多发性骨髓瘤患者的p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

ｐ16及ｐ15基因是细胞周期依赖激酶 (ＣＤＫ4/6 )的抑制因子 ,通过抑制ｐＲｂ(视网膜母细胞基因表达产物 )的磷酸化 ,阻滞细胞进入Ｓ期。若ｐ16及ｐ15基因发生纯合子缺失、甲基化或点突变 ,导致其功能失活 ,ＣＤＫ4/6与ｃｙｃｌｉｎＤ1结合 ,活化ｐＲｂ ,使细胞进入ＤＮＡ合成期 ,肿瘤细胞进行无序增殖 ,形成克隆性疾病。在多发性骨髓瘤 (ＭＭ)的基因学研究中发现ｐ15和ｐ16在其发生中起重要作用[1 3] 。为此 ,我们探讨了ｐ16及ｐ15基因在ＭＭ中失活的发生率及临床意义。材料和方法1　研究对象　初次诊断的ＭＭ患者 31例 ,所有患者的诊断均…     

恶性血液病中的P15^INK4B基因甲基化

目的 探索特定基因操纵区ＣｐＧ岛高甲基化对人类造血系统恶性肿瘤的作用。方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）的方法,用亚硫酸氢钠修饰后的ＤＮＡ为模板进行甲基化特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）,测定了２５例急性髓系白血病（ＡＭＬ）,１５例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）,１６例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和１２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在操纵区５′－ＣｐＧ岛异常甲基化的发生率。结果 Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因异常甲基化的发生率：ＡＭＬ为８４％,ＣＭＬ为０,ＭＤＳ为５０％,ＭＭ为７５％。高危型的ＭＤＳ较低危型更易发生甲基化,在ＭＭ中,Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ甲基化一般发生在早期,与骨髓象的幼稚程度关系密切。结论 调节细胞生长和分化的Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因高甲基化是使Ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因失活的主要原因之一,     

p15^INK4B基因甲基化在急性普细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究

为探索ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＣｐＧ岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用,应用敏感的甲基化特异的ＭＳＰ－ＰＣＲ的测定方法,测定了ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在急性粒细胞白血病（ＡＭＬ）和慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中甲基化的表达变化,研究结果表明,ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因操纵区在ＡＭＬ和ＣＭＬ中的甲基化发生率分别为８３．９％（２６／３１）和０％（０／２８）。结论提示：甲基化是ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＡＭＬ中主要的失活方式之一,并可在病程进展中出现甲基化,使病情加重,在ＣＭＬ中无基化的发生,说明ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因的功能在ＣＭＬ中可能是完整的。     

白血病的p53基因研究

对４０例不同类型的白血病和骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者进行ｐ５３基因的ＤＮＡ印迹杂交分析和ｐ５３蛋白的免疫组化染色，发现４例有ｐ５３基因结构异常，主要聚集在ＡＭＬ－Ｍ５亚型；１３例有ｐ５３蛋白高表达，与白血病类型，患者预后无直接关系。     

白血病等恶性血液病中p15基因甲基化的检测及临床意义

p15基因位于染色体 9p2 1,是一种肿瘤抑制基因 ,其编码产物p15蛋白特异地抑制细胞周期素依赖激酶 4 6 (CDK4 6 ) ,使细胞不能通过G1 期和S期间的监测点 ,从而停留在G1 期。血液系统恶性肿瘤有高频率的p15基因失活[1 ] ,研究发现 5′启动子及转录启始区域内的CpG岛的异常甲基化是p15基因的主要失活方式[2 ] 。Herman等[3] 研究出甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,为基因CpG岛甲基化研究提供了有效的方法。对象和方法1　研究对象　急性白血病患者共 4 0例 ,男 2 2例 ,女 18例 ,年龄 14～ 76岁 ,均符合FAB诊断和分型标准 ;其中初治或…     

DCC基因在白血病及骨髓增生异常综合征患者中的表达

ＤＣＣ基因位于人类染色体 1 8ｑ2 1 .3 ,在 88%结肠癌、直肠癌患者中 ,ＤＣＣ基因的表达明显减少或缺失。为了评价ＤＣＣ基因在白血病发病及骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)转化为白血病的作用 ,我们检测了 3 1例白血病患者和 8例ＭＤＳ患者的ＤＣＣ基因表达情况。病例和方法1　病例　所有病例均来自本院儿科、血液内科。白血病患者 3 1例 ,年龄为 6个月至 73岁 ,其中 6个月～ 1 4岁 1 0例 ,1 5～ 73岁 2 1例 ;急性髓系白血病 (ＡＭＬ) 1 4例 ,急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 1 0例 ,慢性髓细胞白血病 (ＣＭＬ) 7例。ＭＤＳ 8例 ,均按ＦＡＢ诊断…     

骨髓增生异常综合征降钙素基因甲基化的定量研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）向白血病转化的分子标志。方法：采用设有内、外参照的多聚酶链反应（ＰＣＲ），结合限制性内切酶和激光扫描技术，检测２７例ＭＤＳ和６例由ＭＤＳ转化的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：ＭＤＳ患者ＣＴＭＲ为３３．６５％±２３．３７％，显著高于对照组（８．０１％±４．２５％，Ｐ＜０．００１），其中ＲＡＥＢｔ组显著高于对照组和ＲＡ组，已随访３～１０年的ＲＡ患者５例均在正常范围，且无白血病转化。９例ＲＡＥＢｔ的ＣＴＭＲ均＞３０％，随访８例中７例于２个月内转化为ＡＭＬ。结论：ＣＴＭＲ对早期预测ＭＤＳ向白血病转化可能是一个有用的指标。     

采用甲基化特异性聚合酶链反应研究急性白血病p15基因CpG岛甲基化

目的　探讨ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化作为各型急性白血病通用的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）法检测４０ 例初治或复发急性白血病、５ 例完全缓解期白血病及８ 例（ 份） 正常骨髓的ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化,并对ＭＳＰ产物进行序列测定。结果　急性白血病患者ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化阳性率为８０％ ,ＡＭＬ与ＡＬＬ的阳性率（分别为８３％ 和７３％） 差异无显著性;５ 例完全缓解期白血病患者中１ 例ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化阳性（该例患者不久白血病复发）;正常骨髓８ 例均为阴性,表明ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化为白血病细胞所特有;ＭＳＰ产物测序结果与理论结果相符合,ＭＳＰ敏感度可达１０ －３。结论　ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化在各型急性白血病中均有很高的发生率,可以作为各型急性白血病通用的微量残留病（ＭＲＤ） 指标;白血病完全缓解期ｐ１５ ＣｐＧ 岛甲基化仍为阳性可能预示着复发;ＭＳＰ法ＤＮＡ需要量极少,不需要有特异性酶切位点,无同位素污染,对标本要求不高,敏感度高,是甲基化研究的一个简便、敏感、特异的新手段。     

采用甲基化特异性聚合酶链反应研究急性白血病p15基因CpG？…

目的 探讨ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化作为各型急性白血病通用的基因标志物的可行性。方法 采用甲基化特异性聚合链反应（ＭＳＰ）法检测４０例初治或复发急性白血病、５例完全缓解白血病及８例（份）正常骨髓的ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化,并对ＭＳＰ产物进行序列测定。结果 急性白血病患ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化阳性率为８０％,ＡＭＬ与ＡＬＬ的阳性率（分别为８３％和７３％）差异无显性;５例完全缓解期白血病患中１例ｐ     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

外源性野生型p53基因对HL-60细胞的作用

野生型ｐ5 3基因是一种肿瘤抑制基因 ,急性髓系白血病(ＡＭＬ)患者伴有 17号染色体异常 [ｉ(17ｑ) ]者ｐ5 3基因点突变的发生率可高达 40 %。大多数ＡＭＬ细胞系 ,如ＨＬ 6 0、ＣＭＫ、ＭＬ 1、Ｕ937均可检出ｐ5 3基因严重缺失或者突变[1,2 ] 。我们利用脂质体介导法将两种ｐ5 3基因ｐＣ5 3 ＳＮ3(含人野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ)、ｐＮ5 3ｃＧ(Ｖａｌ135 ) (32 .5℃表现野生型ｐ5 3基因功能 )分别导入Ｐ5 3蛋白缺失的ＨＬ 6 0细胞中 ,观察它的表达及其对ＨＬ 6 0细胞的影响。材料和方法1　细胞系及培养体系　ＨＬ 6 0细胞由福建省医学科学研究…     

转导p16cDNA对Jurkal细胞的生长抑制作用

Ｐ16(ＭＴＳ1ＣＤＫＮ2)蛋白是细胞从Ｇ1期向Ｓ期转换的主要抑制因子,许多白血病细胞ｐ16基因缺失,尤其是急性Ｔ淋巴细胞白血病(ＴＡＬＬ),缺失率可达83%[1]。提示ｐ16基因与ＴＡＬＬ的发生、发展有关。我们构建了ｐ16的逆转录病毒载体,体外转导缺失ｐ16的Ｔ淋巴细胞白血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ,以探讨ｐ16对Ｔ淋巴细胞白血病的治疗作用。材料和方法1　细胞培养　Ｊｕｒｋａｔ细胞由中国医学科学院基础医学研究所吴宁华教授惠赠,文献报道和实验均证明其ｐ16基因纯合性缺失,Ｒｂ基因正常表达[2]。双嗜性包装细胞ＰＴ67购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司…     

p16抑癌基因敲除小鼠髓系细胞增殖特性的研究

最近大量资料显示 ,周期蛋白依赖激酶抑制剂 (ＣＤＫＩ)家族成员之一Ｐ16蛋白竞争性地与周期蛋白依赖性激酶 4(ＣＤＫ4)结合 ,在细胞周期中起着重要的负调节作用[1 ] 。许多研究显示ｐ16外显子纯合缺失在慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ)淋巴细胞急变患者中阳性率为 5 0 % [2 ] 。我们对ｐ16基因敲除(ｐ16 - - )小鼠骨髓细胞所建立的细胞系进行了细胞增殖特性的研究。现将结果报告如下。材料和方法1　ｐ16 - -小鼠　ｐ16 - -和野生型 (ＷＴ ,ｐ16 + +)小鼠由英国帝国理工大学动物研究中心提供。ｐ16 - -小鼠由Ｓｅｒ ｒａｎｏ实验室[3 ] 提供…     

骨髓增生异常综合征造血细胞基因异常研究进展

骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)是源于造血干 /祖细胞突变的异常克隆逐步替代正常造血的白血病前期状态 ,其演变可能与一系列随机突变的积累有关 ,是内在的ＤＮＡ缺陷和外源致突变物两方面作用的结果。现综述迄今有关ＭＤＳ造血细胞基因研究的主要进展。1　ＭＤＳ染色体异常及基因突变的发生率　原发性ＭＤＳ 30 %～ 6 0 %有染色体异常 ,治疗相关性ＭＤＳ为 80 % ,频率随疾病危险性增加而增加。ＭＤＳ基因突变率为 0 %～ 5 0 % ,几乎全是点突变 ,近 1/ 3转化为ＡＭＬ[1,2 ] 。2　相关癌基因　原癌基因表达的改变是获得性的 ,而非直接源于遗传…     

急性髓系白血病细胞粘附分子Mac-1、LFA-1、L-选择素的表达及其临床意义

有研究表明 ,急性髓系白血病 (ＡＭＬ)细胞表面有多种粘附分子表达的异常 ,早期造血前体细胞粘附分子ＣＤ49、ＣＤ5 6 、ＣＤ44 的改变 ,与白血病发生、发展有关[1 ] 。但晚期髓系造血细胞的粘附分子 β整合素巨噬细胞分子 1(Ｍａｃ 1)、淋巴细胞功能相关抗原 1(ＬＦＡ 1)及选择蛋白Ｌ 选择素 (Ｌ Ｓｅｌｅｃｔｉｎ)在ＡＭＬ细胞的表达情况报道较少。我们对 2 5例ＡＭＬ患者及2 0名正常人Ｍａｃ 1、ＬＦＡ 1、Ｌ 选择素表达进行检测 ,分析其表达特征及与临床及化疗的关系 ,现将结果报道如下。病例和方法1　病例选择　初诊ＡＭＬ 2 5例 ,年…     

HAC方案诱导治疗急性髓系白血病疗效观察

我们近年来发现对柔红霉素耐药的病例逐渐增多 ,故近3年来我们采用高三尖杉酯碱 (ＨＨａｒ)联合阿糖胞苷 (Ａｒａ Ｃ)及环磷酰胺 (ＣＴＸ)组成ＨＡＣ方案作为部分急性髓系白血病(ＡＭＬ)患者的诱导缓解化疗方案 ,取得了良好效果 ,并与以前采用的ＤＡＣ方案[1 ] 进行了比较 ,现报道如下。病例和方法1　病例　治疗组 (ＨＡＣ方案组 ) 32例患者全部为 1 997年 3月～ 2 0 0 0年 7月住院患者 ,男 2 4例 ,女 8例 ,年龄 1 0～ 66岁(平均 37岁 )。 30例为初治患者 ,其中Ｍ2ａ1 1例 [1例由骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)转化而来 ] ,Ｍ4ａ5例 ,Ｍ4ｂ1例…     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因甲基化对白血病前期基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应（ＰＣＲ），扩增ＣＴ基因５’端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。结果：再障组与正常对照组ＣＴ基因处于正常甲基化状态。２１例ＭＤＳ中１６例ＣＴ基因高度甲基化。３例ＣＴ基因高度甲基化的ＭＤＳ转化成ＡＭＬ。ＣＴ基因高度甲基化与原始细胞计数无相关性（ｒ＝００４２）。结论：ＣＴ基因高度甲基化可作为ＭＤＳ基因诊断的一个指标，为探知ＭＤＳ的发病机理以及与白血病的关系提供了有价值的诊断方法。     

骨髓增生异常综合征患者Fas、FasL和FAP-1基因的表达

有报道骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)患者存在凋亡诱导基因Ｆａｓ、ＦａｓＬ的表达异常[1,2 ] 。ＦＡＰ 1为Ｆａｓ相关酪氨酸磷酸酶 ,可与Ｆａｓ胞浆内链相互作用 ,抑制Ｆａｓ介导的细胞毒作用[3 ] ,其在ＭＤＳ细胞中的表达 ,国外报道尚少 ,国内未见报道。我们采用ＲＴ ＰＣＲ对 2 6例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞(ＢＭＭＮＣ)中Ｆａｓ、ＦａｓＬ和ＦＡＰ 1的ｍＲＮＡ表达进行了研究。对象和方法1　病例　 2 6例ＭＤＳ患者 ,男 12例 ,女 14例 ,中位年龄 46 (17～ 79)岁。按 1982年ＦＡＢ标准诊断和分型[4 ] ,ＲＡ患者须符合 :①外周血至少二系细…     

TEL基因与白血病染色体易位

1995年,Ｓｈｕｒｔｌｅｆｆ等[1]发现近30%的儿童前Ｂ急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)中存在ＴＥＬＡＭＬ1融合基因并与预后相关。此后,不断在白血病中发现ＴＥＬ基因受累,其伙伴基因可见于几乎所有染色体上。由于ＴＥＬ基因的重要性,其功能和导致白血病的发病机制受到广泛关注,且已有许多人在这些方面作了初步的探索。现就近年来有关的内容作一综述。1　ＴＥＬ基因的结构和功能　ＴＥＬ基因又称为ＥＴＶ6基因,位于12ｐ13,基因组ＤＮＡ长度约300ｋｂ,共有8个外显子,编码452个氨基酸,是转录因子Ｅｔｓ家族的成员之一[2]。Ｅｔｓ家族的成员都有一…     

急性白血病CD34抗原和P170表达与预后关系的研究

文献报道在急性髓系白血病(ＡＭＬ)以及急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ),ＣＤ34抗原表达阳性是预后不良的因素[1]。在研究中还发现ＣＤ34抗原表达与多药耐药基因产物Ｐ170表达有相关性,在ＡＭＬ如两者同时表达则完全缓解(ＣＲ)率下降更为明显[1]。但有些学者认为:ＣＤ34抗原表达不影响ＡＭＬ和ＡＬＬ的ＣＲ率及生存期[2,3]。我们常规选用14种单抗,对90例急性白血病(ＡＬ)患者进行了免疫学分型,同时观察了ＣＤ34抗原和Ｐ170的表达规律以及与ＣＲ率的相关性。病例和方法1　病例来源　ＡＬ患者90例中ＡＭＬ59例,其中初治47例,另外12例包括慢性粒细…