阿德福韦酯耐药株感染者乙型肝炎病毒基因型和多聚酶区基因变异分析

目的了解阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型、多聚酶区基因变异位点和变异类型,并分析HBV基因型和多聚酶区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测73例阿德福韦酯耐药患者HBV基因型、多聚酶基因区变异位点、病毒载量。结果 73例阿德福韦酯耐药株感染者中,HBV B基因型占35.6%,C型占64.4%;HBV多聚酶基因区基因突变位点主要以rtA181V/T(39.8%)、rtN236T(31.5%)为多见,rtA181V/T+rtN236T(20.5%),其他(8.2%);其中rtA181V/T位点变异中B型占10.3%,C型占89.7%;rtN236T位点变异中B型占78.3%,C型占21.7%。rtA181V/T+rtN236T位点变异B型占26.7%,C型占73.3%;基因型B和C的病毒载量分别为(6.38±1.24)lg和(6.27±1.10)lg拷贝/毫升。结论阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型主要为B型和C型;HBV多聚酶区基因突变位点主要为rtA181V/T和rtN236T,基因型与多聚酶区基因突变位点之间有一定相关性。C基因型易发生rtA181V/T变异,B基因型多出现rtN236T变异。C基因型比B基因型更易出现rtA181V/T+rtN236T双突变,可能与C基因型容易导致的严重的肝脏疾病有关,基因型与病毒载量之间无相关性。     

阿德福韦酯耐药患者HBV基因型的相关分析

目的探讨慢性乙型肝炎、肝硬化患者阿德福韦酯治疗过程中出现耐药变异与HBV基因型的关系,为优化临床抗病毒治疗提供依据。方法对近年来山西地区122例慢性乙型肝炎、肝硬化患者阿德福韦酯抗病毒治疗过程中出现病毒学反弹患者,采用巢式PCR法检测血清HBV基因型;采用巢式PCR-DNA测序法检测患者血清标本HBVDNA位点,观察是否存在rtA181V/rtN236T变异,并分析其与基因型的关系。结果 122例患者中B基因型7例占5.74%;C基因型115例,占94.26%;在性别上,B、C基因型差异均无显著性意义（P〉0.05）;C型肝硬化率明显高于B基因型（P〈0.05）;均发生了rtA181V和/或rtN236T位点变异。结论 C基因型可能与阿德福韦酯耐药变异及肝硬化关系密切。     

慢性乙型肝炎患者乙肝病毒B、C基因型和阿德福韦酯耐药基因的相关性

目的:研究本地区HBV基因型分布;探讨阿德福韦酯长期治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型和阿德福韦酯耐药基因突变的关系。方法:选取320例阿德福韦酯治疗>3年,治疗前乙肝病毒载量>105拷贝/ml、无相关耐药基因的自然变异并符合其他入选标准慢性乙型肝炎患者进入此研究。PCR法检测HBV基因分型,305例单一B型或C型的患者中,36例可疑耐药的患者用基因芯片法检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯相关耐药突变位点。结果:①慢性乙型肝炎患者中HBV基因型包括B型53.1%(170/320)、C型42.2%(135/320)、B和C混合型4.7%(15/320)、未检出其他型。②305例基因型为B型或C型的患者中36例发生病毒学突破,病毒学突破率为11.8%。③36例出现病毒学突破的患者中有35例检测出阿德福韦耐药突变基因型。B基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占54%(19/35),C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占46%(16/35),B、C两种基因型耐药基因突变率无差别(P=0.854)。④C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变主要为N236T及其混合突变型69%(11/16)。结论:皖南地区HBV基因型以B型为主;HBV基因型与阿德福韦酯耐药突变无关,但C基因型患者以N236T及其混合突变型为主;检测HBV基因型和相关耐药突变是评价慢性乙型肝炎临床治疗疗效的重要指标。     

HBV准种变异与阿德福韦酯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎持续疗效的关系

目的观察阿德福韦脂治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者HBV聚合酶（HBV-P）基因序列的准种组成及变异特点,探讨其与抗病毒疗效的关系。方法巢式PCR法扩增HBV-P基因中覆盖B区-E区序列的基因片段,PCR产物纯化后直接测序。用DNASTAR软件的CLUSTALV方法对HBVDNAP基因片段的核苷酸和氨基酸差异、变异类型进行分析,以评估HBV准种复杂性。128例HBeAg阳性慢性乙肝患者予阿德福韦酯10mg,每日一片口服,抗病毒治疗48-96周,疗效评估包括HBVDNA血清学、HBeAg/HBeAb血清学转换及生化学应答。观察阿德福韦酯治疗完全应答组、部分应答组和无应答组病人治疗24周、48周、96周的准种组成特点,并分析其与疗效的关系。结果 128例患者应用阿德福韦酯治疗两年,完全应答23例,部分应答86例,无应答19例。HBVDNA转阴率50.8%（65/128）,HBeAg血清转阴率为21.1%（27/128）,ALT复常率为60.9%（78/128）。7例患者产生了病毒变耐药变异,其中4例为rtn236T变异,2例为rtA181V变异,1例为rtN236T和rtA181V联合变异,耐药率为5.4%。所有患者HBV准种变异在治疗24周、48周、96周时均具有不同程度的改变,无应答组24周与48周时HBV准种复杂性显著高于完全应答组（P〈0.001）。结论慢性乙型肝炎患者血清HBVP区存在准种现象,且该区准种随宿主病程进展可发生动态变化。HBVP区准种变异的复杂性及异质性与慢性乙型肝炎患者阿德福韦酯抗病毒治疗的持续疗效存在负向相关性。     

核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎患者的HBV耐药位点分析

目的:采用核苷类似物对乙型肝炎患者进行治疗,分析HBV基因耐药位点情况,为慢性乙型肝炎患者的临床治疗提供参考。方法:选取2018年12月-2019年12月在贵州航天医院接受核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者105例为研究对象,先给予患者PCR反向点杂交检测,随后对患者的HBV基因分型进行明确,并检测患者的耐药变异位点,此过程分别采用HBV基因分型和耐药相关检测实现,分析检测结果。结果:105例慢性乙型肝炎患者中,检出HBV-B型基因耐药变异23例(21.90%),HBV-C型基因耐药变异81例(75.24%),HBV-其他型基因耐药变异3例(2.86%)。共检测出HBV基因耐药变异位点9个,分别为rtL80M、rtA181V、rtA181T、rtT194L、rtS204I、rtM204V、rtN236T、rt180M+rt204V/I、rtA181T+rtN236T;其中HBV-B型基因耐药变异位点检出率为91.30%,HBV-C型基因耐药变异位点检出率为94.94%,HBV-其他型基因耐药变异位点检出率为100.00%。结论:慢性乙型肝炎患者的HBV基因耐药变异位点多且复杂,不同...     

拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者接受单剂量阿德福韦治疗48周:阿德福韦耐药的风险亦增加

尽管阿德福韦酯(A DV)在应用于未经治疗的慢性乙型肝炎患者时具有独特的延迟效应,并且极少发生耐药,但是ADV耐药性与先前的拉米夫定(LAM)耐药是否有关仍不清楚。该研究旨在比较LA M耐药者与未经治疗者在接受ADV单剂量治疗48周后ADV耐药株(rtA181V/T与rtN236T)的发生率。研究选取LAM耐药组患者57例,未经治疗组患者38例,经10m g/dlADV治疗48周以上,分别采集基线期及治疗48周时的血液标本,通过限制性片段长度多态性分析ADV耐药突变株。抗病毒反应的评估依据为:实时PCR测得的血清H BV-DN A变化、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平、…     

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎过程中发生病毒突破患者的(HBV)P基因变异分析

目的观察阿德福韦酯（adefovir dipivoxil,ADV）单药治疗慢性乙型肝炎（慢乙肝）过程中发生病毒突破的患者乙型肝炎病毒（HBV）P基因区变异发生情况。 方法选取51例阿德福韦酯单药治疗（10mg/d,疗程＞12月）发生病毒突破的慢乙肝患者作为研究对象,分别检测随访发现病毒突破时患者的血清ALT、HBV DNA水平,并采用PCR产物直接测序法分析HBV P区基因的变异发生情况。结果51例患者中有37例检测出阿德福韦酯耐药相关变异,且rt181位点变异多于rt236位点（分别为33例和8例,其中两位点联合变异4例,P＜0.001）。联合变异患者其血清HBV DNA水平高于单一变异患者［分别为（6.53±0.45）log10拷贝/mL、（5.37±1.08）log10拷贝/mL,P＝0.043］。结论在应用阿德福韦酯单药治疗的慢乙肝患者中可筛选出HBV P基因区的相关耐药变异,不同耐药位点患者的HBV DNA水平可有差异。     

阿德福韦酯治疗失败的慢性乙型肝炎患者的耐药分析

目的 探讨阿德福韦酯(ADV)治疗失败慢性乙型肝炎(CHB)患者的基因型耐药情况.方法 收集ADV治疗失败CHB患者的血清样本及临床资料,将患者分为病毒学突破组与应答不佳组,应用PCR产物直接测序法联合焦磷酸测序法进行基因型耐药检测;比较两组患者耐药发生情况,并分析耐药发生与患者抗病毒治疗的关系.结果 共210例ADV治疗失败的CHB患者纳入研究,其中病毒学突破组106例,应答不佳组104例.两组共检出耐药变异67例(31.9％),其中rtA181V/T位点变异38例(18.1％),rtN236T变异7例(3.3％),rtA181V/T+rtN236T联合变异22例(10.5％).病毒学突破组耐药检出率显著高于应答不佳组(42.5％ vs.21.2％;x2=10.961,P=0.0009).病毒学突破组rtA181T变异患者比例低于应答不佳组(28.9％ vs.59.1％;x2=5.676,P=0.017).病毒学突破组拉米夫定(LAM)经治换用ADV患者的ADV耐药基因变异检出率显著高于ADV初治患者(56.5％ vs.31.7％;P=0.010).应答不佳组LAM经治换用ADV的耐药基因变异检出率亦显著高于ADV初治患者(31.3％ vs.12.5％,P=0.020).结论 ADV治疗失败患者ADV基因型耐药检出率为31.9％,对于ADV治疗≥48周应答不佳者,即使未出现病毒学突破,也应酌情考虑进行耐药检测.     

阿德福韦耐药的乙型肝炎与病毒反跳和肝脏失代偿有关

背景与目的:阿德福韦耐药的H BV突变的易感性在体外实验中仅降低3～10倍,提示病毒反弹和临床病情恶化并不相同。该研究旨在描述阿德福韦耐药的H BV感染患者的临床过程。方法:对阿德福韦治疗反应差或病毒反弹患者中的阿德福韦耐药突变进行检测。采用线性探针检测法和H BVP基因的直接测序法检测阿德福韦耐药突变。结果:8例曾有拉米夫定耐药或病毒反弹的男性患者(年龄47±13岁)存在阿德福韦耐药突变rtA181V/T或rtN236T。基线ALT的中位值为66U/L(极差27～1161),H BV-DNA中位值为7.9log10拷贝/m l(极差6～8.3)。阿德福韦耐药发生时(20…     

乙肝患者阿德福韦酯基因型耐药的临床研究

目的：了解阿德福韦酯治疗慢性乙肝患者产生基因型耐药的原因。方法：对我院2001年3月-2006年3月收治入院的慢性乙肝患者300例进行阿德福韦酯治疗,在治疗的不同阶段检测患者HBV—DNA水平,了解患者阿德福韦酯的基因型耐药。结果：300例乙肝患者经阿德福韦酯治疗,3年时间内15例患者出现基因型耐药。结论：经研究证明阿德福韦酯在治疗过程中基因屏障较低。     

乙型肝炎病毒逆转录酶区N236T单独突变与N236T+A181T联合突变患者临床特征的比较

目的 了解乙型肝炎病毒(HBV)逆转录酶区N236T单独突变患者与逆转录酶区N236T+A181T联合突变患者核苷(酸)类药物应用情况和病毒学特点的异同。方法 对发生HBV逆转录酶区N236T单独突变与逆转录酶区N236T+A181T联合突变的慢性乙型肝炎患者的血清HBsAg、HBV DNA和丙氨酸转氨酶(ALT)水平进行检测和HBV基因分型,并对所有患者的核苷(酸)类药物治疗史进行回顾性调查。结果 逆转录酶区N236T单独突变组与逆转录酶区N236T+A181T联合突变组相比较,两者血清HBsAg水平的差异无统计学意义(P=0.975 5),但后者血清HBV DNA(P=0.001 4)和ALT(P=0.003 2)水平高于前者。此外,C型较B型容易发生rtN236T+rtA181T联合突变(40% vs 20.45%,P=0.023 5),由拉米夫定换用阿德福韦的治疗方式容易引起病毒突变。结论 HBV逆转录酶区N236T单独突变患者与逆转录酶区N236T+A181T联合突变患者在引起突变的核苷(酸)类药物的使用情况上存在一致性(拉米夫定换用阿德福韦),但基因型构成和血清病毒学指标存在明显差异。     

核苷（酸）类似物相关HBV P基因区耐药变异的焦磷酸测序

目的  分析HBV P基因区核苷(酸)类似物相关10个位点的变异情况。方法  采用焦磷酸测序法对NA治疗并发生病毒学突破或不充分病毒学应答的慢性乙型肝炎患者HBV P基因区10个位点(rtI169T、rtV173L、rtL180M、rtA181V/T、rtT184G、rtA194T、rtS202I、rtM204V/I、rtN236T、M205V)进行检测。结果  拉米夫定(LAM)耐药48例,4个耐药位点呈8种模式,以rtM204为主;阿德福韦酯(ADV)10例,2个耐药位点呈4种模式,以rtA181为主;替比夫定(LdT)4例,2个耐药位点呈2种模式,均存在rtM204I;恩替卡韦(ETV)6例,7个耐药位点呈4种模式,以rtT184多见。结论  应用NA可筛选出HBV P基因区的相关耐药变异,建议病毒突破患者检测耐药并行个体化治疗。     

慢性乙肝患者及HBV携带者CD8^＋T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达研究

目的研究慢性乙肝（CHB）患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8＋T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况,并探讨其与疾病进展的关系。方法收集32例经阿德福韦酯治疗的CHB患者,31例HBV携带者和28例正常对照,采集CHB患者治疗前后及HBV携带者和正常对照外周血。采用流式细胞术检测CD4＋和CD8＋T细胞数量和比例,以及CD8＋CD38＋和CD8＋HLA-DR＋T细胞比例,HBV DNA和生化由本院检验室检测。结果 CHB患者治疗前CD8＋CD38＋T细胞比例显著高于HBV携带者和正常对照组,阿德福韦酯治疗后显著降低（P〈0.05）。HBV携带者CD8＋CD38＋T细胞比例高于正常对照组（P〈0.05）。CHB患者治疗前CD8＋HLA-DR＋T细胞比例显著高于正常对照组（P〈0.01）,但与HBV携带者无明显差异,阿德福韦酯治疗后显著下降,仍高于正常水平（P〈0.05）。结论 HBV感染可以引起CD8＋T活化水平显著升高,阿德福韦酯抗病毒治疗能够降低CD8＋T的活化。CD8＋T活化水平是良好的HBV感染病情评价指标。     

核苷(酸)类似物抗HBV过程中出现短暂性病毒学突破与逆转录酶区基因变异的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者经核苷(酸)类似物抗病毒治疗后出现短暂性病毒学突破与逆转录酶区基因变异的关系。方法在随访门诊中抽取16例接受核苷(酸)类似物抗病毒治疗出现短暂性病毒学突破者的预留血清,并提取HBV DNA,采用巢式PCR方法扩增HBV逆转录酶区基因,PCR产物回收纯化后直接测序,将直接测序结果用DNASTAR进行分析,找出HBV逆转录酶区基因的变异位点和相应的氨基酸。结果 16例短暂性病毒学突破患者HBV逆转录酶区均出现不同程度的点突变,其中主要的变异位点rtI/F122L、rtQ130P、rtS135Y、rtK149Q、rtW275替换为终止密码子(TAG)、rtV266I、rtH/Q271E的发生频率分别为56.3%、37.5%、43.8%、56.3%、50.0%、37.5%和37.5%,但无一例出现既往报道的常见耐药位点(rtI169T、rtV173L、rtL180M、rtA181V/T、rtT184G、rtA194T、rtS202I/G、rtM204I/V、rtI233V、rtN236T、rtM250V/L)变异。结论短暂性病毒学突破者逆转录酶区可出现不同程度的核苷酸位点变异及氨基酸替换,但均未检测到核苷(酸)类似物相关的常见耐药位点的变异。     

肝脏病学

冷球蛋白血症与慢性丙型肝炎的肝脂肪变性及纤维化相关,慢性HCV感染角蛋白突变体与其肝纤维化进程相关,拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患接受单剂量阿德福韦治疗48周：阿德福韦耐药的风险亦增加,乙型肝炎病毒基因型与混合基因型对越南肝脏疾病进程的影响.[编按]     

慢性乙型肝炎病毒感染者阿德福韦酯诱导耐药突变与 预存耐药突变的比较分析

目的：对比分析慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者阿德福韦酯（ADV）诱导耐药突变与预存 耐药突变的临床及分子生物学特点