丁基苯酞对大脑中动脉阻断后皮层组织中花生四烯酸释放及磷脂酶A2基因表达的影响

目的　研究丁基苯酞（dl-NBP), d-NBP和 l-NBP对大脑中动脉阻断(MCAO) 6 h后缺血区皮层中花生四烯酸(AA)释放及磷脂酶A₂（PLA₂）基因表达的影响。方法　阻断大脑中动脉起始部造成局灶性脑缺血模型。HPLC检测AA。Northern blot检测皮层中PLA₂基因表达。结果　MCAO后6 h,皮层中AA释放明显增加。于脑缺血后5 min 和120 min,给dl-NBP(10或20 mg.kg^-1) 和尼莫地平(0.5 mg.kg^-1) 可显著抑制AA的释放。d-NBP和l-NBP作用比较,显示d-NBP有与dl-NBP相似的作用,而l-NBP则无明显影响。Northern印迹结果表明,脑缺血6 h,皮层中PLA₂的基因表达增强。 dl-NBP和d-NBP(10, 20 mg.kg^-1,ip)皆可使表达降低,而l-NBP对缺血脑组织中PLA₂的基因表达的升高无明显影响。结论　dl-NBP和d-NBP可抑制MCAO后脑组织中AA释放和PLA₂的基因表达。     

丁基苯酞对局灶性脑缺血过程中线粒体损伤的保护作用

目的　探讨抗脑缺血新药丁基苯酞(NBP)对缺血脑线粒体结构和功能的影响,以阐明其改善缺血脑损伤的作用机制。方法　用大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)和原代培养神经元的低糖低氧损伤模型,测定神经细胞线粒体的膜流动性、膜电位、总ATPase活性和超微结构的影响。结果　大鼠于MCAO后1 h线粒体膜流动性显著降低。经低糖低氧处理后神经细胞线粒体膜电位和总ATPase活性也明显降低。NBP ip能逆转缺血期线粒体膜流动性降低; dl-,l-和d-NBP能使线粒体膜电位和线粒体总ATPase活性恢复至正常水平。电镜结果显示NBP能明显改善脑缺血再灌引起的线粒体肿胀和空泡化。结论　NBP从形态和功能方面对线粒体发挥保护作用,从而改善缺血脑的损伤。     

丁基苯酞对蛛网膜下腔出血后脑血流的改善及血脑屏障的保护作用

侧脑室注入自体血液造成蛛网膜下腔出血模型,观察丁基苯酞(dl-NBP)对局部脑血流的改善作用及血脑屏障的保护作用。结果表明,dl-NBP5～20mg·kg^-1明显提高蛛网膜下腔出血后3h内尾状核的血流量,但无明显的剂量效应关系。0.25mg·kg^-1的尼莫地平亦明显提高脑血流。并发现dl-NBP10mg·kg^-1及尼莫地平0.25mg·kg^-1(分别于蛛网膜下腔出血后5min和3hip)均能明显降低蛛网膜下腔出血6h后皮层组织中伊文氏蓝的摄取量,提示对血脑屏障有明显的保护作用。     

丁基苯酞对大鼠血栓形成及血小板功能的影响

目的研究消旋、左旋和右旋丁基苯酞(dl-,l-和d-NBP)对血栓形成及血小板功能的影响。方法利用半体外血栓形成术及比浊法,观察dl-,l-和d-NBP及阿司匹林(Asp)对大鼠血栓湿重和血小板聚集率的影响,并用放免法、荧光分光光度法测定其对血小板内cAMP和TXB2的水平以及血小板5-HT释放率的影响。结果ip,dl-NBP和l-NBP可剂量依赖性地抑制大鼠血栓形成,且l-NBP作用与Asp相似,d-NBP对半体外血栓形成无显著作用;dl-,d-和l-NBP可显著抑制胶原、ADP、花生四烯酸诱导的血小板聚集。结论NBP有抗血栓作用,l-NBP作用最强,dl-NBP作用较弱,其抗栓作用与升高血小板内cAMP的含量及抑制5-HT释放有关。     

丁基苯酞对局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍的影响

目的：观察消旋、左旋及右旋丁基苯酞（dl-,l-,d-3-n-butylphthalide,dl-,l-,d-NBP）对局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍的影响。方法：用插线法造成大鼠局灶性脑缺血模型,并用体外显微摄像技术及微循环图象处理系统观察大鼠软脑膜微动脉管径及红细胞流速的变化。结果：dl-,l-和d-NBP对正常大鼠脑微动脉管径无明显影响,MCAO术前1 h预防给药,dl-,l-NBP和尼莫地平可明显增加局灶性脑缺血大鼠软脑膜微动脉管径及血流速度,而d-NBP则加重软脑膜微循环障碍。MCAO术后20 min治疗给药,dl-和l-NBP仍可明显逆转局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍,而d-NBP及尼莫地平作用不明显。结论：改善脑微循环状态是 dl-和l-NBP发挥抗脑缺血作用的重要药理机制之一。     

丁基苯酞对局灶型脑缺血再灌大鼠脑hsp70mRNA和c-fos时相表达的影响

用原位杂交法和Northern印迹法,研究NBP对暂时性大脑中动脉阻断大鼠不同再灌期脑内hsp70mRNA和c-fos的时相表达的影响。发现缺血后再灌1h,在缺血侧有较明显的hsp70mRNA表达。再灌3h,6h和12h,表达逐渐加强。在缺血前10min和再灌即刻ipNBP10mg·kg^-1和20mg·kg^-1均能明显降低再灌6h和12hhsp70mRNA的表达。c-fos基因在再灌0.5h在缺血侧有清晰表达,再灌3h达峰值,再灌6h表达降低。ipNBP10mg·kg^-1(缺血前10min)可明显降低再灌1h和3h时c-fos的表达。Northern印迹法显示了同样的结果。提示NBP降低基因表达的作用可能是通过减轻缺血再灌引起的组织损伤来实现的。     

丁基苯酞对线粒体呼吸链复合酶活性的影响

目的：阐明正丁基苯酞（ｄｌ３ｎｂｕｔｙｌｐｈｔｈａｌｉｄｅ,ｄｌＮＢＰ）改善缺血脑能量代谢的机制。方法：用分光光度法测定局灶性脑缺血大鼠脑线粒体呼吸链复合酶Ｉ,Ｉ,ＩＩ和ＩＶ活性的改变,并观察ｄｌＮＢＰ对这些变化的影响。结果：缺血时复合酶ＩＩ活性升高,ＩＶ的活性显著降低;再灌后,复合酶Ｉ活性升高,ＩＩ的活性降低。在缺血前１０ｍｉｎ给予ｄｌＮＢＰ（５ｍｇ·ｋｇ－１或１０ｍｇ·ｋｇ－１,ｉｐ）能逆转缺血再灌引起的上述复合酶活性改变,尤其是使缺血后急剧降低的复合酶ＩＶ活性得到明显提高。同时ＮＢＰ（ｄ,ｌ,ｄｌ）还能逆转低糖低氧造成的原代培养大鼠皮质细胞呼吸链复合酶ＩＶ活性降低。结论：ＮＢＰ能够改善缺血脑内能量状态是直接作用于脑线粒体的结果,而ｄＮＢＰ起着主要作用。     

丁基苯酞对小鼠全脑缺血的保护作用

观察了丁基苯酞(NBP)对小鼠全脑缺血脑保护作用和脑能量代谢的影响。用Lowry法测定脑乳酸,ATP和磷酸肌酸(PCr)的含量。结果表明,NBP112.5或250mg·kg^-1sc能明显延长断头或iv饱和MgCl₂后喘息的时间;NBP15O或200mg·kg^-1sc能明显减少断头缺血后乳酸的升高和ATP及PCr的降低。实验结果提示,NBP对缺血脑有保护和改善脑能量代谢的作用。     

羟基红花黄色素A对脑缺血所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A对脑缺血所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用。方法用栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型，测定线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂含量、呼吸功能、线粒体呼吸酶、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Ca²⁺等。结果羟基红花黄色素A(10，20 mg·kg^-1)能明显抑制缺血脑线粒体膜流动性的降低，膜磷脂降解，减少脑缺血引起的线粒体肿胀，抑制NADH脱氢酶、琥珀酸脱氢酶和细胞色素c氧化酶活性的降低，改善线粒体呼吸功能；同时羟基红花黄色素A能明显降低中风大鼠脑细胞线粒体MDA含量、升高SOD活性、抑制Ca²⁺过多摄入。结论羟基红花黄色素A对缺血脑细胞线粒体的损伤有明显的保护作用，该作用可能与清除氧自由基、抑制脂质过氧化、拮抗Ca²⁺有关。     

α-青心酮对损伤的脑线粒体Na+,K+-ATPase活性和脑细胞耗氧的作用

目的研究α-青心酮对抗坏血酸和硫酸亚铁诱导脑线粒体Na⁺，K⁺-ATPase活性和脑细胞耗氧的作用。方法采用无机磷法测定Na⁺，K⁺-ATPase活性,分光光度法检测脑线粒体膨胀和脂质过氧化物，氧电极法测定脑细胞耗氧量。结果在抗坏血酸和硫酸亚铁的作用下，鼠脑线粒体Na⁺，K⁺-ATPase活性降低，线粒体膨胀和脑细胞脂质过氧化物升高。α-青心酮抑制其抗坏血酸和硫酸亚铁诱导脑线粒体和细胞的损伤,增加Na⁺，K⁺-ATPase活性，降低脑线粒体膨胀和脑细胞脂质过氧化物生成。α-青心酮还具有减少ADP刺激的脑细胞耗氧的作用。结论α-青心酮通过清除自由基和抗氧化作用保护脑细胞结构和功能的完整。     

丁基苯酞对大鼠全脑缺血纹状体细胞外液氨基酸和多巴胺含量的影响

用大鼠4动脉阻断全脑缺血模型和大鼠纹状体灌流方法,观察到大鼠急性全脑缺血20min,纹状体细胞外液谷氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸及多巴胺含量显著升高。丁基苯酞40 mg·kg^-1能使全脑缺血20 min纹状体细胞外液多巴胺及其代谢产物DOPAC含量明显降低,并能降低缺血前后纹状体细胞外液甘氨酸含量,而对谷氨酸等其他氨基酸无显著影响。结果提示丁基苯酞对缺血性脑损伤可能有保护作用。     

丁基苯酞对局部脑缺血大鼠行为和病理改变的保护作用

观察了丁基苯酞对大鼠右侧大脑中动脉阻断(MCAO)后行为和脑梗塞面积的影响。结果表明,MCAO后15min丁基苯酞po或ip,均能降低局灶型脑缺血大鼠的脑梗塞面积和改善各种神经症状,疗效与MK801(0.5mg·kg^-1,ip)相当,优于尼莫地平(1.0mg·kg^-1.sc)。提示丁基苯酞可能是一个有开发前途的抗脑缺血药物。     

丁基苯酞对局部脑缺血大鼠神经元迟发性损伤及细胞内钙的影响

观察了丁基苯酞(NBP)对局部脑缺血迟发性脑梗塞和神经功能缺损的影响。结果表明,大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后2h分别poNBP80,160和240mg·kg^-1,均能明显降低脑梗塞面积,抑制率分别为49.0%,69.5%及85.1%,并明显改善神经功能缺失。在MCAO前1h予防给NBP(160mg·kg^-1po),也可明显缩小脑梗塞面积和改善神经功能缺失;在MCAO前连续口服7d,NBP剂量为80mg·kg^-1·d^-1,对上述指标均有改善作用。NBP对高K⁺引起大鼠脑突触体内Ca²⁺含量升高无影响。以上结果提示NBP对迟发性神经元损伤有保护作用。     

手性3-n丁基苯酞对大鼠局灶性脑缺血诱导的凋亡的影响

目的:观察和比较手性3-n丁基苯酞(NBP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注诱导的凋亡的影响。方法:插线法制备大脑中动脉阻断(MCAO)模型,原位末端标记(TUNEL)和琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,蛋白质印迹和免疫组化方法检测细胞色素c及caspase-3蛋白的表达。结果:大鼠局灶性脑缺血2小时,再灌注开始后24小时可见明显的TUNEL阳性染色和DNA ladder.s-(-)-NBP 5,10 mg/kg显著减少TUNEL阳性细胞数和DNA ladder,s-(-)-NBP 10 mg/kg几乎完全抑制DNA片段化,而r-(+)-NBP 10 mg/kg仅有轻度抑制作用。(±)-NBP(20 mg/kg)对DNA片段化的抑制作用介于s-(-)-NBP(10 mg/kg)和r-(+)-NBP(10 mg/kg)之间。脑缺血过程中可见到线粒体细胞色素c的释放及caspase-3的激活,s-(-)-NBP能明显抑制这一效应,r-(+)-NBP和(±)-NBP对细胞色素c和caspase-3作用的强弱与它们抑制DNA片段化的作用强度相似。结论:NBP,尤其是s-(-)-NBP能够抑制脑缺血诱导的DNA片段化,细胞色素c释放和caspase-3激活。     

丁基苯酞抑制低氧低糖诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡

目的：以原代培养的大鼠胎鼠皮质神经元低氧低糖再复氧为模型,研究丁基苯酞对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率,透射电镜观察细胞形态学变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和原位末段标记(TUNEL)检测DNA断裂。 结果：丁基苯酞能减轻细胞核形态的改变,减少DNA断裂和阳性细胞数,使低氧低糖诱导的神经细胞凋亡百分率明显下降,凋亡峰显著降低。 结论：丁基苯酞对低氧低糖诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡有抑制作用。     

3‐butyl‐6‐fluoro‐1 (3H)‐isobenzofuranone,a derivative of dl‐n‐butylphthalide,attenuates hydrogen peroxide‐induced damage in PC12 cells

The anti‐cerebral ischemia agent, dl‐3‐n‐butylphthalide (NBP), is effective in models of vascular dementia in animals. The present study investigates the protective effect of 3‐butyl‐6‐fluoro‐1 (3H)‐isobenzofuranone (6‐F‐NBP), a fluoro derivative of dl‐nbutylphthalide, in hydrogen peroxide (H₂O₂)‐induced damage in PC12 cells. Exposure of PC12 cells to H₂O₂ for 24 h led to decreased cell survival, glutathione peroxidase (GSH‐PX), and mitochondrial membrane potential (MMP). In contrast, malondialdehyde (MDA) production, nitric oxide synthase (NOS) activity, nitric oxide (NO) formation, and intracellular reactive oxygen species (ROS) were increased, as was intracellular accumulation of [Ca²⁺]_i. However, pretreatment with 6‐F‐NBP markedly reversed the changes induced by H₂O₂, exhibiting a protective effect against H₂O₂‐induced cytotoxicity in PC12 cells. The compound may have therapeutic potential in the treatment of cerebral ischemia by inhibiting the oxidative damage. Drug Dev Res 72: 259–264, 2011. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.