量子点标记在生物成像中的应用研究进展

生物活体成像作为一种新兴的分子成像技术,在生物医学研究、药物研发及精准医疗等方面发挥着重要作用.荧光标记技术是活体成像的重要手段之一,传统的荧光标记方法稳定性差、荧光强度较低,较难实现长时间的活体标记.量子点(quantum dots,QDs)作为一种新型荧光探针,具有激发光谱宽而发射光谱窄、荧光效率高、生物相容性好等优点,在生物活体成像方面具有独特的应用优势,QDs标记技术将得到越来越广泛的应用.目前,对于QDs用于生物成像的综述较少.本文将重点综述QDs在生物成像方面的应用.     

免疫自动化分析新进展

免疫学检测是临床检验中重要的一部分内容，对许多疾病的诊断、治疗及预后评估都很有意义。早期的免疫分析技术大都是通过观察沉淀物的形成、凝集及溶血现象的发生和测定由集合体造成的光散射来分析待测样品中特异性蛋白质的有无及含量，如免疫扩散、免疫电泳、直接及间接血凝、被动血凝、补体结合实验等，这些检测方法成本低、结果易于判断、技术上便于掌握，可广泛用于检测多种类型的临床样品。后来，随着单克隆技术的建立及其他学科技术的发展，又出现丁一类将标记技术与抗原、抗体的免疫化学技术相结合的免疫标记技术，如放射性核素标记、荧光免疫标记，酶免疫标记、稀土元素标记及化学发光分子标记等。这些标记技术具有快速、灵敏、特异、易于测定等优点，极大地促进了免疫分析技术的发展，同时，也为实验室的免疫检测自动化奠定了基础。     

荧光量子点在纳米药物研究中的应用进展

量子点是一类新型无机纳米荧光探针,在长时间、多色的荧光成像和检测中具有突出优势.近年来发展起来的量子点标记技术推动了纳米药物在细胞、活体动物水平上的研究;基于量子点和荧光成像技术开发的集靶向、成像和治疗作用于一体的多功能纳米药物,有望应用于肿瘤诊断和治疗.本文从量子点作为纳米药物载体、量子点标记纳米药物载体、量子点荧光共振能量转移技术用于纳米药物释放研究以及多功能纳米药物开发这四个方面综述了荧光量子点技术用于纳米药物研究的最新进展,并讨论了该领域未来可能的发展方向.     

一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U2联合标记法

目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。     

羧基荧光素乙酰乙酸在移植免疫研究中的应用

目的：介绍和探讨活体荧光示踪染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA—SE)在移植免疫研究中的应用及价值。方法：以不同浓度的CFDA—SE标记小鼠脾细胞用于体内外实验。标记Balb／c(H2^d)和C57BL／6小鼠(H2^b)脾细胞行混合淋巴细胞培养，流式细胞术观察标记细胞的增殖情况。Balb／c裸小鼠(H2^d)构建移植物抗宿主(GVHR)、宿主抗移植物(HVGR)模型；通过流式细胞术检测标记细胞在外周血及脾的增殖情况。结果：荧光显微镜观察到标记细胞。流式细胞术检测到标记细胞荧光强度出现倍减现象，表明细胞发生了增殖；无抗原刺激组荧光强度无明显变化，抗原刺激后24—72h标记细胞停留在脾，第3天后增殖细胞进入外周血液。结论：羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记技术可应用于体内、体外实验，有助于对细胞增殖及定位进行检测，在移植免疫实验研究中具有很高的应用价值。     

人涎腺癌原位转移裸鼠模型的建立

光学成像技术与基因标记技术结合的非侵入性在体分子荧光成像可以实时监测肿瘤的发生发展过程。本研究利用绿色荧光蛋白（GFP）转染人涎腺癌细胞ACC-M，建立了GFP标记肿瘤原位转移模型，并对模型进行了整体荧光成像的初步研究。实验结果表明光学成像可以从时间和空间上反映肿瘤转移的过程，因而这种模型同在体光学成像的结合为研究肿瘤治疗药物的筛选提供了一种很好的平台。     

一种新的基因芯片检测荧光标记技术：通用引物U2联合标记法

目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性.方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析.结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单.结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用.     

药物分析几种新技术的应用进展

评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱?质谱联用技术。其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信噪比,目前广泛用于药物含量测定、酶活性测定、DNA检测和时间分辨荧光免疫分析;流动注射分析是一种新型的微量、高速和自动化的分析技术,具有分析速度快、样品和试剂消耗量少、设备与操作简单、分析效率高等特点,可与各种检测器联用,检测手段灵活多样,适用性广泛,目前在药物分析领域主要用于药物含量测定和生物内源性物质的分析;液相色谱-质谱联用技术集液相色谱的高分离效能与质谱的高选择性、高灵敏检测能力于一体,是组分复杂样品和微量/痕量样品分离分析的最有力的研究手段,是药物分析相关领域中不可或缺的重要工具,目前广泛用于药物及天然产物化学成分分析、药物代谢研究、残留物分析等。     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎T细胞增殖研究中的应用

目的 探讨荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎(EAU)抗原特异T细胞增殖研究中的应用价值. 方法 以人类光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)的多肽片段IRBP161-180为抗原,免疫B10RⅢ小鼠使其产生EAU.用CFSE荧光染料标记细胞,结合荧光单抗和流式细胞术,检测T细胞及其亚群在特异抗原刺激下,不同时间点细胞增殖的情况.结果 IRBP161-180刺激4 d后出现T淋巴细胞增殖分裂,表现为CFSE荧光强度的系列减半.使用荧光单抗双标记发现CD4+ T和CD8+ T细胞增殖反应不同步,CD8+ T细胞较CD4+T细胞增殖分裂更活跃,亲代细胞百分率下降更明显(P<0.01).结论 CFSE荧光标记技术是分析EAU抗原特异性T细胞及亚群增殖分裂的有力工具.     

中缝背核触液神经元对荧光活性染料DiI亲和性的实验研究

目的 观察荧光染料DiI标记中缝背核触液神经元的可行性.方法 6只雄性SD大鼠,侧脑室注射1％3μl的DiI染料,3天后经4％多聚甲醛灌注固定,冰冻切片机切片,共聚焦显微镜下观察,并进行连续光学切片兼对标记的触液神经元进行三维重塑.结果 DiI对中脑导水管腹侧处中缝背核内的触液神经元标记清楚,且阳性标记神经元的三维重塑显示,中缝背核触液神经元的胞体和近胞体的一级树突可被清楚标记.结论 中缝背核触液神经元对荧光活性染料DiI的亲和力较强,脑切片无需进行其他染色处理,可直接在荧光显微镜下观察到触液神经元,是一种示踪标记中缝背核触液神经元的良好方法.     

荧光比率法测量平滑肌细胞内的钙动力学变化

目的建立一种荧光比率方法来测量细胞内钙离子的动力学变化,并研究血管平滑肌细胞钙动力学变化在重症休克血管反应性降低中的作用.方法复制SD大鼠失血性休克模型,分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC),使用荧光探针Fluo-3/AM、FuraRed双标记比率方法结合激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞钙动力学变化;评估荧光比率法在动态测定胞内钙离子浓度变化中的应用及其观察ATP敏感钾通道(KATP)特异性阻滞剂优降糖对血管反应性和钙动力学影响.结果休克后2 h(失代偿期),血管反应性明显降低,NE作用带来的平滑肌细胞内钙离子浓度升高的程度明显减弱;加入优降糖可明显提高NE对平滑肌细胞内钙离子的升高作用,改善细动脉对NE的反应性,带来血管反应性部分恢复.在37℃,Fluo-3/AM、FuraRed浓度为5μnol/L的条件下,肠系膜细动脉平滑肌细胞负载40 min左右即可获得良好的标记效果.结论优降糖特异性的阻滞ATP敏感钾通道的开放,增多细胞外钙内流并提高血管反应性;使用荧光比率法可以使胞内钙离子浓度的测量不受荧光探针浓度、细胞大小、激光漂白等因素的影响,可以准确、实时、动态测量细胞内钙离子浓度变化.     

Identifiler体系在亲子鉴定中的应用分析

目的 运用AmpFlSTR Identifiler PCR 扩增试剂盒用于亲子鉴定126例,探索此试剂盒在亲子鉴定案例中的应用价值.方法 采用荧光标记STR-PCR复合扩增、毛细管电泳基因分型技术,应用ABI 310遗传分析仪对126例亲子鉴定的个体进行15个STR位点的基因分型.结果 在126例亲子鉴定中,否定亲权的25个案例中均至少有3个位点不符;认定亲权的101例中,亲子关系指数(RCP)均＞99.98%,在认定的亲子关系中,有3例出现1个位点的基因突变.结论 应用Identifiler 体系的15个STR位点的基因鉴定,能成功地开展亲子鉴定,并显著提高了亲子关系指数.     

标记后转输的凋亡细胞流式细胞术体内示踪方法

目的 探索一种可用于转输凋亡细胞体内示踪研究的方法。方法 首先对分离所得活细胞进行（CFSE）荧光标记,再诱导细胞凋亡。将该细胞经静脉注射入受体后,采用流式细胞术和组织学荧光显微镜观察标记凋亡细胞在不同组织的动态分布。同时进行CFSE标记稳定性观察实验。结果 CFSE标记凋亡细胞的阳性率高,荧光强度大,不会迅速衰减和外漏。流式细胞术检测可发现标记凋亡细胞在不同组织的动态分布。结论 CFSE标记细胞后诱导凋亡,再经流式细胞术检测组织内细胞分布,必要时辅以组织学检测可以作为一种可靠、高效,经济的凋亡细胞体内示踪研究技术方法．     

MAOA μ-VNTR多态性荧光标记自动分型方法的建立及应用

目的 应用毛细管电泳和荧光标记技术, 建立MAOA μ-VNTR多态荧光标记自动分型的方法.方法使用Chelex-100法提取DNA后, 采用荧光标记和毛细管电泳检测技术对720份云南汉族无关个体血样进行MAOA μ-VNTR基因分型.结果 荧光毛细管电泳分型方法能准确、高效地对MAOA μ-VNTR多态性进行分型检测.结论 MAOA μ-VNTR多态性荧光标记自动分型方法操作简便, 在针对MAOA μ-VNTR多态性的相关研究中具有良好的应用前景.     

纳米荧光量子点对组织标本抗原的标记检测

目的:观察量子点纳米荧光材料对组织标本抗原特异性标记的效果。方法:分别对胃腺癌组织标本和膀胱癌组织标本中的肿瘤标志物进行量子点荧光标记,观察标记效果,并在实验后1个月内连续观察荧光标记的稳定性,于实验后当天、10d和30d对荧光强度分4个等级进行评价。结果:在蓝光激发下,阳性标记位点发出橙红色荧光,与组织自发绿色荧光对比明显。持续观察30d,阳性标记位点荧光强度逐渐减弱,97.7%的阳性表达标本的荧光强度在10d内保持稳定,标记30d后荧光强度明显减弱,93%的阳性表达标本的荧光仍在可见范围,但对抗原位点的标识已比较模糊。结论:量子点独特的荧光效应能与传统检测方法有效结合,实现对组织标本敏感、长期的标记。作为一种新的检测手段,量子点荧光具有广阔的应用前景。     

罗丹明-6GDN在体外的正常细胞和肿瘤细胞中潴留效应比较

对荧光染料罗丹明-6GDN(Rhodamine-6GDN,Rh-6GDN)在细胞中潴留效应的研究表明,正常细胞与肿瘤细胞对Rh-6GDN的摄取无明显差别,但肿瘤细胞保留Rh-6GDN的能力显著强于正常细胞,肿瘤细胞能保留染料达5d以上,而正常细胞在24h内将染料完全排出,二者之间的差异为Rh-6GDN在肿瘤诊断上的应用提供了可能性。     

近红外二区荧光/光声双模态成像脂质体的制备与表征

近红外二区(NIR-II)荧光染料IR-1061水溶性差、量子产率低，限制其在生物医学方面的应用。本研究将脂质体作为载体材料，增加其水溶性，并且将近红外一区(NIR-I)荧光染料IR-780同时负载于脂质体，以增强IR-1061在NIR-II的荧光强度。结果表明，980 nm激光照射下，脂质体表现出显著增强的特征荧光。此外，对脂质体粒径、外观、光热转换效率、光声性能以及细胞毒性进行考察。结果显示，本研究所制备的复合物脂质体可作为NIR-II荧光/光声双模态成像体系，具有用于诊断和引导肿瘤光热治疗的潜力。     

荧光标记法结合PDCA管理对提高多重耐药菌感染患者环境清洁质量的作用

目的 针对医院多重耐药菌感染患者的环境清洁质量管理问题,通过开展质量循环改进(plan-do-check-action, PDCA)管理与荧光标记法相结合的干预措施,为临床提高此类患者环境清洁质量的相关研究提供参考依据。方法 选取滁州市第一人民医院多重耐药菌感染患者床单元作为研究对象,其中2019年1—3月利用荧光标记法对多重耐药菌感染患者床单元的清洁状况进行基线调查(对照组)。2019年4—6月利用荧光标记法监测患者床单元清洁质量,结合监测-反馈培训-改进和提高的PDCA管理模式来逐步提高多重耐药菌感染患者床单元环境清洁质量(观察组)。记录2个时间段内荧光标注的反馈效果,同时对2个时段内多重耐药菌感染患者的防控措施落实情况应用SPSS 22.0统计学软件进行统计比较。结果 与对照组相比,观察组的荧光标注点清除率和其他环境中发现的荧光点数占比分别由59.87%(282/471)和6.79%(32/471)改善至88.03%(412/468)和1.92%(9/468),组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论 通过开展PDCA管理与荧光标记法相结合的干预措施,能够有效提高...