转化生长因子β1对慢乙肝细胞免疫功能的影响

观察慢性乙肝、肝硬化患者血清TGF - β1和T淋巴细胞亚群的关系 ,探讨TGF - β1对慢乙肝细胞免疫功能的影响。以ELISA法测定 83例慢性乙肝、肝硬化患者血清TGF - β1,以抗体致敏的红细胞花环试验测定T淋巴细胞亚群。 1 慢性乙肝轻、中、重度及肝硬化患者血清TGF - β1水平明显高于对照组 ;2 慢性乙肝轻、中、重度、肝硬化患者血清CD3 T细胞、CD4 T细胞、CD4 /CD8 明显低于对照组 ,CD8 T细胞明显高于对照组。相关分析发现 ,血清TGF - β1与CD4 T细胞、CD4 /CD8 呈负相关 ,与CD8 T细胞呈正相关。慢乙肝、肝硬化患者血清TGF -β1水平明显升高 ,而细胞免疫功能低下 ;TGF - β1对细胞免疫功能的抑制作用是慢性乙肝、肝硬化患者细胞免疫功能低下的原因之一     

乙型肝炎相关肝癌外周血树突状细胞负载肿瘤抗原前后免疫功能的变化

目的探讨肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞(DC)表面分子表达及负载肿瘤抗原前后免疫功能变化与免疫逃逸的关系。方法分离18例乙型肝炎相关原发性肝癌、11例乙型肝炎肝硬化患者和10名健康献血者PBMC,体外培养,并加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导DC。以共聚焦显微镜和扫描电镜观察形态,以流式细胞仪检测DC表面人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD1a、CD80、CD83、CD86等分子表达水平。以HCCLM6肝癌细胞株制备肿瘤抗原,分别负载3种DC,最后以混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC负载前后刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力,并测定MLR上清液中IL-12的含量。结果肝硬化和肝癌组PBMC、DC得率低于正常组(P<0.05);HLA- DR、CD1a、CD80和CD86等分子表达水平也低于正常组(P<0.05);负载肿瘤抗原前肝硬化和肝癌组刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力和MLR上清液中IL-12含量明显低于正常组,负载肿瘤抗原后3组均提高, 并以肝硬化组提高最为明显,但IL-12含量仍低于正常组。结论DC表型和功能缺陷可能是乙型肝炎病毒产生免疫耐受和肝癌细胞免疫逃逸的重要机制。肝硬化患者DC仍有一定功能。     

原发性肝癌和乙型肝炎肝硬化患者外周血淋巴细胞凋亡率、T细胞亚群和NK细胞的水平变化和临床意义

目的通过检测乙型肝炎肝硬化和合并乙型肝炎病毒感染的原发性肝细胞癌患者的外周血的粒细胞、单核细胞、NK细胞、T细胞及其亚群和淋巴细胞及其凋亡率,探讨两者在细胞免疫方面的差异.方法用Ficoll Hypaque离心法分离外周血单个核细胞(PBMNC),流式细胞仪检测外周血T细胞及其亚群、NK细胞和淋巴细胞、单核细胞和粒细胞,AnnexinV/FITCKit检测凋亡细胞.结果乙型肝炎肝硬化患者的外周血单核细胞、粒细胞、淋巴细胞、CD3-CD16 CD56 NK细胞、CD3 T细胞、CD3 CD4 T细胞、CD3 CD4 T细胞和CD4 CD8 T细胞比值,均与正常对照组无显著性差异(P＞0.05);但淋巴细胞凋亡率明显低于对照组(P＜0.01).原发性肝癌外周血CD3-CD16 CD56 NK细胞、单核细胞和CD4 /CD8 T细胞比值与肝硬化组和正常对照组比较,均无显著性差异(P＞0.05),而粒细胞明显升高(P＜0.05);CD3 T细胞、CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞均较另两组明显减少(P＜0.05),淋巴细胞及其凋亡率均明显低于另两组(P＜0.01).结论乙型肝炎肝硬化患者的外周血细胞免疫只发生不显著的变化,但淋巴细胞的凋亡率明显降低.原发性肝癌外周血的细胞免疫和淋巴细胞凋亡率均明显低下.     

不同临床状态的HBV感染相关肝病患者T淋巴细胞水平和主要细胞因子表达的比较

目的:对不同临床状态的HBV感染相关肝病患者的T细胞免疫功能状态进行初步研究。方法:分别收集乙型肝炎病毒携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)及CHB肝硬化患者的血清,检测患者的T淋巴细胞水平和主要细胞因子表达情况。细胞免疫(CD3、CD4、CD8、NK)采用流式细胞仪检测;细胞因子(IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IFN)采用ELISA方法检测。结果:不同临床类型慢性乙肝病毒感染者血清肝功能、T淋巴细胞亚群、细胞因子水平均具有一定差异,CHB肝硬化患者的TBil、ALP、γ-GT水平最高,并长期处于轻度升高状态;As C的肝功能均正常,CHB活动期患者的ALT、AST水平最高。肝硬化患者的各种细胞因子水平均高于As C和CHB活动期患者,尤其以IL-1、IL-2、SIL-2R、IL-6、IL-8、IL-10最为显著,差异具有统计学意义(P0.05)。不同临床类型慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群差异有显著意义(P0.01)。不同ALT水平的患者,其外周血T淋巴细胞亚群与细胞因子差异无显著性意义(P0.05)。结论:不同临床类型慢性HBV感染者,其肝功能、T淋巴细胞亚群、细胞因子水平等均表现为不同状态,CHB肝硬化患者的TBil、ALP、γ-GT水平最高,并长期处于轻度升高状态;肝硬化患者的各种细胞因子水平均高于病毒携带者和CHB活动期患者,而ALT水平对HBV感染者T淋巴细胞亚群、细胞因子水平无明显影响。     

和解汤对慢性乙型肝炎功能性T细胞亚群的影响

[目的]探讨和解汤对慢性乙型肝炎(CHB)功能性T淋巴细胞亚群的影响.[方法]将72例CHB患者随机分为2组,治疗组(42例)采用和解汤治疗,对照组(30例)采用核苷类似物治疗,观察2组治疗后外周血功能性T淋巴细胞亚群(CD8 CD28 、CD4 CD28 )、白细胞介素2(IL-2)水平及乙肝病毒(HBV)标志物及肝功能的变化.[结果]治疗组治疗后CD8 CD28 、CD4 CD28 T细胞和IL-2水平较治疗前明显升高(P＜0.05),6例患者HBeAg阴转、HBV DNA量下降至1×105 copy/ml以下;对照组治疗前后CD8 CD28 T细胞、CD4 CD28 T细胞及IL-2水平无明显变化(P＞0.05),1例患者HBeAg阴转,22例HBV DNA量下降至1×105 copy/ml以下.CHB显效者治疗后CD8 CD28 、CD4 CD28 T细胞水平和IL-2水平明显升高(P＜0.01);非显效组治疗前后CD8 CD28 T细胞、CD4 CD28 T细胞水平无明显变化(P＞0.05).[结论]和解汤清除HBV的疗效,可能与CD8 CD28 T细胞的有效激活有关,细胞免疫在HBV感染发病机制和病毒清除过程中起重要作用.     

不同临床类型HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的研究HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义.方法在33例慢性乙型肝炎轻度、50例中度、32例重度、64例肝硬化、51例慢性乙型肝炎肝衰竭和30例健康人,采用特异性荧光抗体标记法和流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群.结果慢性乙型肝炎重度、乙型肝炎肝硬化和慢性乙型肝炎肝衰竭患者与正常对照组比,CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞数和CD4^＋/CD8^＋比值显著下降（P〈0.05）,以慢性乙型肝炎肝衰竭下降最显著;HBeAg阴性患者外周血CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋细胞数较HBeAg阳性患者显著减少（P〈0.05）;HBV DNA载量与患者外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞数和CD4^＋/CD8^＋比值均无明显相关性.结论严重的HBV感染者存在不同程度的细胞免疫功能低下及免疫调节紊乱,细胞免疫功能下降程度与病毒复制水平无明显相关.     

肝癌患者乙型肝炎病毒基因变异的检测

目的了解肝癌患者HBV基因变异、机体免疫功能异常及肿瘤抑制基因P16蛋白失活的情况。方法运用基因芯片和核苷酸序列分析技术，对114份我院住院患者血清中HBVDNA（前C区1814、1896、BCP区1762、1764位）进行分析，流式细胞荧光染色检测患者外周血WBC中P16蛋白，流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群，ELISA法检测IFN-γ、IL-4水平。结果慢性乙型肝炎组（41份）、乙型肝炎肝硬化组（37份）、肝癌组（36份）血清中的HBV总突变率为58．5％、75．6％和88．8％，肝组织中肝硬化、肝癌分别为75．0％和100％；慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌组患者外周血WBC中P16蛋白阳性率分别为（43．09±8．08）％、（30．54±10．61）％和（16．29±6．86）％，正常人为（76．57±6．07）％；肝癌患者CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞绝对数均明显低于健康对照组（t＇1=8．83、t＇2=6．59、t＇3=9．84，P〈0．05）；肝癌患者IFN-γ、IL-4水平明显低于健康者（t＇1=6．67、t＇2=3．82，P〈0．05）。结论肝癌患者中HBV基因变异普遍存在，机体免疫功能低下，外周血WBC中P16蛋白表达明显低。     

慢性乙型肝炎患者血清转化生长因子β1与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞的关系

目的 调查慢性乙型肝炎患者转化生长因子β1(TGF β1)与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞异常的关系.方法 将实验对象分为慢性乙型肝炎(CHB)患者、无症状HBV携带者(AsC)、乙型肝炎恢复者、正常人对照4组.通过流式细胞术分析外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞的表型和频率以及实时荧光定量PCR分析Foxp3表达水平;并通过酶联免疫吸附法检测血清中TGF β1水平.根据数据不同采用方差分析或秩和检验进行统计学分析.结果 CHB或AsC组外周CD4~+T淋巴细胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞频率以及CD4~+CD25~+T淋巴细胞中Foxp3 mRNA表达水平显著高于正常人对照组,差异有统计学意义(P<0.05).CHB患者和AsC血清中TGF β1水平显著高于正常人和乙型肝炎恢复者,并与CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞频率存在显著正相关(r=0.78,P<0.01).结论 CHB和AsC患者TGF β1与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞增高有密切关系.     

健脾益气方对慢性乙型肝炎患儿细胞免疫功能的影响

目的:观察健脾益气方对慢性乙型肝炎患儿细胞免疫功能的影响.方法:将42例服用健脾益气方治疗的慢性乙型肝炎患儿用流式细胞仪检测其治疗前后外周血T淋巴细胞亚群水平,并与健康儿童进行比较.结果:慢性乙型肝炎患儿外周血T淋巴细胞CD3 基本正常,CD4 下降,CD8 上升;治疗组患儿CD4 上升、CD8 下降、CD4 /CD8 上升,治疗前后比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论:健脾益气方能够提高慢性乙型肝炎患儿的细胞免疫功能.     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血淋巴细胞亚群的变化,以了解细胞免疫在乙型肝炎发病中的作用。方法使用流式细胞仪检测100例乙型肝炎患者和20例正常人外周血CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比。结果 15例急性肝炎患者T淋巴细胞亚群与正常对照组比,差异无统计学意义(P>0.05),而43例慢性肝炎、26例乙型肝炎肝硬化和16例慢性肝衰竭患者CD3+淋巴细胞百分率分别为56.15±8.94%、48.85±9.01%和55.86±9.03%,均显著低于正常对照组的66.35±8.93%(P<0.05);慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者CD4+淋巴细胞百分率分别为30.46±7.51%、26.71±7.03%和29.03±7.64%,,均显著低于正常对照组的35.72±7.52%(P<0.05);慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者CD8+淋巴细胞百分率分别为21.93±5.06%、18.71±5.53%和21.15±5.62%,均显著低于正常对照组的24.58±4.92%(P<0.05);慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者CD4+/CD8+比值分别为1.34±0.60、1.35±0.53和1.34±0.58,均低于正常对照组的1.58±0.47(P<0.05)。结论 HBV感染者体内存在T细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱,提示细胞免疫参与了乙型肝炎的发病和疾病进展。     

慢性乙型肝炎外周血细胞毒性T细胞亚群（Tc1／Tc2）失衡的研究

目的研究细胞毒性T细胞亚群(Tc1/Tc2)在慢性乙型肝炎(CHB)和乙型肝炎肝硬化(LC)发病机制中的作用。方法用流式细胞仪测定Tc细胞亚群特异性的细胞表面双标志物Tc1(CD8/CCR5)、Tc2(CD8/CD30)的方法,测检了75例CHB、40例LC患者和20例正常人(NC)外周血Tc1、Tc2水平。结果CHB和LC患者外周血水平Tc1明显高于NC组(P<0.01);LC组Tc2小于CHB和NC组(P<0.05);重型CHB患者Tc1、Tc2均明显低于其它CHB患者(P<0.01);CHB和LC组Tc1/Tc2明显高于NC组(P<0.01)。结论CHB患者Tc细胞亚群(Tc1/Tc2)与正常人存在着差异,Tc细胞亚群失衡可能在CHB、LC患者病情的进展以及预后中起着重要作用。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血调节性T细胞频率及血清IL-1β、IL-6和IL-10水平的变化

目的检测未抗病毒治疗的乙型肝炎肝硬化患者外周血调节性T细胞(Treg细胞)及其亚群频率和血清IL-1β、IL-6、IL-10水平,以探讨乙型肝炎肝硬化患者免疫功能的变化。方法在20例健康对照人群、17例慢性乙型肝炎(CHB)患者和38例乙型肝炎肝硬化(LC)患者,采用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3(+Treg)细胞频率、CD4+CD39+Foxp3(+CD39+Treg)细胞和CD4+CTLA-4+Foxp3(+CTLA-4+Treg)细胞频率;采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和IL-10水平。结果 LC患者Treg细胞频率、CD39+Treg细胞频率、CTLA-4+Treg细胞频率、血清IL-1β、IL-6和IL-10水平均高于正常人(P均<0.01)和CHB患者(P<0.05或P<0.01);失代偿期LC患者Treg细胞频率、CD39+Treg细胞频率、IL-6水平高于代偿期患者(P均<0.01);LC患者Treg细胞频率与CD39+Treg细胞频率(r=0.474,P<0.01)、CTLA-4+Treg细胞频率均呈正相关(r=0.330,P<0.05),Treg细胞频率(r=0.381,P<0.05)、CD39+Treg细胞频率(r=0.333,P<0.05)与TBil呈正相关,Treg细胞频率(r=-0.549,P<0.01)、CD39+Treg细胞频率(r=-0.437,P<0.01)、CTLA-4+Treg细胞频率(r=-0.368,P<0.01)与PTA呈负相关,CD39+Treg细胞频率与AST呈正相关(r=0.406,P<0.05)。结论 Treg细胞及其亚群频率和IL-1β、IL-6、IL-10水平的变化可作为临床初始治疗的乙型肝炎肝硬化患者辅助检查指标之一。     

从Th1/Th2、Treg/Th17之间的平衡研究轻、中度慢性乙型肝炎患者CD4~+T淋巴细胞的免疫失衡状态

目的从Th17及其相关细胞因子与Th1、Th2、Treg的相互关系,探讨轻、中度CHB患者CD4~+T淋巴细胞的整体免疫失衡状态。方法选择轻、中度CHB患者,与健康志愿者进行比较,观察其外周血各免疫细胞(Th17、Th1、Th2、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17)、相关细胞因子(IL-17、IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-4)、主要效应分子(穿孔素、颗粒酶B)和核转录因子(孤独核受体RORγt、Foxp3等)的变化及其相互关系。结果与健康志愿者相比,CHB患者CD8~+T淋巴细胞比例更高,CD4~+/CD8~+比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th1细胞比例更高,Th1/Th2显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th17细胞比例更高,Treg/Th17比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者穿孔素和颗粒酶B的表达更高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者FOXP3、IL17mRNA和RORγt的表达差异无统计学意义(P0.05);与健康志愿者相比,CHB患者TGF-B1、IL-6、IL-17显著增高,差异有统计学意义(P0.01);IFN-γ和IL-4的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论轻、中度CHB患者在免疫细胞及其相关细胞因子、效应分子等各环节,尤其是Treg/Th17比例,均处于严重的免疫失衡状态。     

The Expression of Programmed Death-1 in Circulating CD4+ and CD8+ T Cells during Hepatitis B Virus Infection Progression and Its Correlation with Clinical Baseline Characteristics

Background/Aims

Programmed death-1 (PD-1) expression was investigated in CD4⁺ and CD8⁺ T cells from hepatitis B virus (HBV)-infected patients at the chronic hepatitis B (CHB) infection, liver cirrhosis (LC), and hepatocellular carcinoma (HCC) stages.

Methods

PD-1 expression in circulating CD4⁺ and CD8⁺ T cells was detected by flow cytometry. The correlations between PD-1 expression and HBV viral load, alanine aminotransaminase (ALT) levels and aspartate aminotransferase (AST) levels were analyzed using GraphPad Prism 5.0.

Results

PD-1 expression in CD4⁺ and CD8⁺ T cells was significantly increased in both the CHB group and advanced-stage group (LC plus HCC). In the CHB group, PD-1 expression in both CD4⁺ and CD8⁺ T cells was positively correlated with the HBV viral load, ALT, and AST levels. However, in the LC plus HCC group, significant correlations between PD-1 expression and the clinical parameters were nearly absent.

Conclusions

PD-1 expression in peripheral CD4⁺ and CD8⁺ T cells is dynamic, changes with HBV infection progression, and is related to HBV viral load and liver function, especially in CHB. PD-1 expression could be utilized as a potential clinical indicator to determine the extent of virus replication and liver injury.     

慢性HBV感染患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及其临床意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞与慢性HBV感染后不同临床转归和临床特点的相关性。方法在26例慢性乙型肝炎(CHB)患者、15例无症状HBsAg携带者(ASC)和11例肝炎肝硬化(LC)患者和16例正常对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平。结果CHB组和ASC组的CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分率分别为4.40±2.76%和4.43±2.10%,均高于正常对照组(2.70±0.97%),差异显著(P0.01);CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平与HBVDNA水平无相关性(r=0.018,P0.05);在HBeAg阳性与阴性组患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达也无明显的差异(P0.05)。结论慢性HBV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,可能与HBV感染的慢性化有关。     

慢加急性肝衰竭患者Toll样受体3触发后DC分泌细胞因子的变化

目的探讨慢加急性肝衰竭（ACLF）患者外周血单核细胞衍生的树突状细胞（MoDC）上TLR3触发后细胞因子的分泌情况。方法选择ACLF患者60例,慢性乙型肝炎（CHB）患者40例,20例健康者作对照组（NC组）,取其抗凝全血,通过密度梯度法离心及免疫磁珠阳性选择法分离单核细胞,体外诱导培养为MoDC,经poly（I︰C）刺激后,实时荧光定量PCR检测TLR3及核因子κB和干扰素调节因子3的表达,液相蛋白流式检测促炎性因子IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-1β和TNF-α的分泌水平,均数间两两比较采用t检验。结果 poly（I︰C）刺激后,ACLF组患者NF-κBmRNA显著高于CHB组和NC组（P〈0.01）,而其IRF3mRNA低于CHB和NC组（P〈0.01）。3组研究对象MoDC分泌的IL-6及TNF-α差异有统计学意义（P〈0.005）,其分泌水平为ACLF组〉CHB组〉NC组。分泌的IL-10在ACLF组低于CHB组（P=0.021）,但与NC组差异无统计学意义。IL-12p70的分泌水平在ACLF组显著低于CHB组和NC组（P〈0.001）。IL-8分泌水平为ACLF组     

Pegylated interferon α-2b up-regulates specific CD8+ T cells in patients with chronic hepatitis B

AIM:To investigate the effect of pegylated interferon (IFN) α-2b on specific CD8+ T lymphocytes in patients with chronic hepatitis B (CHB). METHODS:Twenty-one patients with CHB were treated with pegylated IFN α-2b. Periphery blood mononuclear cells were isolated from fresh heparinized blood by Ficoll-Hypaque density gradient centrifugation (density:1.077 g/L,Pharmingen) at weeks 0,4,8,12,and 24,respectively. Frequency of circulating hepatitis B virus (HBV) epitope-specific CD8 T cells was detected by flow cytometry. Cytokines were detected by cytometric bead assay. RESULTS:The frequency of circulating HBV core or env-specific CD8 T cells was higher (P < 0.05),the number of HBV core specific CD8 T cells was greater at week 24 (P < 0.05),the level of Th1-type cytokines [interleukin (IL)-12,tumor necrosis factor-α,and IFN-γ] was higher,while that of Th2-type cytokines (IL-4,IL-6,and IL-10) was lower in responders than in nonresponders (P < 0.05) after pegylated IFN α-2b treatment. The IL-6 level was correlated with HBV DNA (r = 0.597,P = 0.04),while the inducible protein-10 (IP-10) level was correlated with serum alanine aminotransferase (ALT) (r = 0.545,P = 0.005). The IP-10 level at week 8 after pegylated IFN α-2b treatment could predict the normalization of ALT in CHB patients (positive predict value = 56%,negative predict value = 92%). CONCLUSION:Pegylated IFN α-2b can enhance the immune response of CHB patients by increasing the frequency of HBV specific CD8+ T cells and regulating the Th1/Th2 cytokines.     

Compartmentalization and its implication for peripheral immunologically‐competent cells to the liver in patients with HBV‐related acute‐on‐chronic liver failure

Aims: This study attempts to characterize the feature of immunologically competent cells (ICCs) and evaluate its clinical implication in patients with acute‐on‐chronic liver failure (ACLF) in relation to chronic hepatitis B virus (HBV) infection. Methods: Circulating ICCs were examined in ACLF patients (n = 75), as well as in patients with hepatitis B (CHB, n = 31), CHB‐related liver cirrhosis (LC, n = 36), and normal controls (NC, n = 30). Intrahepatic ICCs in some patients were further analyzed via immunohistochemical and flow cytometric assays. Results: Total lymphocytes, CD4⁺ T cells, CD8⁺ T cells, and NK cells in circulation were numerically lower in the ACLF and LC groups compared to the CHB and NC groups. Importantly, the number of these cells was significantly lower in non‐surviving ACLF patients compared with surviving ACLF patients. In comparison to NC, ACLF patients displayed a significantly higher ratio of liver‐infiltrating CD4⁺ T‐cell frequency than its circulating counterpart, suggesting that the possiblility of the ICCs compartmentalization from the peripheral blood into the liver in ACLF. Immunohistochemical analysis showed that intrahepatic CD4⁺ cells, CD8⁺ cells, and CD56⁺ cells were significantly higher in the ACLF group compared with the other three groups, suggesting a stronger cellular immune response‐mediated inflammation in ACLF group than other patient groups. Conclusions: The abnormal prevalence of circulating and intrahepatic ICCs possibly acts as an important factor that may drive the progression of HBV‐related ACLF.     

慢性乙型肝炎急性肝衰竭患者外周血免疫活性细胞特点及其与预后的关系

目的慢性乙型肝炎(乙肝)急性肝衰竭(慢加急性肝衰竭,ACLF)的发病机制尚不清楚,本文主要研究ACLF患者的免疫特点及其与预后的关系。方法选取ACLF患者75例,慢性乙型肝炎(CHB)患者31例,乙型肝炎肝硬化(LC)患者36例,健康志愿者30例,采用流式细胞仪检测外周血CD3 、CD4 、CD8 T细胞、NK细胞、NKT细胞等细胞亚群计数,用SPSS10.0软件对其进行统计学分析。结果ACLF组外周血淋巴细胞总数、CD4 、CD8 T细胞、NKT细胞与健康对照组及慢性乙肝组相比,均具有显著性差异(P<0.001或P<0.01或P<0.05)。ACLF组外周血NK细胞与健康对照组相比,具有显著性差异(P<0.01)。ACLF患者死亡组中淋巴细胞总数、CD4 、CD8 T细胞、NK细胞计数均低于存活组各细胞计数,二者具有显著性差异(P<0.05)。结论ACLF患者外周血免疫活性细胞的减少可能是ACLF病情急剧进展的驱动因素。     

慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定前后T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及白细胞介素-10、干扰素-γ的变化

目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者应用拉米夫定抗病毒治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Treg)及IL-10、IFN-γ水平的变化.方法 选择CHB患者90例,在应用拉米夫定抗病毒治疗前及治疗后52周时,用流式细胞仪检测患者外周血T淋巴细胞亚群;在治疗前及治疗后12、24、36、52周时,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg频率,用双抗体夹心ELISA法检测IL-10、IFN-γ水平.组间及组内总体均数比较采用方差齐性的单因素方差分析或Dunnett's检验,组内治疗前后两时段均数比较采用配对t检验.结果 在90例CHB患者中,完全应答的32例患者的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+较治疗前升高(t=4.055、3.267、2.328,均P＜0.05),外周血CD4+CD25+Treg频率在0、12、24、36、52周时分别为(5.40±0.60)%、(4.99±0.59)%、(4.54±0.72)%、(3.86±0.95)%、(3.44±0.76)%;IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10逐步上升,IL-10水平逐步下降.部分应答的43例患者的CD4+T淋巴细胞及CD4+/CD8+较治疗前升高(t=3.484、2.018,均P＜0.05),CD8+T淋巴细胞较治疗前无明显差异,外周血CD4+CD25+Treg频率在0、12、24、36、52周时分别为(5.65±0.60)%、(5.23±0.63)%、(4.65±0.98)%、(4.42±0.97)%、(4.32±0.82)%,IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10升高,IL-10水平降低.无应答的15例患者的外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+、外周血CD4+CD25+Treg频率及IFN-y水平、IFN-γ/IL-10、IL-10水平较治疗前无明显变化.结论 应用拉米夫定治疗过程中,获得满意应答的CHB患者的外周血CD4+CD25+Treg频率下降,CD4+/CD8+、IFN-γ/IL-10的比例升高.

Abstract：

Objective To explore the correlation between the efficacy of lamivudine (LAM)therapy and changes of T lymphocyte subsets,CD4+ CD25+ regulatory T lymphocytes (Treg),and levels of interleukin-10 (IL-10)and interferon-gamma (IFN-γ)in the peripheral blood of patients with chronic hepatitis B (CHB).Methods Ninety CHB patients were enrolled in this study.T lymphocyte subsets in the peripheral blood were detected by flow cytometry at baseline and week 52 of LAM therapy.The frequencies of CD4+ CD25+ Treg in the peripheral blood were detected by flow cytometry and levels of IL-10 and IFN-γ were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)at baseline,week 12,24,36 and 52.The comparisons of overall means between groups and within groups were done by analysis of variance or Dunnett's test.The comparison of means before and after LAM therapy was done by paired t test.Results In 32 complete-responders of 90 CHB patients,the proportions of CD4+ T lymphocytes,CD8+ T lymphocytes and CD4+/CD8+ ratio were increased significantly after LAM therapy (t=4.055、3.267、2.328,all P＜0.05); the frequencies of CD4+CD25+ Treg at baseline,week 12,24,36 and 52 were (5.40±0.60)%,(4.99±0.59)%,(4.54± 0.72)%,(3.86±0.95)% and (3.44±0.76)%,respectively; the levels of IFN-γ,IFN-γ/IL-10 ratio were increased,while the IL-10 level was decreased after LAM therapy.In 43 partial-responders,the proportion of CD4+T lymphocytes and ratio of CD4+/CD8+ were increased after LAM therapy (t= 3.484,2.018,both P＜0.05); the proportion of CD8+ T lymphocytes was not changed significantly after therapy; the frequencies of CD4+ CD25+ Treg at baseline,week 12,24,36 and 52 were (5.65±0.60)%,(5.23±0.63)%,(4.65±0.98)%,(4.42±0.97)% and (4.32±0.82)%,respectively;IFN-γ level,IFN-γ/IL-10 ratio were increased,while IL-10 level was decreased.In 15 non-responders,the proportion of T lymphocyte subsets,the frequency of CD4+ CD25+ Treg,the levels of IFN-γ and IL-10 were not changed significantly after LAM treatment.Conclusions In CHB patients who have achieved response after LAM therapy,the frequency of CD4+ CD25+ Treg in the peripheral blood is decreased,while ratios of CD4+/CD8+ and IFN-γ/IL-10 in the peripheral blood are increased.