β—内酰胺丝氨酸样蛋白在高脂诱导的心肌细胞损伤中的作用及机制

目的 探讨高脂对心肌细胞的影响及β-内酰胺丝氨酸样蛋白（LACTB）在其中的作用与机制。方法 将小鼠心肌细胞分为正常组（脂肪酸浓度为0μmol/L）和高脂组（HF组,脂肪酸浓度为400μmol/L）,干预18h。采用siRNA敲低心肌细胞LACTB的表达,进一步将HF组分为对照组（仅予以转染试剂处理）、Scra siRNA组（予以转染试剂+非特异阴性siRNA处理）及LACTB siRNA组（予以转染试剂+ LACTB特异性siRNA处理）。为探讨LACTB在高脂诱导的心肌细胞损伤中可能的作用机制,将LACTB siRNA组分为Vehicle组、N-乙酰半胱氨酸（ NAC）组。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR及Western blot分别检测细胞LACTB mRNA及蛋白表达,DHE染色及ELISA试剂盒检测细胞内活性氧簇（ROS）含量。结果 高脂可增加心肌细胞的凋亡,增加心肌细胞中LACTB的表达,促进ROS生成（均P＜0.05）。与对照组及Scra siRNA组比较,LACTB siRNA组心肌细胞凋亡与ROS生成进一步增加（P＜0.05）;与此相反,在此基础上使用抗氧化剂NAC部分逆转了心肌细胞凋亡（P＜0.05）。结论 LACTB通过抑制氧化应激反应可缓解高脂诱导的小鼠心肌细胞凋亡。     

诃子提取物含药血清对乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:研究诃子提取物含药血清对H2O2所致心肌细胞损伤的保护作用.方法:采用H2O2处理培养心肌细胞,造成氧化应激模型,通过检测细胞培养液中LDH、CK漏出量、MDA含量和SOD活性反映诃子提取物含药血清对H2O2氧化模型的影响.结果:与模型组比较,诃子提取物含药血清能显著减少LDH、CK漏出量(P＜0.05,P＜0.01);降低培养液中MDA含量(P＜0.05,P＜0.01),升高SOD活性(P＜0.01).结论:诃子提取物含药血清可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关.     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

高糖对培养乳鼠心肌细胞L型钙通道表达的影响

目的观察高糖对培养乳鼠心肌胞L型钙通道mRNA表达的影响.方法分别用正常糖培养液(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)和高糖培养液(葡萄糖浓度为25.5mmol/L)培养乳鼠心肌细胞,用RT-PCR方法检测心肌细胞mRNA水平的变化.结果与正常糖组相比,高糖组心肌细胞L型钙通道mRNA表达明显增加(P<0.05).结论单纯高糖培养可明显促进心肌细胞L型钙通道mRNA表达.     

高糖对乳鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨高糖对乳鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,以20mmol/L终浓度的葡萄糖干预48h后,激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测高糖对凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug、Msx1表达的影响。结果:激光共聚焦显微镜观察可见高糖组心肌细胞凋亡明显增加;TUNEL检测心肌细胞凋亡指数,高糖组为(19.67±3.45)%,明显高于对照组(1.12±0.24)%(P<0.05);流式细胞术显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05);荧光定量PCR表明高糖能上调P53、Msx1基因的表达,下调Pax3、Bmp4、Slug基因的表达。结论:高糖可能通过影响凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug、Msx1的表达而诱导心肌细胞凋亡。     

高脂血清对猪主动脉内皮细胞结构与抗血栓功能的损伤作用

采用高脂血清（ＨＬＳ）培养猪主动脉内皮细胞（ＥＣ）。观察ＨＬＳ对ＥＣ结构与抗血栓功能的影响。结果表明：ＨＬＳ可激发ＥＣ的脂质过氧化过程，使培养液中脂质过氧化物（ＬＰＯ）升高，造成ＥＣ形态结构受损。同时使ＥＣ产生前列环素（ＰＧＩ２）含量减少纤溶酶原激活物（ＰＡ）．纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）活性降低。提示：ＨＬＳ培养可使ＥＣ结构及抗血栓功能受损，与冠脉病变相似。因此该模型适宜于研究冠心病。     

复方缬芎滴丸对大鼠乳鼠心肌细胞的保护作用

目的研究复方缬芎滴丸(VLC)对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用血清药理学的研究方法,对大鼠进行灌胃给予VLC,剂量分别为32 mg.kg-11、6 mg.kg-1,空白组给予等体积生理盐水;制备含药血清,将含药血清加入培养5 d的乳鼠心肌细胞中,阳性组直接加入川芎嗪;厌氧培养24 h后,更换培养基(含有受试药),再给氧4 h,阴性对照组一直置于常规下培养;最后,检测培养基上清中的乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)含量;消化受试乳鼠心肌细胞制成细胞悬液,进行碘化丙啶染色,用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率。结果与正常组相比,缺氧再给氧损伤组LDH、MDA含量均增高,说明细胞在缺氧再给氧后脂质过氧化增强,心肌细胞出现明显的损伤。与模型组相比,VLC各含药血清组LDH、MDA值均明显降低,表明VLC有抗心肌细胞脂质过氧化的作用。流式细胞仪检测结果显示VLC含药血清组心肌细胞凋亡率分别降低38%、69%(P<0.01),表明VLC可降低缺氧再给氧后心肌细胞凋亡百分率。结论VLC对急性心肌缺血有明显的保护作用,其作用机制可能是VLC能够降低心肌缺血时氧自由基的产生,并有抗心肌细胞凋亡的作用。     

吡格列酮抑制体外高糖培养乳鼠心肌细胞炎症作用的研究

目的 探讨吡格列酮对高糖培养乳鼠心肌细胞炎症的抑制作用。方法 SD乳鼠原代心肌细胞培养至90%融合,换上无血清的DMEM培养基,并随机将细胞分为正常组、高糖模型组、吡格列酮低剂量组(10μmol/L)和高剂量组(20μmol/L),继续培养48h后,分别收集细胞培养液及心肌细胞,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、炎症因子IL-6、TNF-α的含量以及心肌细胞中蛋白P38MAPK的表达量和NF-κB的活性。结果 高糖下的细胞经吡格列酮药物处理后LDH、IL-6、TNF-α的含量、P38MAPK的表达量和NF-κB的活性均明显下降。结论 吡格列酮能抑制高糖培养下心肌细胞炎症作用。     

姜黄素对培养乳鼠心肌细胞损伤的抗氧化作用

目的评价姜黄素对心肌细胞损伤的抗氧化保护作用。方法对培养的乳鼠心肌细胞加入异丙肾上腺素造成缺血缺氧损伤模型,比较正常对照组、异丙肾上腺素损伤组、以及不同剂量姜黄素组培养液中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和氧化亚氮（NO）含量。结果异丙肾上腺素损伤组SOD活性明显降低,MDA和NO含量显著升高;而姜黄素中、高剂量组上述指标都有不同程度的改善。结论姜黄素对异丙肾上腺素造成的心肌细胞损伤具有保护作用,并呈现剂量依赖关系,作用机制与增强细胞抗氧化作用,减轻自由基和脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关。     

高脂血清对人内皮细胞前列环素、脂质过氧化物的影响及维生素E的保护作用

实验比较了高脂兔血清（ＨＲＳ）和正常兔血清（ＮＲＳ）对培养的人脐静脉内皮细胞（ＥＣ）脂质过氧化物（ＬＰＯ）的形成和ＥＣ利用外源性花生四烯酸（ＡＡ）合成前列环素（ＰＧＩ２）能力的影响；同时观察了抗氧化剂ＶｉｔＥ对ＥＣ的保护作用。结果表明，ＨＲＳ对ＥＣ合成ＰＧＩ２的影响有一时间和浓度相关的反应过程。用ＨＲＳ孵育培养呈融合状的ＥＣ，在４８ｈ前刺激ＰＧＩ２的产生，４８ｈ达最高值，然后急骤下降；而ＬＰＯ含量随着孵育时间的延长呈直线上升（ｒ＝０．９８７）。随着ＨＲＳ浓度的增加，ＬＰＯ含量逐渐升高，ＥＣ合成ＰＧＩ２能力呈下降趋势。ＶｉｔＥ可阻止ＨＲＳ引起的ＥＣ中ＬＰＯ含量的增加和ＰＧＩ２合成能力的下降。     

Mn~(++)对常规培养及低血清培养的乳鼠心肌细胞电生理的影响

用细胞内微电极技术观察了Mn~(++)对培养的乳鼠心室肌细胞电生理的影响。在常规培养条件下,Mn~(++)呈现其慢通道阻滞作用,使心肌细胞动作电位的APA、OS、MDP、Vmαx、APD等电参数减小。在低血清培养条件下,Mn~(++)改善心肌细胞机能状态,保护细胞膜的完整性,促使各主要电参数增大。     

牛磺酸对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用

目的：观察牛磺酸对培养的心肌细胞损伤的影响。方法：以培养的心肌细胞为模型。在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,结果：牛磺酸可以提高心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,使心肌细胞的搏动频率明显恢复。结论：牛磺酸对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞有保护作用。     

硒铁对实验大鼠心肌细胞电生理的协同性影响

目的研究硒（Ｓｅ）铁（Ｆｅ）微量元素异常时心肌细胞损害的机理。方法用细胞内微电极技术分别测定饲养１４周后大鼠心肌细胞电生理的改变。结果与对照组相比，单纯高Ｆｅ组无变化；单纯低Ｓｅ组ＲＰ、ＡＰＡ降低、ＡＰＤ５０延长；低Ｓｅ并高Ｆｅ组ＲＰ、ＡＰＡ也降低，但与低Ｓｅ组相比无显著性差异，ＡＰＤ５０则明显延长。提示低Ｓｅ是心肌细胞损害的基本原因，高Ｆｅ对心肌损害有一定的协同作用     

PROTECTIVE EFFECT OF GERMANIUM-AMINO ACID ON RAT MYOCARDIAL CELLS IN CULTURE TO OXYGEN AND GLUCOSE DEPRIVATION

ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥＥＦＦＥＣＴＯＦＧＥＲＭＡＮＩＵＭ－ＡＭＩＮＯＡＣＩＤＯＮＲＡＴＭＹＯＣＡＲＤＩＡＬＣＥＬＬＳＩＮＣＵＬＴＵＲＥＴＯＯＸＹＧＥＮＡＮＤＧＬＵＣＯＳＥ　ＤＥＰＲＩＶＡＴＩＯＮＬｉｎＨｕａ（林华），ＷｅｉＰｉｊｉｎｇ（魏丕敬），ＧｕＰ...     

人参二醇组皂甙对培养心肌细胞动作电位的双向性效应

人参二醇组皂甙(PDS)对培养的Wistar大鼠心肌细胞动作电位呈双向性效应:低浓度使动作电位的波幅、波宽、超射、阈电位、最大舒张电位、最大除极速度等电参数一致增大;高浓度使这些电参数一致减小;无论在低浓度范围,或者在高浓度范围,电参数的改变均随PDS剂量的增大而更加显著。在电位记录前,临时向培养基中加入PDS,只表现对跨膜电活动的抑制效应。而且此效应可被肾上腺素所抵销。以上结果提示人参二醇组皂甙既有膜保获作用也有钙通道阻滞作用。     

单纯缺锌对大鼠海马神经元内锌代谢的影响

采用Timm氏硫化银染色法结合图象分析,对单纯缺锌大鼠海马细胞内锌灰度值的变化进行了研究。结果表明:缺Zn状态下,海马CA_1、CA_3、CA_4区和齿状回的光密度均降低(P<0.05)。提示:缺锌早期,脑海马神经细胞内可螯合Zn的减少,超前于海马Zn总浓度的变化。     

乳鼠培养心肌细胞蛋白质含量对血清浓度的依赖性

以纯化培养的乳鼠心肌细胞模型，分析在无血清和合１０％血清培养条件下，每瓶细胞数、蛋白质总量和单个细胞平均蛋白质含量。结果表明，细胞蛋白质含量可作为评价心肌生长肥大的重要指标；该指标与血清浓度呈非线性依赖关系．本实验为心肌细胞生长调控的研究提供了方法和基础资料。