烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027抗肿瘤研究进展

烯二炔类抗肿瘤抗生素Ｃ１０２７是迄今已报道的活性最强的大分子蛋白类抗肿瘤抗生素之一。本文综述了Ｃ１０２７抗肿瘤活性，分子作用机制，活性基团与活性关系以及Ｃ１０２７与单克隆抗体的高效偶联物的研究。     

紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响

目的:研究紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)和自噬相关蛋白Beclin-1、p62的mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照比较,10、20、40μg/mL紫草素作用48 h后HCT116细胞的增殖抑制率和凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01)。10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后均可不同程度地升高细胞中LC3、Beclin-1、p62 mRNA及其蛋白的表达水平,除10μg/mL紫草素作用后细胞中LC3 m RNA表达水平升高不显著外,其余指标水平与空白对照比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草素可诱导人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,并激活其自噬途径。     

烯二炔类新抗生素C1027的抗肿瘤作用研究

从我国湖北潜江县壤分离的一株链霉菌生产的Ｃ１０２７是大分子肽类抗生素，其发色基团是新的烯二炔化合物。研究表明，抗生素Ｃ１０２７对肿瘤细胞有强烈杀伤作用。Ｃ１０２７在精原细胞法检测中显示高度活性，比阿霉素、丝裂霉素Ｃ等强５００倍。由发色基团和蛋白质两部分构成的Ｃ１０２７分子可以拆分与重建；而重建的Ｃ１０２７分子同样具有很强的活性。在可耐受剂量，Ｃ１０２７对移植性小鼠结肠癌２６以及对移植于裸鼠的人体肝     

烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027抗菌与抗肿瘤活怀差异的研究

Ｃ１０２７具有极强杀伤肿瘤细胞活性，作用靶点在ＤＮＡ，但Ｃ１０２７的抗菌活性不强，如能了解差别出现的原因，就可进一步掌握Ｃ１０２７的抗菌作用机制，并为将来在临床上确定其应用范围打下良好基础。对Ｃ１０２７的抗肿瘤活性与抗菌活性的差异的初步研究结论如下：大分子Ｃ１０２７与小分子博莱霉素Ａ５相比，对肿瘤细胞抑制作用明显高于后者；对细菌的抑制作用却明显低于博莱霉素Ａ５；对支原体的抑制作用略大于博莱霉素Ａ５     

新烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027的分子构成与活性关系

C1027是含烯二炔发色团的大分子肽类新抗肿瘤抗生素,由一个蛋白和一个烯二炔发色团两部分构成。后者是活性部分,对肿瘤细胞有强杀伤作用,蛋白对发色团的活性有保护作用。蛋白和发色团在一定条件下可以重新组建成完整的C1027。C1027分子内的二硫键有辅助蛋白保护发色团的作用,当二硫键被还原后,C1027活性丢失加快。C1027被链霉蛋白酶降解产生一个分子量为3～5kDa的中间产物,此产物对肿瘤细胞的杀伤作用与完整C1027相同,表明C1027是可以裁剪的,保护发色团的最小肽段为3～5kDa。     

诱导细胞凋亡的抗肿瘤抗生素

细胞凋亡是肿瘤防治的一个非常重要的机制，诱导细胞凋亡的抗肿瘤抗生素的面世开辟了肿瘤化疗药物研发的新途径。概述诱导细胞凋亡的抗肿瘤抗生素种类、来源、抗肿瘤谱及实验研究，并对其作用机制进行探讨。     

新抗癌抗生素C1027及其单克隆抗体组装偶联物的抗肿瘤活性

C1027是链霉菌株产生的大分子肽类新抗癌抗生素,对肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,它由一条肽链和一个发色团组成,后者是主要活性部分。本研究用甲醇拆分C1027并重新组建,重建的C1027与天然C1027活性相似;C1027的重建是特异的,肽链与发色团的结合不受BSA竟争影响。肽链不能与表阿霉素组建;单抗H16(IgG₁)不能与发色团组建。我们用不同的方法分别制备了C1027与抗人肝癌单抗H16直接偶联物和组装偶联物(单抗与肽链连接后再加入发色团);克隆形成测定,前者IC₅₀为42pmol·L^-1,后者为5.5pmol·L^-1;C1027与无关抗体M3组装偶联物的IC₅₀为240pmol·L^-1。结果表明H16-C1027组装偶联物对肝癌细胞的抑制作用比直接偶联物明显增强,并具有选择性杀伤作用。     

新抗癌抗生素C1027及其单克隆抗体组装偶联物的抗肿瘤活性

C1027是链霉菌株产生的大分子肽类新抗癌抗生素,对肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,它由一条肽链和一个发色团组成,后者是主要活性部分。本研究用甲醇拆分C1027并重新组建,重建的C1027与天然C1027活性相似;C1027的重建是特异的,肽链与发色团的结合不受BSA竟争影响。肽链不能与表阿霉素组建;单抗H16(IgG_1)不能与发色团组建。我们用不同的方法分别制备了C1027与抗人肝癌单抗H16直接偶联物和组装偶联物(单抗与肽链连接后再加入发色团);克隆形成测定,前者IC_(50)为42pmol·L~(-1),后者为5.5pmol·L~(-1);C1027与无关抗体M3组装偶联物的IC_(50)为240pmol·L~(-1)。结果表明H16-C1027组装偶联物对肝癌细胞的抑制作用比直接偶联物明显增强,并具有选择性杀伤作用。     

烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027抗菌与抗肿瘤活性差异的研究

Ｃ１０２７具有极强杀伤肿瘤细胞活性,作用靶点在ＤＮＡ,但Ｃ１０２７ 的抗菌活性不强,如能了解差别出现的原因,就可进一步掌握Ｃ１０２７的抗菌作用机制,并为将来在临床上确定其应用范围打下良好基础。对Ｃ１０２７ 的抗肿瘤活性与抗菌活性的差异的初步研究结论如下：大分子Ｃ１０２７ 与小分子博莱霉素Ａ５ 相比,对肿瘤细胞抑制作用明显高于后者;对细菌的抑制作用却明显低于博莱霉素Ａ５;对支原体的抑制作用略大于博莱霉素Ａ５ 。Ｃ１０２７（１００～０．０１ｍ ｇ／Ｌ）对大肠埃希氏菌Ｂ原生质体ＤＮＡ合成几乎无抑制作用,同对大肠埃希氏菌Ｂ菌体的ＤＮＡ合成抑制作用相比,差别不大。细胞壁并非阻碍Ｃ１０２７损伤大肠埃希氏菌ＢＤＮＡ的主要因素。     

力达霉素对人结肠癌HCT-8细胞侵袭调节基因表达的影响

目的研究抗肿瘤抗生素力达霉素对人结肠癌HCT-8细胞侵袭调节基因表达的影响。方法利用cDNA排列(cDNAarrays)、Northern杂交、RT-PCR技术。结果力达霉素可以促进TIMP-1的表达,抑制MMP-9的表达,cDNA排列、Northern杂交、RT-PCR检测得到了同样的结果。结论力达霉素可能通过抑制IV型胶原酶的产生,同时诱导金属蛋白酶抑制因子的产生,从而表现出抗侵袭活性。     

抗癌抗生素C1027与单克隆抗体Fab片段偶联物的抗肝癌作用

抗人肝癌单克隆抗体(单抗)3A₅用木瓜蛋白酶消化得到Fab片段。单抗3A₅和Fab片段分别与抗癌抗生素C1027偶联,偶联物经克隆生成法测定对肝癌细胞有很强的杀伤作用,C1027,Fab-C1027和3;3A₅-C1027的IC₅₀分别为6.5×10^-16,8.6×10^-16和4.2×10^-14mol·L^-1;Fab-C1027偶联物对非靶细胞(KB)的IC₅₀值为1.4×10^-13mol·L^-1,与靶细胞(BEL-7402)的IC₅₀值相比,两者相差160倍。说明Fab-C1027的杀伤活性强于3A₅-C1027,并对靶细胞呈选择性杀伤作用。给皮下移植人肝癌的裸鼠iv剂量0.1 mg·kg^-1,结果C1027和Fab-C1027的抑瘤率分别为59和85%,说明Fab片段与C1027偶联物比游离C1027的疗效更高。     

金喜素诱导肺癌细胞凋亡与抑制Bcl-2和PKC活性的关系

目的　研究金喜素诱导人肺癌SPC -A - 1细胞凋亡的作用及可能的机制。方法　体外培养肺癌细胞 ,以 2 0mg·L-1金喜素处理后 ,TUNEL法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl- 2蛋白的表达 ;放射性同位素法检测肺癌细胞蛋白激酶C(PKC)活性。结果　金喜素处理细胞 2 4h后 ,TUNEL法观察到典型的凋亡细胞形态学特征 ,流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率为 11 5 %± 2 8%,显著高于对照组细胞 (P<0 .0 1) ;Bcl- 2蛋白阳性表达细胞率为 7 8%± 1 1%,较对照组显著降低 (P <0 .0 1) ;肺癌细胞膜PKC活性较对照组显著降低 (P <0 0 1)。结论　金喜素可诱导肺癌细胞凋亡而发挥抗瘤作用 ,其作用机制可能为抑制凋亡蛋白Bcl- 2表达及PKC活性。     

单克隆抗体与丝裂霉素交联物对人胃癌细胞的选择性杀伤作用

本文选用抗胃癌单克隆抗体(MoAb)3H 11与Mitomycin C(MMC)制备交联物。体外实验结果表明,3H 11-MMC对人胃癌细胞BGC 823有明显的杀伤作用。而且有明显的选择性:3H 11-MMC(相当于MMC 100 ng/ml)对靶细胞的杀伤率为71%,而对非靶细胞MCF-7仅为14%。MoAb 3H11与靶细胞预温后可使杀伤率(1 μg/ml)由85%下降为38%,而与MoAb 3G9预温却无明显影响。体内实验表明。3 H 11-MMC处理组,肿瘤形成的时间较各对照组明显延长,肿瘤生长速度明显减慢,具有显著性差异。     

吗啡对增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达的影响

目的 :研究吗啡对培养的大鼠胶质细胞瘤C6的增殖抑制作用及其机制。方法 :3H -TdR掺入法测定吗啡对细胞增殖的影响 ;RT -PCR方法观察吗啡对细胞PCNA基因表达的影响。免疫组织化学法观察吗啡对细胞PCNA蛋白质水平的影响。结果 :不同浓度吗啡 (0 0 0 1- 10 0mg·L- 1 )作用于培养C6细胞 2 4h后 ,3H -TdR掺入量剂量依赖性降低。不同浓度吗啡 (0 0 0 1- 10 0mg·L- 1 )作用于培养C6细胞 2 4h后 ,细胞PCNAmRNA的相对含量与对照组相比均明显减少 (P <0 0 1)。 10mg·L- 1 吗啡作用细胞 6 - 4 8h后 ,不同时间点吗啡组细胞的PCNAmRNA的相对含量与对照组相比均明显减少 (P <0 0 1)。10mg·L- 1 吗啡作用细胞 2 4h后 ,与相邻吗啡组比较细胞内PCNA蛋白质水平明显降低 (P <0 0 1)。结论 :吗啡对胶质细胞瘤C6的增殖具有抑制作用 ,其机理可能与吗啡使细胞中PCNA的基因表达水平降低有关。     

螺旋藻多糖对荷瘤小鼠化疗后造血细胞增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响

目的研究螺旋藻多糖(PSP)对肿瘤化疗后造血细胞增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法小鼠移植性实体瘤模型、用造血祖细胞体外培养、荧光和普通光学显微镜、ELISA及免疫组化方法,检测了造血细胞增殖、凋亡、Bcl-2表达及相关细胞因子含量。结果PSP明显改善了CTX引起的CFU-GM减少、造血细胞凋亡,并促进了IL-1,IL-3和GM-CSF分泌及造血细胞Bcl-2表达。结论PSP促进内源性细胞因子的分泌间接上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达可能是其促进肿瘤化疗后造血细胞增殖并抑制其凋亡的分子机制之一。