黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化

目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。     

RAPD的建立及优化研究

目的：建立优化的RAPD反应条件,为进一步进行遗传监控研究奠定基础。方法：按常规方法制备小鼠基因组DNA,在一定的RAPD－PCR反应条件下分别改变各组份浓度及退火温度。扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透射仪上观察照相。结果：当Mg^2 浓度为1．5mmol/L,4种dNTPs各为150μmol/L,Taq酶为1．5U,引物为0．2mol/L,模板DNA为50ng,退火温度为38℃,RAPD－PCR扩增效果好。结论：在优化的条件下规范操作,RAPD的稳定性、重复性好。     

百合鳞叶总DNA提取方法的改进

目的建立一种适合RAPD分析的百合鳞叶总DNA提取方法。方法在传统CTAB提取方法上,对其进行改良,进一步优化提取方法。结果用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6-2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足RAPD分析的要求。结论该方法提取百合鳞叶总DNA简便实用。     

菝葜RAPD扩增条件优化

目的 研究菝葜的RAPD-PCR扩增体系最适宜的条件。方法 采用CTAB提取方法，从菝葜的嫩叶中提取总基因组DNA，以此为模板，优化菝葜RAPD-PCR的反应条件。结果 最适宜的PCR扩增体系为：反应体积30 μL，内含0.20 μmol/L引物、200 μmol/L dNTP、40 ng模板DNA、2 U Taq DNA聚合酶、2 μmol/L Mg²⁺。结论 通过扩增条件优化实验，建立了重复性好、稳定性高的药用植物菝葜RAPD-PCR扩增体系最适宜的条件，筛选出条带清晰多态性好的14条随机引物，共扩增得到144条电泳带，其中有多态性带62条，检测到了62个多态性位点，多态率为43%。     

金钗石斛及其相似种RAPD优化和DNA多态性分析

目的:以金钗石斛为材料,建立石斛的RAPD优化条件,应用于石斛相似种的DNA多态性分析.方法:分别设置模板DNA,Mg2 ,Taq DNA聚合酶,dNTPs,引物的浓度梯度,优化RAPD反应体系.结果:在25 μl总反应体系中,以上反应物的用量分别为100 ng,3.0 mmol/L,1.0 U,0.2 mmol/L,0.4 μmol/L时所获得的石斛属DNA指纹图谱谱带型清晰、重复性好.其中用S48 扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,适合于石斛真伪鉴别;而S90 扩增的片段具有明显的多态性,适合于石斛遗传分化研究.结论:优化后的RAPD方法可作为研究石斛属植物的遗传多样性及真伪鉴别的有效方法.     

药用百合多糖提取纯化工艺的研究

目的:优化百合多糖提取、纯化工艺。方法:以水提醇沉法提取百合多糖,savage法去蛋白纯化。在单因素实验的基础上,采用正交试验的方法对影响百合多糖提取、纯化的因素进行优化。结果:百合多糖的最佳提取工艺为:在65℃下,用15倍药材量的蒸馏水提取3次,每次4h。最佳纯化工艺为:样品:氯仿(v∶v)为3∶2,氯仿:正丁醇为2∶1,振摇时间为15min。结论:优化的百合多糖提取纯化工艺简单、稳定,易于产业化规模生产。     

RAPD技术鉴定商品药材百合

目的鉴别商品药材百合及其混淆品,探讨商品药材鉴别的新方法。方法采用RAPD技术对商品药材百合进行了多态性分析,并构建聚类树型图。结果RAPD技术能从分子水平上检测种内差异,可以解决不同产地的商品药材百合与混淆品轮叶百合不易区分的难题。结论RAPD技术完全可以作为商品药材的一种较好的鉴别方法。     

连翘干燥叶片高质量DNA的提取方法研究

目的：探讨不同DNA提取方法对连翘干燥叶片的DNA质量及RAPD—PCR标记结果的影响,找出提取连翘总DNA的最佳方法。方法：分别用常规CTAB法、高盐低pH法和改良CTAB法提取连翘总DNA．分别进行琼脂糖凝胶电泳、紫外吸收A260／A280和RAPD—PCR分析,通过比较找出提取连翘总DNA的最佳方法。结果：以CTAB法为基础的改良CTAB法可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。结论：改良CTAB法是一种分离高质量完整DNA的简便、快速方法。     

石蜡标本DNA提取优化方案

目的 :探索从福尔马林固定石蜡包埋组织中提取出高纯度、高浓度DNA的优化方案,为临床DNA的常规检测提供快速、经济、实用的方法。方法 :选取2011年~2013年间于湖南省某大型医院收集的598例卵巢组织石蜡标本进行切片、脱蜡、DNA提取、PCR扩增、凝胶电泳及分析。结果 :提取的DNA中,69.4%的纯度能达到标准值,99%以上标本能扩增出内参。结论 :选择适合的切片厚度,脱蜡时间和方法,合理的消化酶浓度及时间,试剂的选取等均可改善提取DNA的质量。     

RAPD技术在肠炎沙门氏菌同源性分析中的应用

目的 研究2004年广州市3起肠炎沙门氏菌食源性疾病分离的20株菌株和来源于从业人员健康体检的18株肠炎沙门氏菌的分子特征,为肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法 采用随机引物扩增多态性DNA分析（randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD）对38株肠炎沙门氏菌进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析。结果 38株肠炎沙门氏菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,分属3个不同的克隆。结论 RAPD技术可用于肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源。     

近交系中国地鼠山医群体遗传结构的随机扩增多态分析

目的应用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对近交系中国地鼠山医群体的遗传结构进行多态分析。方法采用30条10bp引物对中国地鼠山医群体的A家系和E家系共24个个体进行RAPD扩增,分析家系的遗传纯度,探讨两个家系的亲缘关系。结果30条随机引物对供试的24个个体产生255条谱带。单个引物扩增的谱带数是2~17条,平均8条。所有样品的相似系数0.9431~0.9955之间变动,平均相似系数为0.9749。根据扩增出的RAPD图谱,运用SPSS软件包中的Wardmethod法进行聚类分析。结论供试中国地鼠A家系和E家系两个家系间存在一定程度的差异,中国地鼠A家系和E家系分别先聚为一类,中国地鼠群体间的分子聚类关系与各群体间的亲缘关系基本一致。     

RAPD在判别肺炎克雷伯菌暴发流行中的应用

肺炎克雷伯菌是重要的条件致病菌，常常引起老人及婴幼儿重症护理病房的交叉感染及暴发流行，追踪其传染源尤为重要，故多年来许多学者致力于细菌的克隆识别研究。1990年，Williams和Welsh几乎同时提出了一种遗传标记技术－随机引物PCR（RAPD）^[1,2]。本人于同一时期从两个病房共收集7株肺炎克雷伯菌，经RAPD分析后7株菌出现两个型。联合RAPD分析和表型分析证实肺炎克雷伯菌有流行趋势。     

肺炎克雷伯菌随机扩增多态性DNA的分子流行病学研究

目的采用随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法监测肺炎克雷伯菌医院感染。方法对临床分离的36株肺炎克雷伯菌进行RAPD基因分型,并通过指纹图谱比较与分析,确证医院感染爆发。结果36株肺炎克雷伯菌共分得33型,肺炎克雷伯菌医院感染局部流行共1起。结论RAPD可对肺炎克雷伯菌进行分子流行病学调查。     

霍山石斛种内遗传稳定性的RAPD初探

目的 研究霍山石斛荚果内遗传稳定性及荚果间的差异大小。方法 利用从20个随机引物筛选出来的3个稳定性较好的10碱基引物对来自5个不同荚果的霍山石斛种群进行RAPD检测。结果 5个荚果内遗传相似系数较大,在92.5926%-100.00%,其中H1、H9、H10、H14存在一定程度的变异,H23是一个较为稳定的群体;5个荚果间H1、H9、H10、H23的遗传距离较小,H14与其他4个荚果的遗传距离则较大。结论 建立霍山石斛稳定的无性快繁体系是切实可行的,同时说明霍山石斛种内存在一定的变异,H14与其他荚果的差异最大。     

贵州省同一产地野生和栽培天麻的RAPD分析

目的: 对贵州省同一产地野生和栽培天麻的遗传多态性进行分析.方法: 采用随机扩增多态性DNA标记技术.结果: 从30个随机引物中筛选到6个多态性强、重复性好的引物.该6个引物的扩增结果表明,贵州省同一产地野生和栽培天麻的指纹图谱有明显差异,差异系数为40%～60%,而栽培天麻之间的差异并不显著.结论: 本实验为天麻的分子生物学鉴定及天麻种质资源合理利用及科学的栽培育种提供了一定的科学依据.     

随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的 研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件。方法 在改变引物、Mg^2 、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下，采用RAPD法对酵母菌进行基因分型。结果 经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型。结论 RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法。     

我国仙茅属植物遗传关系的RAPD分析

目的 从分子水平研究我国仙茅属（Curculigo Gaertn.）植物的遗传关系。方法 对我国仙茅属植物7个国产种30个单株进行RAPD分析。运用Popgene Version1.31软件计算相关参数,采用UPGMA聚类法进行聚类分析。结果 11个RAPD引物共扩增出157条带,其中有145条呈多态性。我国仙茅属植物的遗传多样性极为丰富,在物种水平上,多态位点百分率（PPB）为92.36%,平均每个位点的有效等位基因数（N_e）为1.493 7, Nei’s基因多样性指数（H）为0.300 1,Shannon’s多样性信息指数H_sp为0.457 7。在种内水平上,PPB＝5.09%,N_e＝1.036 6,H＝0.020 4,种内Shannon’s多样性信息指数（H_pop）为0.029 8。Nei’s 基因多样性指数计算的种间遗传分化系数（G_st＝0.931 3）与Shannon’s分化系数（0.934 9）基本一致,均说明大部分遗传变异存在于种间。种间基因流（N_m）为0.036 9,说明种间基因流动较少,遗传分化程度较高。两种间的Nei’s遗传一致度（I）的范围为0.520 8～0.823 7。根据Nei’s遗传距离进行UPGMA聚类,基于RAPD分子标记的聚类结果与传统分类一致。结论 我国仙茅属植物的遗传多样性十分丰富,且种间的遗传差异大于种内的遗传差异。