AT1R反义寡核苷酸对心肌细胞生长影响的实验研究

目的 :探讨 AT1 R反义寡核苷酸 （AT1 R- AS- ODNs）对正常大鼠心肌细胞生长的影响。方法 :脂质体介导AT1 R- AS- ODNs转染体外培养的 SD乳鼠心肌细胞 ,Western印迹及原位杂交检测细胞内 AT1 R蛋白及 m RNA表达 ;流式细胞仪检测细胞内 DNA合成 ;免疫沉淀法检测 c- Jun氨基末端活化蛋白激酶 （JNKs）活性 ;免疫细胞化学检测核转录因子 c- Jun蛋白表达水平。结果 :在脂质体介导下 ,AT1 R- AS- ODNs成功转染心肌细胞 ;转染 2 4 h后 ,AT1 R蛋白及 m RNA表达水平分别被下调 6 0 .7%、5 1.2 % （P<0 .0 5 ） ;但 AT1 R- AS- ODNs转染对细胞内 JNKs活性、c- Jun蛋白表达、DNA合成无显著影响。结论 :AT1 R- AS- ODNs能有效抑制正常大鼠心肌细胞 AT1 R表达 ,但不改变细胞内 AT1 R偶联的信号转导过程 ,也不影响细胞的正常生长。     

AngⅡ、TGF-β1和FN对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞合成胶原的影响

目的　观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子β1（TGF-β1）、洛沙坦（Losartan）、纤维粘连蛋白（FN）对培养的SHR和WKY大鼠心肌成纤维细胞（CFb）合成胶原的影响。方法　采用组织块贴壁法培养CFb,分别测定AngⅡ、TGF-β1、Losartan、FN干预下CFb的　3H-脯氨酸（　3H-Proline）掺入量。结果　AngⅡ、TGF-β1、FN促进CFb的　3H-Proline掺入量,Losartan抑制10-7MAngⅡ诱导的CFb的　3H-Proline掺入。结论　AngⅡ、TGF-β1、FN对CFb的胶原合成有促进作用,Losartan可拮抗AngⅡ的作用。     

Benazepril和Losartan对培养SHR心肌成纤维细胞增殖及合成胶原影响

目的　观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )、苯那普利 (Benazepril,Be na)、洛沙坦 (Losartan)对培养的SHR和WKY大鼠心肌成纤维细胞 (CFb)增殖及合成胶原的影响。方法　采用组织块贴壁法培养CFb ,分别测定AngⅡ、Bena干预下CFb的增殖情况 ,AngⅡ、Bena和Losartan干预下CFb的3H 脯氨酸 (3H Proline)掺入量。结果　各种浓度的AngⅡ (10 -10 mol～ 10 -6mol)和Bena(10 -9mol～ 10 -5mol)对CFb的细胞数显著增殖无影响 ,AngⅡ呈浓度依赖性促进CFb的3H Proline掺入量 ,Bena抑制CFb的3H Proline掺入量 ,Losartan呈浓度依赖性抑制 10 -7molAngⅡ诱导的CFb的胶原合成。结论　AngⅡ和Bena不影响CFb的增殖 ,AngⅡ对CFb的胶原合成有促进作用 ,Bena抑制CFb胶原合成 ,Losartan可拮抗AngⅡ的作用     

血管紧张素Ⅱ对不同年龄大鼠的促心肌肥厚作用

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )在不同年龄SD大鼠致心肌肥厚作用的特点及机制。　方法　应用心肌细胞和心肌成纤维细胞体外培养 ,分别测定心肌细胞3 H 亮氨酸 (3 H leu)掺入和心肌成纤维细胞3 H 胸嘧啶脱氧核苷 (3 H TdR)掺入 ,观察AngⅡ对不同年龄SD大鼠心肌细胞蛋白合成和心肌成纤维细胞分裂增殖的影响及心肌成纤维细胞对心肌细胞蛋白合成的作用。　结果　 10 6mol/L的AngⅡ可使新生SD大鼠的心肌细胞3 H leu掺入明显增加 (P <0 0 5 )。加入心肌成纤维细胞培养上清液后 ,新生乳鼠心肌细胞3 H leu掺入增加更显著 (P <0 0 1) ,但不能增加 12月龄组心肌细胞3 H leu的掺入 ;10 6mol/LAngⅡ可使新生和 12月龄两组SD鼠心肌成纤维细胞3 H TdR掺入均显著增加 (P <0 0 1) ,Losartan可阻断上述AngⅡ的作用。　 结论　AngⅡ通过AngⅡ 1型受体 (AT1)受体对新生乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞具有直接促蛋白合成及细胞分裂作用 ,并可通过心肌成纤维细胞进一步促进心肌肥大。随年龄增长 ,AngⅡ主要影响心肌成纤维细胞分裂增殖 ,促进心肌间质纤维化     

AngⅡ、TGF—β1和FN对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞合成胶原的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子β1（TGF－β1)、洛沙坦（Losartan)、纤维粘连蛋白（FN）对培养的SHR和WKY大鼠心肌成纤维细胞（CFb)合成胶原的影响。方法 采用组织块贴壁法培养CFb,分别测定AngⅡ、TGF－β1、Losartan、FN干预下CFb的^3H-脯氨酸（^3H-Proline)掺入量。结果 AngⅡ、TGF－β1、FN促进CFb的^3H-Proline掺入量,Losartan抑制10^-7M AngⅡ诱导的CFb的^3H-Proline掺入。结论 AngⅡ、TGF－β1、FN对CFb的胶原合成有促进作用,Losartan可拮抗AngⅡ的作用。     

骨髓间充质干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞的影响

目的探讨体外2％氧条件下培养骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）培养液对成年大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成情况的影响。方法分离Wistar大鼠下肢骨获取MSCs进行培养，收集培养3、6、9、24h培养液，用其刺激成年Wistar大鼠的心肌成纤维细胞30h，采用MTT法和^3H-脯氨酸掺入法检测心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成情况。结果经3、6、9h的MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入量与无血清对照组比较显著增加，分别增加23％（P〈0．01）、44％（P〈0．01）和31％（P〈0．01），而24h组与无血清对照组比较差异无显著性：MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞MTT结果与对照组比较差异无显著性。结论MSCs低氧条件培养液可以促进心肌成纤维细胞胶原合成，改善心功能。     

敲低Tribbles同源蛋白3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖

目的研究敲低Tribbles同源蛋白(TRIB)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响。方法用AngⅡ处理心肌成纤维细胞,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法检测细胞中TRIB3表达情况。心肌成纤维细胞转染TRIB3 siRNA慢病毒载体,经AngⅡ处理后,qRT-PCR和Western印迹检测干扰效率。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,羟脯氨酸法检测胶原合成,Western印迹法检测细胞中Ⅰ型胶原(COLL)Ⅰ、COLLⅡ和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达,硝酸还原法检测培养液中一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性。结果 AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞中的TRIB3表达水平升高(P0.01)。TRIB3 siRNA慢病毒载体可明显下调AngⅡ条件下心肌成纤维细胞中TRIB3的表达水平(P0.05)。AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞增殖能力升高(P0.05),细胞胶原合成增多(P0.05),细胞中COLLⅠ、COLLⅡ蛋白水平升高(P0.05),MMP-2水平降低(P0.05),培养液中NO含量降低(P0.05),iNOS活性降低(P0.05)。下调TRIB3能够降低AngⅡ条件下心肌成纤维细胞增殖能力(P0.05),减少细胞胶原合成(P0.05),降低细胞中COLLⅠ、COLLⅡ蛋白表达(P0.05),促进细胞中MMP-2蛋白表达(P0.05),促进细胞分泌NO(P0.05),提高细胞iNOS活性(P0.05)。结论敲低TRIB3能够抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,减少胶原合成,促进细胞分泌NO。     

抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原合成与降解的调节作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖、胶原合成和降解代谢的调节作用。方法分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞。采用^3H-TdR和。H-脯氨酸掺入法分别检测心脏成纤维细胞增殖与胶原蛋白合成。Western blot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达和基质金属蛋白酶（MMP）-1蛋白的表达。明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2和MMP-9活性的表达。结果PDGF促进心脏成纤维细胞增殖、胶原合成,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,以及MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达。AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成均有抑制作用。AcSDKP上调由PDGF介导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1的表达。结论AcSDKP抑制PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖和胶原的合成,上调MMPs活性或表达,促进胶原的降解,这些可能与AcSDKP抗心脏纤维化作用相关。     

血管紧张素Ⅱ对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢和分裂增殖的影响

目的 :探讨血管紧张素 ( Ang )对心脏成纤维细胞 ( cfbs)胶原代谢和分裂增殖的直接影响。方法 :培养 SD大鼠乳鼠 cfbs,测定其胶原合成总量、 型胶原含量及胶原酶活力 ;检测细胞增殖核抗原 ( PCNA)及与增殖相关的 c- m yc基因的表达。结果 :在一定浓度和作用时间下 ,Ang 能显著增加培养细胞胶原合成总量及 型胶原合成量 ;10 - 9～ 10 - 7m ol/ L Ang 均可在 2 4 h后使培养细胞分泌的前胶原酶活性受到抑制 ,Ang 的此种作用可被 saralasin拮抗 ;10 - 8m ol/ L 的 Ang 不促进 PCNA蛋白及 c- m yc基因的表达。结论 :一定浓度和时间作用下 ,Ang 能不同程度地促进胶原合成 ,抑制胶原酶活力 ,使胶原沉积的净效应增加 ,从而加速心肌纤维化。但是Ang 在体外不能促进 cfbs进行有丝分裂     

容量超负荷心肌肥大时局部心肌AngⅡ,bFGF的变化及ATI受体拮抗剂对其影响的实验研究

目的 :观察急性容量超负荷心肌肥大 （MH）早期局部心肌碱性成纤维细胞生长因子 （b FGF）及血管紧张素 （Ang ）的作用以及 Ang 1型受体 （AT1）拮抗剂 （Losartan,Los）的逆转 MH作用。方法 :选择 3 6只雄性 SD大鼠随机分为 3组 :腹腔动静脉造瘘容量超负荷组 （AVO组 ）、容量超负荷治疗组 （L OS组 ）及对照组 （CON组 ） ,每组 12只 ,对比检测术后第 10天和第 2 0天的收缩压 （SBP）、左室重量指数 （LVMI）、心肌羟脯氨酸 （HY）、b FGF,Ang 及血浆 Ang 含量。结果 :1ACF组 SBP和 L VMI第 10天和第 2 0天持续升高 （P<0 .0 5 ,vs CON组 ） ,给药后二者水平仍显著高于对照组 ,但较 ACF组明显下调 ;2 ACF组心肌 b FGF和 Ang 第 10和第 2 0天明显上升 （P<0 .0 5 ,vs CON组 ） ,AT1受体被阻断后第 10天心肌 b FGF显著升高 （P<0 .0 5 ,vs ACF组 ） ,第 2 0天无明显变化 （P>0 .0 5 ,vs ACF组 ） ,而心肌和血浆 Ang 较 ACF组明显增多 （P<0 .0 5 ） ;3心肌 b FGF,Ang 及 L VMI之间均呈显著正相关。结论 :心肌 b FGF可能和 Ang 共同参与急性容量超负荷 MH早期发生 ,其产生可能与心肌 Ang 有关 ,AT1受体拮抗剂早期具显著逆转 MH作用     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径.方法体外培养心肌成纤维细胞(CFB),分别加入不同浓度Ang Ⅱ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein),测定细胞3H-TdR和3H-Leu掺入率.结果 Ang Ⅱ浓度依赖性促进CFB的3H-TdR和3H-Leu掺入率,洛沙坦可完全抑制该效应,Genistein部分抑制该效应.结论外源性AngⅡ通过CFB的AT1R 对该细胞产生增殖反应,作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导.     

转染血管紧张素Ⅱ受体反义核苷酸对心肌成纤维细胞的作用

目的 :评价转染血管紧张素 （Ang ）受体 （AT1 ）反义核苷酸 （AT1 A）对心肌成纤维细胞 （Fbs） Ang 受体亚型 m RNA、蛋白激酶 C（PKC）、丝裂素活化蛋白激酶 P38（P38MAPK）蛋白表达 ,及蛋白质合成的作用。方法 :RT-PCR克隆 AT1 c DNA片段 （4 76 bp） ,将克隆的 AT1 c DNA片段反向插入 Pc DNA 3.1（5 .4kb） ,构建一完整的含AT1 A的质粒 （PAT1 A）。转染培养的大鼠 Fbs,RT- PCR检测转染的 Fbs AT1 m RNA表达。 Ang 10 - 7m ol/ L 刺激 2 4h后 ,比较转染及非转染的 Fas Ang 受体 AT1 及 AT2 m RNA表达 （RT- PCR）、P38MAPK和 PKC蛋白表达（western blot）、蛋白质合成 （3H- L eu掺入 ）。结果 :成功构建 PAT1 A。 RT- PCR显示转染 Fbs AT1 m RNA的水平降低 ,与对照 Fbs相比差异显著 （P<0 .0 1）。 Ang 10 - 7m ol/ L 刺激 2 4h后 ,与非转染 Fbs相比 ,转染 Fbs AT1m RNA明显减少 ,AT2 m RNA明显增加 （P<0 .0 1） ;但两组间 PKC和 P38MAPK蛋白表达、3H- L eu及 3H- Td R掺入量均无显著性差异 （P>0 .0 5 ）。结论 :经 AT1 A封闭后 ,能显著地抑制 Fbs AT1 m RNA表达 ,同时上调 AT1 m RNA。单纯封闭 AT1 m RNA并不能有效阻断 Ang 介导的 Fbs蛋白质合成及 Fbs生长相关的信号转导。     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径。方法 体外培养心肌成纤维细胞(CFB)，分别加入不同浓度AngⅡ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein)，测定细胞^3H—TdR和^3H—Leu掺入率。结果 AngⅡ浓度依赖性促进CFB的^3H—TdR和^3H—Leu掺入率，洛沙坦可完全抑制该效应．Genistein部分抑制该效应。结论 外源性AngⅡ通过CFB的AT1R对该细胞产生增殖反应，作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导。     

醛固酮促进心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的：研究醛固酮对培养心肌成纤维细胞增殖的影响。方法：培养新西兰白兔心肌成纤维细胞,将第三代心肌成纤维细胞分为醛固酮组（不同浓度）、醛固酮＋螺内酯组和对照组,心肌成纤维细胞的代谢活性与DNA合成分别用WST-1试剂和5′溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）酶联免疫吸附试验（ELISA）进行测定。结果：与对照组比较,不同浓度醛固酮作用后,心肌成纤维细胞的WST-1与BrdU的OD值均增加,并呈浓度依赖性（P〈0．05～〈0．01）;丽螺内酯＋醛固酮组的WST-1与BrdU的OD值明显低于醛固酮组（P〈0．01）。结论：在体外,醛固酮能诱导心肌成纤维细胞增殖,而螺内酯抑制其作用。     

扶正化瘀方对大鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原生成的抑制作用

目的：探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。方法：以10％的扶正化瘀方药物血清作用于大鼠皮肤成纤维细胞，通过[^3H]-TdR和[^3H]-Rroline掺入,观察药物血清对大鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原生成的影响。结果：药物血清组[^3H]-TdR掺入量明显少于正常大鼠血清组。药物血清组细胞内胶原的合成率和细胞外胶原的分泌率均低于正常大鼠血清组。结论：扶正化瘀方抑制了大鼠皮肤成纤维细胞的增殖和胶原的生成。     

长期芦沙坦治疗对自发性高血压大鼠心肌间质的影响

目的:确定长期芦沙坦治疗能否逆转自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化.方法:本实验选用33周龄Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只,SHR未用药组6只,SHR用药组6只(已口服17周芦沙坦30 mg/kg/d).大鼠断头处死,取出心脏标本进行检测.血压、心脏重量、左心室重量、左心室重量指数测定用常规方法.纤维胶原用左心室心肌组织切片行VanGieson染色,图象用真彩色图象分析系统计算左室胶原容积分数,进行定量评估.免疫组化染色左心室心肌组织切片Ⅲ型胶原,用记分法进行半定量分析.电镜观察左心室心肌间质形态学变化.用3×1000放大比例计算每个视野成纤维细胞数,每个标本随机取10个视野,比较各组间成纤维细胞数的差异.结果:与WKY组大鼠相比较,SHR存在高血压、心肌肥大、左心室胶原容积分数增加.免疫组化分析左心室Ⅲ型胶原增加,电镜观察成纤维细胞数增加,有统计学显著性差异.与SHR组相比,SHR用药组高血压、左心室重量、左心室胶原容积分数降低.免疫组化分析左心室Ⅲ型胶原减少.但成纤维细胞数无明显变化.结论:芦沙坦在逆转自发性高血压大鼠心肌肥大,同时能减少基质胶原沉积.但电镜形态学观察,不能抑制成纤维细胞增殖.     

长期芦沙坦治疗对自发性高血压大鼠心肌间质的影响

目的 :确定长期芦沙坦治疗能否逆转自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化。方法 :本实验选用 33周龄Wistar Kyoto(WKY)大鼠 8只 ,SHR未用药组 6只 ,SHR用药组 6只 (已口服 17周芦沙坦 30mg/kg/d)。大鼠断头处死 ,取出心脏标本进行检测。血压、心脏重量、左心室重量、左心室重量指数测定用常规方法。纤维胶原用左心室心肌组织切片行VanGieson染色 ,图象用真彩色图象分析系统计算左室胶原容积分数 ,进行定量评估。免疫组化染色左心室心肌组织切片Ⅲ型胶原 ,用记分法进行半定量分析。电镜观察左心室心肌间质形态学变化。用 3× 10 0 0放大比例计算每个视野成纤维细胞数 ,每个标本随机取 10个视野 ,比较各组间成纤维细胞数的差异。结果 :与WKY组大鼠相比较 ,SHR存在高血压、心肌肥大、左心室胶原容积分数增加。免疫组化分析左心室Ⅲ型胶原增加 ,电镜观察成纤维细胞数增加 ,有统计学显著性差异。与SHR组相比 ,SHR用药组高血压、左心室重量、左心室胶原容积分数降低。免疫组化分析左心室Ⅲ型胶原减少。但成纤维细胞数无明显变化。结论 :芦沙坦在逆转自发性高血压大鼠心肌肥大 ,同时能减少基质胶原沉积。但电镜形态学观察 ,不能抑制成纤维细胞增殖。     

血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞PTEN基因表达及增殖的影响

目的以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞（CFC）,观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）及转化生长因子-β1（TGF-β1）基因表达。方法以AngⅡ（1×10-7mmol/L）刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增殖情况,以RT-PCR的方法检测PTEN及TGF-β1基因表达。结果MTT测定的结果:32 h后AngⅡ刺激组的吸光值（A）显著高于该时间点对照组（P<0.05）,与正常对照组相比,AngⅡ作用组PTEN基因表达显著下降（P<0.05）,TGF-β1基因显著上调（P<0.05）。结论在AngⅡ的刺激下,CFC的TGF-β1表达上调,抑制PTEN基因表达,并引起细胞增殖。     

比索洛尔对高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨比索洛尔对培养的高血压大鼠（SHR）和W istar大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响。方法:采用胰酶消化法培养CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成功能,四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖,3H-脯氨酸（3H-Proline）掺入法测定胶原合成。结果:①基础状态下,SHR组CFs的3H-Proline掺入量3、H-TdR掺入量及MTT比色法A值均明显高于W istar组。②不同浓度比索洛尔对两组大鼠CFs3H-TdR掺入量及MTT比色法A值均无明显作用。③不同浓度比索洛尔以浓度依赖的方式抑制CFs3H-Proline掺入量,与W istar大鼠组相比,SHR组CFs受抑制的效应更强。结论:SHR的CFs细胞数目、DNA合成及胶原含量均存在异常,比索洛尔呈浓度依赖性抑制CFs的胶原合成,但对CFs增殖及DNA合成无明显作用。     

转化生长因子β_1对心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)对原代培养的乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖与胶原合成的影响。方法出生1d~3 d的SD大鼠,用胰蛋白酶消化、差速贴壁法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞,用不同浓度的TGF-β_1作用于心肌成纤维细胞,采用四氮唑盐(MTT)法测定CFs增殖,羟脯氨酸试剂盒检测胶原分泌,蛋白印迹法(Western Blot)检测心肌成纤维细胞分泌的TGF-β_1蛋白表达。结果与正常对照组比较,10 ng/m L TGF-β_1组心肌成纤维细胞增殖明显(P0.05);心肌成纤维细胞羟脯氨酸含量明显增加(P0.01),同时TGF-β_1蛋白表达明显增加(P0.05)。结论 TGF-β_1可引起心肌成纤维细胞的增殖,胶原分泌增加,同时可使蛋白TGF-β_1蛋白含量增加。