电离辐射对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的：明确电离辐射对瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFb）增殖的影响。方法：MTT比色法、流式细胞仪检测不同剂量电离辐射照射前后KFb形态、增殖和存活力变化;通过测定培养基上清液中羟脯氨酸含量,明确处理前后胶原总体水平变化。结果：4Gy X-Rays作用72 h后,KFb增殖抑制率为（47.88±1.82）%高于正常皮肤成纤维细胞（39.86±0.07）%（P〈0.05）;KFb细胞的形态发生了明显的变化,KFb细胞培养上清液中羟脯氨酸含量照射72 h后为（11.749±0.9428）μg/mL高于照射前的（18.689±0.8484）μg/mL（P〈0.05）。结论：电离辐射能够抑制KFb细胞的增殖及胶原的产生。     

田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

以四甲基偶氮唑(MTT)法,琼脂糖凝胶电泳检测田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响.田积颗粒低、中、高剂量组与空白组比较,DNA的含量均有不同程度的下降,随着浓度的增加,DNA含量亦随之降低,表明田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡有一定程度的促进作用.     

咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生的影响

目的 探讨咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生的影响.方法 从手术切除的瘢痕疙瘩组织中培养成纤维细胞,加入不同浓度的咪喹莫特作用后,观察细胞的形态学变化,MTT法检测细胞的活性.免疫组化和蛋白免疫印迹法检测咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原产生的影响.结果 在10～100μg/mL范围内,咪喹莫特能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,且存在剂量和时间依赖性;进一步检测到咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原表达减弱.结论 咪喹莫特能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型前胶原的产生.     

PDTC对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:评价核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用.方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测PDTC作用后细胞增殖及胶原合成的变化.结果:和对照组相比,PDTC能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P＜0.01).结论:PDTC具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,有可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物.     

4-羟苯基维胺在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡影响

目的 探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)增殖及凋亡的影响.方法 采用薄膜-超声分散法制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.用不同浓度(0～80 mg/L)4-HPR脂质体溶液作用原代HKF 6～48 h后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞增殖情况.将部分HKF分成3组,分别用15 mg/L 4-HPR溶液、4-HPR脂质体溶液、4-HPR微泡处理,每组再分成两个亚组,一个亚组在给药后接受超声处理,另一亚组不做超声处理.作用24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测HKF的增殖情况.流式细胞仪检测15 mg/L 4-HPR脂质体或4-HPR微泡处理24 h后HKF的凋亡情况.结果 成功制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.MTT检测显示,4-HPR脂质体溶液在1 ～ 80 mg/L浓度范围内对HKF增殖有抑制作用,且增殖抑制率与药物浓度呈正相关(r=0.633,P＜0.01).超声处理后4-HPR微泡组与4-HPR溶液及4-HPR脂质体组对HKF的增殖抑制作用差异均有统计学意义(P＜0.01).4-HPR脂质体组和4-HPR微泡组HKF凋亡率分别为(21.81±3.73)％和(39.79±1.61)％,较对照组(6.18±0.61)％均显著增加(均P＜0.01).结论 成功制备4-HPR微泡,不同载体中4-HPR可促进HKF凋亡,进而抑制增殖,其中4-HPR微泡结合超声抑制作用较4-HPR脂质体强.     

积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法 取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,加入不同浓度积雪苷,观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞活性,免疫组化和Western印迹法检测积雪苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响。结果 细胞形态学观察显示,经不同浓度积雪苷处理的成纤维细胞呈现明显的抑制及凋亡征象。积雪苷在1 ～ 100 mg/L范围内,在24、48、72 h时积雪苷浓度与细胞活性抑制率均呈正相关,r分别为0.95、0.90和0.92,P值均 ＜ 0.01;且各浓度不同时间段细胞活性抑制率间单因素方差分析,P值均 ＜ 0.01。瘢痕疙瘩成纤维细胞中CTGF呈强阳性表达,而经积雪苷处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,CTGF表达有所减弱,每100个成纤维细胞中CTGF表达阳性细胞数均值未加药组为73个,1 mg/L积雪苷组为54个,10 mg/L积雪苷组为46个,未加药组与1 mg/L、10 mg/L积雪苷组比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.34和6.26,P值均 ＜ 0.01）;1 mg/L积雪苷组与10 mg/L积雪苷组比较,差异亦有统计学意义（t = 1.95,P ＜ 0.05）。Western印迹显示,积雪苷作用48 h后,成纤维细胞中CTGF的表达量比未加药的细胞明显减弱,且表达量随药物剂量的加大有递减趋势。结论 积雪苷能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和结缔组织生长因子的表达。     

五倍子瘢痕膏提取液通过miR-21靶向调控mTOR通路对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨五倍子瘢痕膏提取液通过microRNA-21(miR-21)对瘢痕疙瘩成纤维细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target protein of rapamycin,mTOR)信号通路的调控作用及对其增殖、凋亡的影响.方法 miR-21mimic、inhibitor转染至人瘢痕疙瘩成纤维细胞,予...     

二聚糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响

目的 探讨二聚糖(biglycan,BGN)在瘢痕疙瘩中的表达及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响.方法 应用免疫组织化学及Western blot检测BGN在瘢痕疙瘩组织及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的蛋白表达.采用siRNA的方法对BGN基因进行敲减,利用体外细胞划痕实验方法观察瘢痕疙瘩成纤维细胞的移行能力.结果 免疫组织化...     

槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的研究槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响,探讨其作用机理。方法体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,应用羟脯氨酸比色法对不同药物浓度处理后成纤维细胞胶原合成量进行分析;RT-PCR及Real-timePCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ-1基因表达水平。结果槲皮素可抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成,该作用呈剂量依赖效应;槲皮素可降低Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ-1基因mRNA水平。结论槲皮素对于瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有显著抑制效应,其作用机制之一为通过抑制TGFβ-1基因在转录水平降低了前胶原mRNA水平,因而使成纤维细胞胶原合成减少。     

雷公藤甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨雷公藤甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,传代培养后加入不同浓度的雷公藤甲素作用,观察细胞的形态学变化,应用MTT法检测细胞的活性,应用免疫组化和Western-blot法检测雷公藤甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原合成的影响。结果雷公藤甲素能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,且存在一定的浓度依赖性;雷公藤甲素作用后瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原表达减弱。结论雷公藤甲素能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型前胶原的合成。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩中胶原过度聚集的原因.方法 从正常皮肤与活跃增生瘢痕疙瘩标本分别培养真皮成纤维细胞,采用³H-脯氨酸掺入法分别检测单层培养及胶原凝胶三维培养体系中成纤维细胞的胶原合成量.用斑点杂交法检测单层培养细胞的人前.α1(Ⅰ)型胶原mRNA水平.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA水平升高,其胶原合成量也显著高于正常真皮成纤维细胞(P<0.01).结论 在增生活跃瘢痕疙瘩中,成纤维细胞胶原合成功能处于活化状态,胶原合成增加是导致胶原过度积聚的重要原因.     

槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的影响

目的探讨槲皮素对人体瘢痕疙瘩成纤维细胞在生长增殖、细胞凋亡方面的作用,为临床瘢痕疙瘩的治疗提供实验基础。方法MTT法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞干预前后的生长曲线;光学显微镜观察干预后细胞的形态学变化;流式细胞仪分析成纤维细胞在干预前后的细胞周期变化;原位细胞凋亡检测成纤维细胞干预后的细胞凋亡率;免疫细胞化学和蛋白印迹实验检测成纤维细胞干预前后p53、bcl-2、bax蛋白表达水平的变化。结果MTT法显示槲皮素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,抑制效应呈剂量时间依赖关系;槲皮素作用后48h瘢痕疙瘩成纤维细胞发生G2/M期阻滞,并且出现细胞凋亡,光镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓集;流式细胞仪结果显示有凋亡峰出现;原位细胞凋亡检测显示凋亡率为16.5%±2.7%。槲皮素作用后细胞p53蛋白和bax蛋白表达升高,bcl-2蛋白表达降低。结论槲皮素通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长。     

紫外线对人皮肤成纤维细胞的影响

紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。     

婴幼儿皮肤血管瘤发生发展与细胞增殖和凋亡的研究

目的　观察小儿皮肤血管瘤增生消退过程中细胞增生和凋亡状态 ,以探讨小儿血管瘤发生发展机理。方法　采用免疫组化S P法和TUNEL检测 5 8例不同阶段血管瘤组织中PCNA增殖指数 (PI)和凋亡指数 (AI)。结果　增生期血管瘤PI明显高于消退期 ,AI显著低于消退期 (P <0 .0 5 )。消退Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期PI逐渐降低 ,AI逐渐增高 ,除Ⅱ、Ⅲ期AI之间无显著性差异外 ,其余各组之间均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。AI/PI在消退期明显高于增生期 ,在消退Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期随着病变发展明显增高 (P <0 .0 1)。结论　小儿皮肤血管瘤发生发展与细胞增生、凋亡有关。凋亡指数增高可作为血管瘤自然消退的早期判断指标。     

紫外线诱导成纤维细胞凋亡及防护机制的初步探讨

目的 探讨紫外线诱导真皮成纤维细胞凋亡的发生机理以及绿茶多酚的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对凋亡的保护作用。方法 用流式细胞仪及RT-PCR方法分别检测了成纤维细胞凋亡率变化以及凋亡相关基因Fas和Bcl-2 mRNA表达变化。结果 经中波紫外线(UVB)和长波紫外线(UVA)辐射的成纤维细胞,均在G1期前出现明显的亚二倍体(凋亡峰),凋亡率分别为34.79±2.24和29.69±3.05;而应用EGCG后凋亡率均明显下降为4.23±0.03和5.23±0.01。经统计学分析,差异有显著性(P<0.001)。Fas的mRNA表达在UVB及UVA辐射组均有较明显增加,分别为0.72±0.05和0.68±0.02;应用EGCG后,两组表达均明显减弱为0.35±0.02和0.47±0.03。经统计学分析,差异有显著性(P<0.001)。Bcl-2的mRNA经UVB辐射后,没有明显变化,仍有较强表达;而经UVA辐射以后,其mRNA表达明显减弱。为0.27±0.03,应用EGCG后,表达则又明显增强为0.51±0.04。结论 EGCG对UVB及UVA诱导的凋亡均有保护作用,但凋亡的发生机理以及保护机理则有所差异。     

血竭素高氯酸盐促进瘢痕成纤维细胞凋亡的作用

目的观察天然药物血竭素高氯酸盐对瘢痕成纤维细胞凋亡的影响,为开发有效治疗增生性瘢痕的新药提供实验依据。方法应用四甲基偶氮唑(MTT)法、特异性荧光染色和原位末端标记技术(TUNEL)分别检测血竭素高氯酸盐对成纤维细胞的抑制率和凋亡指数。结果MTT法显示血竭素高氯酸盐对成纤维细胞的抑制率增高,且呈现浓度和时间依赖性(P<0.05)。特异性荧光染色和TUNEL法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高(P<0.05)。结论血竭素高氯酸盐对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。     

卡泊三醇对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度卡泊三醇(CPT)对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响。方法不同浓度CPT作用于体外培养的小鼠黑素瘤B16细胞24h,在倒置显微镜下观察细胞密度及形态,采用MTT比色法和AnnexinV/PI染色法分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率。结果与对照组相比,CPT浓度为1,10μg/mL组中B16细胞密度及形态无明显变化,也无增殖抑制作用(P>0.05)。而当CPT为102,103μg/mL时,细胞密度减少,形态由多角形变为略圆钝,甚至皱缩,对细胞增殖呈剂量依赖性的抑制作用(P<0.05)。CPT为1,10,102μg/mL时对B16细胞无凋亡诱导作用(P>0.05),而103μg/mL时则明显促进细胞凋亡(19.17±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CPT≤10μg/mL对B16细胞密度形态、增殖抑制率和凋亡率无明显影响;CPT≥102μg/mL能改变B16细胞形态,并呈浓度依赖性地抑制其增殖;而当CPT≥103μg/mL时能诱导B16细胞凋亡。     

白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平及细胞凋亡的影响

目的初步探寻红葡萄酒中主要活性成分白藜芦醇对紫外线照射皮肤保护作用的可能机制。方法白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1水平及细胞凋亡的影响。将培养的人皮肤成纤维细胞分为5组,A组:无UVB照射无干预组,B组:UVB照射无干预组,C组:UVB照射1μmol/L白藜芦醇干预组,D组:UVB照射10μmol/L白藜芦醇干预组,E组:UVB照射100μmol/L白藜芦醇干预组。UVB照射剂量均为30mJ/cm2。用免疫组织化学方法分别检测5组细胞中MMP-1水平,用磷脂酰丝氨酸外翻分析(AnnexinV法)检测细胞凋亡率。结果 A～E组5组细胞MMP-1阳性细胞评分及凋亡率差异均有统计学意义(P均<0.05)。A组评分及凋亡率均明显低于B组,两组比较差异有统计学意义(P均<0.05),B组与C,D,E组评分及凋亡率比较差异均有统计学意义(P均<0.05),C～E组3组评分及凋亡率比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可以抑制UVB照射诱导的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平的升高,并可减少细胞因UVB照射引起的凋亡,白藜芦醇可能通过此机制对紫外线照射皮肤起到保护作用。     

超抗原SPE对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖和凋亡作用的研究

目的研究超抗原SPE对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖及凋亡的作用。方法用SPE刺激SLE患者外周血T淋巴细胞,用流式细胞仪观察T淋巴细胞增殖、细胞表型以及凋亡情况,ELISA法检测IL2产生。结果SPE有促进SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的作用,增殖细胞主要为CD4+T淋巴细胞,同时产生大量的IL2;再次用SPE刺激,可诱导T淋巴细胞凋亡。结论链球菌感染后,可能通过SPE诱导T淋巴细胞激活、随后出现细胞凋亡的途径而导致SLE病情活动加重。