硫化氢对自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞增生的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉平滑肌细胞(ASMC)增生的影响。方法体外培养SHR ASMC,将其分成对照组、10-5、10-4和l0-3 mol/L NaHS组,检测经H2S处理后ASMC细胞的增生指数和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果与对照组相比,10-5、10-4和10-3 mol/L NaHS组增生指数显著降低(P<0.01),MAPK活性明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 H2S可抑制SHR ASMC增生和MAPK活性,推测可能通过MAPK信号途径介导。     

Salusin-β对血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制研究

目的研究新的内源性活性肽salusin-β对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法原代培养大鼠主动脉VSMCs,MTT法测定不同浓度salusin-β(0.1、1、10nmol.L-1)对VSMCs增殖的影响;Westernblot法测定p-ERK1/2蛋白表达;RT-PCR测定c-myc、c-fos基因表达。结果与对照组相比,salusin-β明显刺激大鼠VSMCs增殖,增加p-ERK1/2蛋白表达,促进c-myc、c-fos基因表达。结论Salusin-β促进大鼠VSMCs增殖可能与激活ERK1/2途径有关。     

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡和增殖的影响

目的研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对SHR胸主动脉平滑肌细胞凋亡和增殖的影响。方法分别给予SHR钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱,并以Wistar大鼠作为正常对照。用流式细胞仪检测胸主动脉平滑肌细胞凋亡,用免疫组化法检测胸主动脉Bcl-2、Bax、c-myc、c-fos蛋白表达,采用原位杂交法检测胸主动脉平滑肌细胞PDGF mRNA及凋亡平滑肌细胞mRNA的表达。结果钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱均能促进SHR胸主动脉平滑肌细胞凋亡,增强Bax蛋白及凋亡平滑肌细胞mRNA表达,抑制c-fos蛋白、c-myc蛋白和PDGF-B mRNA表达;其中异钩藤碱能抑制胸主动脉Bcl-2表达。结论钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞凋亡,并能通过抑制c-fos蛋白、c-myc蛋白和PDGF-B mRNA表达途径抑制自发性高血压大鼠胸主动脉细胞增殖,从而改善胸主动脉壁重塑。     

周期蛋白D1正反义表达质粒的构建鉴定及其对哮喘大鼠气道平滑肌增殖的影响

观察哮喘大鼠气道平滑肌周期蛋白D1的表达，并构建大鼠周期蛋白D1 (CyclinD1)正反义表达质粒，转染支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)，探讨CyclinD1在哮喘大鼠ASMC增殖过程中的影响。大鼠雾化吸入卵清蛋白建立哮喘模型，免疫荧光检测CyclinD1的表达。以气道平滑肌条总RNA为模板，通过RT-PCR获取大鼠CyclinD1全长cDNA，插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，构建CyclinD1正义表达质粒(pcDNA3.1-CyclinD1)和反义表达质粒(pcDNA3.1-asCyclinD1)。用脂质体介导的基因转染方法，将正反义重组体和空质粒(vector)分别转染哮喘大鼠和正常大鼠ASMC，用Western blotting方法鉴定CyclinD1基因的表达。采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察构建质粒对哮喘大鼠ASMC增殖的影响。结果表明：(1)与对照组相比，哮喘组CyclinD1表达显著增高；(2)酶切鉴定和测序分析证实，试验成功构建了CyclinD1正反义表达质粒。与转染pcDNA3.1-CyclinD1组和vector组相比，转染pcDNA3.1-asCyclinD1组大鼠ASMC中CyclinD1表达水平下降(P<0.01)；(3)与vector组S+G₂M期比例、吸收度(A)值、PCNA阳性表达率相比，转染pcDNA3.1-CyclinD1组增殖指标均明显增加(P<0.01)。转染pcDNA3.1-asCyclinD1组增殖指标均明显下降(P<0.01)。正常组大鼠转染质粒后各组间变化趋势与哮喘组一致。pcDNA3.1-CyclinD1可促进哮喘大鼠ASMC增殖，pcDNA3.1-asCyclinD1可抑制哮喘大鼠ASMC增殖，提示CyclinD1在哮喘ASMC增殖的信号转导中具有重要作用。     

硫化氢抑制离体灌流大鼠急性心肌缺血所致心肌细胞凋亡研究

目的探讨硫化氢(H2S)能否抑制离体灌流大鼠急性心肌缺血所致细胞凋亡。方法应用Langendorff离体灌流大鼠心脏复制急性心肌缺血损伤模型,结扎冠状动脉,心肌缺血4 h。40只♂SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(Sham),缺血组(Ischemia)和硫氢化钠(NaHS)5、10、20μmol·L-1组。HE染色分析左心室心肌细胞组织形态学变化,TUNEL方法检测细胞凋亡,Western blot检测各组caspase-3和Cyt-C的蛋白表达。结果离体心肌缺血4 h后,光镜下可见心肌较大范围局灶性病变,细胞呈凝固性或带状坏死;心肌细胞凋亡率及心肌组织中caspase-3和Cyt-C蛋白表达明显升高。经NaHS 2 h处理,NaHS组光镜下心肌细胞结构清晰,心肌病变的程度明显减轻,大鼠心肌组织Cyt-C蛋白表达明显低于Ischemia组;NaHS 10、20μmol·L-1组心肌细胞凋亡率及心肌组织caspase-3蛋白表达明显低于Ischemia组。结论 H2S可通过抑制细胞凋亡对离体灌流大鼠急性心肌缺血发挥一定保护作用。     

硫化氢对自发性高血压大鼠胸主动脉舒张反应的影响

目的 探讨内源性及外源性硫化氢(H_2S)对自发性高血压大鼠(SHR)离体胸主动脉舒张反应的影响。方法 4wb WKY大鼠24只,随机分为WKY对照组(n=8)、WKY+H_2S组(n=8)及WKY+PPG组(n=8)。同样周龄SHR大鼠24只,随机分为高血压对照组(n=8)、高血压+H_2S组(n=8)及高血压+PPG组(n=8),高血压对照组及WKY对照组大鼠每日腹腔注射生理盐水,WKY+H_2S组及高血压+H_2S组每日腹腔注射硫氢化钠(NaHS),WKY+PPG组及高血压+PPG组每日腹腔注射PPG,5 wk后处死,取胸主动脉,观察其对乙酰胆碱(ACh)、硝普钠(SNP)及NaHS的舒张反应。结果 WKY+PPG组及高血压对照组、高血压+PPG组对ACh及SNP的舒张率较WKY组降低(P<0.05),而高血压+H_2S组较高血压对照组升高(P<0.05),与WKY对照组相似;各组大鼠血管环对SNP的舒 张反应均高于ACh(P<0.05);WKY对照组及高血压对照组对不同浓度的NaHS呈现剂量依赖性舒张反应,对于同样浓度的NaHS,高血压对照组较WKY对照组的舒张率高。结论 H_2S可以独立及与一氧化氮协同发挥舒张血管效应,在自发性高血压血管舒张功能异常的形成机制中占据重要地位。     

硫化氢对青光眼大鼠视网膜细胞的保护作用及机制研究

目的研究硫化氢(H2S)对青光眼大鼠视网膜细胞的保护作用及作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和低、高剂量实验组,每组25只。模型组及低、高剂量实验组大鼠均用光凝法建立青光眼大鼠模型,造模成功后,低、高剂量实验组大鼠分别腹腔注射50,100μmol·kg^-1·d^-1硫氢化钠(NaHS)溶液(H2S供体),对照组与模型组腹腔注射等量生理盐水,连续干预2周。用动物眼压计测量各组大鼠干预后眼内压,以原位末端标记染色法检测视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡情况,用蛋白质印迹法检测各组大鼠视网膜组织中磷酸化原癌基因蛋白Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)蛋白相对表达量。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组大鼠干预后眼内压分别为(18.55±3.02),(37.11±2.62),(29.34±3.22),(23.87±1.68)mmHg,RGCs凋亡指数分别为(3.24±1.12)%,(59.03±5.92)%,(23.26±3.87)%,(12.52±2.33)%,视网膜组织中p-JNK蛋白相对表达量分别为0.10±0.04,0.81±0.13,0.19±0.05,0.15±0.06,p-ERK蛋白相对表达量分别为0.22±0.05,0.89±0.08,0.32±0.09,0.27±0.06,p-p38 MAPK蛋白相对表达量分别为0.40±0.06,0.94±0.06,0.51±0.11,0.45±0.08。模型组及低、高剂量实验组以上各指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、高剂量实验组以上各指标与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 H2S具有降低青光眼大鼠眼内压,改善视网膜组织病变,保护RGCs的作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号转导通路有关。     

硫化氢对脂多糖诱导的大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法♂SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只:空白对照组、LPS组、LPS+NaHS低剂量组、LPS+NaHS中剂量组、LPS+NaHS高低剂量组和LPS+PPG组。LPS组、LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组舌下静脉注射LPS(5 mg.kg-1),空白对照组注射等容量的生理盐水。LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组在注射LPS 3 h时腹腔分别注射低、中、高剂量的氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG),空白对照组和LPS组腹腔注射等容量生理盐水。各组大鼠均在舌下静脉注射LPS或生理盐水6 h后处死,取肺组织。应用流式细胞学技术检测各组大鼠肺组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肺组织Bcl-2和Bax的表达,Westernblot检测肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3和9(Caspase-3、9)的蛋白表达。结果 LPS组与空白对照组比较肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2蛋白表达明显减弱,Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+NaHS中、高剂量组肺组织细胞凋亡率明显降低,LPS+NaHS高剂量组Bcl-2阳性细胞表达明显增强,LPS+NaHS中、高剂量组Bax阳性细胞表达明显减弱,LPS+NaHS低、中、高剂量组Bcl-2/Bax比值明显增加,LPS+NaHS高剂量组Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显减弱(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+PPG组肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2阳性细胞表达明显减弱,Bax阳性细胞表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论 LPS诱导的ALI早期肺组织细胞凋亡增加,给予外源性H2S可减少肺组织细胞凋亡,可能与通过下调Bax、Caspase-3、9蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达有关。     

硫化氢下调大鼠主动脉L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路

目的观察H2S对血管L-精氨酸/一氧化氮(L-Arg/NO)通路的影响以探讨H2S和NO这两种气体信号分子间的相互作用。方法离体孵育大鼠主动脉薄片,加入H2S供体NaHS(10-7~10-4mol.L-1)孵育4 h,及50μmol.L-1NaHS分别孵育2、4和6 h。采用G re iss法测定血管亚硝酸盐含量;同位素示踪法检测血管组织一氧化氮合酶(NOS)活性及L-Arg转运,RT-PCR检测eNOS、CAT1基因表达。结果一次性给予50μmol.L-1NaHS,孵育2 h,孵育液中NO2-含量比对照组低62%,血管NOS活性下降48%,L-Arg转运减少50%(P<0.01);孵育6 h,NO2-含量比对照组低19%(P<0.05),而NOS活性和L-Arg转运已基本恢复(P>0.05)。NaHS(10-7~10-4mol.L-1),呈浓度依赖的抑制了L-Arg/NOS/NO通路,IC50分别为0.499、3.198及3.927μmol.L-1(P<0.01);而给予50μmol.L-1NaHS后,eNOS和CAT-1A的mRNA表达分别减少34.3%和55.1%(P<0.01)。结论H2S通过抑制血管组织L-Arg转运和NOS活性和基因表达,下调L-Arg/NOS/NO通路,从而减少血管NO生成。     

热休克蛋白90在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡PC12细胞的形态学改变;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测Hsp90的表达。结果H2S的供体400μmol·L-1硫氢化钠(NaHS)可上调PC12细胞Hsp90的表达,NaHS作用3h,Hsp90表达达最高峰,作用24h时表达恢复到基础水平;NaHS也能明显地增加CoCl2引起的Hsp90的表达上调。NaHS预处理能对抗CoCl2引起的PC12细胞损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率。Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)可拮抗NaHS预处理对Hsp90表达的上调作用,并明显地减弱H2S诱导的适应性细胞保护作用。结论H2S能保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的低氧损伤作用,诱导Hsp90表达上调可能是其细胞保护机制之一。     

川芎嗪抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨川芎嗪对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的影响。方法采用酶消化法和改良组织块法培养原代大鼠气道平滑肌细胞。MTT法检测血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)与川芎嗪共同处理的大鼠ASMCsA490的吸光度值,以观察川芎嗪对PDGF诱导的细胞增殖的抑制作用。Western blot检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平。结果 MTT法检测,与各对照组比较,给予12.5、25、50、100和200μmol.L-1浓度川芎嗪处理6、12、24、36和48h后,各浓度组川芎嗪处理的细胞平均抑制率均增加,P<0.05,其中以200μmol.L-1在48h时效果最明显,P<0.01。川芎嗪(200μmol.L-1)与PDGF(20pg·L-1)共同处理30min和60min后,p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低。结论川芎嗪对增殖的ASMCs有抑制作用,可能与抑制ERK1/2的信号通路活化有关。     

硫化氢在大鼠阿霉素心肌病发病中的意义

目的探讨新型气体信号分子硫化氢(hydrogen sul-fide,H2S)对阿霉素(adriamycin,ADR)心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法♂性Wistar大鼠66只,随机分为6组①阿霉素组(ADR组,n=12):腹腔注射ADR,每次2.5mg.kg-1,1次/周,共用药10wk;②ADR+小剂量NaHS组(n=12):ADR用药方法同ADR组,同时经腹腔注射H2S供体NaHS,2.8μmol.kg-1.d-1,连续用药10wk;③ADR+大剂量NaHS组(n=12):ADR用药方法同ADR组,同时经腹腔注射NaHS,14μmol.kg-1.d-1,连续用药10wk;④ADR+PPG组(12只):ADR用药方法同ADR组,同时经腹腔注射PPG30mg.kg-1.d-1,连续用药10wk;⑤对照组(n=9):用相同容量的生理盐水代替ADR,给药方法同ADR组;⑥NaHS组(n=9):经腹腔注射NaHS,14μmol.kg-1.d-1,连续用药10wk。于第10周检测大鼠心功能和血流动力学指标,处死大鼠,取心肌组织制作病理切片,分别于光镜及透射电镜下观察其显微以及超微结构,用TdT介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)方法检测心肌细胞凋亡及用免疫组化测定心肌细胞中Fas和Bcl-2蛋白的表达,同时用敏感硫电极法测定血浆及心肌组织里的H2S含量。结果阿霉素组大鼠左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)及左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)明显降低(P均<0.01),心肌病理结果显示阿霉素组心肌细胞变性、线粒体和肌浆网水肿、细胞内空泡增多,呈心肌病样改变;心肌细胞凋亡数明显增加,心肌细胞中的Fas蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白的表达明显降低(P均<0.01);同时大鼠血浆及心肌组织H2S含量均明显低于对照组(P<0.01)。经外源性补充H2S供体NaHS后,大鼠心功能较前明显改善,光镜及电镜显示ADR+小剂量NaHS组及ADR+大剂量NaHS组心肌组织病理损害程度明显较阿霉素组减轻;心肌细胞凋亡率明显降低,Fas蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。ADR+PPG组与ADR组相比较,差异无显著性,NaHS组和对照组相比较,差异无显著性(P>0.05)。结论H2S参与大鼠阿霉素心肌病的发病过程,外源性补充H2S供体可以改善阿霉素心肌病大鼠心功能,减轻心肌损伤,减少细胞凋亡,对其发病起到调节作用。     

硫化氢对大鼠急性心肌缺血损伤后心功能的影响

目的探讨硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系在大鼠急性心肌缺血中的变化及对心功能的影响。方法♂SD大鼠48只随机分为假手术组、缺血组、缺血+硫氢化钠(NaHS)低、中、高剂量组和缺血+炔丙基甘氨酸(PPG)组,每组8只。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型。缺血组、缺血+NaHS低、中、高剂量组和缺血+PPG组大鼠分别于缺血3h时腹腔注射生理盐水,低、中、高剂量NaHS及PPG,假手术组只在大鼠左冠状动脉前降支下穿线但不结扎,各组大鼠均于术后6h时处死并取材。取材前Powerlab/8s多导生理仪记录各组大鼠心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压力变化速率(±dp/dtmax)等心功能指标;检测血浆中H2S含量、心肌组织CSE活性。结果与假手术组比较,缺血组大鼠心功能指标HR、LVDP、±dp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高,血浆中H2S含量和心肌组织CSE活性降低(P<0.01)。与缺血组比较,缺血+NaHS中、高剂量组大鼠心功能指标HR、LVDP、±dp/dtmax明显升高,LVEDP明显降低,心功能改善随NaHS剂量升高有增高趋势;缺血+NaHS低、中、高剂量组大鼠血浆中H2S含量和心肌组织CSE活性升高,且随NaHS剂量升高而增高;缺血+PPG组大鼠心功能指标HR、LVDP、±dp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高,血浆中H2S含量和心肌组织CSE活性降低(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠急性心肌缺血时H2S/CSE体系可能参与急性心肌缺血的病理生理过程,给予外源性H2S可明显减轻急性缺血所致的心肌损伤,改善心功能,起到心肌保护作用。     

硫化氢对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响

目的观察硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)所致大鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)的影响,探讨其对肺脏的作用机制。方法♂SD大鼠共64只,随机分为8组,每组8只:Ⅰ:3h空白对照组;Ⅱ:LPS3h组;Ⅲ:6h空白对照组;Ⅳ:LPS6h组;Ⅴ:LPS+NaHS低剂量组;Ⅵ:LPS+NaHS中剂量组;Ⅶ:LPS+NaHS高剂量组;Ⅷ:LPS+PPG组。LPS3h和LPS6h组给予LPS,其相应空白对照组给予生理盐水,分别在3h或6h时处死大鼠;LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组分别在给LPS3h时腹腔注射低、中、高剂量氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG),再观察3h后处死大鼠。光、电镜下观察肺组织形态学改变,检测肺系数、肺湿/干重比(W/D)、血浆中H2S含量、肺组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性,以及肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化。结果LPS3h和LPS6h组与相应的空白对照组比较,光、电镜下肺组织明显受损,超微结构明显改变,肺系数、肺湿/干重比和肺组织MDA含量升高,血浆中H2S的含量、肺组织CSE以及SOD、GSH-Px活性降低。LPS+NaHS低、中、高剂量组与LPS6h组比较,光、电镜下肺组织受损情况均有不同程度改善,肺系数、肺湿/干重比和肺组织MDA含量降低,血浆H2S含量、肺组织CSE以及SOD、GSH-Px活性升高。LPS+PPG组与LPS6h组比较,光、电镜下肺组织损伤无改善,肺系数、肺湿/干重比和肺组织MDA含量升高,血浆中H2S的含量、肺组织CSE和SOD活性降低,肺组织GSH-Px活性无明显变化。结论CSE/H2S体系可能参与内毒素性ALI的病理生理过程,外源性补充H2S可减轻内毒素性ALI。     

氢氯噻嗪和吲哒帕胺逆转自发性高血压大鼠心肌肥厚及对心肌中eNOS表达的影响

目的研究氢氯噻嗪和吲哒帕胺对肥厚心肌及心肌中内皮型一氧化氮合酶(endothelial n itric oxide synthase,eNOS)表达的影响,从而探讨其逆转心肌肥厚可能的分子机制。方法15只成年♀SHR随机分为对照组、氢氯噻嗪组、吲哒帕胺组。治疗前、开始至结束时每周测血压1次。4wk后处死动物,取左心室称重后,计算左心室重与体重的比值,采用天狼猩红染色分析心肌间质和血管壁胶原分布。采用W estern B lot法检测心肌eNOS蛋白质表达。结果治疗组动物收缩压及左心室重与体重比均明显低于对照组。心肌经天狼猩红染色后见治疗组心肌结构基本正常,与对照组相比未见明显的胶原沉积。并且治疗组在蛋白质水平上调心肌eNOS的表达(P<0.05)。结论吲哒帕胺或氢氯噻嗪可逆转自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)左室肥厚、改善心肌纤维化从而起到保护心脏的作用,可能与其促进心肌中eNOS的表达有关。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠细胞外信号调节激酶活性和B型利钠肽表达的影响

目的　探讨氯沙坦治疗高血压心肌肥厚的作用机制。方法　选择同周龄WistarKyoto(WKY)大鼠作正常对照,将2 1只14周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分成3组:模型组、肼屈嗪组(10mg·kg- 1·d- 1)和氯沙坦组(10mg·kg- 1·d- 1)。用West ern印迹方法检测大鼠心肌总细胞外信号调节激酶(t ERK)、磷酸化ERK(p ERK)及有丝分裂素激活蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)水平;用RT PCR法半定量测定大鼠心肌中B型利钠肽(BNP)mRNA的含量;酶联免疫吸附法检测大鼠血浆BNP水平。结果喂药10周后,氯沙坦组和肼屈嗪组血压相似,均显著低于模型组(n =7,P <0 .0 1)。氯沙坦组心肌肥厚指数显著低于肼屈嗪组和模型组(n =7,P <0 .0 1) ,与WKY组无差异(n =7,P >0 .0 5 ) ;肼屈嗪组和模型组心肌肥厚指数无差异(n =7,P >0 .0 5 )。4组大鼠t ERK水平无显著性差异(n =7,P >0 .0 5 ) ;氯沙坦组心肌p ERK ,p ERK/t ERK及MKP 1水平均显著低于SHR肼屈嗪组和SHR模型组(n =7,P <0 .0 5 ) ,与WKY组无差异(n =7,P >0 .0 5 )。肼屈嗪组和模型组心肌p ERK ,p ERK/t ERK及MKP 1水平无差异(n =7,P >0 .0 5 )。氯沙坦组大鼠心肌BNPmRNA和血浆BNP水平显著低于SHR肼屈嗪组和模型组(n =7,P <0 .0 5 ) ,与WKY组无差异(n =7,P >0 .0 5 ) ;肼屈嗪组和SHR模型组大鼠     

PI3K/Akt信号通路在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的作用

目的探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用。方法Western blot法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min,在50～400μmol.L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地上调Akt磷酸化的水平,但随着NaHS浓度的增加,磷酸化Akt表达量逐渐下降;Ly294002明显抑制了NaHS对Akt磷酸化水平的上调作用。NaHS预处理可以保护PC12细胞对抗600μmol.L-1CoCl2诱导的损伤,使细胞存活率提高及细胞凋亡率降低。而在预处理前使用PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002,则明显地减弱了H2S的神经细胞保护作用。结论 H2S可通过激活PI3K/Akt信号通路保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤。     

Interaction between hydrogen sulfide/cystathionine gamma-lyase and carbon monoxide/heme oxygenase pathways in aortic smooth muscle cells

AIM: To investigate the interaction between hydrogen sulfide (H2S)/cystathionine gamma-lyase (CSE) and carbon monoxide (CO)/heme oxygenase (HO) pathways in aortic smooth muscle cells (ASMC). METHODS: The ASMCs were divided into the following groups: (1) the control group; (2) the zinc protoporphyrin (ZnPP) 20 micromol/L group; (3) the propargylglycine (PPG) 2 mmol/L, 4 mmol/L and 10 mmol/L groups; and (4) the sodium hydrosulfide (NaHS) 1 x 10(-5) mol/L, 1 x 10(-4) mol/L and 1 x 10(-3) mol/L groups. Each of the groups was further divided into 6 h, 12 h, 18 h and 24 h subgroups. The CO level, represented by carboxyhemoglobin (HbCO) content was measured using a spectrophotometric method and H2S content was detected by a sensitive electrode method. CSE and HO-1 expressions were detected by Western blotting. RESULTS: The H2S content in the medium and CSE expression by ASMC were markedly increased by ZnPP compared with the control group. HbCO content in the medium and HO-1 expression by the ASMC started strengthening following 24 h treatment with PPG at 2 mmol/L, but were further strengthened following 18 h and 24 h treatment with PPG at 4 mmol/L compared with the controls (P < 0.01). PPG at 10 mmol/L increased the HbCO level in the medium following 18 h treatment and increased HO-1 expression by the ASMC following 12 h treatment. Moreover, NaHS at 1 x 10(-5) mol/L and 1 x 10(-4) mol/L decreased the HbCO level in the medium and HO-1 expression by the ASMC after 6 h and 12 h treatment, while NaHS at 1 x 10(-3) mol/L decreased them at all time points of the treatments. Conclusion: The results suggested that endogenous CO/HO and H2S/CSE pathways inhibited each other in ASMC under physiological conditions.