EGCG抑制人胃癌SGC-7901细胞生长

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)抑制人胃癌(SGC-7901)细胞生长及诱导凋亡的生物学效应.方法:应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对SGC-7901细胞生长曲线的影响;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染法观察各组细胞凋亡形态,计算凋亡率.结果:EGCG显著抑制人胃癌(SGC-7901)细胞的生长,呈浓度依赖性;SGC-7901细胞经EGCG作用后,其细胞群体倍增时间明显延长,由(34.50±0.14) h延长到(97.74±0.33) h,细胞增殖周期延长,从而细胞增殖速度减慢;EGCG可以诱导SGC-7901细胞凋亡,且随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加.结论:EGCG具有显著抑制人胃癌(SGC-7901)细胞的生长,诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡的作用.     

EGCG对结肠癌细胞RECK基因甲基化以及p38磷酸化的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EQCO）对结肠癌细胞HT29RECK基因甲基化及p38信号通路的影响。方法用50uMEGcG以及p38特异性抑制剂SB203580与培养的HT29细胞孵育36h,甲基化特异性PCR（MSP）检测RECK甲基化情况,并用Westernblot检测p38的磷酸化改变。结果MSP结果显示EGCG、SB203580处理后,HT29细胞内甲基化RECK基因有昕减少,而非甲基化基因明显增多,同时EGCG能抑制HT-29细胞中p38的磷酸化水平。结论EGCG可能通过抑制p38磷酸化而逆转肿瘤细胞RECK甲基化。     

莱菔硫烷对鼻咽癌RASSF1A基因甲基化及表达的影响

目的探讨莱菔硫烷（SFN）对鼻咽癌CNE-2细胞RASSF1A甲基化及蛋白表达水平的影响。方法体外培养鼻咽癌CNE-2细胞,用0,5、10、30μM的SFN与其孵育24～96h,用MTT法检测细胞的增值情况;流式细胞术分析细胞周期的改变;采用甲基化特异性PCR检测RASSF1A基因启动子区域的甲基化改变情况;提取SFN处理后细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平,并用Western blot检测处理前后RASSF1A蛋白的表达。结果 SFN能以时间和剂量依赖性方式抑制CNE-2细胞增值,并能使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。随着SNF浓度的增加,甲基化RASSF1A水平逐渐减弱,非甲基化RASSF1A水平逐渐增多。同时SFN能明显上调RASSF1A的mRNA和蛋白表达水平。结论 SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,从而抑制细胞的增值和分化而具有抗肿瘤的效应。     

莱菔硫烷对胃癌细胞SGC-7901RASSF1A甲基化及表达的影响

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对胃癌细胞SGC-7901 RASSF1A甲基化及表达有何影响.方法 体外培养胃癌细胞SGC-7901细胞,用0,10μM,301μM,50μM的SFN与SCG-7901细胞孵育24-96h,采用甲基化特意性PCR检测RASSF1A基因启动子区域的甲基化改变情况;提取EGCG处理后SGC-7901细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平.结果 静息状态下,SCG-7901细胞可检测出RASSF1A基因启动子区域有明显的甲基化条带,当与50μM SFN孵育96h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多.SFN也能以剂量依赖性与时间依赖性方式促进SGC-7901细胞RASSF1A基因mRNA的表达.结论 SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,这可能是其抗肿瘤的重要机制.     

白藜芦醇对胃癌细胞Ras相关结构域家族1A基因甲基化及表达的影响

目的探讨白藜芦醇对人胃癌SGC-7901细胞Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）基因甲基化及蛋白表达的影响。方法体外培养SGC-7901细胞,用不同浓度（0,10μM,20μM,40μg/ml）白藜芦醇与其孵育48h。采用甲基化特异性PCR（MSP）检测RASSF1A基因启动子区域的甲基化改变情况;RT-PCR检测RASSF1A的表达水平,并用Westernblot检测处理前后RASSF1A蛋白的表达。结果白藜芦醇能以剂量依赖性方式抑制SGC-7901细胞增值,随着SNF浓度的增加,甲基化RASSF1A水平逐渐减弱,非甲基化RASSF1A水平逐渐增多。同时白藜芦醇能明显上调RASSF1A的mRNA和蛋白表达水平。结论白藜芦醇能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,可能是其抗癌的重要因素。     

EGCG抑制口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人口腔鳞癌Tca8113细胞生长抑制及促凋亡的作用。方法：应用MTT法检测不同浓度的EGCG对Tca8113细胞体外增值抑制作用;采用HE染色、Hochest33258染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：MTT法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性（P〈0.05）;HE、Hochest33258染色显示,EGCG处理Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩。结论：EGCG对Tca8113细胞的生长具有显著的抑制及促凋亡作用,且呈现时间及浓度的依赖性。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对胃癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法 用不同浓度的EGCG处理7901细胞,采用MTT法和PCR－ELISA法测定增殖抑制率和端料酶活性,用RT－PCR法测定端粒酶亚单位hTR、TP1、hEST2／hTRT和c-myc cRNA的表达。结果 EGCG在100μmol／L以下浓度对7901细胞增殖无明显抑制作用,而在200μmol/L以上浓度时对7901细胞增殖有明显的抑制作用,其24h和48hIC50分别为27．4μmol／L和19．5μmol／L。EGCG处理7901处理7901细胞能显著抑制其hEST2／hTRT和c-mycmRNA表达,且抑制程度与EGCG剂量有关,但对hTRRNA和TP1mRNA表达无明显影响。结论 EGCG在非细胞毒性剂量时就能有效地抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,此可能是其防癌抗癌的机制之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制甲状腺癌细胞的端粒酶活性

目的　探讨表没食子儿茶素没食子酸酯 [(- )epigallocatechin - 3-gallate (EGCG) ]对甲状腺癌细胞端粒酶活性的抑制作用 ,为天然来源的端粒酶抑制剂治疗甲状腺癌提供理论依据。方法　不同浓度的EGCG处理甲状腺癌FRO细胞 ,MTT法测定EGCG对FRO细胞生长的影响 ,TRAP -PCR -ELISA法检测药物处理前后FRO细胞端粒酶的活性。结果　EGCG显著抑制FRO细胞的增殖 (P <0 .0 1) ;随着药物浓度的递增 ,FRO细胞的端粒酶活性逐渐降低。结论　EGCG显著抑制甲状腺癌FRO细胞的端粒酶活性 ,可考虑应用于甲状腺癌的临床治疗     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖和凋亡的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中Ki67的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC-7721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0．05）,Ki67表达水平下调（P〈0．05）,细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论EGCG可能通过增加细胞凋亡,抑制Ki67表达达到抗癌作用。     

RASSF1A基因启动子甲基化在胃癌中的检测意义

目的：检测胃癌患者 Ras相关结构域家族基因1 A（RASSF1 A）基因启动子甲基化的情况,探讨其相关的临床意义。方法收集漯河医学高等专科学校第一、第二、第三附属医院2003年2月至2013年10月保存的200例胃癌患者的胃癌组织蜡块,另取30例胃溃疡切除患者的正常胃壁组织作为对照。甲基化特异性 PCR检测 RASSF1 A基因启动子甲基化的改变。结果胃癌患者 RASSF1A基因启动子甲基化的阳性率（37．0％）显著高于对照组（13．3％）,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。RASSF1A基因启动子甲基化阳性率在临床Ⅲ、Ⅳ期,有淋巴结转移和中、低分化的患者分别为46．2％、47．7％和48．7％,显著高于临床Ⅰ、Ⅱ期,无淋巴结转移和高分化患者的27．1％、28．6％和29．8％（P＜0．05）。RASSF1A基因启动子甲基化阳性患者复发率（16．2％）显著高于阴性患者（5．6％）,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论胃癌组织中 RASSF1A基因启动子甲基化可能参与了胃癌的发生、发展过程,有可能作为胃癌分级、预后评估的新指标。     

莱菔硫烷对胃癌细胞SGC-7901 RASSFIA甲基化及表达的影响

目的探讨莱菔硫烷（SEN）对胃癌细胞SGC-7901RASSF1A甲基化及表达有何影响。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901细胞,用0,10μM,30μM,50μM的SFN与SCG-7901细胞孵育24～96h,采用甲基化特意性PCR检测RASSFIA基因启动子区域的甲基化改变情况;提取EGCG处理后SGC-7901细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平。结果静息状态下,SCG-7901细胞可检测出RASSF1A基因启动子区域有明显的甲基化条带,当与50μMSFN孵育96h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多。SFN也能以剂量依赖性与时间依赖性方式促进SGC-7901细胞RASSFIA基因mRNA的表达。结论SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,这可能是其抗肿瘤的重要机制。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡影响的研究

目的：探讨表没食子儿茶素中没食子酸酯(epigallocatechin-3-ganate, EGCG)对人卵巢癌A2780细胞株及裸鼠移植瘤细胞增殖的抑制、凋亡的诱导作用及相关分子机制。方法：(1)在体外,通过电镜及四甲基偶氮唑盐酶比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)观察不同浓度EGCG在不同时间点作用于A2780细胞后,对其细胞形态及增殖活力的影响。(2)在体内,通过建立A2780细胞裸鼠移植瘤模型,分别比较腹腔注射EGCG低、中、高剂量组和未注射EGCG组之间肿瘤体积及重量的变化;免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)检测增殖相关基因Ki-67及凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达情况。结果：体外EGCG诱导A2780细胞的形态学改变;MTT法结果显示,EGCG能显著地抑制A2780细胞的增殖活性,并呈时间-浓度依赖性;体内EGCG注射组与未注射组相比肿瘤体积随用药浓度增加而减小,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义;免疫组化和RT-PCR结果表明,EGCG能下调Ki-67、NF-κB(p65)、Bcl-2及上调Bax蛋白及mRNA的表达。结论：体外EGCG可有效抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖活力;体内EGCG能明显抑制人卵巢癌A2780细胞、裸鼠移植瘤细胞的增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与下调Ki-67和NF-κB(p65),促Bax/Bcl-2比值增高有关。     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

VBE-3对卵巢癌CoC1细胞凋亡的影响

目的:观察黄荆子木脂素VBE-3诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用。方法:体外培养CoC1细胞和中国仓鼠卵巢CHO-K1细胞,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。结果:PI染色FCM分析发现VBE-3以浓度依赖方式诱导CoC1细胞凋亡(P<0.01),对CHO-K1细胞的作用弱。琼脂糖凝胶电泳观察结果表明10μmol/L的VBE-3和LY294002处理24小时,CoC1细胞呈现典型凋亡细胞的DNA梯形条带;而CHO-K1细胞未见DNA梯形条带。结论:VBE-3选择性诱导CoC1细胞凋亡作用与其阻断PI3K信号传导有关。     

抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及对人卵巢癌细胞系SW626增殖的影响

目的 构建抑癌基因PTEN的真核表达载体,研究外源性PTEN基因稳定表达对人卵巢癌细胞系SW626体外增殖的影响.方法 构建PTEN基因的真核表达载体pcDNA3.1/PTEN,转染重组质粒pcDNA3.1/PTEN于体外培养的人卵巢癌细胞系SW626,筛选并获得稳定表达PTEN基因的细胞克隆,应用RT-PCR和western blot分析PTEN基因的mRNA及蛋白质表达,MTT实验分析细胞增殖能力.结果 稳定转染PTEN基因的细胞系有外源目的 基因的mRNA及其蛋白表达.MTT实验表明,pcDNA3.1/PTEN 转染组细胞增殖能力低于pcDNA3.1(-)转染组和对照组 (P＜0.05).结论 外源性抑癌基因PTEN的稳定表达可抑制人卵巢癌细胞系SW626的增殖.     

KiSS-1基因对卵巢癌细胞HO8910生物学行为影响的实验研究

目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS1对卵巢癌细胞株HO8910生物学行为的影响。方法含有人KiSS1基因全长cDNA的重组真核表达载体pcDNA3KiSS-1经酶切和测序鉴定正确后,转染卵巢上皮癌细胞株HO8910,观察其KiSS1mRNA表达、细胞生长及增殖能力和细胞侵袭力的变化。结果pcDNA3KiSS1成功转染HO8910细胞,KiSS1mRNA表达阳性,而亲本HO8910细胞为阴性。转染目的基因后细胞生长曲线、软琼脂克隆形成率等与未转染之细胞无显著性差异(P>0.05),但细胞侵袭能力明显下降(P<0.01),穿透Matrigel膜细胞数较未转染组明显减少(P<0.01)。结论KiSS1基因对卵巢上皮癌细胞HO8910的生长、增殖能力无影响,但可抑制其侵袭能力。     

EGCG通过降低Notch1和Jagged1表达抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的机制。方法采用M1Tr法检测EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50;选用细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验观察EGCG对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响;采用Westernblot检测NotcM和Jagged1蛋白表达。结果EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50值为149．02mg／L;EGCG呈浓度和时间依赖性抑制SPl8细胞的增殖（n=3,P〈0．05）;EGCG呈浓度依赖性抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达。结论EGCG能有效抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖,其可能通过降低Notch1和Jagged1蛋白的表达而发挥作用。     

卵巢癌特异性结合肽OSTP的鉴定

目的验证卵巢癌特异性结合肽(OSTP)对卵巢癌A2780细胞的特异性结合作用。方法合成OSTP并标记荧光素5-FAM。将培养的卵巢癌A2780细胞及对照组胃癌SGC7901细胞、骨肉瘤MG63细胞分别加5-FAM-OSTP孵育,荧光显微镜下观察拍照。构建卵巢癌A2780细胞荷瘤小鼠模型,尾静脉注入5-FAM-OSTP,循环1 h后进行左心室灌注,取肿瘤组织及各脏器组织,行冰冻切片,荧光显微镜下观察拍照。结果成功合成和标记5-FAM-OSTP。荧光显微镜观察显示：5-FAM-OSTP孵育后的卵巢癌A2780细胞产生明亮的黄绿色荧光,而对照组SGC7901、MG63细胞不产生荧光。裸鼠体内实验结果显示：肿瘤组织可见强荧光信号,平均荧光强度为17.656±1.980;肝组织平均荧光强度4.277±0.291;肾组织平均荧光强度4.422±0.767;其他脏器均无可见荧光信号。肿瘤组织与肝、肾组织的荧光强度间差异有显著性（P<0.05）。结论通过体内外实验证实了5-FAM-OSTP对卵巢癌A2780细胞具有特异结合作用,有望成为卵巢癌靶向化疗药物的导向肽。     

Zebularine 调控卵巢癌细胞hMLH1基因再表达

 目的探讨去甲基化药物Zebularine（Zeb）对体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因甲基化状态的
影响及表达调控作用。方法应用不同浓度的Zeb（50 μmol/L,100 μmol/L,200 μmol/L）处理体外培养的卵巢癌细胞A2780/
cp70 后,甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）法检测用药前后细胞中hMLH1基因的甲基化状态,RT-PCR 法及
Western-blot 法检测用药前后细胞中hMLH1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果hMLH1基因在卵巢癌细胞A2780/cp70 中
呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性。经过Zeb 处理后,hMLH1基因呈去甲基化状态,其mRNA及蛋白重新表
达。结论异常甲基化是卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因失活的原因,去甲基化药物Zeb 能使hMLH1基因去甲基化从而
调控其重新表达。