铁蛋白笼形纳米颗粒应用于HIV-1P24抗原高灵敏检测的研究

目的构建以铁蛋白笼形纳米颗粒为基础的分子展示平台,并应用于HIV-1P24抗原检测,实现低丰度、高灵敏检测。方法采用分子生物学手段,构建生物素耦联的铁蛋白笼形纳米颗粒,基于链霉亲和素与生物素特异性结合,将其应用于HIV-1P24抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测中,并测试其检测灵敏度。结果构建出具有链霉亲和素特异性结合能力的生物素化铁蛋白笼形纳米颗粒,应用到HIV-1的P24抗原ELISA检测中,实现0.1ng/mL的检测下限,显著提高检测灵敏度。结论成功建立基于铁蛋白笼形纳米结构的分子展示平台,以HIV-1P24抗原ELISA检测为例,该平台能够应用于低丰度、高灵敏检测。     

生物条形码检测技术与超微量病毒抗原蛋白检测

基于纳米材料的生物条形码检测技术,以其超灵敏度检测特性大大推动了超微量蛋白免疫学检测技术的发展,并在痕量病毒抗原蛋白超灵敏检测研究中得到较好的应用.本文主要介绍传统生物条形码检测技术和新型生物条形码检测技术,并阐述该技术在人免疫缺陷病毒(HIV)、蓝舌病病毒(BTV)和其他病原标志蛋白中的应用情况.     

应用BED-CEIA方法估算陕西省2011年三类高危人群HIV-1新发感染率

目的 估计陕西省2011年男男性行为者、吸毒者和性病门诊男性就诊者三类高危人群的艾滋病病毒(HIV)新发感染情况.方法 使用酶联免疫试验(ELISA)和蛋白免疫印迹试验(WB)对陕西省2011年4～7月内15个哨点所监测到的800例男男性行为者、2 400例吸毒者和2 800例性病门诊男性就诊者进行HIV-1抗体筛查和确证,再应用BED HIV-1捕获酶联免疫测定法(BED HIV-1 capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)检测出其中的新发感染样品,从而估算其HIV-1新发感染率.结果 陕西省2011年男男性行为者、吸毒者和性病门诊男性就诊者的HIV-1新发感染率分别为4.42％(2.19％～6.66％),0和0.39％(0.05％～0.73％).结论 陕西省男男性行为者HIV-1新发感染率较高,吸毒者和性病门诊男性就诊者的HIV-1新发感染率相对比较低.     

HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定

目的　探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法　分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果　P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论　HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 ,可用于HIV基础研究和临床检验     

磁酶免方法检测甲状腺激素及临床应用

1磁酶免方法简介 该方法是磁性微珠(红细胞直径大小)分离技术和酶联免疫技术综合而成的定量测定系统.磁性微珠连接的单克隆抗体(免疫磁珠)与相应的标本抗原结合后,在磁铁磁力的作用下,特异性结合的抗原与其它物质分离,再通过酶联免疫显色反应测定抗原含量,从而克服了放免和普通96孔酶联免疫测定方法的缺点,该方法具有以下优点:     

乙型肝炎病毒PreS1抗原检测的临床应用

PreS1抗原位于乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）组成成分之一大分子蛋白的N末端,只存在于具有传染性的完整的HBV颗粒上,它与乙型肝炎病毒S抗原、前S2共同构成HBV的衣壳蛋白。PreS1含有肝细胞膜受体,可直接与肝细胞膜结合,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答中起重要作用。近年来,PreS1作为一种新的HBV标志物已广泛应用于临床。     

快速检测、抗原-抗体联合酶联检测和集合核酸检测在MSM人群HIV-1检测中的应用研究

目的比较快速检测(胶体硒)和抗原-抗体联合酶联检测(4代酶联检测)以及集合核酸检测对男男同性恋人群(MSM)HIV急性感染的检验效能。方法结合该市2008年男男同性恋人群HIV感染专项调查工作,应用快速检测、4代酶联检测对接受调查的2 165例MSM进行HIV抗体初筛,对结果阴性者进行集合核酸检测,直至找到急性期感染者;对不同方法的检测成本进行估算,比较发现1例感染者的性价比。结果快速检测和4代酶联检测应用于MSM人群HIV筛查时,分别存在7.6%和2.9%的漏检率。本次调查使用集合核酸检测共发现10例急性期感染者。使用快速检测、4代酶联检测发现1例感染者的成本分别为48.8、50.5元,使用集合核酸检测发现1例急性期感染者的成本为7 380.2元。结论 4代酶联检测与快速检测成本接近,但前者功效更高,应该成为目前针对MSM人群HIV检测策略的组成部分,集合核酸检测应成为必要的补充,在该市MSM人群中使用上述方法的成本低于国外同类报道。     

化学发光免疫分析法快速检测血清登革热病毒NS1 抗原方法的建立及初步应用评价

目的 建立一种化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay,CLIA) 用于血清中登革热病毒（denguevirus,DENV）NS1 抗原的定量检测。方法 先制备NS1 单抗与吖啶酯发光剂的偶联物,同时活化磁珠并标记抗NS1的配对单抗,基于双抗体夹心检测方法的技术原理构建定量检测血清中NS1 抗原浓度的化学发光检测方法。通过对其灵敏度、特异度和参考区间等试验评估其检测性能。取85 例临床确诊的登革热阳性血清样本和20 份健康志愿者阴性血清样本,采用美国Cortez 公司的登革热NS1 快速检测试剂盒和该方法进行临床样本验证。结果 该方法对血清中NS1抗原的检测灵敏度为1.12ng/ml,线性范围在0.1 ～ 1 000ng/ml;与血清中常见干扰物质的交叉反应率均低于2%,检测特异度较好;参考区间的cut off 值为3.66ng/ml;对临床样本的检测准确度较高,与Cortez 公司NS1 检测试剂盒比较无显著性差异（χ2 检验P=1.000,一致性检验,Kappa=0.876）。结论 建立了一种可定量检测血清中登革热病毒NS1抗原的CLIA 法,该方法具有高灵敏度、高准确度、操作简单和方便快捷等优点,有望为登革热临床样品的早期准确筛查提供一种新的选择。     

一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质表达及鉴定方法的临床应用

目的 表达并鉴定一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质,探讨其在化学发光检测系统中的临床应用.方法 利用Primer 5.0软件设计引物,扩增谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的部分蛋白质编码区(CDS)并克隆至pFastBac1载体中,经测序验证后在SF9细胞中表达.采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴...     

M2抗体重组人源靶抗原二联体在原发性胆汁性肝硬化患者中的检测及应用

目的 利用重组抗原BCOADA-E2和PDC-E2的二联体（BP），检测PBC患者血清中的M2抗体并探讨其临床意义。方法 经Ni—NTA亲和柱纯化重组表达的BP融合蛋白，分别建立免疫印迹法（IBT）和酶链免疫吸附（ELISA）法检测60份PBC患者血清，以60份其他肝病患者、60份自身免疫病患者、80例正常人血清为对照组。结果 经常规试剂盒检测为M2（＋）的60份患者血清，利用重组抗原检测阳性53例，阴性7例，阳性率为88．3％；经常规试剂盒检测为M2（-）的60份自身免疫病患者血清、60份其他肝病患者和80例正常人血清，利用重组抗原检测为M2（-）。结论 利用重组抗原BP检测M2抗体敏感性较高。对临床辅助诊断PBC提供一定的手段。     

等位基因特异性PCR检测CYP3A5和MDR-1基因多态性方法的建立及临床应用

目的用等位基因特异性PCR(ARMS-PCR)检测细胞色素P450酶CYP3A5(A6986G)和多药耐药基因MDR-1(C3435T)基因多态性,探讨其与肾移植受者他克莫司(Tac)血药浓度和剂量比的相关性。方法根据CYP3A5(A6986G)和MDR-1(C3435T)基因多态性位点分别设计ARMS-PCR引物,分析72例肾移植受者外周血基因组DNA中该2个基因位点的多态性,同时以DNA测序法为金标准进行验证。化学发光微粒子免疫分析法测定肾移植受者血Tac浓度,并比较术后1个月时不同基因型受者之间血Tac浓度、Tac剂量/Tac用量的差异。结果建立的ARMS-PCR法与DNA测序法检测符合率为100%。72例肾移植受者中,CYP3A5*1/*1、*1/*3和*3/*3基因型的发生频率分别为18.1%、31.9%和50.0%,MDR-1 C/C、C/T和T/T基因型的发生频率分别为27.8%、58.3%和13.9%。此外,不同CYP3A5基因型肾移植受者的血Tac浓度(P=0.014)和Tac浓度/Tac用量(P=0.019)均存在明显差异,进一步两两比较发现,CYP3A5*3/*3基因型受者血Tac浓度/Tac用量明显高于*1/*1和*1/*3基因型(P均0.05)。结论成功建立检测CYP3A5和MDR-1基因多态性的ARMS-PCR法,肾移植受者CYP3A5*3基因多态性与Tac的药代动力学明显相关。     

P16INK4A、L1壳蛋白联合检测在宫颈鳞状上皮内病变中的应用研究进展

宫颈癌是严重危害妇女健康的疾病,是世界范围内导致女性癌症患者死亡的第4位因素[1]。宫颈癌前病变发展成宫颈癌的主要原因是持续感染人类乳头状瘤病毒(HPV)。然而,并非所有的HPV感染必然导致宫颈病变甚至发展成宫颈癌。大部分宫颈HPV持续感染8~10个月能自行消退[2]。随着分子生物学的发展,目前大量学者[3-4]研究的热点是就生物标志物在宫颈鳞状上皮内病变筛查程序中的应用价值。与