多囊卵巢综合征患者脂肪组织中TNFR2mRNA的表达及临床意义

目的从分子水平探讨PCOS患者发生胰岛素抵抗(IR)的分子生物学机制,研究多囊卵巢综合征PCOS脂肪组织肿瘤坏死因子受体II(TNFR2)mRNA的表达。方法采用RT-PCR技术结合内对(TNFR2)mRNA照,半定量检测PCOS及其对照组脂肪组织TNFR2mRNA的表达。结果TNFR2mRNA的表达在PCOS肥胖组(0.83±0.13,P<0.001〉)和PCOS非肥胖组(0.63±0.14,P<0.05)均显著大于非肥胖对照组(0.50±0.15),且以P-COS肥胖组升高更为明显(P<0.001),PCOS肥胖组与肥胖对照组(0.87±0.11)相比则无显著性(P>0.05)。结论高水平的肿瘤坏死因子a(TNFa)可通过上调TNFR2促进PCOS者TNFa系统活性增强。PCOS两组肥胖组织TNFR2mRNA的表达均较非肥胖对照组增强,且PCOS肥胖组升高更为显著。     

针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物和葡萄糖转运蛋白4的影响

【目的】观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的影响。【方法】将32只SD大鼠随机分成正常组、正常针刺组、模型组和模型针刺组,采用葡萄糖氧化酶法、酶联免疫吸附法（ELISA）、实时荧光定量PCR等方法,检测并比较各组大鼠空腹血糖(FPG),血浆胰岛素(FINS),胰岛素敏感性指数(ISI),血清C-肽(C-P),骨骼肌IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达。【结果】模型组大鼠的FPG、 FINS、C-P水平较正常组显著升高（P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较正常组显著降低(P＜0.01);模型针刺组的FPG、 FINS、 C-P水平较模型组显著降低（P＜0.05或P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较模型组显著升高(P＜0.01)。【结论】针刺可能在基因转录水平对IRS-1、 IRS-2、 GLUT4产生影响,从而改善PI3K通路的信号转导。     

IRS-1 IRS-2蛋白质在PCOS患者脂肪组织中的表达

目的研究多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物-1(Insulin receptor substeate-1,IRS-1)及胰岛素受体底物-2(Insulin receptor substeate-2,IRS-2)蛋白的表达,探讨PCOS产生胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的分子机制。方法采用放射免疫法检测PCOSIR组(20例)、PCOS非IR组(15例)及对照组(20例)血清空腹胰岛素(Fasting insulin,FIN)的浓度;采用葡萄糖氧化酶法测定血浆空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG);采用HOMA(Homeostasis model assessment,HOMA)模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用Western blot方法检测IRS-1及IRS-2蛋白的表达。结果(1)PCOS IR组患者血清FIN及HOMA-IR均显著高于PCOS非IR组与对照组(均P<0.05);PCOS非IR组患者血清FIN及HOMA-IR亦显著高于对照组(均P<05);(2)PCOSIR组与PCOS非IR组及对照组相比,IRS-1蛋白表达量明显下降(P<0.05),而IRS-2蛋白表达无显著性差别。结论PCOS患者脂肪组织IRS-1蛋白表达的下降所导致的受体后信号转导障碍可能是其产生胰岛素抵抗的机制之一。     

TNF琢对体外培养的人脂肪细胞葡萄糖摄取和IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

【目的】探讨肿瘤坏死因子琢(TNF琢)对体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取和胰岛素受体底物1(IRS-1)酪氨酸磷酸化的影响,为多囊卵巢综合征(PCOS)的胰岛素抵抗(IR)病因学研究提供新的实验依据。【方法】脂肪细胞葡萄糖摄取的测定采用3H标脱氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸收法,IRS-1酪氨酸磷酸化的检测采用免疫沉淀、Western印迹和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析。【结果】①胰岛素(100nmol/L)作用下,TNF琢刺激浓度分别为0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL时,脂肪细胞2-[3H]DG的摄取分别为(652±203)U,(609±172)U,(511±135)U和(404±168)U,当TNF琢刺激浓度达20ng/mL时,脂肪细胞对葡萄糖摄取的降低有显著性差异(P<0.05)。②胰岛素(100nmol/L)刺激下IRS-1的酪氨酸磷酸化在TNF琢(5ng/mL)作用时(74.50%±16.86%)较无TNF琢作用(94.00%±14.70%)有所降低,但无显著性差异;当TNF琢刺激浓度分别为10ng/mL(31.16%±10.44%)和20ng/mL(27.33%±9.63%)时,胰岛素(100nmol/L)刺激后IRS-1的酪氨酸磷酸化明显降低(P<0.001)。【结论】①TNF琢刺激浓度的升高可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取。②TNF琢可抑制体外培养的人脂肪细胞胰岛素刺激的IRS-1的酪氨酸磷酸化,并存在一定的量效关系,可能阻碍了胰     

不对称性多囊卵巢的初步研究

【目的】探讨不对称性多囊卵巢(PCO)的临床特点及雄激素受体(AR)和胰岛素受体(IR)在其发病机制中的作用。【方法】分析了38例不对称性PCO的症状、体征、生化参数及影像学特点,并应用免疫组化法检测该类型疾病双侧卵巢间质细胞上AR和β-IR的表达。【结果】在不对称性PCO中,多囊卵巢综合征(PCOS)组患者的月经异常、肥胖和LH/FSH升高者分别为92％、62％和77％,显著高于非PCOS组的28%(P<0.01)、20％(P<0.05)和12%(P<0.01)。在不对称性PCO卵巢间质细胞上,PCO组AR和β-IR的表达为(64±12)PU和(115±35)PU,明显低于非PC0组AR的表达(161±3)PU(P<0.01),明显高于非PC0组β-IR的表达(7±5)PU(P<0.01)。【结论】不对称性PCO的临床特点具有多样性,当其出现月经异常、肥胖或LH/FSH升高时,提示可能已发展至PCOS;卵巢局部间质细胞AR负反馈调节机制障碍和IR降调节机制失常可能与PCO的发生有关。     

Visfatin对SW872脂肪细胞胰岛素信号分子蛋白表达的影响

目的:观察visfatin对胰岛素抵抗状态下的SW872成熟脂肪细胞胰岛素信号分子胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响。方法:体外培养SW872前脂肪细胞,诱导细胞分化成熟,建立胰岛素抵抗模型,用含有100nmol/L visfatin的无血清培养液孵育1h后收获细胞,采用Western印迹法检测visfatin刺激前后信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平。结果:在正常状态下(正常组内比较),visfatin促进脂肪细胞IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达,分别增加了51.65%(P<0.01)、44.74%(P<0.01)和61.38%(P<0.01)。在胰岛素抵抗状态下,visfatin刺激组的IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平,分别比基础状态组增加了26.98%(P<0.05)、35.59%(P<0.05)、27.61%(P<0.01)。结论:在胰岛素抵抗状态下,visfatin通过调节脂肪细胞胰岛素信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K蛋白表达而发挥促进葡萄糖转运、改善胰岛素抵抗的生物学作用。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制

目的 研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物1(IRS-1)、底物2(IRS-2)蛋白表达及酪氨酸磷酸化的程度,探讨PCOS患者子宫内膜胰岛素抵抗(IR)的分子机制.方法 采用放射免疫法检测PCOS合并IR患者15例(PCOS IR组)、PCOS非IR患者15例(PCOS非IR组)和正常妇女10例(对照组)的血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮及空腹血清胰岛素(FIN)水平;利用稳态模型(HOMA)计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用蛋白印迹法(Western blot)检测子宫内膜IRS-1和IRS-2的蛋白表达;采用免疫沉淀法检测IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化程度,并进行分析比较.结果 ①PCOS合并IR组患者血清LH[(15.2±2.6)U/L]、LH/FSH[(2.4±0.4)]及睾酮[(2.6±0.3)nmol/L]均明显高于对照组[分别为(5.8±2.5)U/L,(0.8±0.3),(1.0± 0.2)nmol/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05);PCOS合并IR组FIN[(13.8±3.1)μU/mL]、HOMA-IR(3.2±1.4)均明显高于PCOS非IR组[(6.4±3.8)μU/mL,(1.7± 0.8)]及对照组[(6.5±1.9)μU/mL,(1.6± 0.8)],差异均有统计学意义(均P＜0.05);②PCOS合并IR组IRS-1和IRS-2蛋白表达均明显低于PCOS非IR组和对照组(均P＜0.01);PCOS非IR组与对照组比较差异无统计学意义(均P＞0.05);③PCOS合并IR组IRS-1和IRS-2蛋白酪氨酸磷酸化程度均明显低于PCOS非IR组和对照组(均P＜0.01);PCOS非IR组与对照组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 PCOS合并IR患者子宫内膜组织的IRS-1和IRS-2蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度降低导致受体后信号转导障碍,可能参与了PCOS子宫内膜IR的发生.     

免疫抑制剂姜黄素逆转胰岛素抵抗的研究

 【目的】为探讨姜黄素（curcumin）对胰岛素抵抗的治疗作用及其机制。【方法】利用胰岛素抵抗的小鼠模型,观察姜黄素对小鼠胰岛素抵抗的水平、转录因子I-κBα、循环细胞因子的变化。【结果】①姜黄素能抑制TNFα刺激Fao细胞NF-κB激活;②姜黄素治疗后小鼠的空腹血糖水平没有明显下降,但空腹胰岛素的水平下降约30%,葡萄糖耐量曲线的水平也明显下降;③循环中TNFα[（34.5±3.4）pg/mL vs（31.3±1.1）pg/mL]水平没有明显改变,而IL-1β[（33.9±3.2）pg/mL vs（15.6±1.1）pg/mL]和IL-6[（72.1±9.8）pg/mL vs（47.2±5.3）pg/mL]水平明显被抑制;④胰岛素刺激的IRS-1酪氨酸的磷酸化水平明显升高,而胰岛素受体的磷酸化水平没有明显改变。与IRS-1酪氨酸的磷酸化水平平行,P85的磷酸化水平也明显升高,AKT的磷酸化的水平也明显升高。【结论】姜黄素能提高小鼠胰岛素敏感性,有治疗改善肥胖诱导的胰岛素抵抗的作用。     

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏IRS-2/PI3K通路的影响

目的 研究辛开苦降方对KKay 2型糖尿病（T2DM）小鼠肝脏胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路（IRS-2/PI3K）的影响.方法 将小鼠随机分为辛开组、苦降组、辛开苦降组、罗格列酮组、模型组.对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只.对照组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC）.灌胃给药四周后测血浆葡萄糖（FBG）,及胰岛素浓度（FINS）,免疫蛋白质印迹法（Western blotting）测定肝组织IRS-2、P-IRS-2（磷酸化胰岛素受体底物-2）、PI3K、P-PI3K（磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶）、IRS-3、IRS-4蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝组织PI3K 、IRS-2、IRS-3、InsR（胰岛素受体）的mRNA表达水平.结果 与模型组比较,苦降组、马来酸罗格列酮组血糖明显降低（P＜0.05）.与模型组比较,各给药组小鼠胰岛素浓度均降低,IAI均升高（P＜0.05）.辛开苦降组、辛开组、苦降组可增强T2DM KKay小鼠IRS-2及其磷酸化形式的蛋白表达（P＜0.05）,抑制负性调节因子IRS-3、4蛋白表达（P＜0.05）.辛开苦降组可以增强PI3K、P-PI3K蛋白表达量及PI3-K mRNA表达（P＜0.05）.各给药组间相比,各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 辛开苦降方及其拆方可改善胰岛素抵抗,可能是通过恢复肝脏细胞内正调控和负调控IRS蛋白的平衡实现的.     

男性肥胖患者胰岛素受体的改变及意义

目的:研究男性肥胖患者胰岛素受体及胰岛素和血糖的改变及意义。方法:选取肥胖患者128例,根据体质量指数(BMI)分为轻、中、重3组,其中轻度肥胖组52例,年龄(41±5)岁,BMI 25-27 kg/m2;中度肥胖组42例,年龄(43±6)岁,BMI 27-29kg/m2;重度肥胖组34例,年龄(45±4)岁,BMI>29 kg/m2;而对照组24例,年龄(42±6)岁,BMI<25 kg/m2。采用131I标记胰岛素的放射配体结合法检测腹部脂肪组织中胰岛素受体的结合容量(位点/细胞),同时检测空腹血糖和血清中胰岛素的水     

3T3-L1脂肪细胞中高糖诱导胰岛素抵抗的分子机制

观察 3T3-L1脂肪细胞长期暴露到高浓度葡萄糖对糖的转运活动和胰岛素信号蛋白的表达及磷酸化的影响。结果表明 ,在 3T3 -L1脂肪细胞中高浓度葡萄糖 (10 ,15和 2 5mmol·L-1)培养 2 4h ,以一种剂量依赖的方式诱导基础的和胰岛素刺激的糖转运活动的减少。高糖降低了细胞内胰岛素受体底物 1(IRS1)的蛋白表达和它的酪氨酸磷酸化 ,而胰岛素受体底物 2 (IRS2 )蛋白表达呈明显的上调 ;对p85和PKB量无影响。 3T3 -L1脂肪细胞长期暴露到高浓度葡萄糖可以抑制糖的转运活动 ,诱导胰岛素抵抗。其作用机制与影响胰岛素信号肽的表达和酪氨酸磷酸化有关。     

3T3-L1脂肪细胞诱导分化与肿瘤抑制因子PTEN的表达研究

目的 优化3T3-L1脂肪细胞分化条件,研究信号因子PTEN在分化过程中的表达,以了解PTEN是否通过表达量来调节正常脂肪细胞形成,为探索PTEN的药物靶标作用奠定基础.方法 DMEM高糖培养基培养3T3-L1脂肪前体细胞,地塞米松、3-异丁基1-甲基黄磦呤(IBMX)和胰岛素按2种组合方案分别诱导3T3-L1细胞分化,油红O染色鉴定脂肪细胞,蛋白裂解液提取细胞总蛋白,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分化过程中PTEN的表达量,用生物信息学进行小鼠和人类PTEN的同源性分析.结果 1 μmol/L地塞米松、0.5 μmol/L mMX和5 μg/ml胰岛素诱导48 h后,再用含5 μg/ml胰岛素的DMEM高糖营养液培养48 h的方案对3T3-L1细胞诱导分化效果较好,脂肪细胞分化率高且均一,在分化第10天可见90%以上细胞分化为脂肪细胞.PTEN在脂肪细胞分化过程中表达量在第0、4 th、6 th、9 th和第12天时不一致,在12天时明显下降,显著低于诱导前.同源性比对分析表明,小鼠和人类的PTENmRNA编码序列匹配率为96%,而氨基酸序列匹配率为100%.结论 内源性PTEN在小鼠3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化为脂肪细胞的时相过程中表达量有所变化,提示PTEN可能在生理条件下即可发挥提高胰岛素敏感性和促进脂肪细胞形成的作用.     

地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的 应用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨建立方便可靠的胰岛素抵抗(IR)细胞模型的方法. 方法 3T3-L1前脂肪细胞经1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,将其与10 nmol/L和100 nmol/L、1 μmol/L地塞米松共孵育,100 nmol/L胰岛素作用30 min刺激脂肪细胞糖转运.以葡萄糖氧化酶法测定培养液中残余的葡萄糖含量,观察地塞米松对脂肪细胞糖摄取的影响,鉴定IR模型. 结果 地塞米松抑制胰岛素诱导前后的脂肪细胞糖转运,抑制作用呈剂量依赖性,其中1 μmol/L地塞米松的抑制率分别为80%及75%(P＜0.05). 结论 地塞米松可诱导3T3-L1脂肪细胞产生IR,这种细胞模型简便、可靠.     

IR-3T3-L1脂肪胰岛素抵抗细胞的建立

目的探讨3T3-L1脂肪胰岛素抵抗细胞（insulin resistant 3T3-L1 adipocytes cell, IR-3T3-L1）最佳的建立条件。方法采用
地塞米松（Dexamethason,DEX）、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（3-isobutyl-methylxanthine, IBMX）和不同浓度的胰岛素（10-8、10-7、
10-6 mol·L-1）诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,Oil red O染色确定最佳胰岛素诱导浓度,继而用1 μmol·L-1 DEX
诱导建立IR-3T3-L1 脂肪胰岛素抵抗细胞。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（Glucose oxidase-peroxidase, GOD-POD）法对
IR-3T3-L1细胞的最佳诱导时间（24~120 h）及其稳定时间（24~48 h）进行了考察。结果Oil red O染色发现3T3-L1前脂肪细胞
用DEX、IBMX和10-6 mol·L-1胰岛素诱导9 d,>90% 的前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞;用1 μmol·L-1 DEX培养96 h后,脂肪
细胞葡萄糖消耗率达到最大（P=0.0003）;稳定时间考察发现,在36 h内葡萄糖消耗与对照组比较有统计学意义（P<0.001）。结
论3T3-L1前脂肪细胞在1 μmol·L-1 DEX、0.5 mmol·L-1 IBMX 和10-6 mol·L-1最佳胰岛素浓度作用下诱导分化为成熟的脂肪细
胞后,用1 μmol·L-1 DEX培养96 h即可成功诱导成IR-3T3-L1-IR脂肪胰岛素抵抗细胞,且在36 h内稳定。
     

氯沙坦改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的探讨氯沙坦改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的主要作用机制。方法以地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞,建立胰岛素抵抗细胞模型,根据细胞模型添加干预药物的不同分为模型对照组（不添加任何药物）、氯沙坦组（分别给予1、10、100μmol/L氯沙坦干预48 h）和wortmannin＋氯沙坦组,wortmannin＋氯沙坦组以100 nmol/L的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂wortmannin预处理20 min后再加入100μmol/L氯沙坦干预48 h。观察脂肪细胞体积的变化,采用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养上清液中葡萄糖的浓度,采用Western blotting分析脂肪细胞中PI3K和胰岛素受体底物1（IRS-1）的表达以及IRS-1丝氨酸磷酸化水平。结果与模型对照组比较,氯沙坦组脂肪细胞体积明显缩小（P〈0.01）,细胞培养上清液中葡萄糖的浓度显著降低（P〈0.01）,PI3K和IRS-1表达明显上升（P〈0.01）,IRS-1丝氨酸磷酸化水平显著下降（P〈0.01）但可被wortmannin阻断。结论氯沙坦可使3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的细胞体积缩小,并增加细胞对葡萄糖的利用,其机制可能与PI3K信号通路有关。     

6,6-D2葡萄糖和3-3H标记葡萄糖作为示踪剂应用于葡萄糖钳夹术的比较

目的比较扩展高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术中两种示踪剂6,6-D2葡萄糖和3-3H标记葡萄糖在评估糖代谢方面是否存在差异.方法将20只正常大鼠随机分为两组,分别运用6,6-D2葡萄糖和3-3H标记葡萄糖作为示踪剂进行扩展高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术研究,观测胰岛素介导的外源性葡萄糖输注率(GIR)、葡萄糖利用率(GRd)及肝糖输出率(HGP)是否存在差异.结果扩展高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验中,两组大鼠的血糖、血浆胰岛素及游离脂肪酸(FFA)水平无明显差异,糖代谢指标GIR GRd,HGP亦无明显差异.结论葡萄糖钳夹技术中两种示踪剂在评估糖代谢方面效果一致,但6,6-D2葡萄糖具有无放射性污染的优点.     

胰岛素对NIH3T3细胞生长和Ras-MAPK信号途径的影响

目的 探讨胰岛素激活的Ras-MAPK信号途径对鼠成纤维细胞（NIH3T3细胞）生长的影响。方法 藉四唑蓝比色法（MTT法）和蛋白免疫印迹试验分别观察胰岛素对NIH3T3细胞生长和胞内丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）活性的影响。结果 胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用呈时间和浓度依赖性，10mU/ml胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用效果最佳，对NIH3T3细胞作用的EC50是0.2mU/ml(48h);0.14mU/ml(72h)。MAPK在10mU/ml胰岛素刺激1min后即出现酪氨酸磷酸化，10min达到高峰。胰岛素作用10min，MAPK酪氨酸磷酸化程度随浓度增高（0.1,1.0,10mU/ml)而递增。结论 胰岛素对NIH3T3细胞促增殖作用与激活Ras-MAPK信号途径相关。     

吡格列酮对3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的研究噻唑烷二酮类药物吡格列酮对3T3-L1细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将3T3-L1细胞随机分为3组对照组3T3-L1细胞进行正常的诱导分化,实验1组在3T3-L1细胞诱导时加入吡格列酮(0.1mmol/L),实验2组在诱导分化后成熟的3T3-L1脂肪细胞中加入吡格列酮(0.1mmol/L)。提取细胞总RNA和总蛋白做RT-PCR和Western-blot测定GLUT4mRNA和蛋白的表达情况。结果与对照组比较实验组GLUT4mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论吡格列酮促进3T3-L1脂肪细胞GLUT4mRNA和蛋白表达。     

visfatin对体外脂肪细胞胰岛素受体底物和PI3K表达的影响

目的：从胰岛素经典信号传导通路磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）角度探讨内脏脂肪素（visfatin）与2型糖尿病（T2DM）胰岛素抵抗（IR）的关系。方法：复苏、传代和诱导分化人源T2DM前脂肪细胞,构建 visfatin过表达载体,进行载体转化、培养和提取;以4个不同表达梯度（0.0、1.0、2.5和5.0 μg）转染传代脂肪细胞,以0.0 μg组为对照组,其余3组为观察组;Q-PCR法检测visfatin 、胰岛素受体底物1（IRS-1）、胰岛素受体底物2（IRS-2）和 PI3K（P85α） mRNA表达水平,Western blotting法检测visfatin、IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α） 蛋白表达水平及IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化水平,[³H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法测定细胞葡萄糖摄取率的变化。结果：各组 visfatin mRNA及蛋白表达水平随转染浓度梯度升高而升高（P<0.01）,所构建visfatin过表达载体有效。随visfatin表达增加,各组IRS-1和PI3K（P85α） mRNA和蛋白表达水平以及IRS-1磷酸化程度均明显升高（P< 0.01）,但IRS-2 mRNA和蛋白表达水平未出现明显变化（P>0.05）。脂肪细胞的葡萄糖摄取率随visfatin表达增加而升高（P<0.05）。结论：体外脂肪细胞visfatin过表达可增加IRS-1和PI3K的表达水平。     

LMP2基因多态性与胰岛素依赖型糖尿病及DR3基因的关系

目的 探讨大多功能蛋白酶（ＬＭＰ２）基因多态性与胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）及ＤＲ３基因的关系。方法 以６８例ＩＤＤＭ患者及７１例正常人（对照组）为研究对象,采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析技术进行ＬＭＰ２基因分型。根据ＤＲ３基因分型将ＩＤＤＭ患者及对照组分为ＤＲ３阳性组与ＤＲ３阴性组,并分别比较ＬＭＰ２基因频率在ＩＤＤＭ虱与对照组之间的差异。结果 ＤＲ３阳性组,ＬＭＰ２－Ｒ／Ｈ、ＬＭ