恶性疟原虫顶端膜抗原1基因转染伯氏疟原虫模型的建立

目的：建立恶性疟原虫顶端膜抗原1（AMA-1）基因转染伯氏疟原虫的模型．方法：将含有恶性疟原虫AMA-1基因的重组转染质粒pDB.DTm. DB./AB. AF. DB．用Bgl Ⅰ酶切线性化．伯氏疟原虫经体外培养和分离后进行电转化,转化的原虫经药物筛选后进行PCR检测．结果：PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在恶性疟原虫AMA-1基因．结论：成功建立了恶性疟原虫AMA-1基因转染伯氏疟原虫的模型,为进一步研究提供了基础．     

动物疟原虫与人疟原虫的交叉反应抗原

目的分析5种疟原虫（间日疟原虫、恶性疟原虫,食蟹猴疟原虫、伯氏症原虫,约氏疟原虫）中,可被间日疟、恶性疟病人血清识别的交及反应抗原。方法用50％、60％Percoll不连续梯度分离疟原虫感染红细胞,20mmolPBS被红细胞后,收集红内期原虫,以1％NP—40提取可溶性抗原。各种抗原经SDS—PAGE电泳后,转移至硝酸纤维膜上,分别用间日疟、恶性疾病人血清进行免疫识别。结果3神动物疟原虫红内期抗原中有多条蛋白区带可被间日疟或恶性疟病人血清识别。其中合蟹报疟原虫有14条蛋白带被间日疟病人血清识别,伯氏疟原虫有16条蛋白区带被恶性疟病人血清识别,分别多于其它疟原虫。间日疟病人血清可识别5种疟原虫共有的72kD蛋白,而恶性疟病人血清不识别该蛋白。结论人疟原虫和动物疟原虫之间有一系列支又反应抗原。会压滤疟原虫与间日疟原虫,伯氏疟原虫与恶性疟原虫之间抗原相似程度高于其它疟原虫。72kD．蛋白在间日疟无疾学诊断方面可能有实用价值。     

疟原虫纯化新方法的研究

目的：拟应用去白细胞输血器,建立一种快速简便纯化疟原虫的新方法,以去除宿主白细胞DNA干扰。方法：建立Pb ANKA株鼠疟模型;39只小鼠分为A组（新鲜虫血组,n=18）、B组（冻存虫血组,-80℃保存,n=16）及C组（正常对照组,n=5）;应用去白细胞输血器对血样进行过滤纯化,观察比较过滤速度及血样处理（新鲜、冻存）对去除白细胞效果的影响;血细胞计数板和血涂片吉姆萨染色法计数各样本过滤前后白细胞、红细胞、原虫率并观察疟原虫形态和疟原虫密度。滤过后的血液提取DNA,PCR验证白细胞滤过效果。结果：经血细胞计数板计数,3组白细胞平均去除率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;C组红细胞的回收率高于A组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;B组则仅见原虫。白细胞过滤后疟原虫形态及密度无明显改变。PCR鉴定PbGAPDH结果 A、B组均为阳性,而小鼠GAPDH均为阴性。结论：建立了白细胞输血器一步法纯化疟原虫的新方法。该方法简便、快速、廉价,是进行疟原虫分子生物学、免疫学等方面的研究不可或缺的实用技术。     

鼠疟原虫对小鼠某些遗传、病理变化的影响

为了解伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)和约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染小鼠后,对宿主的遗传、病理、生化变化的影响,我们观察了染虫后小鼠的外周血淋巴细胞微核率,精子畸形率,三种血清同工酶及肝肾的病理、生化改变。结果如下。给小白鼠(昆明株)腹腔接种鼠疟原虫。当血原虫率达60％时,取鼠尾血分离淋巴细胞,制成涂片,经Giemsa染色后观察有微核细胞数。伯氏疟原虫和约氏疟原虫感染小鼠后,淋巴细胞微核率分别为5.33‰和2.33‰,正常对照组微核率为1.2‰。伯氏疟组血微核率与对照组比较相差非常显著(P<0.01),而约氏疟组则相差不明显(P>0.05)。显示伯氏疟原虫可导致小鼠遗传损伤。     

转基因伯氏疟原虫的建立及报告基因表达的初步研究

目的:通过转染含有绿色荧光蛋白(GFP)和PbfMSP1片段的重组质粒,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫MSP-1 19 000片段(PfMSP1-19)的转基因伯氏疟原虫.方法:构建重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.伯氏疟原虫ANKA株经培养和分离后用电转化方法转入重组转染质粒,药物筛选转化原虫后进行PCR检测,并于荧光显微镜下检测报告基因GFP的表达.结果:构建了重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的伯氏疟原虫.PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在GFP和PbfMSP1基因.结论:重组质粒已成功转染伯氏疟原虫并表达了GFP报告基因,建立了伯氏疟原虫转染技术.     

寄生虫学练习题

~、名词解释 寄生齐生虫宿主生活史终宿主中间宿主保虫宿主感染阶段蠕虫原虫医学昆虫裸介昆虫一芝态全变态 二、漫住选择甩(在字母上画圈) 1.仕氏利什曼原虫主要寄生于:A.肝细 胞B。红细胞c.多核白细胞D。巨噬细胞E.网织红细胞 2.浇道毛滴虫的感染阶段:A.大滋养体 B.小滋养体C.滋养体D.包囊E.成热包囊 3。输血可感染:A.溶组织内阿米巴马。自由生活的致病阿米巴C.丝虫D.疟原虫 E。弓浆虫 4.黑热病的重要保虫宿主:A。猫B。狗C.绪D.鼠E。牛 5。引起肝孩肿的原虫:A。溶组织内阿米巴B.自自生活的致一扁阿米巴C.社氏利什曼原虫D.疟原虫E…     

5种疟原虫红内期可溶性蛋白质图谱比较

目的　比较 5种疟原虫 (间日疟原虫、恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、约氏疟原虫、伯氏疟原虫 )红内期可溶性蛋白电泳图谱。方法　用 1%NP - 40提取 5种疟原虫红内期可溶性蛋白组分。各种蛋白提取物经十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)后氨银染色 ,所得蛋白图谱经光密度扫描进行分析。结果　 5种疟原虫蛋白区带波峰位置和大小各不相同 ,显示较大差异。但有两个区带为 5种疟原虫共有区带 ,其分子量分别为 72KD和6 4KD。在 5种疟原虫中 ,以伯氏疟原虫与约氏疟原虫蛋白区带相似性最高。结论　 5种疟原虫红内期蛋白组分差异较大 ,伯氏疟原虫与约氏疟原虫种间进化关系较接近     

约氏疟原虫红内期18S UrRNA和Pir基因扩增实验条件的研究

目的 扩增红内期约氏疟原虫相关基因方法的建立和优化.方法 收集约氏疟原虫感染昆明株小鼠抗凝全血,不处理或分别用淋巴细胞分离液去除白细胞、分离后破碎红细胞,提取总RNA,分别用Olig(dT)15和随机引物进行常规反转录,在不同的MgCl2浓度条件下,PCR扩增约氏疟原虫18S UrRNA和Pir基因.结果 经过淋巴细胞分离液分离处理组提取的RNA的纯度相对较高,可达1.9以上,但是3种处理方式在MgCl2浓度大于等于2 mmol/L条件下,可成功扩增出约氏疟原虫的Pir基因,但是只有随机引物进行反转录组才能成功扩增出18S UrRNA.结论 不处理疟原虫感染全血提取的RNA纯度较低,但是能在2 mmol/L MgCl2条件下成功扩增疟原虫相关基因;18S UrRNA只能从随机引物进行反转录组中成功扩增.     

用死卡介苗保护小白鼠防止柏氏鼠疟原虫(P.berghei)感染

用卡介苗保护动物防止感染寄生原虫,如巴贝斯虫(Babesia)、弓浆虫(Toxopl-asma gondii)和锥虫(Frypanosoma)等曾先后有报告。Clark等(1976)用活卡介苗静脉接种小白鼠以保护小白鼠不感染柏氏鼠疟原虫约氏亚种(P.berghei yoelii)和芬氏疟原虫(P.vinckei)获得成功。1978年我们用死卡介苗经皮下、皮内不同途径接种小白鼠,然后用柏氏鼠疟原虫攻击,观察小白鼠能否受到保护。     

约氏疟原虫动力素蛋白(PyDyn)的基因克隆及其结构域的免疫特性

目的 分离、克隆约氏疟原虫动力素蛋白(Plasmodium yoelii dynamin-like proteon,PyDyn)基因,并用其在原核表达的蛋白结构域产物做候选疫苗,研究其免疫保护性。方法 应用约氏疟原虫基因组数据库,设计特异引物,用RT—PCR法从约氏疟原虫红内期mRNA扩增PyDyn基因编码区;分析其序列特性;原核表达约氏疟原虫动力素结构域蛋白、IPA分析其免疫原性。结果 从鼠约氏疟原虫mRNA扩增的PyDyn基因编码区是一个全长为2433bp的cDNA克隆,编码811个氨基酸的蛋白肤链,具有典型的动力素蛋白家族的结构特性。该基因GeneBank登录号为AF458071。IFA表明该虫源性结构蛋白(PyDyn)的第1、3、5结构域的抗血清可以识别约氏疟原虫感染的红细胞。结论 经分离、克隆和表达的新PyDyn有望成为疟疾疫苗的候选抗原分子。     

伯氏疟原虫在-20℃保存下原虫复苏成功率

将伯氏疟原虫感染小鼠,当其血原虫密度大于３０－００ ％ ,置病鼠于－ ２０ ℃低温冰箱保存。经不同时间后,迅速解冻,心脏取血,经腹腔内接种健康小鼠,以观察原虫复苏成功率。结果表明：低温保存５０ ～１００ ｄ 和１０１～１５５ ｄ,病鼠复苏成功率分别为３３－３３ ％ 和２０－００ ％ 。提示该法仍不适为一种简便可行,行之有效的低温保存方法。     

红内期间日疟原虫浓集纯化及免疫反应性研究

目的：建立白细胞滤器（Plasmodipur）联合Percoll密度梯度离心浓集纯化红内期间日疟原虫（P.v）的方法。分析和比较皂素与冻融两种处理方法制备的P.v抗原与P.v感染者混合血清免疫反应性的差别。方法：P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分离去除白细胞,经60%Percoll浓集其中的感染红细胞（iRBC）。采用皂素法和冻融法从iRBC中释放疟原虫,经超声粉碎,所获P.v可溶性抗原和同样处理的正常红细胞（nRBC）成分经SDS-PAGE电泳分析其组分差别,并应用P.v感染者、正常对照混合血清与相应的抗原进行免疫印迹分析,确定具有免疫原性的抗原组分。结果：115例P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分离去除白细胞,每10个油镜视野中WBC残留≤5个99例（86.1%）,经60%Percoll浓集的35例样本中,共有30例（85.7%）能提高iRBC比例至60%以上。SDS-PAGE电泳分析,皂素处理与冻融处理的P.v抗原分别显示出6条和2条P.v特异性蛋白条带。免疫印迹分析表明,P.v感染者混合血清能特异性地识别22、24.5、29、35、36 kDa皂素处理的P.v抗原,26、49、59、63、115、120 kDa冻融处理的P.v抗原。结论：血样中疟原虫皂素与冻融两种处理方法制备的P.v抗原与P.v感染者混合血清免疫反应性存在明显差异,其中皂素处理的22 kDa抗原组分具有较强的免疫原性,其作为P.v特异性诊断抗原的价值有待进一步研究。     

初探日本血吸虫SWA及SEA对Ⅰ型糖尿病小鼠血糖的抑制作用

目的：探讨日本血吸虫SWA及SEA对实验性Ⅰ型糖尿病小鼠血糖的抑制作用。方法：制备日本血吸虫可溶性成虫抗原（Soluble worm antigen ,SWA）与可溶性虫卵抗原（Soluble egg antigen ,SEA）并构造实验性Ⅰ型糖尿病小鼠模型。把24只糖尿病实验小鼠随机平分为A、B、C组（每组8只）。A组实验小鼠从腹部皮下多点免疫注射日本血吸虫SWA ;B组实验小鼠从腹部皮下多点免疫注射日本血吸虫SEA ;C组实验小鼠用PBS进行腹部皮下多点免疫,3组小鼠每周免疫1次,连续免疫4周后,采小鼠尾静脉血,检测实验小鼠的血糖变化。结果：B组实验小鼠的血糖在4周左右为（9．85＆#177;1．17）mmol/L ,有明显降低,相比C组小鼠血糖（12．14＆#177;1．25）mmol/L具有显著性差异（P＜0．01）,但A组实验小鼠血糖在4周左右为（12．11＆#177;0．67）mmol/L与C组小鼠血糖无显著差异（P＞0．05）。结论：日本血吸虫SEA 对实验性Ⅰ型糖尿病小鼠的血糖具有一定的抑制作用,其机制可能是日本血吸虫SEA刺激了机体的免疫应答,导致T h1反应向T h2反应偏移。     

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

Effect of pre-existing Schistosoma haematobium infection on Plasmodium berghei multiplications in imprinting control region mice

Objective: To investigate the effect of pre-existing Schistosoma haematobium(S. haematobium) infection on malaria disease severity.Methods: The study involved the use of twenty-i ve imprinting control region mice, i fteen of which were initially infected with S. haematobium. Five of the remaining ten schistouninfected mice together with i ve schisto-infected mice were infected with Plasmodium berghei(P. berghei) after four weeks(acute stage) of schistosoma infection. The remaining i ve schisto-uninfected mice together with i ve schisto-infected mice were also infected with P. berghei after seven weeks(chronic stage) of schistosoma infection. The last i ve schistoinfected mice were used as control group. They were then monitored for changes in P. berghei parasitaemia on Days 3, 5, 7, 9 and 11 post-infection. Records on their survivability were also taken.Results: The co-infected mice had signii cantly higher malaria parasitaemia, compared with the mono-infected mice during acute S. haematobium infection. In contrast, the co-infected mice had signii cantly lower malaria parasitaemia during chronic S. haematobium infection and a higher survival rate.Conclusions: Co-infection of mice with P. berghei during acute S. haematobium infection resulted in rapid P. berghei development and increased malaria parasitaemia. However, the co-infection resulted in slower P. berghei development and decreased malaria parasitaemia with enhanced survivability of the mice during chronic S. haematobium infection. Therefore, pre-existing chronic S. haematobium infection may provide some protection to the host by reducing parasitaemia.     

鼠疟原虫引起血小板减少药物干预效果的观察

目的了解退烧药、抗生素及激素对感染鼠疟原虫引起的血小板减少是否具有恢复的效果。方法健康昆明小鼠腹腔接种感染伯氏鼠疟原虫,当感染鼠血小板明显低于正常值后,分别采用临床常用的大环内酯类、β内酰胺类和喹诺酮类抗生素、退烧药及激素类药物按照人体治疗量的10倍灌服或肌注方法给药3d,每12h采血1次做血小板计数观察。每5只小鼠为一个观察试验组,每种药物采用一组小鼠试验观察取平均数据,并设正常对照组。结果正常鼠血小板平均计数为256×109/L。健康鼠感染鼠疟原虫后第8d,各组感染鼠血小板计数平均降至90×109/L后,开始灌服各类抗生素和肌注氨基比林及地塞米松,除阿奇霉素观察组治疗3d后血小板计数平均恢复至201×109/L水平外,其它抗生素和退烧药及激素均对感染鼠疟原虫所引起的血小板明显减少恢复无影响。结论除阿奇霉素外,复方氨基比林、阿莫西林、左氧氟沙星、地塞米松对鼠疟原虫感染小鼠血小板减少无明显效果。     

伯氏疟原虫氯喹抗性株红内期虫体在肝内的清除

目的：探讨伯氏疟原虫（Plasmodium berghei)氯喹抗性（RC）株红内期虫体在宿主体内消亡的机制。方法：电镜观察感染伯氏疟原虫RC株和药物敏感（N）株小鼠肝脏内白细胞和疟原虫的相互作用。结果：感染N株小鼠的肝脏内未见白细胞增生、浸润、感染RC株小鼠肝脏的门管区和血窦内可见大量单核－巨噬细胞和少量淋巴细胞及中性粒细胞增生、浸润,并伴有大量感染疟原虫的红细胞滞留。活化的单核－巨噬细胞和感染疟原虫红细胞的表膜相互粘附,大量与吞噬细胞直接接触或未接触的感染疟原虫红细胞内的虫体出现危机状态（crisis form)。偶见巨噬细胞吞噬游离的裂殖子,但未见吞噬整个感染疟原虫红细胞。结论：宿主可能主要通过活化单核－巨噬细胞诱导疟原虫发生危机状态,清除RC株红内期疟原虫,而并非依赖白细胞直接吞噬、溶解疟原虫。     

伯氏疟原虫感染小鼠后血清过氧化脂质含量的动态变化

本文采用TBA荧光法测定了伯氏疟原虫感染小鼠后不同时期小鼠血清中丙二醛的含量,结果表明小鼠血清丙二醛含量呈直线升高,并与原虫血症和贫血程度密切相关。提示脂质过氧化反应增强.可能是导致鼠体内溶血及其他病理损伤的原因之一,也可能在介导对疟原虫的氧化杀伤中起部分作用。