胸腺激素组分V的结构与生物活性——1.小牛胸腺激素组分V制备的简化与生物活性的测定

本研究系基本上按A.L Goldstein方法并参照刘士廉等报道的方法加以改进。从小牛胸腺提取其中蛋白质和多肽,经加热处理,饱和硫酸胺沉淀,超滤膜过滤、葡聚糖凝胶G25脱盐和冷冻干燥等步骤,得到白色粉状的胸腺提取物。由于省去用冷丙酮沉淀的步骤,产品可能与Goldstein等所报道的“胸腺素F_5”不同,又因仍保留用超滤膜过滤,滤去除分子量10,000以上的大分子,所得产品与刘士廉等应用葡聚糖凝胶G150层析者,可能也不尽同。本文拟称之为胸腺激素组分V。     

妊娠相关蛋白A的纯化及鉴定研究

目的:对比G200凝胶过滤、反向亲和层析、DEAE离子交换等不同的方法纯化孕妇血清中的妊娠相关蛋白A(PAPP-A),为下一步的临床应用研究奠定基础。方法:把正常男性血清过G200凝胶过滤纯化后免疫家兔得到兔抗人抗体,连接溴化氰活化G25凝胶制备反向免疫层析柱。收集足月孕妇血清,离心后依次应用G200凝胶过滤、反向亲和层析及离子交换层析柱纯化。用ELISA检测试剂盒检测各个洗脱峰的PAPP-A活性,SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度。结果:稀释兔抗人血清抗体至浓度为1∶16,双向扩散有明显沉淀线,可以用于制备抗体,蛋白A亲和层析洗脱pH3.0洗脱峰,G200凝胶过滤第一个洗脱峰,反向亲和层析的0.1 mol/LPBS洗脱峰,离子交换层析的0.45 mol/L NaCl洗脱峰中PAPP-A活性均较高。SDS-PAGE结果显示,孕妇血清用G200凝胶过滤处理后杂蛋白条带较多,反向亲和层析或者DEAE分别处理后同样存在杂蛋白条带,三种纯化方法结合应用杂蛋白条带明显减少,Western blot鉴定显示三种方法结合应用后纯化蛋白样品条带单一。结论:本研究用三种层析方式相结合的方法得到纯度较高的PAPP-A抗原,鉴定显示可以到达制备单克隆抗体(mAb)的要求,为mAb的制备以及酶联免疫试剂盒的建立奠定了基础,使PAPP-A在临床应用方面前景广阔。     

两种可透析胸腺因子激活的人单核细胞和NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

在酸性条件下自牛胸腺组织中提取的两种可透析组分,经离子交换层析将其分开,分别命名为可透析胸腺提取物—细胞毒刺激因子a(DTE-CSFa)和可透析胸腺提取物—细胞毒刺激因子b(DTE-CSFb)。作者对这两种因子的生物学活性作了分析。作者采用纯系STU小鼠,试验组于肿瘤细胞攻击前14天开始隔日分别注射50μg、5μg、2μg的CSFa/b。肿瘤细胞攻击后的35天每天分别注射上述剂量CS Fa/b.对照组则     

猪胸腺中免疫抑制调节物的研究——Ⅱ.提取物的分离和对淋巴细胞增殖效应的抑制

在前一报告已简述我们用乙醇分段抽提法从猪胸腺中制备粗提物,观察其体内免疫抑制效应。本文将粗提物通过Ultrogel ACA 54凝胶过滤提纯,获得部分纯化的制品。在PHA和ConA诱导下,对该制品的抑制效应进行了研究并对某些生化特性作了鉴定。通过ACA～54胶滤后分得3个峰,活力分布在Ⅱ～Ⅲ峰,将Ⅱ峰再层析又分得A和B两峰。活性较高的A峰聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE图谱显示一主要区带和另一小的区带。SDS-PAGE法测定其分子量分别为70,000和15,000道尔顿,用Alcian-Blue染色法证明这两条带均是糖蛋白。     

乳腺癌患者胸水中免疫抑制和生长抑制因子的进一步分离

乳腺癌患者胸水经硫酸铵沉淀、疏水层析，分出６个峰。对具有免疫抑制活性的第６峰进行离子交换层析和凝胶过滤等处理，获得４种组分。它们具有免疫抑制性和生长抑制性，其中一种组分含有ＴＧＦβ。     

乳腺癌患者胞水中免疫抑制和生长抑制因子的进一步分离

乳腺癌患者胸水经硫酸铵沉淀、疏水层析，分出６个峰。对具有免疫抑制活性的第６峰进行离子交换层析和凝胶过滤等处理，获得４种组分。它们具有免疫抑制性和生长抑制性，其中一种组分含有ＴＧＦβ。     

粉尘螨抗细菌活性物质的分离与鉴定

目的从粉尘螨丙酮提取液中分离抗细菌活性成分,并对其抗菌活性进行初步鉴定。方法用丙酮抽提粉尘螨,并用Sephadex G50分子筛层析进行对粉尘螨提取液中的抗细菌活性进行初步分离、纯化。对各组分的抗细菌活性进行初步鉴定。结果经Sephadex G50分子筛层析分离得到Ⅰ及Ⅱ两个峰。粉尘螨丙酮粗提物对绿脓假单胞菌无抑制作用,但对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及短小芽孢杆菌均有抑制作用。峰Ⅰ及峰Ⅱ则对大肠埃希杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌都有抑制作用。粉尘螨粗提液及第二个峰在加热及蛋白酶K处理后仍然保留抗细菌活性,但是第一个峰在同样处理后失去了抗菌活性。结论首次从粉尘螨分离纯化得到抗细菌成分。     

Jo-1抗原的提取和纯化

目的改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法。方法用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IgG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品。结果100g兔胸腺可制得5～7g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%～24%。经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应。虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50ku处有阳性条带。在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性。结论亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法。     

人参总皂甙和单体皂甙Rb_1对家兔及猪心肌细胞膜和骨髂肌细胞膜钙离子通道拮抗剂受体的作用

本实验采用家兔及猪的心肌及骨骼肌组织,制成组织匀浆,经高速、超速离心,得到细胞膜钙拮抗剂受体粗品,再经WGA-琼脂糖凝胶层析(Chromatography on WGA Sepharose)和DEAE-交联葡聚糖凝胶层析(DEAE-Sephadex Chromatography)和庶糖梯度离心(Sucrose gradient)得到提纯的和浓缩的DHP受     

粉尘螨浸液免疫活性的测定

近20年来许多实验已证实尘螨是世界性分布的重要过敏原,是屋尘过敏原的主要成份。尘螨浸 液的成份很复杂,许多学者已用各种方法对其进行分离,着重测试各个成分的过敏原活性,即产生IgE的免疫原性,而没有同时测试其在人体产生阻断抗体IgG的免疫原性。本实验将粉尘螨浸液经葡聚糖凝胶G-75进行层析,得到三个蛋白质组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。用皮肤挑刺试验、鼻腔粘膜激发试验和酶联免     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生 …

目的 进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配（手术侧）的脊髓后角组织提取液，以获得某种营养活性物质。方法 用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｇ－７５ ｐｒｅｐ ｇｒａｄｅ凝胶层析、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）层析和细胞培养等技术分离和检测神经营养活性物质。结果 手术侧脊髓后角组织提取液经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｇ－７５ ｐｒｅｐ ｇｒａｄｅ凝胶层析和ＨＰＬＣ层析后，得到的Ａ峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节（ＤＲＧ     

识别胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞的单链 …

目的 利用噬菌体展示技术寻找胸腺基质细胞表面的新抗原。方法 用培养的胸腺基质细胞系ＭＴＤＣ作为靶抗原富集初级噬菌体抗体库。从经过富集后的次组抗体库中挑选克隆，制备单链抗体，并在冰冻切片及培养的细胞系上检测抗体的特异性。结果 从经４轮富集的次级抗体库中挑选到一个新的克隆。用此克隆制备的单链抗体可同时辨认胸腺髓质上皮细胞亚群和胸腺树突状细胞亚群。结论 胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞均具有异质性，同时     

胸腺因子D注射液对40例变态反应性疾病患者玫瑰花试验的影响

胸腺因子Ｄ注射液对４０例变态反应性疾病患者玫瑰花试验的影响张克生，罗夏，黄雅琴，郭东升内蒙古医学院附属医院内蒙古科右前旗人民医学呼和浩特市西苑实业有限公司关键词胸腺因子，变态反应，免疫功能注射用胸腺因子Ｄ，由猪胸腺经严格工艺提取的多肽物质，是空军福州...     

识别胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞的单链抗体的筛选

目的　利用噬菌体展示技术寻找胸腺基质细胞表面的新抗原。方法　用培养的胸腺基质细胞系MTDC作为靶抗原富集初级噬菌体抗体库 ,从经过富集后的次级抗体库中挑选克隆 ,制备单链抗体 ,并在冰冻切片及培养的细胞系上检测抗体的特异性。结果　从经 4轮富集的次级抗体库中挑选到一个新的克隆。用此克隆制备的单链抗体可同时辨认胸腺髓质上皮细胞亚群和胸腺树突状细胞亚群。结论　胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞均具有异质性 ,同时噬菌体展示技术可以作为寻找细胞表面新分子的强有力工具。     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

目的　进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配 (手术侧 )的脊髓后角组织提取液 ,以获得某种神经营养活性物质。　方法　用 Superdex G- 75 prep grade凝胶层析、高效液相色谱 (HPL C)层析和细胞培养等技术分离和检测神经营养活性物质。　结果　手术侧脊髓后角组织提取液经 Superdex G- 75 prep grade凝胶层析和 HPL C层析后 ,得到的 A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节 (DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用。经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示 ,A峰洗脱液呈现一条分子量约为 6 0 k D的蛋白质主带。　结论　结合生物活性检测结果 ,分子量约 6 0 k D的蛋白质可能是手术侧脊髓后角组织的神经营养活性物质     

猪胸腺因子D研制成功并通过技术鉴定

<正> 胸腺激素广泛存在于牛、猎、羊等动物体内,为一组多肽类激素,无种属特异性。国际上已有二十多种胸腺激素相继问世。胸腺激素能使未成熟的胸腺淋巴细胞进一步分化成熟,成为具有免疫活性的T淋巴细胞,增强机体的免疫功能。近年运用胸腺激素治疗免疫缺陷症的研究受到医学界重视。目前认为,许多与人体免疫功能异常有关系的疾病。可以用动物的胸腺激素补充以求增强和调节以细胞免疫为主的机体免疫功能,达     

胸腺素α元:大鼠胸腺中胸腺素α_1主要免疫反应型的分离及其性质

应用抗合成胸腺素α_1的抗体建立的放射免疫分析法,从大鼠胸腺分离到在NH_2端含有胸腺素α_1序列的一个约有112个氨基酸残基的多肽.这一新发现的多肽为大鼠胸腺提取物中能与抗胸腺素α_1血清起交叉反应     

用荧光DNA探针原位杂交法对Down综合征的快速产前诊断

本文介绍了一种快速、准确筛选染色体数目异常的核分型方法,本法使早期羊膜穿刺术的优点更突出。应用本法,可在羊膜穿刺术后24小时内检出21三体。离心20ml未经培养的羊水,收集细胞;然后加入低渗缓冲液,细胞胀破前经Caynoy氏液固定。用双重激光细胞分类器,从正常人成纤维细胞中分拣出21号染色体;然后用限制性酶消化21号染色体的DNA;经葡聚糖凝胶层析后,收获较短DNA片段,并用Southern印迹法检测,使用于杂交的DNA探针含有21号染色体特异顺序,并使之标记上生物素。使羊     

白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

目的　研究白色念珠菌（ 白念菌） 在体内对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用。方法　小鼠经尾静脉注射白念菌后,以流式细胞仪（ＦＣＭ） 分析、ＤＮＡ 琼脂糖凝胶电泳分析及细胞形态学改变为指标检测细胞凋亡。静脉注射ＮＯＳ 抑制剂观察对白念菌诱导胸腺细胞凋亡的影响。结果　白念菌能诱导小鼠胸腺细胞产生特征性的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析显示特征性的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳显示胸腺细胞出现典型的ＤＮＡ“梯状带”;用荧光染色（ＡＯ＋ ＥＢ） 以及ＦＣＭ 检测凋亡细胞百分率,发现白念菌注射后２４ 小时,胸腺细胞凋亡百分率随白念菌剂量增加而增高;用４ ×１０６ 白念菌经尾静脉注射后,胸腺细胞凋亡百分率于６ 小时开始增高,２４ 小时达高峰,以后迅速降低;小鼠胸腺萎缩,胸腺重量于１２ 小时明显降低,且于７２ 小时达到最低水平;ＮＯＳ 抑制剂氨基胍仅能部分抑制白念菌诱导的小鼠胸腺细胞凋亡;热灭活的白念菌不能诱导胸腺细胞凋亡。结论　白念菌菌血症能诱导小鼠胸腺细胞凋亡,而且呈时间和剂量依赖性;白念菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡有赖于真菌的代谢;白念菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡的过程可能与ＮＯ 部分相关。     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

<正> 我室新近的研究发现,部分去传入纤维支配的脊髓后角组织提取液含有神经营养活性组份,其分子量约在40KD～78KD之间,但不清楚是那种分子量的蛋白质具有神经营养活性作用.为了寻找这种物质,本研究应用Superdex G-75prep grad凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)层析和细胞培养等技术和方法,进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配(手术侧)的脊髓后角组织提取液,以期获得某种神经营养活性物质.用SD雄性大鼠100只,切除其一侧L_1-L_3、L_5和L_6背根,仅保留L_4背根(此动物为备用根模型大鼠),术后5天处死动物.分别切取L1_～L_6节段的手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备成提取液、凝胶层析洗脱液和PHLC层拆洗脱液.结果发现,手术侧脊髓后角组织提取液具有神经营养活性作用,将该提取液经Superdex G-75prep grade凝胶层析和PHLC层析后,得到的A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节(DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用.经SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(PAGE)显示,A峰洗脱液呈现一条分子量约为60kD的蛋白质主带.结合生物活性检测结果,我们推测分子