nm23-h1转染腺样囊性癌细胞及其增殖能力的实验研究

目的　考察nm23-h1导入腺样囊性癌细胞(ACC-M)后对其体内、外增殖的影响。方法　以阳离子脂质体 (lipofectamine)介导nm23-h1转染ACC-M细胞,体外培养并用G418培养基筛选,体外观察转染组生长情况,并用细胞爬片免疫组化ABC法染色Ki67单克隆抗体;将nm23-h1阳性表达的ACC-M植入10只裸鼠皮下,同时以未转染的 ACC-M作对照,观察肿瘤大小。4周后处死动物,获取标本,常规固定、包埋、切片后采用免疫组化LsAB法研究Ki67 的表达并用流式细胞仪对转染组和非转染组的移植瘤进行细胞周期时相分析。结果　体外培养转染组细胞生长较未转染组慢,这种趋势随着转染组传代次数的增加而更加明显,Ki67呈阳性表达,未转染组Ki67呈部分阳性表达;转染组ACC-M体内移植瘤早期(2周)生长缓慢,2周后生长无统计学差异(P>0.05),细胞周期时相分析结果与之一致。组织切片显示瘤体Ki67,nm23-h1表达均为阴性。结论　nm23-h1的导入可能对ACC-M细胞增殖具有短时间的抑制作用。     

阿斯匹林抗ACC-M裸鼠肺转移的实验研究

目的 应用ACC-M裸鼠肺转移模型研究阿斯匹林对腺样囊性癌细胞转移的抑制作用。方法 裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞前后各7天连续服用分别含1mg％、10mg％和50mg％阿斯匹林饮用水或消毒饮用水14天,接种肿瘤后6周处死动物,比较各实验组与对照组的裸鼠肺重量和肺转移灶面积比。结果 服用含1mg％和 50mg％阿斯匹林饮用水的实验组与对照组相比较,两项指标的差别均有显著性（P<0.05）。结论 阿斯匹林对腺样囊性癌细胞ACC-M裸鼠肺转移有抑制作用。     

血管生成抑制剂TNP-470抑制腺样囊性癌转移的实验研究

目的观察血管生成抑制剂TNP-470对人涎腺腺样囊性癌肺转移的抑制作用.方法将腺样囊性癌ACC-M细胞接种于裸鼠尾静脉(1×106/鼠).将20只裸鼠随机分成对照组和治疗组,自第2天起分别给予溶剂(3%酒精)和TNP-470(40mg/kg),隔天给药1次,共用4周.接种后6周末处死动物,检测对照组和治疗组的肺转移率及含转移灶的肺重量,观察转移情况.结果对照组和治疗组肺转移率分别为90%和40%(P＜0.025);含转移灶的肺重量分别为0.2138g±0.0667g和0.1685g±0.0445g(P＜0.05).结论血管生成抑制剂TNP-470能明显抑制腺样囊性癌的肺转移.     

脂质体介导nm23-h1质粒体内转染腺样囊性癌可行性

目的　研究阳离子脂质体介导nm23-h1质粒体内转染腺样囊性癌的可行性。方法　将腺样囊性癌细胞株体外培养后移植入40只裸鼠体内。ACC瘤体长至直径1 cm左右时,用脂质体包裹nm23-h1质粒进行瘤体内注射, 每次注入质粒-脂质体复合物0.1 ml,其中10只裸鼠每只注射2次,10只裸鼠注射1次,10只作空白对照,10只裸鼠多针道注射0.2 ml质粒及脂质体复合物。注射后2、3、7 d处死动物,获取肿瘤标本作常规组织学及免疫组化研究。结果　瘤体内注射质粒-脂质体复合物3 d后肿瘤细胞内均有nm23-h1表达,7 d后表达增加,肿瘤细胞外间质增加,2次注射较1次注射、多针道注射较单一针道注射有更多的细胞呈阳性表达。结论　脂质体介导nm23-h1 质粒体内转染腺样囊性癌可获得小范围阳性表达,但还不具备临床实施的可能性。     

PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌实验性裸鼠肺转移的抑制作用

目的　探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌M3SP2细胞系实验性裸鼠肺转移能力的影响。方法　用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照M3SP2 -pBp细胞 ) ,应用裸鼠肺转移实验测定癌细胞的体内转移能力 ,并进行组织学观察。结果　对照组裸鼠肺转移结节数为 (2 4 0± 1.2 )个 ,组织学观察瘤细胞转移灶体积大 ,细胞生长活跃 ,可见较多核分裂。实验组裸鼠肺转移结节数量减少为 (8 5± 3 4 )个 ,转移抑制率为 6 5 6 % ;组织学观察可见转移灶数量少、体积小 ,并有较多的坏死和凋亡细胞。结论　转染野生型PTEN抑癌基因能降低人高转移性黏液表皮样癌细胞转移能力。     

nm23—h1基因导入对腺样囊性癌分化的影响

目的 探讨nm23h1基因对腺样囊性癌细胞分化的影响。方法 体外用了子脂质体介导nm23－h1质粒转染人口腔涎腺样囊性癌（ACC）细胞株,筛选出转染阳性细胞克隆,并植入4只裸鼠颌面部,3w后获取标本,石蜡包埋后进行常规组织学及免疫组织化学检查,实验以未转染的阴性细胞克隆植入4只裸鼠作对照。结果 nm23－h1阳性ACC植入裸鼠体内后肿瘤细胞有向原代细胞回归的倾向,即由实体型向筛状型或管状型转变,肿瘤细胞周围的肿瘤间质增多,巢状的肿瘤细胞外围有基底膜样结构;肿瘤细胞在体内增殖的过程中,表达nm23－h1的细胞数量有逐渐减少、表达强度减弱的趋势。结论 以nm23-h1为靶基因的治疗同时具有抑制转移和促进分化的作用,具有较大的研究价值和临床应用前景。     

nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖及PKC-α表达的影响

目的探讨nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖的影响及可能机制。方法检测6个口腔鳞癌细胞系中nm23．h1的表达水平;挑选nm23-h1表达量最少、绿色荧光报告基因质粒转染效率最高的细胞系,瞬时转染pCMV—nm23．hl质粒,MTT法检测转染的细胞增殖活性;应用实时定量PCR检测nm23-h1功能相关基因PKC-α的表达。结果在Tca8113、Tb、Tca8113M、TSCC、OSC-4、Tca8113／CDDP6个口腔鳞癌细胞系中,高转移细胞系Th、Tca8113M的nm23-h1表达量最低。Th细胞转染pCMV—nm23-h1后,细胞增殖速度减慢,为对照组的79．69％（P〈0．01）;过表达nm23-h1的Th细胞PKC-α的mRNA表达量增加,为对照组的1．52倍（P〈0．01）。结论nm23-h1基因过表达能抑制口腔鳞癌细胞的增殖,该作用可能与PKC-α相关的信号通路有关。     

HBXIP对腺样囊性癌细胞株ACC-M生物学功能及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)对唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)增殖、迁移和侵袭的影响,及其对PI3K/Akt信号通路的影响.方法:将HBXIP质粒转染到ACC-M中,将细胞分为实验组(转染pEGFP-N1-HBXIP质粒)、对照组1(未转染组)和对照组2(vector组,pEGFP-N1).采用RT-PCR检测HBXIP在ACC-M中的表达;采用MTT实验、Transwell小室实验和划痕实验检测HBXIP过表达对ACC-M的增殖、迁移和侵袭的影响;Western印迹法检测HBXIP过表达对Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及S100A4蛋白表达量的影响.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:MTT实验结果显示,实验组中存活的细胞数显著高于对照组(P＜0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率显著高于对照组(P＜0.01);Transwell小室实验结果显示,实验组细胞侵袭个数显著高于对照组(P＜0.01);Western印迹法结果显示,相对于对照组,实验组随着HBXIP过表达,p-Akt、p-PI3K及S100A4表达量相对增高.结论:HBXIP基因过表达ACC-M增殖、迁移和侵袭具有影响,可能通过促进Akt、PI3K磷酸化及S100A4蛋白表达量增加,促进ACC-M的增殖、迁移和侵袭.     

Docetaxel对涎腺粘液表皮样癌高转移细胞增殖及转移力的抑制作用

目的 :研究Docetaxel对涎腺粘液表皮样癌高转移细胞M3 SP4 增殖及转移力的抑制作用。方法 :用细胞计数法、克隆形成法、流式细胞术、癌细胞裸鼠尾静脉注射法、癌细胞裸鼠颌下腺原位接种法研究Docetaxel对M3 SP4 细胞增殖及转移力的抑制作用。结果 :Docetaxel对M3 SP4 细胞具有浓度及时间依赖性生长抑制作用 ,作用 72h后 ,IC3 0 和IC50 分别为 0 .34nmol/L和 0 .6 3nmol/L ;IC3 0 浓度的药物作用于M3 SP4 细胞 ,对照组及处理组细胞群体倍增时间分别为 32 .7h和 43h ;对照组及药物作用浓度分别为 0 .0 5nmol/L及 0 .1nmol/L时 ,克隆形成率为 ( 2 9.2± 1.4) %和 ( 2 0 .2± 0 .8) % ,( 2 .8± 0 .4) % ;在裸鼠体内实验中对照组及治疗组〔30mg/(kg·周 )〕肺表面的转移结节数为 11± 3.4和 0 ;裸鼠颌下腺重量 ( g)为 1.2 0± 0 .2 3和 0 .31±0 .0 5。结论 :Docetaxel可明显抑制M3 SP4 细胞的增殖及转移力。     

舌癌脑转移细胞系Tb转移相关生物学特性

目的：研究舌癌脑转移细胞系Tb的转移相关生物学特性。方法：分别用软琼脂糖克隆形成法、流式细胞术、癌细胞悬液经探鼠尾静脉注射法（每只鼠0．2ml，含细胞2×105）检测舌癌细胞系Tea8113（T）和Tb细胞的克隆形成率、P53蛋白和nm23－H1蛋白表达率、Tb细胞在肺内形成转移灶的组织学过程以及T和Tb细胞在脑表面的人工转移力。结果：T和Tb细胞的克隆形成率分别为19．5％和35．5％；P53蛋白表达率分别为37.6％和24.9％，nm23－H1蛋白表达率分别为100％和99．9％；Tb细胞在肺内先形成小的痕控，逐渐增大，最终形成巨大转移灶并产生胸水，转移灶仍保持鳞状上皮癌组织学特征；T和Tb细胞在裸鼠肺表面形成的转移结数分别为25±16和73±41。结论：Tb细胞转移力强于T细胞。     

肝素抗涎腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺血管粘附研究

目的　通过观察肝素对人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株 (ACC -M )细胞在裸鼠肺、肝组织的粘附影响 ,证实其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　裸鼠腹腔注射肝素后 ,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷 (3 HTdR)标记的ACC -M细胞 (3 H -ACC -M ) ;分别检测细胞注射后 2h、6h、18h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数 (CPM )。结果　单位重量肺组织每分钟放射性计数CPM值 :空白对照组 2h、6h、18h分别为 1875 .75± 11.5 3、164 4.5 0± 2 7.2 0和 14 66.5 0± 12 5 .95 ;2 0 0单位肝素组 2h、6h、18h分别为 912 .0 0± 118.5 5、918.0 0± 44 .0 6和 766.60± 77.66。同一时间肝素组肺组织CPM值明显低于对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。单位重量肝组织CPM值在空白对照组和肝素组的相同时间点无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　肝素腹腔注射后可明显降低肺组织内ACC -M细胞对血管内皮细胞粘附数量 ,但对相同时间肝组织内ACC -M细胞粘附数量无显著影响 ,提示肝素具有抑制腺样囊性癌肺转移的作用     

TNP-470联合顺铂抗腺样囊性癌生长和肺转移的实验研究

目的　研究血管生成抑制剂TNP 470联合顺铂 (CDDP)对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法　分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株 (ACC M)细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉 ,建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第 3周开始 ,于裸鼠对侧皮下注射TNP 470 30mg/kg,隔日 1次 ,共7次。CDDP分别在第 3周和第 4周腹腔给药各 1次 ,剂量为 5mg/kg。停药后第 2d处死裸鼠。测量肿瘤大小 ,称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后 ,计数皮下瘤块血管密度。结果　与单用TNP 470相比 ,TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强 ,但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论　TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。     

P-选择素单抗抗唾液腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺粘附的研究

目的观察P-选择素单克隆抗体(MonoantibodytoP-selectin,PS1)对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法裸鼠尾静脉注射P-选择素单抗后,经尾静脉注射氚标胸腺嘧啶核苷(3HTdR)标记的ACC-M细胞,分别检测细胞注射后2h、6h、18h的单位重量肺、肝组织每分钟核素脉冲数(CPM)。结果空白对照组单位重量肺组织在2h、6h、18h的CPM值分别是1875.75±11.53、1644.50±27.20和1466.50±125.95;P-选择素单抗组肺组织2h、6h、18h的CPM值分别是941.50±68.47、875.00±47.06和787.25±65.38。相同时间P-选择素单抗组肺组织CPM值明显低于对照组,两组间有显著性差异(P<0.001)。空白对照组单位重量肝组织的CPM值与P-选择素单抗组相比,2h、6h、18h各相同时间两组间无显著性差异(P>0.05)。结论P-选择素单抗静脉应用后,可减少肺组织内ACC-M细胞的粘附数量,但对相同时间肝组织内ACC-M细胞数量无显著影响。P-选择素单抗可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用     

腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织分布的影响

目的　通过观察腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织的分布特点,研究其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　实验裸鼠腹腔注射肝素后,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷(3HTdR)标记 ACC-M细胞,分别检测注射后2 h、6 h、18 h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数(CPM)。结果　裸鼠单位重量肺组织3H-ACC-M在不同时间由高到低依次是空白对照组2 h、6 h、18 h,肝素组6 h、2 h、18 h。相同时段肝素组明显低于对照组,两组间有显著性差异(P<0·001)。单位重量肝组织3H-ACC-M在不同时间由高到低依次是空白对照组为2 h、6 h、18 h,肝素组为2 h、6 h、18 h,相同时段两组间无显著性差异(P>0·05)。结论　肝素腹腔注射后可减少肺组织内ACC-M细胞数量,但对相同时段肝组织内ACC-M细胞数量无显著影响,肝素可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用。     

腺病毒介导HSV-TK/GCV与IL-2基因对人涎腺腺样囊性癌的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-TK/GCV）与白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）基因联合应用对涎腺腺样囊性癌的抑制和杀伤作用。方法将0.2 ml细胞浓度为2×107/ml的涎腺腺样囊性癌高转移细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma cell line withhigh tendency of lung metastasis,ACC-M）的细胞悬液接种于20只裸鼠皮下,建立涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型。随机将20只荷瘤裸鼠分为A组：HSV-TK/GCV和IL-2联合基因治疗组（TK（IL-2组）;B组：HSV-TK/GCV组（TK组）;C组：空病毒组（EGFP组）;D组：ACC-M组;每组5只。分别于瘤体内注射TK（IL-2;TK;EGFP和无菌生理盐水。注射48小时后,对A、B、C组裸鼠每日腹腔注射GCV,D组每日腹腔注射生理盐水,连续10天。最后一次给药后第二天处死裸鼠,观察各组裸鼠的肿瘤体积和瘤重的变化,计算肿瘤生长抑制率;对移植瘤进行组织病理学观察;应用流式细胞仪检测移植瘤的细胞凋亡情况。结果在A组和B组中,ACC-M的生长均受到显著抑制。治疗后体积数减少,与ACC-M组比较差别有极显著性（P〈0.01）。A组和B组抑瘤率分别为91%和76%;光镜下观察A组和B组均出现了明显的细胞凋亡;流式细胞仪检测A组和B组有明显的凋亡峰出现,凋亡率分别为30.55±0.23和13.53±0.32;C组凋亡率为10.07±0.31,D组凋亡率为8.34±0.41%。除C、D组之间差别无明显性外,其余各组之间差别均有极显著性（P〈0.01）。A组和B组的细胞S期比例明显增加,G2/M期比例明显降低。结论 HSV-TK/GCV联合IL-2基因对ACC-M移植瘤有明显抑制作用,抑瘤效果优于单独应用HSV-TK/GCV系统。     

减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用。方法:4周龄BALB/Cnunu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期。结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长。结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用。联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用。     

Tip30基因修饰的ACC-M细胞裸鼠体内致瘤性观察

目的:观察肿瘤抑制基因Tip30修饰后的人涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC鄄M)所致裸鼠移植瘤体内生长的变化。方法:BALB/Cnu/nu鼠30只(4周龄,体重18￣20g),随机分3组,各10只;Tip30基因修饰的ACC鄄M细胞(AdTIP30/ACC鄄M)、野生型ACC鄄M细胞(wt/ACC鄄M)及对照基因LacZ修饰的ACC鄄M细胞(AdLacZ/ACC鄄M)分别注射小鼠颌下区皮下,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间。结果:(1)经TIP30基因修饰组肿瘤出现的时间比野生型对照组及基因对照组晚3d,且肿瘤生长缓慢(P<0.01);(2)存活时间显示,基因修饰组(53.0±3.3)d,有2只长期存活;野生型对照组(26±2.2)d;对照基因组(29±2.4)d。结论:抑癌基因Tip30能够显著抑制人涎腺腺样囊性癌细胞在裸鼠体内的生长,延长荷瘤小鼠存活期。