体外培养的人胃癌细胞株MKN45培养液中胃泌素的测定

用放免法测得体外培养的人胃癌细胞株ＭＫＮ４５培养液中含有胃泌素。癌细胞增殖时，胃泌素值高虽不明显，但二者呈正相关（ｒ＝０．９９８，Ｐ＜０．０５），研究结果提示ＭＫＮ４５细胞能分泌和释放胃泌素。     

体外培养的人胃癌细胞株MKN45培养液中胃泌素的测定

采和放射免疫方法检测发现，体外培养的人胃癌细胞株ＭＫＮ４５培养液中含有胃泌素，癌细胞增殖时，胃泌素值升高，两者呈正相关，结果提示ＭＫＮ４５是一种胃泌素依赖性胃癌，为胃癌的内分泌治疗提供了实验依据。     

胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株NKN45裸鼠移植瘤生长的抑？…

探索应用胃泌素受体拮抗剂调控胃癌胞自分泌生长的作用及其机制。方法建立胃癌细胞株ＭＫＮ４５移植瘤的动物模型，观察胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对移植瘤的面积，重量，胃癌细胞ＤＮＡ及血清促胃液素含量的影响。结果第１６天丙谷胺组移植瘤面积（６１．４１±１８．５７）ｍｍ＾２     

胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株MKN_(45)裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探索应用胃泌素受体拮抗剂调控胃癌细胞自分泌生长的作用及其机制。方法建立胃癌细胞株ＭＫＮ４５移植瘤的动物模型,观察胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对移植瘤的面积、重量、胃癌细胞ＤＮＡ及血清促胃液素含量的影响。结果第１６天丙谷胺组移植瘤面积（６１．４１±１８．５７）ｍｍ２较对照组（９４．８６±２８．０５）ｍｍ２明显缩小（Ｐ＜０．０５）,第２８天时差别更明显（１２５．５７±４０．２６）∶（２１１．５９±５０．０８）ｍｍ２。第２８天时丙谷胺组及对照组的移植瘤重量分别为（８４７．９±６９．６）ｍｇ及（１１７７．７±８３．５）ｍｇ（Ｐ＜０．０５）。丙谷胺组胃癌细胞ＤＮＡ指数、平均ＤＮＡ含量及Ｓ期细胞比例均低于对照组。丙谷胺对血清促胃液素含量没有影响。结论丙谷胺对胃癌细胞株ＭＫＮ４５移植瘤有抑制生长的作用;丙谷胺发挥抗肿瘤作用是通过改变胃癌细胞ＤＮＡ代谢过程,而与血清促胃液素含量的改变无关。     

苯乙酸钠在体外诱导胃癌细胞的表型逆转及其分化

目的 研究非毒性分化诱导剂苯乙酸钠（ＮａＰＡ）在体外对胃癌ＭＫＮ－２８和ＭＫＮ－４５细胞的生长、分化以及表型的影响。方法 以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和半固体琼脂培养法分别检测了ＭＫＮ－２８和ＭＫＮ－４５细胞的着壁依赖性和着壁不依赖性生长。以酶联吸附试验和流式细胞仪分别检测了ＭＫＮ－２８和ＭＫＮ－４５细胞表面人白细胞抗原Ⅰ、Ⅱ类分子以及细胞间粘附分子－１的表达。以电子显微镜观察了ＭＫＮ－２８和ＭＫＮ－４     

改良MTT法检测自然杀伤细胞的活性

采用经作者改良的ＭＴＴ比色测定自然杀伤细胞（ＮＫＣ）活性。结果显示：在效应细胞（ＥＣ）和靶细胞（ＴＣ）活性均≥９５％，ＥＣ≥３．０×１０２／Ｗｅｌ、ＴＣ≥１．６×１０２／Ｗｅｌ时，细胞还原ＭＴＴ产生的甲瓒溶解后的ＯＤ５７０ｎｍ值与细胞数成线性相关（ｒｅ＝０．９４，ｒｔ＝０．９７，Ｐ＜０．００１）。本法在测得ＥＣ∶ＴＣ为４０∶１时，正常人外周血ＮＫＣ活性为４５．６４％。用本法和３Ｈ－ＴｄＲ掺入抑制试验同时测定１０份白血病患者外周血ＮＫＣ活性，分别为３４．８６±７．８０％和３５．１６±８．４０％，两者呈良好的正相关（ｒ＝０．８７６，Ｐ＜０．００１）。本法简便、稳定可靠，是一种很有价值的测定ＮＫＣ活性的方法。     

胃癌患者红细胞C3b受体与自然杀伤细胞活性的相关性研究

为研究胃癌患者的红细胞Ｃ３ｂ受体（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲ）与自然杀伤（ＮＫ）细胞活性之间的关系，利用酵母菌 环试验及ＭＴＴ比色法对３０例胃患者有３８例健康对照者的ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体及ＮＫ细胞活怀进行了测定。结果表明胃癌患者的这两项免疫指标均比正常对照显著低下（Ｐ〈０．０１）。经统计学相关性分析显示，这两项免疫指标间呈明显的正相关（ｒ＝０．６０７，Ｐ〈０．００１）。     

胃泌素,生长抑素对人胃癌细胞生长的调节作用

采用ＭＴＴ比色法检测细胞增殖情况，用放射法（ＲＩＡ）测定胰岛素、胰高血糖素和胃泌素含量，氨基己糖含量用Ｎｅｕｈａｕｓ法测定，以期观察五肽胃泌素和生长抑素对体外培养的人胃癌细胞ＨＧＣ８０３和ＨＧＣ８２３生长的调节作用。结果显示，胃泌素对两株胃癌细胞增殖均有促进作用，以１×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ浓度最为明显，并使胃癌细胞氨基己糖含量明显增加（７．５８±０．６６ｖｓ４．２±０．３９ｐｇ／细胞，Ｐ〈０．０５     

胃癌患者脾脏细胞免疫功能的临床研究

作者检测１６例进展期胃癌患者脾静脉血淋巴细胞（ＳＶＬ）和脾细胞（ＳＣ）的自然杀伤细胞（ＮＫ），ＬＡＫ细胞的杀伤活性及Ｔ细胞亚群（ＴＣ），与胃良性病变的ＳＶＬ及外伤性脾破裂（ＳＣ）对照，探讨了进展期胃癌脾脏细胞免疫功能，结果表明：胃癌患者脾脏ＮＫ，ＬＡＫ细胞杀伤尖性显著降低（Ｐ〈０．０２，Ｐ〈０．０１），ＣＤ４减少，ＣＤ８增加，ＣＤ４／ＣＤ８比值显著降低（Ｐ〈０．０２～０．０１）。提示进展期胃癌患者     

胃泌素、生长抑素对人胃癌细胞生长的调节作用

采用ＭＴＴ比色法检测细胞增殖情况，用放免法（ＲＩＡ）测定胰岛素、胰高血糖素和胃泌素含量，氨基己糖含量用Ｎｅｕｈａｕｓ法测定，以期观察五肽胃泌素和生长抑素对体外培养的人胃癌细胞ＨＧＣ８０３和ＨＧＣ８２３生长的调节作用。结果显示，胃泌素对两株胃癌细胞增殖均有促进作用，以１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ浓度最为明显，并使胃癌细胞氨基己糖含量明显增加（７．５８±０．６６ｖｓ４．２±０．３９ｐｇ／细胞，Ｐ＜０．０５））。生长抑素对两株胃癌细胞增殖均有抑制作用。以１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度最为明显，同时还抑制胃癌细胞分泌胃泌素和胰高血糖素的能力，并使胃癌细胞氨基己糖含量明显减少（２．６２±０．２９ｖｓ４．２±０．３９ｐｇ／细胞，Ｐ＜０．０５）。胃肠激素可调节胃癌细胞的生长，但尚有许多问题待阐明。     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

TWIST转录因子在胃癌中的表达及临床意义

目的 研究TWIST转录因子在人胃癌组织及人胃癌细胞系中的表达,并探讨TWIST的表达与各临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化SP法检测43例胃癌组织和12例正常胃组织中TWIST蛋白的表达水平,采用免疫印迹(Western blot)法检测胃癌未分化(MKN45)和高分化(MKN28)细胞株中TWIST蛋白表达水平...     

大黄素联合5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡

目的研究大黄素联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用于人胃癌MKN45细胞,甲氮唑蓝法观察对MKN45的生长抑制作用;荧光染色法、流式细胞仪分析MKN45的凋亡。结果10、20μg／mL大黄素分别与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞有明显的生长抑制作用,其抑制作用呈时间及浓度依赖性（P〈0．05）;流式细胞仪分析大黄素联合5-Fu能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2／M期阻滞,大黄素与5-Fu联用细胞凋亡率与5-Fu单用组相比差异有统计学意义（P〈0．051;吖啶橙染色观察联合作用组细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成。结论大黄素联合5-Fu可显著增强诱导人胃癌MKN45细胞凋亡的作用。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞黏附分子CD_(44)V_6表达的影响

目的 :观察消痰散结方对体外培养的 MKN- 45人胃癌细胞黏附分子 CD44 V6表达的影响 ,初步探讨了消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节。方法 :制备消痰散结药物血清 ,体外培养 MKN- 45人胃癌细胞 ,拟消痰散结方药物血清干预培养细胞 ,采用免疫组化 ABC法检测胃癌细胞中 CD44 V6的表达。结果 :中药组胃癌细胞中CD44 V6表达水平明显低于空白对照组。结论 :消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响黏附分子的表达 ,从而影响细胞的黏附性机制有关     

多西他赛抑制胃癌MKN45细胞增殖的研究

目的: 探讨多西他赛治疗胃癌细胞的作用机制.方法: 采用不同浓度的多西他赛处理胃癌MKN45细胞后,四唑盐比色试验检测癌细胞生长,分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡,采用荧光实时定量PCR和Western blot检测存活素(survivin)基因mRNA、蛋白表达情况.结果: 多西他赛抑制胃癌MKN45细胞的恶性增殖,且呈浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示,多西他赛处理组出现凋亡现象,且呈浓度依赖性.多西他赛处理组存活素基因mRNA、蛋白表达下调,且呈时间和浓度依赖性.结论: 多西他赛体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖,与诱导凋亡,下调存活素基因表达有关.     

逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用

目的：探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用。方法 应用PA317细胞包装的逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统,在体外以逆转录病毒上清感染法将TK基因导入MKN28人胃癌细胞,并初步观察更昔洛韦（GCV）对转染TK基因的MKN28胃癌细胞的杀伤作用。结果：TK基因可成功转导入MKN28细胞,且对细胞的生长状态无明显影响。但对GCV的敏感性却显增加;同时还观察到显的“旁观效应”。结论：逆转录病毒介导的HSV-TK系统对人胃癌细胞有较高的转染效率,GCV对转染阳性的胃癌细胞有显的杀伤作用。     

Twist对胃癌细胞系MKN28迁移和侵袭能力的影响

目的:研究Twist基因对人胃癌细胞株MKN28迁移和侵袭能力的影响.方法:利用脂质体介导转染技术和遗传霉素筛选得到稳定高表达的Twist蛋白的细胞克隆Twist -MKN28;采用Western免疫印迹检测细胞中Twist,上皮细胞钙黏蛋白(ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达;用基质胶侵袭小室检测细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:阳性质粒组Twist -MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PcDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist -MKN28组细胞中ecadherin蛋白减少,而vimentin蛋白表达上调;Twist -MKN28组细胞迁移、侵袭能力明显增强.结论:Twist基因可能通过上皮-间质转型促进胃癌细胞的迁移和侵袭.     

奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的 探讨奥曲肽（Octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用。方法 采用MTT比色分析法分别测定OCT对生长于无血清培养基及含10％胎牛血清（FBS）培养基中MKN45细胞的调控作用。结果 OCT10^-2,10^-3,10^-4g/L对培养于无血清培养基中的MKN45的生长均有抑制作用，以10^-3g/L浓度的抑制作用最显著，为10．4％；而OCT10^-2,10^-3,10^-4,10^-5,10^-6g/L对生长于含10％FBS培养基中的MKN45均未显示出抑制作用。结论 OCT可抑制无血清培养基中的MKN45的生长。胎牛血清中可能含有可快速降解OCT的肽酶，使得OCT未显示出对生长于含10％FBS培养基中的MKN45的抑制作用。     

siRNA靶向抑制ATDC蛋白对胃癌细胞生物学行为的影响

目的通过比较ataxia—telangiectasiagroupDcomplementinggene（ATDC）在永生化胃黏膜细胞GES与胃癌细胞系MNK45、AGS中的表达差异,探讨其对胃癌细胞生长、增殖及侵袭能力的影响。方法应用Westernblot实验检测ATDC在胃癌细胞系MKN45、AGS及永生化胃黏膜细胞系GES表达差异,利用慢病毒携带的siRNA下调ATDC在MKN45细胞表达水平,采用MTT实验检测细胞生长能力、流式细胞术检测细胞周期、平板克隆实验检测细胞克隆形成能力以及transwell实验检测细胞侵袭能力。结果ATDC在人胃癌细胞系MKN45与AGS细胞中的表达水平均明显高于永生化胃黏膜细胞GES（均P〈0．05）;转染siRNA慢病毒后,与Con—MKN45及MKN45比较,Si—MKN45细胞的表达水平明显下降（P〈0．05）：下调ATDC表达后MKN45细胞的生长能力明显受到抑制（P〈0．05）,S期细胞明显减少、增殖指数克隆形成率及侵袭能力均明显降低（均P〈005）。结论慢病毒携带的siRNA下调ATDC表达后能够抑制胃癌细胞MKN45的生长、增殖与侵袭能力,可为胃癌的基因治疗提供新的靶点。