17β-雌二醇长时程作用促进成骨细胞HOS TE85 45Ca摄取及间质矿化

目的研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E₂)对HOS TE85细胞骨形成的长时程效应。方法³H-胸腺嘧啶参入法(³H-TdR)测细胞增殖;⁴⁵Ca沉积法测细胞钙摄取;茜素红染色法测间质矿化。结果E₂(0.1～10 nmol·L^-1)作用14 d剂量依赖地刺激细胞³H-TdR参入、增加⁴⁵Ca摄取并增加茜素红染色面积。ICI182,780(1.0 nmol·L^-1)能部分抑制E₂作用,使其³H-TdR参入分别减少了36.56%,19.6%和15.4%,⁴⁵Ca的摄入则分别减少了22.27%,37.28%和40.1%,茜素红染色面积减少。结论E₂通过增加细胞数量、增加钙摄入而促进骨间质生成和矿化。     

在人的类成骨细胞TE85中雌激素对活性维生素D作用的影响

目的　观察雌激素对活性维生素D ［1,25(OH)₂D₃］调节人的类成骨细胞TE85作用的影响。方法　以TE85为成骨细胞模型,³H-胸腺嘧啶参入法测细胞增殖,³H-脯氨酸参入法测细胞胶原合成,放射免疫法测骨钙素（BGP）含量,对硝基苯酚法测碱性磷酸酶（ALP）活性。结果　单独以0.5～5 nmol.L^-1 1,25(OH)₂D₃处理细胞96 h,³H-胸腺嘧啶参入被抑制,作用呈剂量依赖性。5 nmol.L^-1 1,25(OH)₂D₃可使细胞ALP活性增加29.7％。 雌二醇（E₂）可取消1,25(OH)₂D₃对细胞增殖的抑制作用。两药合用时能促进细胞胶原、骨钙素及ALP的合成。结论　1,25(OH)₂D₃有促进成骨细胞骨形成的作用。1,25(OH)₂D₃与E₂联合应用时,其促进成骨的作用增强。     

雌激素促进人的类成骨细胞TE85成骨作用的受体机制

目的：研究雌激素促进人的类成骨细胞株TE85细胞骨形成的作用。方法：用³H-胸腺嘧啶、³H-脯氨酸参入法分别测定细胞的增殖和胶原合成; 紫外分光光度法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性; 放免法测定细胞内骨钙素（BGP）含量; 放射配基法测定细胞核雌激素受体结合。结果：雌激素（E₂, 0.01～1.0 nmol.L^-1）可浓度依赖地刺激TE85细胞的³H-胸腺嘧啶和³H-脯氨酸的参入量; 在相同的时间点和剂量下,可增加成骨细胞内ALP活性和BGP的含量。结论：E₂通过增加成骨细胞数量、促进细胞胶原蛋白及ALP和BGP的合成而促进成骨作用,这些作用是通过雌激素受体介导的。     

基于溶解氧乙酰螺旋霉素极谱平行催化氢波的研究

目的提出一种极谱测定乙酰螺旋霉素(ASPM)的新方法。方法应用单扫描极谱法,在含溶解氧的0.1 mol·L^-1 NH₄Cl-NH₃·H₂O(pH 8.9)缓冲液中ASPM产生1个灵敏的平行催化氢波［峰电位E_p=-1.63 V(vs SCE)］。结果该平行催化氢波的二阶导数峰峰电流i″与ASPM浓度在1.74×10^-3～3.48 μg·mL^-1呈良好线性关系(r=0.997 9,n=13),检出限为5.80×10^-4 μg·mL^-1(3σ)。对0.871 μg·mL^-1 ASPM溶液进行13次平行测定,RSD为1.24%。结论本方法可用于ASPM片剂中ASPM含量的测定。     

苯甲酰胺类衍生物的合成及扩血管活性

报道了22个苯甲酰胺类衍生物的合成,其中大多数化合物有不同程度的扩血管活性,化合物H_1,11,17,E_1,3对去甲肾上腺素[NE](10^-7mol·L^-1)引起的大鼠主动脉条收缩的抑制作用明显优于先导物N-(4-甲氧基苯甲酰基)-N′-肉桂基哌嗪,化合物H_7,15,E₇对85.7mmpL·L^-1KCl引起的大鼠主动脉条收缩有明显的抑制作用,进一步钾通道实验表明E1可能为ATP敏感型钾通道开放剂。并初步分析了此类化合物的构效关系。     

染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用

目的　研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用。方法　细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和³H-脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果　染料木素(25 - 70 μmol·L^-1 )和槲皮素(6.25- 5 0 μmol·L^-1 )浓度依赖抑制PDGF促HSC-T6细胞增殖和TGFβ₁ 刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论　染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFβ₁ 对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用     

丁基苯酞对原代培养的大鼠皮层神经细胞外液6-keto-PGF1α和TXB2及其比值的影响

目的旨在观察丁基苯酞(NBP)对神经细胞培养液中6-酮-PGF_1α和TXB₂含量及其比值的影响。用放射免疫方法,结果发现神经细胞在低糖低氧5h或低糖低氧5h/恢复糖氧3h条件下,d-,l-和dl-NBP(0.1～100μmol·L^-1)能够剂量依赖性升高细胞外液中的6-酮-PGF_1α含量,降低TXB₂水平,从而使6-酮-PGF_1α与TXB₂比值升高。而阿司匹林仅在小剂量(0.1,1μmol·L^-1)时能升高6-酮 PGF^1α与TXB^{2比值,大剂量(10,100μmol·L-1)时无影响。提示:NBP对6-酮-PGF_1α/TXB₂比值的升高可能与其增加局部脑血流和改善缺血性脑损伤有关。}     

钾通道阻断剂部分抑制三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡

目的研究钾通道阻滞剂对三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡的作用。方法采用MTT法评价HeLa细胞的存活情况，采用膜片钳技术记录HeLa细胞的电压依赖性钾电流。结果As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育24 h引起显著的HeLa细胞死亡，As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育24 h后存活的细胞表现明显的电压依赖性钾电流密度增加。+80 mV电压下，As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育组电流密度(61±18) pA/10 pF(n=8)明显高于对照组(38±10) pA/10 pF(n=8,P<005)。As₂O₃诱导的HeLa细胞死亡可被共同孵育钾通道阻滞剂四氨基吡啶(3 mmol·L^-1)或四乙基铵(5 mmol·L^-1)所部分抑制。3 mmol·L^-1四氨基吡啶或5 mmol·L^-1四乙基铵对HeLa细胞无明显细胞毒作用。结论As₂O₃长期处理增加HeLa细胞的电压依赖性钾电流。As₂O₃诱导的HeLa细胞死亡可被钾通道阻滞剂四氨基吡啶或四乙基铵部分抑制。     

药物对TNF诱导的牛脑微血管平滑肌细胞增值的拮抗作用

研究表明,肿瘤坏死因子(TNH)在50～5000U·mL^-1范围内呈剂量依赖性地诱导牛脑微血管平滑肌细胞增殖,TNF与该细胞培养24h时,即可明显刺激细胞增殖,48h时达最大刺激效应。欧芹素乙(imperatorin,Imp),异欧芹素乙(iso-imperatorin,Isi)在浓度为10^-6～10^-4mol·L^-1时,均可剂量依赖性地拮抗TNF诱导该细胞增殖。6-(α,α-二苯基乙酰哌嗪基苯基)-4,5-二氢-5-甲基-3(2H)哒嗪酮,6-(α-苯基乙酰哌嗪基苯基)-4,5-二氢-5-甲基-3(2H)哒嗪酮,则只在低浓度(10^-6mol·L^-1)时拮抗TNF诱导该细胞的增殖。     

2',4'-二羟基-3'-甲基-3-甲氧基查耳酮上调p21抑制人肝癌HepG2细胞的生长

目的 探讨2'',4''-二羟基-3''-甲基-3-甲氧基查耳酮(C20)对人肝癌HepG2细胞的体外抗肿瘤作用及其潜在的作用机制。方法 通过CCK-8法、集落形成实验、5-乙炔基-2''-脱氧尿苷(EdU)染色法检测C20对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过彗星实验检测C20(10 μmol·L^-1)对HepG2细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测C20(5、10 μmol·L^-1)对HepG2细胞周期阻滞的影响;通过Hoechst染色和流式细胞术检测C20(5、10 μmol·L^-1)对HepG2细胞凋亡的影响。借助Western blotting法检测C20(5、10 μmol·L^-1)处理对HepG2细胞中与凋亡、DNA损伤、细胞周期阻滞相关蛋白表达水平的调控作用。结果 与对照组比较,C20显著抑制HepG2细胞的活力(P<0.001),给药48 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为7.937 μmol·L^-1;5 μmol·L^-1 C20能够显著抑制HepG2细胞的集落形成能力(P<0.01);EdU染色结果显示5、10 μmol·L^-1的C20能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖能力;5、10 μmol·L^-1的C20显著诱导HepG2细胞G₂/M期阻滞(P<0.001);5、10 μmol·L^-1的C20显著促进HepG2细胞凋亡(P<0.001),并显著上调Caspas-3、Caspase-9以及PARP的剪切水平(P<0.01);10 μmol·L^-1的C20能够诱导HepG2细胞发生DNA损伤,并且5、10 μmol·L^-1的C20显著上调γH2AX、p21的蛋白水平(P<0.01)。结论 C20能够造成HepG2细胞发生DNA损伤,上调p21蛋白水平,导致细胞G₂/M期阻滞,并进一步诱发凋亡,发挥体外抗肝癌作用。     

血清中美西律的柱前衍生化-液相色谱荧光检测

目的建立血清中盐酸美西律的柱前衍生化-液相色谱荧光检测法。方法血清样品用丙酮液直接沉淀蛋白后,定量加入荧光胺丙酮溶液,得盐酸美西律的荧光衍生物。采用Alltima C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm)为分析柱;流动相为甲醇-水-2.4 mol·L^-1二乙胺-磷酸缓冲液(pH 4.0)(70∶28∶2);荧光检测激发波长(E_x)为392 nm,发射波长(E_m)为480 nm。盐酸美西律的保留时间为6.5 min。结果盐酸美西律在0.100～6.400 mg·L^-1线性关系良好。本法的最低检测质量浓度为5 μg·L^-1,(S/N≥4)。批内、批间精密度为1.34%～5.31%。结论本法操作简便、有良好的灵敏度和专一性,可满足盐酸美西律的临床血药浓度的监测和药代动力学研究。     

积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用

研究积雪草苷(asiaticoside)对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)的作用，并初步探讨其作用机制。建立CIA模型，检测小鼠足爪炎症的肿胀度，石蜡切片HE染色对关节组织进行病理检查，MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应，Western blotting法检测关节软组织中环氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)蛋白的表达，EIA法测定关节软组织中前列腺素E₂(prostaglandin E₂，PGE₂)水平，ELISA法检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6的水平。积雪草苷(10，20及40 mg·kg^-1)灌胃给药能剂量依赖性地减轻CIA小鼠的关节炎症状，抑制CIA小鼠C II胶原诱导的淋巴细胞增殖反应，减少CIA小鼠踝关节软组织中高水平的COX-2表达及PGE₂含量，降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平；同时病理检查发现，可以改善局部关节炎症状，抑制CIA小鼠滑膜细胞增生，减轻炎性细胞浸润。结果表明，积雪草苷对CIA具有抑制作用，其机制可能与抑制淋巴细胞增殖、减少COX-2表达及促进炎症因子TNF-α、IL-6释放等有关。     

马蔺子素的单扫描示波极谱法测定

目的建立测定马蔺子素的极谱法。方法单扫描示波极谱法。结果在8.0×10^-3 mol·L^-1 Na₂B₄O₇-1.6×10^-2 mol·L^-1 KH₂PO₄ (pH 7.7)支持电解质中,马蔺子素有一灵敏的极谱还原波,其峰电位E_p=-1.23 V(vs SCE),二阶导数峰电流i_p″与马蔺子素浓度为1.5×10^-7～5.2×10^-6 mol·L^-1呈良好线性关系(γ=0.9992,N=9),检出限为6.0×10^-8 mol·L^-1。13次测量2.0×10^-6 mol·L^-1马蔺子素还原波二阶导数峰峰电流,相对标准偏差RSD为0.87%。结论该方法灵敏、简便、快速,可用于原料药及胶囊中马蔺子素含量的测定。     

异丹叶大黄素对人滑膜细胞白细胞介素-8生成及mRNA表达的影响

目的研究异丹叶大黄素(isorhapotigenin,Iso)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人滑膜细胞(humansynovialcell,HSC)白细胞介素-8(IL-8)生成和mRNA表达的影响.方法用RIA方法测定IL-8的含量,以RT-PCR法测IL-8mRNA.结果Iso在1×10^-6-1×10^-5mol·L^-1浓度范围内对TNF-α诱导的人滑膜细胞IL-8生成有抑制作用,并抑制TNF-α诱导的HSCIL-8mRNA表达.结论Iso抑制TNF-α诱导的HSCIL-8生成,可能与影响IL-8mRNA表达有关.     

格列美脲蛋白结合作用的高效液相色谱-迎头分析法

目的研究格列美脲与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)结合作用。方法采用高效液相色谱-迎头分析法(high performance liquid chromatography-frontal analysis, HPLC-FA)。色谱柱为内表面反相(internal-surface reversed-phase,ISRP)硅胶柱Pinkerton GFF II-S5-80(150 mm×4.6 mm ID, 5 μm)；流动相为 67 mmol·L^-1磷酸盐等渗缓冲液 (pH 7.4, I=0.17 mol·L^-1)；流速0.2 mL·min^-1；检测波长230 nm；进样量900 μL；柱温37 ℃。结果 应用非线性回归参数估算求得HSA分子上两类结合位点结合的格列美脲分子数及相应的结合平衡常数：n₁=1和K₁=5.1 (μmol·L^-1)^-1；n₂=7和K₂=0.017 (μmol·L^-1)^-1。结论HPLC-FA法操作简便，适用于研究格列美脲与HSA的结合作用。     

间硝苯地平在Beagle犬体内的药代动力学

目的用反相高效液相色谱法研究间硝苯地平(m-nifedipine，m-Nif)在Beagle犬体内的药代动力学特征。方法正交设计优化色谱分离条件，Beagle犬分别iv给予m-Nif 0.288 mg·kg^-1和ig m-Nif 1.152，3.456，10.370 mg·kg^-1。用反相高效液相色谱法分析血浆中原型药物浓度，血浆药物浓度-时间数据用3P97药代动力学软件分析。结果Beagle犬iv m-Nif，其体内过程符合二室模型，T_1/2β为116.8 min；ig给予m-Nif 后在Beagle犬体内的代谢符合一室模型，其中低剂量(1.152 mg·kg^-1)组C_max为20 μg·L^-1， T_1/2(k_e)为147 min；中剂量(3.456 mg·kg^-1)组C_max为36 μg·L^-1，T_1/2(k_e) 为122 min；高剂量(10.37 mg·kg^-1)组C_max为69 μg·L^-1，T_1/2(k_e)为144 min。结论Beagle犬ig和iv m-Nif 后，血浆中药物消除迅速，口服绝对生物利用度较低。     

高效液相色谱法测定人血清和尿中盐酸青藤碱浓度及药代动力学研究

用RP-HPLC法,以三唑仑为内标,反相C₁₈为分析柱,乙腈—0.01mol·L^-1磷酸二氢钠—四甲基乙二胺(46∶54∶0.22v/v)为流动相,磷酸调至pH6.9,检测波长263nm,测定血清和尿中盐酸青藤碱浓度,线性范围分别为6～480ng·mL^-1和0.06～3μg·mL^-1,平均回收率75.88%和91.35%,日内日间误差小于5%,最低检测浓度血清4ng·mL^-1,尿40ng·mL^-1。8名健康男性志愿者单次口服盐酸青藤碱片80mg,测定血清及尿浓度,该药符合二室开放模型,体内消除符合一级动力学消除过程,主要药代动力学参数:T_1/2α0.791±0.491h,T_1/2β9.397±2.425h,T_{max 1.040±0.274h,Cmax246.604±71.165ng·mL^-1,AUC 2651.158±1039.050ng·h·mL^-1,CL 0.033±0.01ng·mL^-1。}     

液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中布地奈德

建立液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中布地奈德。血浆样品碱化后，经乙酸乙酯液-液萃取，以乙腈-5 mmol·L^-1醋酸铵(60∶40，v/v)为流动相，Capcell Pak C₁₈ MG柱分离；采用电喷雾电离源，以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测，用于定量分析的离子反应分别为m/z 489→m/z 357(布地奈德)和m/z 493→m/z 413(内标，曲安奈德)。测定血浆中布地奈德方法的线性范围为25.0～2 000 pg·mL^-1，定量下限为25.0 pg·mL^-1，日内、日间精密度(RSD)均小于15%，准确度(RE)在-8.1%～-1.7%。应用本法研究6只比格犬单次和多次给予布地奈德缓释胶囊9 mg后的药代动力学结果显示：单次给药后T_max为(3.5±3.3) h，C_max为(786±498) pg·mL^-1；多次给药后C_max为(2 142±1 515) pg·mL^-1。该法选择性强、灵敏度高、操作简便，适用于布地奈德缓释制剂的药代动力学研究。     

西红花苷对牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的研究西红花苷对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。方法以Fluo-3/AM作为Ca²⁺荧光探针,采用激光扫描共聚焦显微镜观察牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果无论细胞外有无钙离子,西红花苷(1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1)均能明显抑制1×10^-2 mol·L^-1 H₂O₂引起的细胞内钙离子浓度的升高,其抑制率含钙条件下分别为34.1%, 57.1%和74.3%(P<0.01),无钙条件下分别为26.2%,32.1%和50.0%(P<0.01);在胞外无钙的条件下,西红花苷 (1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1)能抑制70 mmol·L^-1 CHCl₃导致雷洛丁敏感钙池的释放,其抑制率分别为27.8%, 27.8%和50.0% (P<0.01)。结论西红花苷能抑制胞外钙离子的内流及内质网上钙离子的释放。     

美洛昔康抑制正常人中性粒细胞与滑膜细胞粘附的作用机理研究

目的研究美洛昔康对正常人中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)与滑膜细胞(human synovial cell,HSC)粘附的抑制作用及其作用机理。方法用MTT比色法检测PMN与HSC的粘附,分别用Cell-ELISA和RT-PCR法检测粘附分子ICAM-1和VCAM-1的蛋白及基因表达,用EMSA法检测NF-κB的活性。结果美洛昔康可显著的并以剂量依赖的方式抑制TNF-α(50 u·mL^-1)和IL-1β(50 u·mL^-1)作用12 h诱导的PMN与HSC粘附,其IC₅₀分别为3.38×10^-7和3.56×10^-6 mol·L^-1。进一步研究发现美洛昔康在1×10^-6～1×10^-5 mol·L^-1时还可在蛋白水平及mRNA水平抑制TNF-α(50 u·mL^-1)诱导的HSC细胞ICAM-1的表达,但对VCAM-1蛋白及mRNA表达均未见显著影响;同时美洛昔康还可显著抑制50 u·mL^-1 TNF-α诱导的NF-κB的活化。结论美洛昔康抑制NF-κB的活化,进而抑制ICAM-1的表达可能是其抑制PMN与HSC粘附的机制之一。