HIV-1潜伏库研究进展

HIV-1在未经治疗的艾滋病患者体内虽可以持续复制,但也可潜伏在细胞内以逃避宿主的免疫清除,这一现象即病毒潜伏。病毒潜伏对抗病毒治疗带来了挑战,也引起人们的高度关注。本文对HIV-1病毒潜伏库的研究进展进行了综述。     

HIV-1病毒储存库及检测方法的研究进展

高效联合抗反转录病毒治疗俗称＆quot;鸡尾酒疗法＆quot;（HAART）,是目前已证实是治疗艾滋病最有效的方法.自从1996年HAART问世以来,HlV-1治疗进入了一个新时期,艾滋病已成为类似高血压、糖尿病等不能根治但可以长期控制的慢性疾病,研究显示,患者在有效的抗病毒治疗下,其平均寿命能延长数十年.早期的研究认为HIV-1病毒颗粒及产病毒的细胞生命周期很短,因此ART治疗在2～3年内能够将病毒完全清除[1-4].     

扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗（HAART）6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞（PBMC）和高度纯化的CD4＋T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4＋T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率（93.3%）明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率（10.0%）。结论 PBMC纯化CD4＋T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。     

Importin α1与HIV-1整合酶相互作用及其对病毒复制的影响（英文）

目的研究HIV-1整合酶与细胞蛋白Importinα1（Impα1）的相互作用及其对HIV-1复制的影响。方法采用化学发光免疫共沉淀系统定量检测细胞内HIV-1整合酶与Impα1蛋白的相互作用,同时利用基因沉默技术下调CD4＋C8166 T细胞中Impα1的表达,以研究Impα/β入核转运途径对HIV-1复制的影响。结果当T细胞内Impα1表达下降时,HIV-1对其感染性显著减弱。Real-time PCR分析结果显示,尽管病毒逆转录未受到影响,但其2-LTR DNA（入核指标）及整合DNA的形成受到了抑制,提示Impα1的下调明显影响HIV-1入核转运过程。结论该研究为HIV-1整合酶与Impα1蛋白之间的相互作用及其在病毒感染中的影响提供了重要的实验依据。     

双黄连粉针剂及其药物血清体外抗HIV-1作用

【目的】探讨双黄连药物及其药物血清在体外是否有抗HIV-1作用。【方法】采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞（H9／HIV-1ⅢB）分别与不同稀释浓度的双黄连药物和药物血清作用后，与靶细胞MT-2细胞混合培养，观察MT-2和H9／HIV-1ⅢB融合细胞的变化；MTT法检测药物对HIV感染细胞的保护作用；HIV-1p24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清p24抗原含量的变化。【结果】双黄连粉针剂及其药物血清能够抑制MT-2和H9／HIV-1ⅢB细胞融合，能够保护HIV感染细胞的死亡，减少HIV-1p24的表达。【结论】双黄连粉针剂及其药物血清在体外具有抗HIV-1的作用。     

中国HIV-1的主要流行状况

自1981年美国报告首例艾滋病（AIDS）以来，艾滋病正以惊人的速度在全球传播和扩散。中国的艾滋病也进入了快速传播期。本文章综述了中国，尤其是云南省和中部地区HIV-1的主要流行情况。     

中药新资源蟾蜕抗HIV-1作用的实验研究

目的观察蟾蜕封艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）的作用。方法按照中国卫生部《新药临床前研究指导原则汇编》中“抗艾滋病药”的要求，进行了抗HIV-1实验研究。结果蟾蜕在0．625-1．25mg／mL剂量范围内，封HIV-1有一定的抑制作用。其平均抑制率为61．65％，治疗指数为3．4。结论蟾蜕封HIV-1有一定的抑制作用。     

HIV-1整合酶抑制剂的研究进展

本文介绍了目前正处于临床试验的人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)整合酶抑制剂S-1360和L-870810;另外,主要叙述了近年来发展比较迅速的三大类HIV-1整合酶抑制剂,即一般含芳环化合物、寡聚核苷酸和寡聚肽的研究进展。     

双黄连粉针剂及其药物血清体外抗HIV-1作用

 【目的】探讨双黄连药物及其药物血清在体外是否有抗HIV-1作用。【方法】采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞（H9／HIV-1ⅢB）分别与不同稀释浓度的双黄连药物和药物血清作用后，与靶细胞MT-2细胞混合培养，观察MT-2和H9／HIV-1ⅢB融合细胞的变化；MTT法检测药物对HIV感染细胞的保护作用；HIV-1p24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清p24抗原含量的变化。【结果】双黄连粉针剂及其药物血清能够抑制MT-2和H9／HIV-1ⅢB细胞融合，能够保护HIV感染细胞的死亡，减少HIV-1p24的表达。【结论】双黄连粉针剂及其药物血清在体外具有抗HIV-1的作用。     

宿主与HIV-1病毒的相互作用

人类获得性免疫缺陷综合征(AIDS)主要由人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)引起。近10年对HIV-1编码基因的功能研究结果促进了抗病毒药物的发展,如能直接抑制HIV-1基因编码的酶(逆转录酶和蛋白酶)的药物。但由于病毒突变所导致的耐药性及药物的不良反应等使这些药物不能很好的控制AIDS的发展。若没有合适的宿主因素,病毒将不能进行复制及引起疾病,通过调控宿主因素有可能防治病毒引起的疾病。本文对近年宿主与HIV-1相互作用的研究进展作简要论述。     

抗HIV广谱中和血清表位特异性研究进展

HIV疫苗研究的巨大障碍在于目前设计的包含Env蛋白或表位的疫苗在临床前及临床试验中难于诱导产生广谱中和抗体。近来的研究表明一些HIV-1感染者血清中存在的抗体能够中和多种病毒株,而新的表位作图技术对这些广谱中和血清表位特异性的深入分析将对广谱中和抗体靶向的病毒表位提供新的线索。通过广谱中和血清表位特异性研究获得的信息将促进新的广谱中和单克隆抗体的分离和潜在新表位的鉴定,为合理设计新的疫苗免疫原提供关键信息。     

蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性及机制的初步研究

目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验,融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结果蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV-1活性,P3抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为5.64μg/mL,对C8166细胞的毒性较小,CC50大于200μg/mL,治疗指数(TI)大于35.46;P3抑制HIV-1急性感染中p24抗原表达的EC50为23.04μg/mL,抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9/HIV-1 B融合的EC50为8.00μg/mL;P3在质量浓度为200μg/mL时,对HIV-1逆转录酶的抑制率为28.86%;P3抑制重组HIV-1蛋白酶活性的EC50为1.77μg/mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV-1活性,其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV-1蛋白酶活性。     

HIV-1辅受体配体的逆转录病毒载体的构建和表达

目的: 构建HIV-1辅受体的配体-趋化因子RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体,并观察在NIH3T3细胞的表达.方法: 从重组质粒pCMV-R-K-S-K中获取RANTES-KDEL-SDF-KDEL基因片段,构建RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体pLNCX-R-K-S-K,酶切鉴定并测序.采用标准的磷酸钙共沉淀法转染包装细胞Bing, G418筛选克隆细胞,制备重组病毒液,继之感染NIH3T3细胞,计算病毒滴度.间接免疫荧光检测NIH3T3细胞中RANTES、SDF-1的表达.结果: pLNCX-R-K-S-K逆转录病毒载体酶切和测序结果与预期一致,筛选出抗性克隆,制备了高滴度的重组病毒液,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可表达于转染细胞.结论: HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体构建成功,重组病毒可以感染NIH3T3细胞,为下一步HIV-1感染实验打下了基础.     

天然产物中的HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂

综述了天然产物中对 HIV- 1逆转录酶具有抑制活性的化合物的来源和分类。重点介绍了几种 HIV - 1非核苷类逆转录酶抑制剂 ( NNRTIs)的性质、特点、抗 HIV- 1活性及其构效关系。从天然资源和传统中草药发现具有新结构、新作用机制的天然 NNRTIs是开发研制抗 HIV- 1药物的一条极有希望的途径。     

转录因子NF-κB在HIV-1表达中的作用

NF-κB／Rel转录因子是由P50和P65组成的同源二聚体以及异源二聚体。它参与许多基因产物的表达和激活，NF—κB／Rel蛋白家族在炎症反应(如调控合成多种炎症细胞因子，趋化因子，粘附因子，细胞表面受体，急性期蛋白等)、免疫、应激、细胞生长及癌症发生与生长等诸多生物学过程中的作用受到越来越多的关注。近年来，人们     

两种巢式PCR方法在HIV-1早期检测的应用和比较

目的 建立并应用HIV-1早期检测的单重巢式PCR和多重巢式PCR方法检测HIV-1感染,探讨两种方法检测结果的差异.方法 针对HIV-1主要流行毒株的pol、gag、env 3个基因的保守序列设计巢式PCR引物,建立单重巢式PCR和多重巢式PCR方法.运用两种巢式PCR方法对118例HIV-1阳性样本和48例HIV-1阴性样本进行检测.结果 多重巢式PCR方法的灵敏性为96.6%,高于env区单重巢式PCR的80.5%和pol区单重巢式PCR的88.1%(P＜0.05),但与gag区单重巢式PCR检测结果(90.7%)差异无统计学意义(P＞0.05);多重巢式PCR的特异性为99.2%,高于env区单重巢式PCR的85.4%(P＜0.05),但与gag区和pol区的特异性差异无统计学意义(P＜0.05);多重巢式PCR方法的平均重复性为98.3%,检测下限至少可以达到250 copy/ml.结论 多重巢式PCR检测方法与单重巢式PCR检测方法相比,具有更高的灵敏性、特异性以及较好的重复性,能检测到较低拷贝数的样本,是一种快速、简便、可靠的HIV-1早期检测方法.     

Alu-反向PCR检测HIV-1整合位点方法的建立

目的建立Alu-反向PCR检测整合型HIV-1DNA的实验方法。方法收集18例HIV-1感染者及12例健康者的抗凝血标本,根据整合型HIV-1DNA的特点设计引物,第一轮PCR5’端引物来自于人类保守的Alu序列,3’端引物来自于HIV-1gag序列,扩增片段包含了整合位点上游的人类基因组DNA序列和整合的HIV-1DNA序列。经PstⅠ酶切后进行自身片段环化,以此为模板设计针对HIV-1LTR和gag保守区域引物,进行巢式PCR。结果 16例HIV-1感染者成功扩增出目的片段,12例健康者均为阴性。结论本实验建立的检测整合型HIV-1的方法为进一步研究HIV病毒储藏库机制提供了参考。     

抗病毒治疗失败的艾滋病患者HIV-1基因型耐药变异的研究

目的 了解高效抗逆转录病毒治疗(HAART)失败的艾滋病患者HIV-1基因型耐药变异的情况,为临床治疗提供实验室参考数据.方法 收集2008年1月至2009年12月在深圳市第三人民医院接受HAART治疗失败的41例艾滋病患者的血浆,采用RT-PCR和套式PCR从血浆中提取病毒RNA,扩增目的基因片段,并对其进行序列测定和分析.结果 共获得38例抗病毒治疗失败者的基因序列,其中有3条序列显示无变异位点,在其他出现耐药变异的序列中K103N、G190A、Y181C、K101P、M184V、D67N、K70R、T215Y及K219R为最常见的变异位点;100%(35/35)治疗失败患者出现了对非核苷类逆转录酶抑制剂NVP或EFV的高中度耐药,超过50%的患者出现了对临床上目前常用的核苷类逆转录酶抑制剂AZT、3TC、IMT及DDI的高中度耐药,仅发现极少数治疗失败患者对蛋白酶抑制剂的高中度耐药;D4T+DDI+NVP治疗方案是最常见出现耐药的治疗组合;病毒耐药变异往往发生在抗病毒治疗后的2～3年.结论 HIV耐药变异株的出现是艾滋病患者临床上抗病毒治疗失败的主要原因,目前引起耐药突变主要是针对NNRTIs或NRTIs药物耐药,而对Pis的耐药在临床上尚比较少见,建议更换治疗组合时多考虑选用含有增强作用的Pis,从而达到更好地病毒抑制效果.     

APOBEC3G对HIV-1及其Vif缺失株的抑制作用

目的研究细胞内在抗病毒因子APOBEC3G对HIV-1及其Vif缺失株的抑制作用。方法 HIV-1野生株病毒(BH10WT)和Vif缺失株病毒(BH10ΔVif)分别由转染293T细胞获得,通过感染MT4和H9细胞,分别检测其反转录酶活性。用分子克隆技术构建APOBEC3G与绿色荧光蛋白融合表达的质粒pEGFP-3G。HIV-1野生株和Vif缺失株质粒与不同剂量的pEGFP-3G共转染293T细胞,APOBEC3G-GFP在细胞内融合表达定位通过荧光显微镜观察。所生成的子代病毒粒子的感染力分别由MAGI检测和反转录酶活性检测方法定量。结果 BH10 WT病毒在H9细胞和MT4细胞中均有所复制,在感染MT4细胞后4 d已经具有较高的反转录酶活性。BH10ΔVif病毒感染H9细胞产生的子代病毒的反转录酶活性接近细胞对照水平,而其在MT4细胞中产生的子代病毒的反转录酶活性在感染后12 d有所显现,即非允许性H9细胞内APOBEC3G对ΔVif病毒株具有很强的抑制作用。与绿色荧光蛋白融合表达的APOBEC3G蛋白定位于细胞质。BH10ΔVif转染293T细胞后生成的病毒滴度为2.75×104 U/mL,随着pEGFP-3G共转染量的升高,所产生的子代病毒滴度从1.48×103 U/mL显著降至0.33×103 U/mL。与0.2μg质粒pEGFP-3G共转染产生的BH10ΔVif病毒的感染力比不表达APOBEC3G的相同病毒的感染力降低近20倍。结论 APOBEC3G具有抗HIV活性,同时HIV Vif在病毒复制过程中发挥关键作用,两者之间相互作用的量效关系为我们构建抗病毒药物筛选平台奠定了可靠的实验基础。