RNA干扰表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默现象,是研究基因功能的重要工具。表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌中过度表达,且EGFR信号通路的启动后可促进细胞增殖、转移、血管生成及阻断细胞凋亡,因此被作为开发肿瘤治疗方法的新靶点。现将对RNA干扰表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌中的治疗作用予以综述。     

靶向血管内皮生长因子受体3基因的小干扰RNA表达载体构建及其生物学效应

目的构建靶向血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体（psiRNA-VEGFR-3）,并观察其抑制人结肠癌细胞株LoVo细胞中VEGFR-3基因表达的效果及生物学效应。方法设计并合成1对VEGFR-3编码基因的反向重复序列,定向克隆至载体pSUPER,构建siRNA真核表达载体,利用脂质体2000将构建的psiRNA-VEGFR-3载体转入LoVo细胞中,应用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGFR-3mRNA表达水平的变化,四甲基偶氮唑蓝法观察细胞生长变化、凋亡率及细胞周期的变化。结果成功构建针对VEGFR-3基因的siRNA表达载体。psiRNA-VEGFR-3可显著抑制LoVo细胞中VEGFR-3基因的表达（P〈0．01）;转染psiRNA-VEGFR-3后能够诱导LoVo细胞发生明显凋亡。结论psiRNA-VEGFR-3载体能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应,通过下调VEGFR-3基因表达可以抑制细胞增殖,诱导LoVo细胞发生明显凋亡。     

SiRNA-EGFR 对人乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的影响

目的 探讨SiRNA-EGFR对人乳腺癌细胞乳腺癌表皮生长因子受体表达的影响.方法 应用RT-PCR测定RNA干扰人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30后Hyase基因的mRNA的表达变化.结果 SiRNA-EGFR作用于表达不同水平透明质酸酶的人乳腺癌细胞铢MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR.75.30和ZR-75后能明显抑制其乳腺癌表皮生长因子受体的mRNA表达水平(P＜0.05).结论 iRNA-EGFR作用于人乳腺癌细胞后能特异性抑制EGFR的mRNA的表达水平.     

表皮生长因子受体反义RNA表达对乳腺癌细胞恶性表型的抑制作用

表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白［１］。为了直接观察ＥＧＦＲ过表达在人类肿瘤中的作用，我们应用反义核酸技术，针对ＥＧＦＲ５′１３５０ｂｐ片段构建了反义ＲＮＡ表达质粒ｐＬＸＳＮＡＥ５′，将其导入人乳腺癌细胞ＭＤＡＭＢ...     

表皮生长因子受体在前列腺良,恶性组织中的表达及其意义

应用免疫组织化学（ＳＰ）方法研究了１４例正常前列腺、５６例前列腺增生和３３例前列腺癌组织中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的表达。结果显示，ＥＧＦＲ分布于上皮细胞；前列腺癌和增生组织中ＥＧＦＲ阳性率分别为９３．９％和８７．５％，均明显高于正常前列腺５７．１％；ＥＧＦＲ表达与癌细胞分化程度有关，各病理分期中ＥＧＦＲ表达也有差别。提示ＥＧＦＲ与前列腺增生及癌变的发生有关，可作前列腺癌生物学行为的判断指标。     

RNAi抑制鼻咽癌细胞表皮生长因子受体表达对细胞生长的影响

目的利用RNAi技术抑制鼻咽癌细胞5-8F表皮生长因子受体（EGFR）表达,观察细胞生长变化,探讨EGFR与鼻咽癌发生发展之间的相关性。方法利用体外转录法合成EGFR特异性siRNA,将其瞬时转染5-8F．收集转染后细胞总RNA和蛋白,利用RT．PCR和Western blot法测定EGFR表达水平的变化,并检测EGFR表达抑制后细胞生长速度和生长周期的变化。结果合成的3对siRNA中,有一对使EGFR mRNA表达下降67．5％,蛋白表达下降77％。EGFR表达抑制后5．8F生长速度减慢,并诱导细胞周期停止在G1期。结论RNAi沉默EGFR表达可抑制鼻咽癌细胞生长,并诱导癌细胞停止在G1期,RNAi可作为探索鼻咽癌发生发展机制和基因治疗的有效工具。     

RNAi技术抑制乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的在体实验研究

目的 探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据.方法 (1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率.(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率.(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量.结果 MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞.ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%.Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%.结论 (1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞.(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验.(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨.     

抑制表皮生长因子受体基因表达的pSIREN-Shuttle RNAi表达载体的构建

目的:构建抑制表皮生长因子受体(EGFR)基因表达的RNA干扰(RNAi)质粒表达载体pSI-REN-Shuttle-EGFR。方法:化学合成3条编码短发夹RNA序列的、特异靶向EGFR基因的寡核苷酸链,各69个碱基,退火,克隆到RNAi-Ready pSIREN-Shuttle载体的人源U6启动子的下游,重组构建RNAi质粒,3种载体转染人鼻咽癌细胞株(CNE),用RT-PCR分析pSIREN-Shuttle-EGFR载体对EGFR基因的mRNA表达抑制效果。结果:重组构建的pSIREN-Shuttle-EGFR载体经插入基因片段序列分析,表明69个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。CNE细胞EGFR基因的mRNA被明显抑制。结论:RNAi质粒表达载体介导对EGFR基因的RNA干扰可能是鼻咽癌干预治疗的一种有效手段。     

胰腺癌表皮生长因子及其受体mRNA表达的临床意义

近年来，一些学者的研究发现某些消化道肿瘤有较高水平的表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）的表达［１］，但胰腺癌组织ＥＧＦ及ＥＧＦＲ表达研究报道甚少。本研究应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法，检测胰腺癌组织中ＥＧＦ和ＥＧＦＲｍＲ－ＮＡ的表达，以探讨两者...     

RNA干扰EGFR基因对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响

目的 构建表皮生长因子受体(EGFR)基因的小干扰RNA(siRNA)质粒,转染人卵巢癌细胞株skov3后检测RNA干扰(RNAi)对EGFR基因表达及细胞对化疗药物敏感性的影响.方法 体外构建EGFR小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入skov3细胞.实验分为正常对照组、非特异性转染组和特异性转染组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EGFR mRNA的表达,使用免疫细胞化学法(ICC)检测EGFR蛋白的表达.使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定EGFR shRNA转染skov3细胞后细胞对顺铂敏感性的改变.结果 EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱(F=87.73,q=16.81、15.33,P＜0.01),EGFR蛋白表达明显下调(F=69.29,q=14.71、13.57,P＜0.01);顺铂敏感性比正常对照组提高了约3倍.结论 靶向EGFR基因的序列特异性shRNA可有效抑制skov3细胞中EGFR基因的表达,增强skov3细胞对顺铂的敏感性.     

CMTM5与表皮生长因子受体在前列腺癌中的表达及意义

目的：通过检测CMTM5（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 5）及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在前列腺癌中的表达,分析其在前列腺癌发生及发展中可能存在的联系。方法：免疫组织化学检测前列腺癌和良性前列腺增生（benigh prostatic hyperlasia,BPH）组织中CMTM5的表达,分析其与前列腺癌临床病理学特征的关系;免疫组织化学检测EGFR在前列腺癌组织中的表达,并分析其与CMTM5在前列腺癌中表达水平的关系;Western blot检测CMTM5和EGFR在BPH组织及各前列腺癌细胞系的表达。结果：免疫组织化学结果显示,CMTM5在75%（27/36）BPH和35.9%（23/64）前列腺癌组织中高表达,差异有统计学意义（P=0.000 2）。CMTM5的表达水平与年龄、临床分期、有无转移之间无明显关系（P>0.05）, 在中高度分化（Gleason评分≤7）的肿瘤组织中,CMTM5的表达水平高于低度分化（Gleason评分≥8）的肿瘤组织,差异有统计学意义（P=0.003）。EGFR在57.8%的前列腺癌组织中高表达（37/64）,其与CMTM5表达水平的差异有统计学意义（P=0.021）。23例前列腺癌组织CMTM5低表达且EGFR高表达,占35.9%。Western bolt结果显示CMTM5在BPH组织中表达,但在各前列腺癌细胞系中均表达缺失,而EGFR在BPH组织中的表达低于各前列腺癌细胞系,特别是激素非依赖性细胞系PC3和DU145。结论：CMTM5的表达缺失与EGFR的过表达可能同时参与了前列腺癌的发生与发展。     

RNA干扰技术对SKOV3细胞EGFR表达的抑制作用

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术对卵巢腺癌细胞株SKOV3表皮生长因子受体(EGFR)表达的抑制作用。方法体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA(dsRNA),用lipofectamin 2000转染SKOV3细胞,采用RT-PCR和Western blotting技术检测EGFR mRNA和蛋白水平的变化,通过水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测细胞增殖力,采用细胞黏附和移动实验检测细胞体外黏附和移动能力,通过细胞侵袭重建基底膜实验检测细胞体外侵袭能力。结果序列特异性dsRNA-EGFR对SKOV3细胞EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为73.65%和58.94%。dsRNA-EGFR组在转染后24、48、72 h细胞增殖抑制率分别为22.54%、35.76%、31.07%;dsRNA-EGFR组在30 min和90 min黏附实验中的黏附率分别下降12.11%和18.66%;转染dsRNA-EGFR后细胞体外移动和侵袭能力的抑制率分别为25.47%和22.08%。结论化学合成的dsRNA可抑制卵巢癌SKOV3细胞EGFR表达,抑制细胞增殖、移动、黏附和侵袭力。     

RNA干扰及厄洛替尼阻断EGFR信号途径对A549细胞抗增殖的影响

目的 研究RNA干扰（RNAi）及厄洛替尼阻断表皮生长因子受体（EGFR）信号途径对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法 肺腺癌A549细胞分为对照组、RNAi组、厄洛替尼组。采用倒置相差显微镜观察EGFR信号阻断前后细胞形态的变化,RT-PCR检测EGFR mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测EGFR及Bcl-2、Bax表达。结果 RNAi阻断EGFR mRNA表达下调。与对照组相比,RNAi组及厄洛替尼组A549细胞凋亡增加, EGFR表达降低,Bcl-2水平表达降低,Bax蛋白表达增高, Bcl-2/Bax比值降低。结论 阻断EGFR信号途径可促进肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值水平相关。     

靶向EGFR基因RNA干扰对胃癌细胞BGC823细胞增殖和凋亡的影响

目的利用R NA干扰技术下调表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,观察其对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法将细胞分为3组,空白对照组、空载体组和实验组(转染EGFRshRNA组)。构建针对EGFR基因的s和R NA真核表达载体,转染入胃癌BGC823细胞中,运用R T-PCR和Western blot检测EGFR在mRNA和蛋白水平的变化;WST-1法检测细胞增殖的影响:Hoechst33258染色观察细胞核形态学变化。实验重复3次。结果成功构建表达质粒pGenSil-EGFR并转染BGC823细胞,shRNA下调EGFR的表达后,与空白对照组相比EGFR在mR NA和蛋白水平的表达均下降,抑制率分别为58.6%和75.2%。shR NA转染24、48、72 h,WST-1法检测胃癌细胞BGC823的增殖情况,与空白对照组相比,24 h后三组差异不明显(F=0.326,P>0.05),48 h及72 h后,细胞增殖明显下降(F=68.25及274.45,P<0.001),有统计学意义。EGFR shR NA作用BGC823细胞72 h后,经Hoechst33258染色发现,实验组细胞核染色质边集,出现凋亡小体。结论靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑胃癌细胞BGC823细胞的EGFR表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,EGFR基因有望成为胃癌基因治疗靶点。     

靶向EGFR基因的siRNA表达载体构建及其生物学效应的研究

目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pSi-EGFR),并观察其抑制人肺腺癌细胞株A549中EGFR基因表达的效果及生物学效应.方法利用Lipofectamine2000将构建的pSi-EGFR载体转入A549细胞中,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光和流式细胞仪检测EGFR基因mRNA和蛋白水平的表达,并采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTF)、集落形成实验观察细胞生长变化.结果pSi-EGFR可显著抑制A549细胞中EGFR基因的表达;转染pSi-EGFR细胞生长抑制率为67.8%,集落形成抑制率为59.4%.结论pSi-EGFR载体能够在A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应下调EGFR基因表达来抑制细胞增殖.     

靶向EGFR基因RNA干扰对人卵巢癌SKOV_3细胞增殖的抑制作用

目的 利用RNA干扰技术下调表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因的表达,观察其对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响.方法 构建针对EGFR基因的siRNA真核表达载体,转染入卵巢癌SKOV_3细胞中,并筛选稳定表达siRNA的转化克隆,RT-PCR及Western blot分别检测EGFR mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,克隆形成实验及MTY法检测细胞克隆形成率及细胞体外的增殖情况.结果 成功构建表达质粒pGenSil-HK、pGcnSil-EGFRI和pGenSil-EGFR2,并转染SKOV,细胞,通过G418筛选后获得稳定转染克隆,RT-PCR及Western blot分析表明转染pGenSil-EGFRI、pGenSil-EGFR2后的细胞EGFR mRNA和蛋白表达均受到了明显抑制,FGFR mRNA抑制率分别为41.87%和68.07%,蛋白表达抑制率分别为45.21%和70.25%.与未转染组和pGenSil-HK组相比,pGenSil-EGFR2组细胞凋亡比例显著增加,G_1期细胞增多,而S期细胞减少(P<0.05);转染pGenSil-HK组克隆形成率为(0.82±0.03),转染pGenSil-EGFR2组克隆形成率为(0.61±0.04),二者比较差异显著(P<0.05),MTT显示细胞培养36 h后,pGenSil.EGFR2组的细胞生长均显著低于未转染组和转染pGenSil-HK组(P<0.05).结论 靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑卵巢癌SKOV_3细胞中的EGFR表达,诱导细胞凋亡、调控细胞周期再分布、抑制细胞增殖.     

短发夹RNA靶向抑制EGFR基因对人卵巢癌Skov-3细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对卵巢癌细胞表皮生长因子受体(EFR)基因表达的影响及其效应.方法 体外合成EFR的DNA模板序列和pSilencer 2.1-U6neo质粒构建编码shRNA的表达载体,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染到人卵巢癌Sov-3细胞,采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学技术检测转染前后Sov-3细胞EFR基因的变化;采用AnnexinV/PI双染色标记的流式细胞仪检测siRNA诱导的细胞凋亡,PI染色检测细胞周期阻滞.结果 成功构建pSilencer-EFR短发卡状siRNA真核表达载体;靶向EFR的序列特异性的siRNA可以有效抑制Sov-3细胞EFR基因的表达;流式细胞分析显示,Sov-3细胞凋亡率明显增加,细胞周期出现明显的0/1期阻滞.结论 RNAi沉默EFR表达可以诱导卵巢癌Sov-3细胞凋亡,并使卵巢癌Sov-3细胞停滞在0/1期,RNAi可作为研究卵巢癌发生发展机制和基因治疗的有效工具.