细胞外Ba~(2 )对双基因内向整流钾通道的阻断作用

目的 :研究 Ba2 对非洲爪蟾卵母细胞表达的双基因内向整流钾通道 (IRK1- T)的阻断作用。方法 :采用双微电极电压钳 (TEV)法。结果 :细胞外 Ba2 浓度分别为 1,3,10和 10 0μmol/ L ,K 浓度为 90 mm ol/ L ,可见 Ba2 的阻断作用对 IRK1- T的瞬间电流 (施加电压后 1m s)具有浓度依赖性、时间依赖性和电压依赖性 ;快速开通道阻断剂 Ba2 对 IRK1- T的通道开关特性几乎无影响作用 ,IRK1- T对之不通透。三级指数拟合表明 :细胞外 Ba2 低浓度(1和 3μm ol/ L )时 ,Ba2 与 K 相互竞争同一结合位点 ,随着 Ba2 浓度的增加 ,时间常数不增加但拟合的权数却浓度依赖性增加 ,所以失活过程随 Ba2 浓度的增加越来越快 ;细胞外 Ba2 高浓度 (10和 10 0μm ol/ L )时 ,时间常数随Ba2 浓度的增加而减少 ,拟合的权数却浓度依赖性减少 ,失活过程也越来越快 ,说明 Ba2 作用位点由通道的表面部位进入通道更深的地方。结论 :Ba2 对 IRK1- T的阻断存在两种不同的机制     

细胞外La~(3+)对内向整流钾通道(IRK1)的阻断作用

本文采用双微电极电压钳 (TEV)法研究细胞外La3+对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道(IRK1)的阻断作用。细胞外La3+浓度分别为 0 ,0 1,0 3,1,3和 10mmol/L ,K+浓度为 90mmol/L ,可见La3+对IRK1的瞬间电流 (施加电压后 1 5ms)具有La3+浓度依赖性、时间依赖性和电压依赖性阻断作用 ;阻断剂La3+对IRK1的门控特性和外向电流几乎无影响作用 ;细胞外加La3+后反转电位没有变化 ,因而IRK1对之不通透。细胞外La3+在减少IRK1电导的同时增加IRK1的归一化电导。三级指数拟合的结果表明 :拟合的时间常数不随La3+浓度的增减而增减 ,这表明细胞外La3+对IRK1的抑制作用可能通过了表面电荷机制或La3+在通道中的阻断位点在通道表面。因为La3+浓度较低时 ,阻断的效力与La3+浓度较高时的差异不大 ,所以La3+不会通过表面电荷机制进行IRK1阻断的 ,因此La3+是IRK1的一种快速开通道阻断剂 ,其阻断位点在通道表面     

细胞外La^3＋对内向整流钾通道（IPK1）的阻断作用

本文采用双微电极电压钳（ＴＥＶ）法研究细胞外Ｌａ＾３＋对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道（ＩＲＫ１）的阻断作用。细胞外Ｌａ＾３＋浓度分别为０,０．１,０．３,１．３和１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＾＋浓度为９０ｍｍｏｌ／Ｌ,可见Ｌａ＾３＋对ＩＲＫ１的瞬间电流（施加电压后１．５ｍｓ）具有Ｌａ＾３＋浓度赖性、时间依赖性和电压依赖性阻断作用;阻断剂Ｌａ＾３＋对ＩＲＫ１的门控特性和外向电流几乎无影响作用;细胞外     

关附甲素对单个心肌细胞钙通道和内向整流钾通道的阻断作用

用膜片钳全细胞记录法观察关附甲素（ＧＡ）对分离的单个豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙通道电流（ＩＣａ－Ｌ）和内向整流钾电流（Ｉｋ１）的影响。结果表明：ＧＡ抑制ＩＣａ－Ｌ：８,４０μＭＧＡ使ＩＣａ－Ｌ最大峰值从１０２０．８±１９７．３ｐＡ分别降至５２３．０±１０１．８和４２９．６±１２０．０ｐＡ（ｎ＝５,Ｐ均＜０．０１）,抑制率分别为４８．８％和５７．９％,ＧＡ使ＩＣａ－Ｌ的电流－电压曲线上移,但不改变其激活、峰值和反转电位。ＧＡ对Ｉｋ１没有影响,不改变Ｉｋ１的电流－电压曲线形态,亦不改变细胞的静息膜电位。结果提示ＧＡ对Ｉｃａ－Ｌ的阻滞作用为其抗心律失常效应的离子基础之一。     

心肌细胞内向整流钾通道研究进展

心肌细胞内向整流钾通道维持心肌细胞的静息电位,调控心肌细胞的兴奋性,其运输、组装、离子选择性和门控特性受到大分子复合体和外源因素的精细调节,内向整流钾通道结构和功能的异常与多种心脏病的发生相关。     

心肌内向整流钾通道（IK1）激动剂缺血预处理对再灌注性心律失常的影响

目的 在麻醉大鼠或离体灌流大鼠心脏建立缺血/再灌注（再灌注）性心律失常模型,应用心肌内向整流钾通道（IK1） 激动剂zacopride（扎考比利）中文 缺血预处理观察zacopride对再灌注性心律失常的效应并分析可能的机制。方法 在体实验：结扎SD大鼠心脏冠状动脉左前降支,局部缺血15 min,松扎后再灌15 min,建立再灌注性心律失常模型。在缺血前3 min（缺血预处理,pretreatment）分别给予1.5、15 或50 µg/kg zacopride。应用利多卡因（Lidocaine）做阳性对照药,IK1非特异性阻断剂氯喹拮抗zacopride的效应。全程连续记录心电图。离体实验：麻醉SD大鼠,开胸取出心脏,建立Tyrode液-Langendorff离体灌流系统,结扎SD大鼠心脏冠状动脉左前降支,局部缺血15 min,松扎后再灌15 min,建立离体再灌注性心律失常模型。缺血前3 min分别给予0.1、1或10 µmol/L zacopride观察预处理对离体再灌注性心律失常的影响,IK1非特异性阻断剂BaCl2 1 µmol/L拮抗zacopride的效应。结果 在体实验：应用1.5~50 zacopride缺血预处理可显著抑制再灌注诱发的心律失常,最适剂量为15 µg/kg（P<0.05）,与利多卡因效应相仿（P>0.05）;离体实验：Langendorff离体灌流心脏应用0.1~10 μmol/L zacopride缺血预处理可有效抑制再灌注心律失常的发生,1 μmol/L为zacopride作用最适浓度,其效应被1 μmol/L BaCl2明显逆转。结论 大鼠在体和离体实验证明,zacopride预处理可有效抑制再灌注性心律失常;应用低剂量的BaCl2可消除zacopride的抗心律失常作用,表明zacopride抗缺血-再灌注性心律失常作用是通过其激动IK1通道介导的。     

内向整流钾通道6.2亚基对鱼藤酮诱导PC12细胞毒性的调节作用及其相关信号通路的实验研究

目的:探讨ATP敏感性钾离子通道亚基内向整流钾通道(Kir)6.2过表达对鱼藤酮诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞毒性作用的调节作用及其相关信号通路。方法:转染Kir6.2质粒于PC12细胞48 h后,分别采用细胞免疫荧光和Western blot方法观察Kir6.2的表达,然后用水溶性四氮唑盐(WST-1)法检测3组细胞(正常对照组、转染组、空载体组)在500 nmol/L鱼藤酮处理24 h后的细胞活力;Western blot检测胞内蛋白激酶C(PKC)及磷酸化PKC(p-PKC)的变化。结果:细胞免疫荧光及Western blot结果显示转染组Kir6.2在细胞中表达较正常组和空载体组明显增高,WST-1检测发现转染组细胞活力较其他2组增高(P<0.05)。在Kir6.2过表达的PC12细胞中,p-PKC的活性上调,且不被PKC抑制剂所抑制。结论:Kir6.2过表达可拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞毒性,且这一神经保护作用与PKC信号通路相关,尤其是p-PKC。     

内向整流钾通道与2型糖尿病

钾离子内向整流通道Kir6.2与胰岛素释放密切相关，其与磺脲类受体（SUR）2共同构成胰岛B细胞膜上ATP敏感的钾通道。已发现的Kir6.2的突变类型有4个错义突变E10R，E23K，L270V，1337V和两个安静突变A190A，L267L。与2型糖尿病相关研究表明，在法国高加索族白种人人群中，位点E23K的多态性意义重大，而23，337位纯合子突变，270位为杂合子型导致健康正常人的胰岛素敏感性改变。     

内向整流钾通道6.2基因E23K多态性与2型糖尿病表型及格列齐特降糖疗效的关系

研究内向整流钾通道6．2（Kir6．2）基因E23K多态性对2型糖尿病临床表型及格列齐特降糖疗效的影响。结果提示K／K纯合子患者的血肌酐水平高于其它基因型患者（P〈0．01），E23K多态性不影响格列齐特的降糖疗效。     

心肌内向整流钾电流的调控因素及相关心律失常

心肌内向整流钾电流(I_K1)由内向整流钾通道(Kir通道)家族成员Kir2.1通道介导。细胞膜电位静息水平时Kir2.1通道处于开放状态,K⁺外流增加;而当膜去极化时,Kir2.1通道的通透性降低,K⁺外流减少。I_K1是形成心肌细胞静息膜电位的主要成分,在多种心律失常中发挥重要的作用。现就I_K1的调控及其相关心律失常做一综述。     

内向整流钾通道与2型糖尿病

钾离子内向整流通道Kir6 .2与胰岛素释放密切相关 ,其与磺脲类受体 (SUR) 2共同构成胰岛B细胞膜上ATP敏感的钾通道。已发现的Kir6 .2的突变类型有 4个错义突变E10R ,E2 3K ,L2 70V ,I337V和两个安静突变A190A ,L2 6 7L。与 2型糖尿病相关研究表明 ,在法国高加索族白种人人群中 ,位点E2 3K的多态性意义重大 ,而 2 3,337位纯合子突变 ,2 70位为杂合子型导致健康正常人的胰岛素敏感性改变。     

慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因对Kv2.1钾通道及内向整流钾电流的影响

目的探讨慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因对Kv2.1钾通道及内向整流钾电流的影响。方法构建携带Kir2.2基因干扰RNA的慢病毒载体(pGCSIL-Kir2.2-siRNA),并转染大鼠心房区心肌细胞,采用荧光显微镜观察携带报告基因GFP的慢病毒载体(pGCSIL-GFP-siRNA)在心肌细胞的转染情况,根据实验设计分为三组:Control组(不行慢病毒转染)、Ad-siRNA-null组(仅行空慢病毒转染)和Ad-siRNA-Kir2.2组(行pGCSIL-Kir2.2-siRNA慢病毒转染)。分别采用RT-PCR和Western印迹检测三组的Kir2.2基因的mRNA及Kv2.1钾通道的蛋白水平,采用膜片钳技术记录RNA干扰前后的心肌细胞内向整流钾电流(IK1)的变化情况。结果 pGCSIL-GFP/Kir2.2-siRNA慢病毒载体构建成功,且pGCSIL-GFP-siRNA转染心房肌细胞后,超过80%的细胞均可检测GFP(MOI=50),载体可正确表达;RT-PCR显示干扰后的细胞Kir2.2基因表达受到明显抑制,Ad-siRNA-Kir2.2组的Kir2.2基因的mRNA和Kv2.1钾通道的蛋白水平均下降,与其余两组相比均有差异(P<0.05);与Control组相比,Ad-siRNA-Kir2.2组的IK1减弱,电流密度降低,且电流-电压曲线上移,内向电流(-100 mV)和外向电流(-60 mV)均降低。结论慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因可降低Kv2.1钾通道的表达并抑制内向整流钾电流。     

利多卡因对离体大鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响

目的研究利多卡因对大鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响,探讨局麻药毒性反应中利多卡因导致心率变慢是否与抑制Ikl有关。方法酶消化法急性分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度利多卡因对大鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响并做出浓度效应曲线,求得其半数抑制浓度。结果保持电压-40 mV,钳制电压-120 mV条件下,局麻药毒性反应浓度的利多卡因100μmot／L使Ikl的电流幅值降低(21．1±7．4)％(P<0．05),但不改变Ikl翻转电压以及电流-电压曲线的形状;冲洗后,Ikl能够完全恢复。500,1000,5000μmoL／L的利多卡因抑制Ikl电流呈浓度依赖性,电流抑制率分别为(32．4±5．7)％,(71．8±8．9)％,(84．5±4．9)％,其IC50为1426．4μmoL／L。结论局麻药毒性反应中,利多卡因呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ikl,可能延长动作电位时程导致心率变慢。     

心肌肽素对豚鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响

目的研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)的影响,探讨心肌肽素抗心律失常的作用机制。方法用急性酶解法分离豚鼠心室肌细胞,用标准的全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的心肌肽素对内向整流钾电流的影响。结果在测试电压100mV的条件下,观察豚鼠心室肌细胞IK1内向电流对心肌肽素的影响。10μg/ml心肌肽素使IK1从给药前21.0±6.3pA/pF降低到给药后18.4±5.4pA/pF(P<0.05),抑制率为(20±3)%。50μg/ml心肌肽素使IK1从给药前22.8±5.5pA/pF降低到给药后16.0±3.8pA/pF(P<0.01),抑制率为(32±6)%。50μg/ml心肌肽素没有改变IK1的电流密度电压曲线形态。结论心肌肽素抑制豚鼠心室肌细胞IK1,可能是其抗心律失常作用的机理之一。     

咪达普利对家兔肥厚心肌内向整流钾电流跨室壁异质性的作用

目的探讨咪达普利（IMI）对家兔左室肥厚心肌（LVH）内向整流钾电流（IK1）的跨室壁不均一性的影响。方法用腹主动脉缩窄法制备家兔LVH模型,并口服IMI[0.625mg/（kg·d）]连续8周进行干预。取心脏分离左室游离壁3层心肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录IK1。结果因LVH模型心肌细胞膜电容增加所致IK1密度明显减少,心外膜下心肌、中层心肌和心内膜下心肌分别从（5.9±0.7）pA/pF、（6.1±0.5）pA/pF和（4.9±0.3）pA/pF降低为（4.4±0.5）pA/pF、（4.5±0.4）pA/pF和（2.1±0.2）pA/pF,各层细胞间电流密度差异加大。IMI处理后,可逆转心肌的病变,IK1的密度明显高于IMI未干预的LVH组（P<0.05）,心外膜下心肌、中层心肌和心内膜下心肌分别为（5.4±0.8）pA/pF、（5.8±0.6）pA/pF和（4.3±0.5）pA/pF,使3层细胞间电流密度的差异减小。结论IMI可逆转LVH后心肌细胞IK1的改变,减少跨室壁差异,提示可能是其减少LVH后发生快速心律失常的机制之一。     

自发性高血压大鼠肥厚左室心肌组织微小RNA-1与内向整流钾通道2.1表达的改变及其意义

目的观察自发性高血压大鼠(SHR)肥厚的左室心肌组织微小RNA-1、内向整流钾通道2.1(Kir2.1)表达的变化及其关系,以探讨高血压左心室肥厚(LVH)发生室性心律失常的分子机制。方法取10只17周龄雄性SHR为LVH组,10只8周龄雄性SHR为阳性对照组,10只17周龄雄性WKY大鼠作为空白对照组,通过HE染色、心肌细胞横径测量、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫组织化学法及Western blot检测等方法,检测大鼠左室心肌组织病理学改变、微小RNA-1表达、Kir2.1蛋白表达水平的改变。结果①与空白对照组比较,LVH组和阳性对照组的收缩压、舒张压明显升高(分别P<0.01,P<0.05);②与两对照组相比,LVH组的左室质量指数及心肌细胞横径均明显增大(均P<0.05),左室心肌细胞明显肥大,心肌间质增多,伴随着微小RNA-1表达水平明显升高,Kir2.1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);③LVH组大鼠左室心肌组织微小RNA-1与Kir2.1蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.720,P<0.05)。结论SHR肥厚左室心肌组织微小RNA-1表达上调,并伴随Kir2.1表达下调。     

特异性抑制内向整流性钾电流对缺血再灌注心脏的保护作用

目的探究转基因特异性抑制心脏内向整流性钾电流(IK1)的小鼠在缺血预适应中对缺血心脏的保护作用。方法选取IK1基因抑制小鼠分为2组:阳性表达者为观察组,阴性表达者为对照组。监测各组小鼠心律失常发生情况,采用离体心脏,观察缺血预适应对心脏缺血再灌注后心肌梗死面积、凋亡的影响。采用Western blot检测相关信号蛋白的表达。采用SPSS 17. 0软件进行统计学分析,样本间比较采用t检验。结果与对照组相比,观察组心律失常评分分值[(3. 50±0. 67) vs(7. 42±0. 70)分]、心肌梗死面积/左室面积的比值[(0. 25±0. 04)%vs (0. 38±0. 02)%]和心肌细胞凋亡指数[(202±93)‰vs (822. 5±97. 5)‰]均显著降低(P 0. 05)。Western blotting结果表明,与对照组相比,观察组磷酸化糖原合成酶激酶3[(1. 41±0. 16) vs (0. 77±0. 05)]和AKT[(1. 84±0. 20) vs (0. 81±0. 14)]及p-AKT[(1. 87±0. 27) vs (1. 08±0. 22)]均显著上调。结论 Kir2. 1转基因抑制可减少缺血预适应后再灌注心肌梗死中心律失常的发生、心肌细胞的凋亡及心肌梗死面积,其机制可能部分与再灌注损伤补救激酶信号通路有关。     

甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚时瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和钙电流的变化

目的 研究甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚模型的心肌细瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和钙电流的变化。方法 以ipL-甲门面腺素造成大鼠心肌肥厚模型后,用膜片钳技术记录心肌细胞瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和L型钙电流。结果 肥厚组心肌细胞瞬时外向钾电流幅度和心坎产增加,激活动力学特性无改变;内向整流钾电流幅度和密度也增加,激活动力学特性也无改变;而钙电流幅度、细胞膜电容增加,电流密度不变,半数激活电压（V1/2）向负电位方向移动,斜率（k)减小。结论 在甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚模型中瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和钙电流特性均发生了变化,这是造成肥厚心肌电生理异常的离子基础。     

心房颤动患者心房组织延迟整流钾通道基因表达的研究

目的 探讨心房颤动（AF）患者心房组织延迟整流钾通道（Kv1、5、HERG、KvLQT1通道）基因表达的变化。方法 以窦性心律组（SR组）为对照，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR），以三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）为内参照，检测35例风湿性心脏瓣膜病患者右心耳组织Kv1．5、HERG、KvLQT1通道的mRNA表达量。结果 和SR组相比，Kv1．5钾通道mRNA表达在慢性房颤组（CAF组）下降显著，有统计学意义（P〈0．05），在阵发性房颤组（PAF组）差异无统计学意义（P〉0．05）；HERG钾通道和KvLQT1钾通道mRNA表达CAF组和PAF组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论 Kv1．5钾通道转录水平下调可能是相应超速延迟整流钾电流（IKur）重构的分子基础，其基因表达异常是AF电重构的重要环节；HERG钾通道和KvLQT1钾通道在基因转录水平差异无统计学意义，与AF模型快速延迟整流钾电流（IKr）和缓慢延迟整流钾电流（IKs）无变化相符。