低BNP浓度.     

内源性硫化氢对柯萨奇病毒B3性心肌炎小鼠心肌内病毒复制的影响

目的 观察内源性硫化氢(H2S)对柯萨奇病毒B3(CVB3)所致病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌内病毒复制的影响,探讨内源性H2S在VMC发病机理中的作用.方法 雄性Balb/c小鼠通过腹腔接种CVB3复制VMC模型.75只雄性Balb/c小鼠随机分为5组(每组15只):正常对照组、VMC组及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)不可逆抑制剂-炔丙基甘氨酸(PAG)低、中、高剂量干预组(PAG给药采用皮下注射,PAG低、中、高剂量干预组的PAG剂量分别为:20.0、40.0、80.0 mg·kg-1,1次/d,共6次.PAG的首次给药为腹腔接种CVB3的同时皮下注射PAG).于腹腔接种CVB3后第7天处死小鼠.用光镜观察心肌组织的病理变化;用分光光度法测定心肌组织的H2S含量;用酶免疫吸附法测定心肌组织的CSE活性及血清的心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量;用逆转录-聚合酶链反应方法检测心肌组织CVB3mRNA表达.结果 VMC组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于正常对照组(P﹤0.01),心肌组织的病理积分、CVB3mRNA表达水平及血清的cTnⅠ含量明显高于正常对照组(P﹤0.01);PAG低、中、高剂量3个干预组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于VMC组(P﹤0.01),心肌组织的病理积分、CVB3mRNA表达水平及血清的cTnⅠ含量明显高于VMC组(P﹤0.01).结论 心肌内源性H2S能抑制CVB3在心肌内复制.     

尾加压素Ⅱ对大鼠心肌细胞氧化应激/内质网应激及其相关信号通路的影响

目的:探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对心肌细胞氧化应激(OS)/内质网应激(ERS)及其相关信号通路的影响。方法:本实验将原代培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞随机分为四组:正常对照组、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸预处理组(NAC 100μmol/L,NAC组)、UⅡ组(UⅡ100 nmol/L)和UⅡ+NAC组(UⅡ100 nmol/L+NAC100μmol/L)。采用2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作为探针检测各组心肌细胞内活性氧(ROS)的水平。通过实时荧光定量PCR (qRTPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组内质网应激的标志性因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活性转录因子6(ATF6)、细胞凋亡信号分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达情况,观察UⅡ对氧化应激及心肌细胞内质网应激信号通路的作用。结果:UⅡ组心肌细胞中ROS表达水平较UⅡ+NAC组、正常对照组、NAC组明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。qRT-PCR、Western blot结果显示,UⅡ组中ATF6、GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA及蛋白表达量均较UⅡ+NAC组、正常对照组、NAC组明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论:UⅡ可以诱导心肌细胞氧化应激及内质网应激的激活,而抗氧化剂预处理可以明显减轻UⅡ诱导的氧化应激、内质网应激及相关信号通路的激活,提示UⅡ可能通过氧化应激进一步激活内质网应激及相关信号通路。     

黄芩苷对肾性高血压大鼠血压及抑制左心室重构的作用

目的探索黄芩苷对肾性高血压大鼠血压及抑制左心室重构的作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机抽取10只为假手术组,其余采用两肾一夹法造成肾性高血压大鼠模型,6周后将造模成功大鼠随机分为模型组和黄芩苷组,最终存活大鼠假手术组(n=9)、模型组(n=10)及黄芩苷组(n=11),连续给药4周。观察大鼠的一般情况,分别于造模前、造模6周后及给药4周后检测各组大鼠血压变化;给药4周后各组大鼠行高频超声心动图检查,测定各项心功能指标;处死大鼠,取心脏,行HE、Masson染色。用TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡;real-time PCR检测各组大鼠心肌细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)表达;Western blot检测各组大鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78、GRP94及CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Caspase 3表达。结果与模型组相比,黄芩苷组大鼠治疗后血压下降(P0.05),心脏彩超结果显示左心室重构各项指标均有明显改善(P0.05)。与模型组相比,黄芩苷组大鼠心肌纤维化病理积分及纤维化相关因子基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子(TGF-β1)表达明显下降(P0.05)。与模型组相比,黄芩苷组大鼠心肌组织GRP78、GRP94、CHOP及Caspase 3表达及细胞凋亡明显减少(P0.05)。结论黄芩苷具有一定降压作用,可改善肾性高血压大鼠左心室重构,减轻心肌病理变化,缓解内质网应激,减少心肌细胞凋亡。     

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌病理改变和超微结构的影响

目的 探讨黄芪总黄酮（TFA）对柯萨奇B3病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌病理改变的影响.方法 Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒感染建立VMC小鼠模型,予黄芪总黄酮（TFA）高、中、低剂量灌胃治疗,于14 d观察心肌病理及超微结构改变,计算心肌病理组织学积分.结果 模型组心肌超微结构改变重于黄芪总黄酮组,黄芪总黄酮组与模型组比较病理积分下降明显,尤其是高剂量组,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 黄芪总黄酮能有效地维护小鼠心肌纤维及膜系统的稳定性.