MPTP诱导小鼠黑质神经元凋亡

目的　探讨 1-甲基 - 4苯基 - 1,2 ,3,6 -四氢吡啶 (MPTP)的神经毒性及其作用机制。　方法　 C5 7BL小鼠腹腔注射 MPTP,总量为 15 0 mg/kg,取中脑黑质 Nissl染色 ,TH免疫组织化学 ,TUNEL法和电镜观察黑质致密带的神经元改变。　结果　 MPTP处理后 ,黑质致密带的存活神经元和 TH阳性神经元的数目明显减少 (P<0 .0 1) ,TUNEL结果表明黑质神经元出现明显的 DNA断裂的特征性凋亡改变 (P<0 .0 1) ,黑质致密带神经元的超微结构出现早期凋亡改变。　结论　 C5 7BL小鼠腹腔注射 MPTP,可诱导黑质神经元凋亡 ,细胞凋亡是 MPTP的毒性作用方式之一。     

JNK抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

[目的]研究特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。[方法]把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子(KCl 25mmol/L)的培养基中转移至低钾培养基(KCl 5mmol/L)中诱导神经元凋亡。以Western blot法检测JNK和c-Jun的磷酸化水平。[结果]低钾(KCl 5 mmol/L)磷酸化并激活JNK,诱导c-Jun磷酸化和小脑颗粒神经元凋亡。SP600125通过抑制c-Jun磷酸化而浓度依赖性地促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活。其保护作用的半数有效量(ED_(50))为1.01μmol/L。[结论]SP600125通过特异性地抑制JNK活性而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用;提示JNK是介导低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关键激酶,它可能可以作为干扰神经元凋亡的药物的作用靶点。     

JNK磷酸化Bad在脑缺血神经元凋亡中的作用

目的探讨JNK磷酸化Bad在大鼠缺血性神经元凋亡中的作用。方法 20只大鼠均分为4组：假手术组、缺血复灌组、溶剂对照组和SP600125组。制作大鼠全脑缺血模型,应用免疫沉淀和免疫印迹法检测大鼠脑缺血复灌1 d海马CA1区神经元Bad与14-3-3及Bad与Bcl-Xl的结合、Bad丝氨酸128位磷酸化[p-Bad（S128）]水平、Caspase-3蛋白表达情况。结果与缺血复灌组相比,SP600125组海马CA1区神经元Bad与14-3-3的结合明显增高,Bad与Bcl-Xl的结合、p-Bad（S128）、Caspase-3表达显著减少（均P〈0.05）。结论 JNK介导的Bad（S128）磷酸化在大鼠缺血性脑损伤中发挥了重要作用。     

Neurotropin 拮抗 6-OHDA诱导大鼠早期黑质多巴胺能神经元的凋亡

[目的] 探讨神经托平 (neurotropin)对 6-OHDA诱导的 SD (Sprague-Dawley)大鼠黑质多巴胺能神经元极早期凋亡的拮抗作用.[方法] 实验组 SD大鼠 , 按完全随机设计分 3组,每组 16只,分别用神经托平 15、 30、 45 U· kg- 1· d- 1腹腔内注射,对照组( 32只)用等体积的生理盐水腹腔内注射. 2周后用 6-OHDA立体定向注射于大鼠纹状体区.在 6 h、 12 h、 24 h、 48 h、 72 h、 96 h、 1周及 2周时采用原位末端标记法( TUNEL)检测黑质细胞的凋亡,用流式细胞仪检测凋亡率,用免疫组化法检测纹状体区多巴胺能神经纤维的含量的变化. [结果] 对照组在 6-OHDA作用后的 6 h即可检测到黑质细胞凋亡,在 48 h达到高峰,凋亡率 6.4%± 0.2%;神经托平 30 、 45 U· kg- 1· d- 1预处理后则可降低细胞凋亡 (P< 0.05), 其中 45 U· kg- 1· d- 1预处理组在 48 h仅为 2.3%± 0.1%,与实验组比有统计学意义,同时纹状体区多巴胺能神经纤维含量的减少较对照组亦有统计学意义 (P< 0.05);而 15 U· kg- 1· d- 1组则无明显效果. [结论] 大剂量神经托平可拮抗神经毒性物质对黑质神经元的凋亡作用,避免了投射至纹状体区多巴胺能神经递质的减少,为今后探讨帕金森病的防治提供了重要的理论依据.     

大鼠中脑黑质神经元的增龄性变化

目的 :探讨大鼠中脑黑质神经元的增龄性变化规律。方法 :SD大鼠 32只 ,雌雄各半 ,分为幼年组 (1～ 2月龄 )、青年组 (4～ 5月龄 )、中年组 (1 1～ 1 2月龄 )和老年组 (≥ 2 4月龄 ) 4个年龄组 ,常规石蜡切片 ,取中脑黑质连续冠状切片 ,进行焦油紫染色和TUNEL法细胞凋亡染色 ,用图像分析仪对焦油紫染色细胞及TUNEL法染色阳性神经元 (凋亡细胞 )进行计数。结果 :随着年龄增长 ,大鼠中脑黑质神经元数量减少 (P <0 0 5 ) ,黑质神经元凋亡增加 (P <0 0 5 )。结论 :中脑黑质神经元随年龄增长而出现的衰老性变化 ,可能是黑质病变的原因之一。     

6-OHDA诱导PD大鼠黑质神经细胞凋亡的观察

目的 探讨帕金森病发病过程中黑质神经元的缺失形式。方法 将6-OHDA立体定向微量注射于右侧内侧前脑柬(MFB)制备PD大鼠模型，观察大鼠的行为改变，并运用特殊染色，DNA原位末端标记技术检测黑质内多巴胺(DA)神经元凋亡的发生及其变化规律。结果 成功复制出符合临床特点的PD大鼠模型，且旋转行为与黑质区神经元数目呈反变关系。损伤侧黑质DA神经元存在着细胞凋亡。以术后两周最明显。结论 6-OHDA诱导的PD大鼠SNc中存在以凋亡为主的死亡方式。细胞凋亡在PD发病中可能起关键作用。     

c-Jun氨基末端激酶信号通路与胰岛β细胞凋亡

近年的流行病学调查显示,我国成人糖尿病患病率达11．6％,糖尿病前期患病率高达50．1％,糖尿病总体防治形势严峻［1］。据一项英国糖尿病前瞻性研究显示,患者确诊糖尿病时胰岛β细胞的功能仅残留约50％,且随着糖尿病的进展胰岛β细胞的功能呈进行性下降［2］。在2型糖尿病患者中,β细胞数量减少及凋亡增加是引起β细胞功能受损的主要原因［3］。 c‐Jun 氨基末端激酶（c‐Jun amino‐terminal kinase ,JNK ）作为一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,参与了内质网应激、氧化应激及细胞因子等途径介导的胰岛β细胞凋亡。对JN K 信号通路的调控,有望成为保护胰岛β细胞功能的重要手段。笔者围绕JNK在胰岛β细胞凋亡中的作用作一综述,旨在阐明糖尿病发病的可能机制。     

一氧化氮诱导小脑颗粒神经元凋亡

应用电镜观察、ELISA、流式细胞分析等技术方法研究了一氧化氮对原代大鼠小脑颗粒神经元的细胞毒性。结果表明小脑颗粒神经元经一氧化氮供体S—亚硝基谷腕甘肽(GSNO；20μmol/L)处理后逐渐发生细胞凋亡，主要表现为DNA链断裂、染色质凝缩、核破裂、形成凋亡小体。在这一过程中线粒体跨膜电位下降、细胞内ATP含量减少，同时线粒体内过氧化亚硝基合量及细胞内过氧化物合量均增加，说明一氧化氮抑制了线粒体的氧化磷酸化，并引发了氧化应激。在神经元凋亡的过程中伴随有Caspase3的活化以及p53、p21^WAF1/CIP1基因表达量的增加，说明一氧化氮引发的氧化应激可能导致了DNA氧化损伤。超氧阴离子自由基清除剂SOD可以有效抑制一氧化氮导致的氧化应激、阻断细胞凋亡，提示由过氧化物造成的氧化应激是一氧化氮具有神经毒性的重要原因。     

大鼠脑创伤后ERK信号转导通路对神经细胞凋亡的影响

目的探讨细胞外调节激酶（ERK）信号转导机制对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡的作用。方法建立重型弥漫性脑损伤（TMI）模型,70只雄性SD大鼠分为创伤组和对照组,其中创伤组分为伤后10、30 min、3、6、24、48、72 h 7个时相点,采用免疫组化法检测细胞凋亡相关基因ERK、caspase-3的表达,原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果创伤组海马CA1区P-ERK1/2和caspase-3蛋白表达在伤后3 h较对照组显著升高（P〈0.05）,伤后6 h达高峰（P〈0.01）,后逐渐下降,P-ERK1/2在伤后24 h表达量仍明显高于对照组（P〈0.05）,caspase-3在伤后72 h仍有大量表达;镜下对照组未见TUNEL阳性细胞,创伤组在伤后3 h凋亡细胞数明显增多,伤后48 h达高峰,均显著高于对照组（P〈0.01）。结论大鼠脑创伤后ERK信号转导通路激活,可能通过诱导caspase-3蛋白表达,进而导致神经细胞凋亡。     

猕猴黑质GABA能神经元的分布

采用进化程度较高的灵长类动物猕猴作为实验材料,在光镜下观察黑质的GABA能神经元。在黑质网状部GABA能神经元数量多,以多角形和梭形为主,致密部的GABA能神经元较网状部略稀少,胞体形态以多角形、圆形和梭形为主;在下丘平面还可见到许多GABA样阳性神经纤维。     

猕猴黑质含TH、GABA神经元与老化的关系

采用在种系进化上与人类很接近的猕猴为实验动物,分为青年组和老龄组,通过免疫组织化学技术观察黑质TH、GABA神经元与老化相关的变化。结果表明老龄组黑质致密部和网状部神经元的TH免疫反应性明显降低,老龄组GABA神经元数量和免疫反应性均明显低于青年组。提示中枢神经老化可能与黑质TH含量和GABA神经元数目减少有关。     

人类黑质神经元衰老性变化的体视学研究

目的探讨人类中脑黑质神经元的增龄性变化规律。方法选取19例正常人尸检的中脑组织,分为青年组(17～35岁)、中年组(40～59岁)和老年组(60～84岁),取中脑黑质连续冰冻切片,进行焦油紫染色和酪氨酸羟化酶(TG)免疫组化染色,用体视学计数原理及相应分析系统进行计数,观察老化过程中黑质神经元的形态学改变规律。结果随着年龄增长,人类中脑黑质神经元总数和黑色素性神经元均减少(P<0.05),其中以酪氨酸羟化酶阳性且带有神经黑色素的多巴胺能神经元数量减少较为突出,差异有统计学意义(P<0.05)。结论神经黑色素(NM)可能参与并促进了衰老过程中黑质神经元的退行性变和丢失,这可能是黑质病变的原因之一。     

MPTP对小鼠黑质纹状体神经递质代谢相关基因表达的影响

目的 研究1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氢吡啶（1－methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的的黑质纹状体系统神经递质代谢相关基因表达的变化。方法 通过MPTP注射诱导C57BL小鼠神经元损伤，利用逆转录PCR方法检测酪氨酸羟化酶（TH），单胺氧化酶B（MAO－B），多巴胺转运体（DAT），胆碱乙酰基转移酶（ChAT)以及谷氨酸脱羟酶（GAD65）五种神经递质代谢相关基因的表达变化。结果 在小鼠黑质与纹状体中，MPTP导致TH基因表达显著降低以及GAD65基因表达的上升。MAO－B，DAT，ChAT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同，在黑质MPTP导致MAO－B与ChAT基因表达的上升以及DAT基因表达下降，在纹状体MPTP导致MAO－B与ChAT基因表达下降，而对DAT基因表达没有明显影响。结论 MPTP对不同神经递质代谢相关基因表达有不同的影响，且具有一定的脑区特异性。     

二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡及JNK表达的影响

目的探讨二氮嗪（DZ）预处理能否抑制C-Jun氨基末端激酶（JNK）表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。方法原代培养9～10d的SD大鼠海马神经元随机分为5组：对照组、DZ0,30,100μmol／L和DZ100μmol／L＋5-羟癸酸（5-HD）100μmol／L预处理组。除对照组外,其余4组神经元自缺氧前2d开始,每天实施以上对应浓度DZ预处理1h。连续3d。于体外缺氧4h复氧48h后,采用四唑蓝比色法测定海马神经元活力,AnnexinV—FITC流式细胞术测定凋亡率,Western blotting法检测JNK蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧复氧后海马神经元的活力下降,凋亡率增大,JNK蛋白表达增强（P〈0．05）。与其他预处理组比较,DZ100μmol／L预处理组的神经元活力高,凋亡率低（P〈0．05）,其他预处理组间比较无统计学意义：DZ预处理后,JNK蛋白表达减低,且DZ100μmol／L组表达弱于DZ30μmol／L组（P〈O．05）。同时给于5-HD预处理后,DZ未能抑制JNK蛋白表达。结论DZ预处理可能抑制JNK表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。     

基于Nrf2-Notch1信号轴探讨黄芩苷对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元氧化应激的影响

[目的]基于核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)-Notch1信号轴探讨黄芩苷(baicalin,BA)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠黑质多巴胺能神经元(dopaminergic neurons,DN)氧化应激的作用机制....