PPARγ及罗格列酮与消化系统肿瘤

过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）属于核激素受体超家族中的一员,作为重要的细胞调节因子,在乳腺癌、肺癌、妇科肿瘤、消化道肿瘤及内分泌等多种肿瘤组织中均有表达。PPARγ被配体激活后,可通过诱导肿瘤分化、促进凋亡、抑制细胞增殖等途径抑制肿瘤生长。近几年来,罗格列酮（ROZ）作为PPARγ特异性配体,副作用小,在消化系统方面的研究比较广泛,故本文通过阐述PPARγ及罗格列酮抑制肿瘤的生长,探讨其在消化系统肿瘤的作用机制的进展。     

罗格列酮对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡及PTEN、存活蛋白表达的作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPARγ)配体罗格列酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡及肿瘤抑制基因PTEN和存活蛋白(survivin)表达的影响.方法:经不同浓度罗格列酮(0、0.1、1、10和100 μmol/L)处理SMMC-7721细胞24、48和72 h后,用MTT法测定细胞的增殖情况,FCM法检测细胞周期变化和凋亡情况,Westem印迹法检测细胞中PTEN和survivin蛋白表达的变化.结果:罗格列酮可以显著抑制SMMC-7721细胞增殖(P＜0.01);可使SMMC-7721细胞G0/G1期比例明显升高(P＜0.05),G2/M期比值降低(P＜0.05),并能显著诱导细胞凋亡(P＜0.05),呈时间依赖性和剂量依赖性.罗格列酮能上调细胞PTEN的表达,并呈时间和剂量依赖性,而对survivin的表达则无明显改变(P＞0.05).结论:PPARγ/被罗格列酮活化后可抑制SMMC-7721细胞增殖、诱导细胞凋亡,该作用可能是与上调细胞PTEN的表达有关.     

罗格列酮对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法设不同浓度罗格列酮组(10、25、50.0、100.0μg/ml)、2‰二甲基亚砜的RPMI1640培养基加细胞为阴性对照组。应用MTT法检测罗格列酮对肝癌HepG2细胞的增殖抑制和生长活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果罗格列酮对肝癌HepG2细胞具有较强的体外毒性,48 h IC50为41.6μg/ml。肝癌HepG2细胞活性随着用药剂量和作用时间的增加而不断下降,出现剂量-效应和时间-效应的关系。罗格列酮作用48 h后,肝癌HepG2细胞G_0/G_1期比例显著升高,S期细胞比例有所降低,到G_2/M期细胞的比例明显下降,并呈明显的剂量依赖性。罗格列酮对HepG2细胞作用48 h后可以诱导肿瘤细胞产生凋亡,并且呈剂量依赖性。结论罗格列酮能抑制肝癌HepG2细胞生长并促进其凋亡。     

MST-312对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性影响研究

目的研究端粒酶抑制剂MST-312对人肝癌细胞HepG2辐射敏感性影响。方法 MTT实验检测0、2、4、6、8和10μmol/L的MST-312对HepG2细胞的增殖抑制作用;采用克隆形成实验检测HepG2细胞存活率,观察MST-312对细胞辐射增敏性的影响;流式细胞术分析细胞周期及凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态变化;蛋白质印迹法检测γ-H2AX蛋白表达水平,衡量DNA损伤的程度。结果 MTT法检测结果显示,MST-312对HepG2细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,4μmol/L MST-312对HepG2细胞的增殖抑制率<10%,而且对细胞的周期分布没有明显影响。克隆形成实验结果显示,MST-312预处理2h后再给予X射线辐照的联合组克隆形成率为(17.68±4.01)%,较辐照组(62.60±7.91)%明显降低,F=9.773,P=0.014。流式细胞术分析结果表明,随着时间的延长,联合组G2/M期的比例由(20.56±0.75)%下降至(5.82±0.45)%,而Sub-G1峰值由(6.13±0.43)%上升至(15.78±0.89)%,即随着G2/M期阻滞比例下降的同时Sub-G1峰值比例在上升。Hoechst 33258荧光染色结果表明,在X射线处理后12h,联合组比辐照组出现了更加明显的细胞凋亡形态变化。蛋白质印迹法检测结果显示,在辐照后24h,联合组γ-H2AX蛋白表达量(614.20±21.13)%,高于辐照组(421.78±19.11)%,F=14.513,P=0.005。提示DNA损伤严重,未完全修复。结论端粒酶抑制剂MST-312促进了辐射诱导的细胞凋亡,对HepG2细胞具有辐射增敏作用,其机制可能与加剧辐射诱导的端粒损伤和抑制辐射后DNA损伤修复有关。     

Lin28 对肝癌HepG2 细胞5-Fu 敏感性的影响及其分子机制

目的：探讨RNA结合蛋白Lin28 对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响及其机制。方法：应用pcDNA3.1-Lin28 或si-Lin28 转染HepG2 细胞,采用qPCR及WB法检测转染后HepG2 细胞Lin28 的表达水平,CCK-8 法检测5-Fu 作用后转染细胞增殖活性变化并计算5-Fu 对细胞作用的IC50,流式细胞术检测5-Fu 处理后细胞凋亡情况、WB法检测凋亡相关蛋白的表达变化,qPCR法检测转染后耐药相关miRNA（let-7a 和let-7b）及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog和Sox2）的mRNA表达水平。结果：与空载对照组（HepG2/Vector）相比,HepG2/Lin28 组细胞中Lin28 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（P<0.05 或P<0.01）,过表达Lin28 可显著抑制HepG2 细胞对5-Fu 作用的敏感性（IC50明显升高,P<0.05）和增强细胞增殖活性、使细胞凋亡率和凋亡相关蛋白caspase-3 表达明显降低（均P<0.01）。与阴性对照组（si-control）相比,si-Lin28 细胞中Lin28 表达水平显著下降（P<0.01）;敲减Lin28 可使细胞增殖活性及5-Fu 的IC50显著降低（均P<0.01）,凋亡率及凋亡蛋白表达明显增加（P<0.01）。与HepG2/Vector 组比较,HepG2/Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog 和Sox2）的表达水平明显上调（均P<0.01）,而si-Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及Oct4、Nanog、Sox2 的表达水平较si-control 组明显下调（均P<0.01）。结论：Lin28 可通过调节miRNAs的表达及肿瘤干细胞的形成从而调节肝癌HepG2细胞对化疗的敏感性,靶向调节Lin28 表达有望成为提高肝癌化疗疗效的手段。     

蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨

目的：探讨4种蛋白酶体抑制剂硼替佐米（bortezome,BZ）、环氧甲酮四肽（epoxomycin,Epox）、乳孢素（1actacystin,Lacta）和MG132单独作用或者联合JNK特异性抑制剂SP600125,对肝癌HepG2细胞内BAG3蛋白表达的影响及分子机制。方法：空白对照、100nmol／LBZ、100nmol／LEpox、500nmol／LLacta和2umol／LMG132单独或联合50μmol／LSP600125处理HepG2细胞;实时定量RT-PCR检测蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞内BAG3基因mR—NA表达水平影响,蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂单独或者联合JNK激酶特异性抑制剂对BAG3蛋白表达水平的影响;利用MTT试剂盒检测蛋白酶体抑制剂细胞存活率,Hoechest33258染色检测细胞凋亡率。结果：蛋白酶体抑制剂BZ、Epox、Lacta和MG132均不同程度上调BAG3基因的mRNA和蛋白表达水平,而SP600125显著抑制蛋白酶体抑制剂引起的BAG3表达上调。MTT结果显示,SP600125显著抑制HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性;进一步Hoechst33258染色结果显示,4种蛋白酶体抑制剂联合SP600125作用引起HepG2细胞的凋亡率分别为（49．2±3．2）％、（58．7±3．5）％、（56．8±3．4）％和（53．4±3．3）％,明显高于蛋白酶体抑制剂单独作用组的（7．2±2．8）％、（16．7±3．2）％、（12．3±2．9）％和（11．4±3．0）％,P〈0．05。结论：蛋白酶体抑制剂通过JNK信号通路上调BAG3的表达,抑制JNK活性增加了HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性。     

磁微球对肝癌HepG2细胞增殖影响的研究

目的:观察不同浓度的磁性纳米颗粒对肝癌HepG2细胞生长的影响.方法:化学共沉淀法制备磁流体,以浓度0、4和8 mg/mL的磁微球分别作用于HepG2细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞凋亡情况.以不同浓度的磁微球作用于HepG2细胞不同时间,MTT检测其增殖率的变化.电镜观察磁微球作用于肝癌HepG2细胞后的形态学变化.结果:制备的磁流体为黑色胶体混悬液,透射电镜观察发现,颗粒以椭圆形和球形居多,颗粒大小多为70 nm左右.4 mg/mL磁流体作用于HepG2细胞48 h后的凋亡率为(32.73±4.80)％,8 mg/mL磁流体作用于HepG2细胞48 h后的凋亡率为(53.87±5.35)％,与HepG2细胞自身凋亡率的(21.15±1.06)％相比,差异均有统计学意义,P值均＜0.05.磁微球浓度为4 mg/mL分别作用HepG2细胞24和48 h的细胞抑制率分别为17.97％和20.22％、8 mg/mL则为35.93％和35.27％,与磁微球浓度为0 mg/mL作用相同时间的抑制率比较差异均有统计学意义,t值分别为2.237,2.483,2.985和3.173,P值均＜0.05.结论:磁微球可对抑制肝癌HepG2细胞增殖,但不成剂量时间依赖关系.     

砷诱导肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡机理研究

目的 研究三氧化二砷(As203)诱导肝母细胞瘤细胞系HePG2细胞凋亡的机理及其对细胞核基质相关蛋白——前髓白血病蛋白(PML)表达的影响。方法 Hep2细胞培养于MEM培养基中,用不同浓度As2O3分别处理24或96h。运用原位末端脱氧核苷转换酶(TdT)标记法(TUNEL)和DNA阶梯法检测细胞凋亡。以激光共振聚交显微镜及Western杂交观察PML的表达。结果 TUNEL阳性的凋亡细胞及DNA阶梯片段可见于As203处理组。用2μmol/L As203处理的Hep2细胞核基质蛋白内PML表达减弱。激光共振聚交图像显示,经2μmol/L As203处理的Hep2细胞核中,PML蛋白的表达明显减弱;用5μmol/L As203处理后,PML在Hep2细胞核中的微小点状表达几乎消失。结论 As203在体外可明显抑制Hep2细胞生长,其诱导HePG2细胞凋亡的作用依时间及剂量不同而异。As203可降解HepG2细胞核中PML蛋白,且PML的表达降低与细胞凋亡密切相关。核基质相关蛋白PML可能是As203作用的靶蛋白。     

植酸对肝癌HepG2细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究植酸对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法:将含不同浓度(0、1、2和3mmol/L)植酸的培养液作用于体外培养的HepG2细胞,应用免疫细胞化学法检测HepG2细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;RT-PCR法检测细胞癌基因Mdm2mRNA的表达;蛋白质印迹法检测核转录因子NF-кB p65的表达变化。结果:1、2和3mmol/L植酸作用组PCNA蛋白表达的A值分别为0.189±0.004、0.179±0.003和0.175±0.002,0mmol/L组即对照组为0.209±0.013,植酸作用组低于对照组,差异有统计学意义,F=21.491,P<0.05;Mdm2mRNA的表达值分别为0.871±0.058、0.720±0.035和0.593±0.061,对照组为0.889±0.092,植酸作用组低于对照组,差异有统计学意义,F=13.698,P<0.05;NF-кB p65蛋白表达值分别为0.933±0.007、0.920±0.014和0.908±0.012,对照组为0.965±0.021,植酸作用组低于对照组,差异有统计学意义,F=8.472,P<0.05。结论:植酸具有抑制肝癌HepG2细胞生长的作用,其机制可能与植酸下调PCNA、Mdm2、NF-кB p65的表达从而起到抑制HepG2细胞的增殖和诱导凋亡有关。     

稳定转染HBx基因的HepG2细胞对raf-1表达的影响

 【摘要】　目的　探讨乙型肝炎病毒x（HBx）蛋白致癌变的分子机制。方法　构建HBx 基因真核表达载体pCDNA3.1(+)-x，脂质体转染入HepG2 细胞（HepG2X 细胞），以pCDNA3.1空载体为对照（HepG2X0细胞），G418选择培养，克隆扩增转染细胞，并用Western blot检测X蛋白的表达；MTS实验检测细胞增生情况；流式细胞仪检测细胞周期变化；检测转染组及对照组raf-1的表达变化。结果　转染组X细胞在相对分子质量为21×103位置有X蛋白的表达，而对照组HepG2X0细胞及未处理的HepG2细胞未见X蛋白的表达。MTS结果显示X细胞增生能力显著高于其他两株细胞（P＜0.01）。流式细胞仪结果显示转染后的细胞系凋亡率增高，G1／G0期细胞减少，G2期细胞增多。Western blot结果示转染组X细胞raf-1表达明显较其他两组细胞增高。结论　HBx 有推进细胞周期的作用，使细胞快速进入G2期。其机制可能是HBx增加细胞周期蛋白raf-1的表达。     

人TNFα真核表达载体的构建及其在人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM中的稳定表达

目的：构建可在真核细胞内表达人肿瘤坏死因子alpha （hTNF-α） 基因的真核表达载体,建立稳定表达hTNF-α基因的细胞模型.方法： 应用RT-PCR 的方法从分离的正常人外周血单核细胞（LPS刺激）中,扩增出hTNF-αcDNA ,连接至载体pMD18-T vector中,经酶切鉴定与序列测定证实;以亚克隆法构建于真核表达载体pBK-CMV的相应酶切位点, 转化至大肠埃希菌DH5α,最后将表达的pBK-hTNFα重组蛋白行SDS-PAGE电泳,并作考马斯亮蓝染色分析,Western blot鉴定;经脂质体Lipofectamine2000转染HepG2/ADM细胞后,经G418筛选,通过ELISA、RT-PCR方法检测其在体外转染肝癌耐药细胞HepG2/ADM后hTNFα基因和蛋白的表达.结果：自正常人外周血单核细胞中克隆的hTNF-αcDNA 成功连接到pMD18-T vector,用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切、经序列测定证实,与Genbank的序列完全一致;pBK-hTNFα的克隆表达重组蛋白经Western blot证实此蛋白为hTNFα.克隆基因正确插入载体pBK-CMV中.pBK-hTNFα经脂质体介导转染肝癌耐药细胞后, ELISA、RT-PCR方法检测到其在转染细胞中稳定表达.结论：通过DNA重组技术成功地构建了可在体外稳定表达hTNF-αcDNA 全长的真核表达载体pBK-hTNFα.     

氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌HepG2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌HepG2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌HepG2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。     

TSLC1真核表达载体的构建及在HepG2肝癌细胞中的表达

目的构建TSLC1真核表达载体,并转染到肝癌细胞HepG2中使之表达,为研究TSLC1的抗肝癌作用奠定基础。方法利用RT-PCR技术扩增TSLC1基因全长,并与真核表达载体pRe-ceiver-M29进行连接;应用双酶切、PCR以及测序鉴定此连接载体;脂质体Lipofectamine 2000介导重组载体转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和免疫组化法检测其表达。结果RT-PCR获得了约1 329 bp大小的TSLC1基因片段;经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实TSLC1基因片段正确插入真核表达载体pReceiver-M29中;与对照组比较,RT-PCR方法可见显示转染组细胞TSLC1mRNA表达明显增多,免疫组化法可见显示转染组细胞TSLC1蛋白表达明显增高。结论成功构建了真核表达载体pReceiver-M29-TSLC1,建立了稳定转染TSLC1的HepG2细胞株。     

Brivanib 对 HepG2细胞的抑制作用及机制

目的：探讨 Brivanib 对人 HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：MTS 法检测 Brivanib 对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同浓度 Brivanib 处理后 HepG2细胞的凋亡率,Western blot 检测凋亡相关蛋白 Bcl -2、Bax 的表达情况,免疫荧光观察 Brivanib 处理后 HepG2细胞内源性 LC3表达情况, Western blot 检测自噬关键蛋白 LC - I 向 LC - II 的转换及 p62的表达。结果：与空白对照组相比,Brivanib 对HepG2肝癌细胞的增殖抑制率随剂量增加和时间延长而增加,呈剂量和时间依赖性。不同浓度 Brivanib 作用72h 后 HepG2细胞的凋亡率分别为（13.06±4.06）%、（20.89±1.83）%、（44.29±2.56）%,其诱导凋亡与下调 Bax、上调 Bcl -2表达相关。2.5μmol/ L Brivanib 处理 HepG2细胞48h 后内源性 LC3表达增加。Western blot 分析表明,LC3- I 向 LC3- II 转换增加,p62表达降低。结论：Brivanib 抑制 HepG2人肝癌细胞增殖,诱导凋亡和自噬活化。     

水蛭素对肝细胞癌HepG2细胞抑制作用机制探讨

目的 研究水蛭素对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌）HepG2细胞抑制作用及其抗肝癌的分子机制。方法 将含不同浓度（1 U/mL、2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素的培养液作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测水蛭素对肝癌HepG2细胞凋亡的影响,Transwell法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭的影响,荧光定量PCR检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因的mRNA表达水平,Western blot检测VEGF基因的蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,肝癌HepG2细胞增殖抑制率随水蛭素浓度（1 U/mL、2　U/mL、4 U/mL和8 U/mL）增加及作用时间（24　h、48　h、72　h）延长而增加,呈剂量-时间依赖效应（P<0.05）。不同浓度（2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素作用48 h后,肝癌HepG2细胞凋亡率分别为（28.37±1.16）%、（40.27±0.97）%、（76.17±1.5）%,细胞侵袭个数分别为（204±9）个、（163±6）个、（94±4）个,细胞迁移个数分别为（86±5）个、（54±7）个、（20±5）个,细胞凋亡率、侵袭及迁移个数随水蛭素浓度增加而增加,呈浓度依赖性（P<0.05）。VEGF mRNA、蛋白的表达量随水蛭素浓度增加而明显下调（P<0.05）。结论 水蛭素能抑制肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭,其机制可能是通过下调VEGF表达。     

HBx genotype D represses GSTP1 expression and increases the oxidative level and apoptosis in HepG2 cells

Epigenetics has been implicated in human cancer development. Epigenetic factors include HBx protein, which is able to induce hypermethylation and suppresses tumor suppressor genes. One of such tumor suppressor genes, GSTP1, shows reduced expression in many human cancers. Hypermethylation of GSTP1 is the most studied mechanism of its silence. In the present study, we reported that GSTP1 expression was completely depleted in HBV integrated HepG2.2.15 cells due to the hypermethylation in its promoter region. And it was HBx, especially HBx genotype D, that played the key role in repressing GSTP1 expression. Further functional studies like ROS assay and apoptosis detection were also used to confirm this repression. Our findings should facilitate the understanding of HBV and their influences on the epigenetic modulations for epigenetic tumorigenesis during HBV‐mediated hepatocellular carcinogenesis.     

HepG2 细胞系CD133+细胞对多柔比星的抗性及其机制

[摘要] 目的: 探讨HepG2 中CD133+细胞对多柔比星（doxorubicin,DOX）的抗性及其作用机制。方法: 通过磁珠分选实验对HepG2 细胞中CD133+细胞进行分选,流式细胞术检测CD133+细胞阳性率,MTT法检测CD133+细胞对DOX诱导凋亡的抗性,免疫荧光实验检测DOX处理各组细胞后P65 激活转运情况,qRT-PCR检测各组细胞乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP) mRNA表达水平;Western blotting 检测CD133+细胞凋亡相关蛋白的表达。结果: 磁珠分选可以高效地富集HepG2 细胞中CD133+细胞。与CD133-细胞相比,CD133+细胞对DOX具有更强的抗性（P<0.05）;与CD133-细胞、HepG2 细胞相比,CD133+细胞中P65 激活速度与表达水平明显提高（均P<0.05）;CD133+细胞中BCRP mRNA表达水平明显高于CD133-细胞和HepG2 细胞（均P<0.05）;与HepG2、CD133-组相比,CD133+细胞组Bax 和p53 蛋白表达水平显著减少、Bcl-2 和Survivin 蛋白表达量显著增加（P<0.05 或P<0.01）。结论: HepG2 细胞中CD133+细胞亚群对DOX 高耐药性的分子机制在于高表达存活相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Survivin以及耐药性转运蛋白BCRP,而低表达促凋亡相关蛋白p53、Bax。     

HDAC6对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的:明确HDAC6对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:应用Western blot技术检测正常肝细胞系LO2和肝癌细胞系HepG2细胞中 HDAC6的表达。应用HDAC6抑制剂Tubastatin A抑制HepG2细胞中HDAC6的表达,运用Western blot及荧光定量PCR技术检测HepG2细胞中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和上皮间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关分子标志物（N-cadherin,β-catenin,Vimentin）的表达;用TGF-β1抑制剂SB431542刺激HepG2细胞后,检测HepG2细胞中 EMT标志蛋白的表达,应用TGF-β1刺激HepG2细胞后观察HepG2细胞的形态变化。应用过表达HDAC6的质粒P3-HDAC6、P3-HDAC6+TGF-β1分别作用于HepG2细胞,通过Western blot检测HepG2细胞中EMT相关分子标志物的表达,应用划痕及Transwell技术检测HepG2细胞处理前后的迁移和侵袭能力变化。结果:肝癌细胞系HepG2细胞内HDAC6的蛋白表达量明显低于正常肝细胞系LO2（P＜0.05）。 HepG2细胞Tubastatin A组中N-cadherin、β-catenin、Vimentin、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平相较于空白对照组明显增高（P均<0.05）。SB431542组中EMT标志蛋白表达水平相较于空白对照组明显降低（P均<0.01）。 TGF-β1刺激HepG2细胞后细胞变得分散且狭长。同时发现P3-HDAC6+TGF-β1组的细胞迁移和侵袭能力在48 h后明显强于P3-HDAC6组且弱于空白对照组（P均<0.05）。结论:HDAC6可通过下调TGF-β1的表达从而抑制HepG2细胞的EMT进而抑制HepG2细胞的迁移和侵袭。     

HBx基因转染胆管癌QBC939细胞对其凋亡的影响及作用机制的研究

目的:探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virus x, HBx)转染胆管癌QBC939细胞引起凋亡及其发生的可能机制.方法:将构建有HBx基因的真核表达载体pcDNA3-x采用脂质体转染法瞬时转染QBC939细胞, RT-PCR及Western 印迹法鉴定HBx在QBC939细胞中的表达;DAPI染色后荧光显微镜镜下观察细胞核的改变,结合FCM法检测细胞的凋亡;以未转染和转染空质粒pcDNA3的QBC939细胞为对照,Western印迹法检测Bax、Bak、Bid、Bcl-XL、CytC、p65的表达;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;RT-PCR法检测Fas和c-myc在mRNA水平的表达;双荧光素酶报告系统分析细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)的转录活性.结果:RT-PCR及Western印迹法检测均证实转染后的QBC939细胞中有HBx的表达;DAPI显示转染细胞核呈现固缩且边缘化等细胞凋亡特征性的改变;FCM检测结果显示,转染HBx组与对照组相比,凋亡细胞数量明显增多;Western 印迹法检测结果显示,Bcl-2家族中Bax表达升高,Bcl-XL下降,p65在核内的表达水平升高,细胞质中细胞色素C( cytochrome C)表达升高;RT-PCR结果显示,Fas和c-myc的mRNA水平均高于对照组;JC-1染色法结果显示ΔΨm下降;双荧光素酶报告系统分析提示NF-κB的转录活性升高.结论:成功将HBx基因转入QBC939细胞中,HBx可能是通过调节Fas/FasL死亡受体途径,Bcl-2家族引起的线粒体路径及NF-κB的激活、c-myc等凋亡相关基因的表达而引起QBC939细胞的凋亡.