口服中药复方有效部位后血浆中葛根素的测定

目的:建立HPLC测定大鼠口服养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中葛根素浓度的方法。方法:以乙腈提取处理血浆,以对羟基苯甲酸为内标,甲醇-0·5%乙酸水(28:72,v:v)为流动相,ODSC18色谱柱(150mm×4·6mm,5μm)为固定相,流速为1·0mL/min,以紫外检测器在248nm波长下测定血浆中葛根素的吸收。结果:葛根素在0·025~3·2μg/mL范围内线性关系良好,RSD<10%,平均回收率为97·6%,最低检测限为0·16ng,血浆中最低检测浓度为0·016μg/mL。结论:此法灵敏、可靠,可较好地用于口服中药复方养阴通脑颗粒主要有效部位组合后血浆中葛根素的测定,可为中药复方体内成分分析提供方法。     

基于药动学与药效学相关联的养阴通脑颗粒主要有效部位正交配伍研究

目的探讨养阴通脑颗粒主要有效部位(总生物碱、总黄酮、总皂苷、总酚酸)配伍后在脑缺血再灌注模型大鼠体内药物浓度及其药动学与药效学变化。方法采用正交试验法组成上述主要有效部位用量配比不同的9个组方,供脑缺血再灌注模型大鼠ig给药,高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定不同时间点血浆中的葛根素、阿魏酸和川芎嗪血浆药物浓度。DAS 3.2.6软件以非房室模型拟合药动学参数,并运用总量统计矩法和综合评分法对整体药动学特征进行评价。同时采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的含量。最后进行药动学-药效学(PK-PD)模型研究,获得各药物浓度与药效之间的定量方程。结果葛根素、阿魏酸和川芎嗪在模型大鼠体内的药动学特征有所差异。总量统计矩和综合评分研究表明不同配伍对总量零阶矩、总量平均滞留时间、综合评分等参数影响不一。主要有效部位正交配伍给药后,一定程度上会抑制脑缺血再灌注大鼠血浆中SOD和CAT的降低。各PK-PD模型均采用Sigmoid-Emax模型,拟合结果与实测数据之间相关性良好,R值均大于0.85。结论养阴通脑颗粒主要有效部位配伍对模型大鼠体内的药动学行为和抗氧化指标具有一定影响;中药复方多成分药物代谢动力学可采用总量统计矩和综合评分法进行研究;PK-PD结合模型可用于中药复方多成分药动学与药效学之间相关性的评价与预测。     

葛根及复方中葛根素在大鼠体内的药动学研究

 目的建立RP-HPLC测定大鼠血浆中葛根素浓度的方法,研究葛根提取物及复方脑得生片中葛根素的药动学特点,评价复方中其他配伍对葛根素药动学的影响。方法大鼠分别灌胃给予葛根提取物、复方脑得生片,断尾采血,离心,取血浆适量,加甲醇沉淀蛋白,取上清液过滤,用HPLC分析,以C₁₈为固定相,流动相为甲醇-0.5%醋酸水溶液(25∶75),在250nm下检测,测定葛根素血药浓度,经3P97软件处理数据。结果葛根素血浆浓度在10～1000μg·L^-1之间线性关系良好,最低检测浓度为6μg·L^-1,高,中,低浓度样品回收率分别为89.9%,95.5%,89.7%。大鼠灌胃葛根提取物和脑得生片后的药-时曲线均符合二房室模型。灌胃脑得生片后,与灌胃葛根提取物相比,前者测定的葛根素ρ_max和AUC_0→∞分别比后者增加了2.23和3.03倍。结论本实验建立的RP-HPLC测定法专属、准确、灵敏,适用于葛根提取物及复方脑得生中葛根素的药动学研究。研究结果表明,脑得生片中的其他配伍药材可以促进葛根素的吸收,提高葛根素的生物利用度。     

统计矩法评价养阴通脑颗粒各有效部位配伍在脑缺血再灌大鼠中的药动学变化

目的:应用总量统计矩法研究中药复方养阴通脑颗粒主要有效部位的不同配伍对主要活性成分药动学参数的影响.方法:以养阴通脑颗粒中的主要有效部位和物碱、黄酮、皂苷、挥发油的量作为配伍的质量控制标准,按正交试验法设计复方主要有效部位的配伍实验,在不同时间点上检测川芎嗪和葛根素的血药浓度,分别计算川芎嗪和葛根素在各配伍条件下的零阶矩和平均滞留时间,再计算葛根素和川芎嗪的总量零阶矩和总量平均滞留时间.应用正交分析法分析配伍对其药动学参数的影响.结果:黄酮对葛根素和川芎嗪的总量零阶矩影响最大,生物碱对葛根素和川芎嗪的总量平均滞留时间影响最大,皂昔对2个总量统计矩参数的影响都很小,而挥发油对2个总量统计矩参数的影响都较大,提示挥发油可能促进葛根素和川芎嗪在大鼠体内的代谢.结论:总量统计矩参数可用于指导中药复方的配伍研究.     

HPLC测定血浆中葛根素

 目的:建立血浆中葛根素的高效液相色谱测定方法，为含葛根素中药复方体内代谢研究提供基础。方法:血浆用0.58 mol· L^-1高氯酸沉淀蛋白质，采用Shimpack CLC-ODS柱(5μ, 150 mm x 4.6 mm )，预柱为YWG-C₁₈H₃₇,流动相为甲醇-5 . 625 mol· L^-1醋酸-水(25:3:72)，流速为1.00 ml·min^-1，检测波长为247 nm。结果:该法回收率91.0%，方法重现性RSD=0.93%(n=6)。结论:本文建立的高效液相色谱测定方法为动物体内葛根素的测定提供了一个可靠的方法。     

灌胃养阴通脑颗粒大鼠血浆中川芎嗪的HPLC法测定

目的建立HPLC测定大鼠灌胃养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中川芎嗪质量浓度的方法。方法以乙腈提取处理血浆,以安眠酮为内标,甲醇-水(55∶45)为流动相,ODSC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)为固定相,体积流量为1.0mL/min,以紫外检测器在279nm波长下测定血浆中川芎嗪。结果川芎嗪在0.11~22μg/mL线性关系良好,平均回收率为102.98%,RSD<10%,最低检测限为0.21ng,血浆中最低检测质量浓度为0.042μg/mL。结论此法灵敏、可靠,可较好地用于口服养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中的川芎嗪的测定,为测定中药复方体内有效成分提供方法。     

养阴通脑颗粒主要有效部位的转运研究

目的:研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制。方法:利用MTT试验研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究养阴通脑颗粒主要有效部位配伍后的转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定。结果:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素的吸收转运Papp皆<1.0×10-6cm·s-1,吸收转运Papp与难吸收药物阿替洛尔接近,其口服在体内的吸收从大到小的顺序为:葛根素>川芎嗪>黄芪甲苷。皂苷与黄酮配伍后,黄芪甲苷吸收转运Papp明显提高,促进吸收方向转运;黄酮、皂苷和生物碱的相互配伍对黄芪甲苷的外排作用明显,对川芎嗪和葛根素的吸收转运影响不明显。各有效部位代表成分的双向转运程度差异较大,Papp(B→A)明显大于Papp(A→B),提示这3个有效部位代表成分在Caco-2细胞单层模型中从BL侧到AP侧的外流转运较占优势。结论:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素可能为吸收不良的化合物,在其转运途径中可能受到了小肠顶侧膜的转运蛋白的外排作用。     

HPLC与紫外-可见分光光度计对养阴通脑颗粒有效部位的质量控制

目的:利用紫外-可见分光光度计(UV-VIS)检测养阴通脑颗粒中有效部位总黄酮含量。并利用梯度洗脱,建立高效液相色谱法(HPLC)测定养阴通脑颗粒中总黄酮有效部位中葛根素、芒柄花素、毛蕊异黄酮含量的方法。方法:以芦丁为对照品UV-VIS测定养阴通脑颗粒有效部位中总黄酮含量。采用HPLC,色谱柱为EclipseXDB-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)和0.04%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速1.00mL/min,检测波长250nm。结果:养阴通脑颗粒有效部位总黄酮含量70%以上,葛根素的线性范围为0.530-296.300mg/L(r=0.9998),平均回收率为99.80%,RSD=0.40%,毛蕊异黄酮的线性范围为0.064-44.440mg/L(r=0.9994),平均回收率为99.70%,RSD=1.10%,芒柄花素的线性范围为0.064-43.110mg/L(r=0.9994),平均回收率为99.40%,RSD=1.50%。结论:本方法操作简便,测定结果准确可靠,为养阴通脑颗粒有效部位黄酮的质量控制提供方法。     

愈风宁心胶囊在兔体内的药动学和生物利用度研究

 目的:测定愈风宁心胶囊中主要有效成分葛根素在家兔体内的药-时曲线，据此测算其体内代谢动力学参数。并与葛根素注射剂比较，研究了愈风宁心胶囊的绝对生物利用度。方法:用高效液相色谱法测定兔血浆中的葛根素，以体积分数为6%的高氯酸沉淀血浆蛋白质，用3P87程序计算药动学参数和生物利用度。结果:愈风宁心胶囊在兔体内的过程为二室开放模型，主要动力学参数是t,_{/1/2(β) = 78. 03 min, Cl = 10. 283 L· in^-1, AUC = 97.25mg·min·L^-1，cmax=0.675 mg·L^-1，达峰时间为44. 5 min.绝对生物利用度为5.45%.结论:该研究可为愈风宁心胶囊内在质量评价和剂型改革提供一定科学依据。}     

脑缺血再灌注大鼠灌胃养阴通脑颗粒后主要成分葛根素的药动学研究

目的采用脑-颈静脉双通道微透析法观察大鼠灌胃养阴通脑颗粒后主要成分葛根素的药动学参数。方法采用HPLC技术建立大鼠脑和颈静脉微透析液中葛根素的含量测定方法,并考察微透析探针回收率;大鼠植入颈静脉和脑微透析探针引导管,并制作大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型。灌胃给予2.5 g/mL养阴通脑颗粒,测定脑、颈静脉微透析液葛根素的浓度变化,参数拟合分析药动学参数。结果观察MCAO模型大鼠灌胃给予2.0 g/mL养阴通脑颗粒后微透析液中葛根素的浓度,发现脑内葛根素浓度低于颈静脉,Tmax更加靠后,葛根素生物利用度在脑部明显低于血液中。结论建立的脑-颈静脉双通道微透析技术分析获得大鼠不同部位的药-时曲线,有助于开展中药及相关制剂的药动学数据及成分分布、生物利用度等参数。     

复方葛根合剂及葛根中葛根素含量的高效液相色谱分析

 目的为了控制复方葛根合剂和葛根药材的质量,需要建立其中有效成分葛根素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,考察了样品制备方法、流动相系统、检测波长等因素对分析结果的影响,色谱柱为Shim Pack CLC-ODS(6.0 mm×150 mm)不锈钢柱,以甲醇-水(29∶71)为流动相,流速1 mL·min^-1,检测波长306nm,进样量10μL。结果葛根素和其它组分可达基线分离,葛根素浓度在20.0～180.0 μg·mL^-1内线性关系良好(r=0.99998),合剂和生药的回收率分别为99.60%和100.4%,RSD＜1.6%,合剂经简单的稀释和过滤后即可直接进样测定。结论此法操作简便,结果准确可靠,精密度好。     

RP-HPLC分离测定甘葛藤茎叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量

目的：建立一种RP-HPLC方法,用于分离测定甘葛藤茎、叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量,为甘葛藤茎、叶的开发利用提供依据。方法：采用C₁₈色谱柱,甲醇(A)-1%冰醋酸(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min^-1,检测波长250 nm,柱温25 ℃。结果：3个化合物在测定的范围内具有良好的线性(r>0.999 5),方法的回收率在99.0%～101.6%。甘葛藤的茎中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量较叶中高。结论：所建立的方法准确、可靠,可作为甘葛藤的茎、叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元含量测定的方法。     

对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量

目的:建立对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量的方法,考察对照提取物在中药质量标准中应用的适用性和可行性。方法:Zorbax C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.02%磷酸(25∶75),检测波长250 nm。采用自制葛根对照提取物,测定葛根饮片中的3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷、大豆苷的含量,并与单一对照品测定法的实验结果进行比较。结果:对照提取物测定法的精密度、稳定性、重复性良好,并且测定结果与单一对照品测定法所得结果一致。2种测定方法所得数据的RSD低于2%。结论:葛根对照提取物可以用于葛根药材的质量控制,该文初步验证了对照提取物在中药应用的可行性。     

HPLC测定柴芩软胶囊中葛根素的含量

目的:建立HPLC测定柴芩软胶囊中葛根素的含量的方法.方法:采用高效液相色谱法进行测定,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水-磷酸(25∶75∶0.2)为流动相,检测波长250 nm.结果:葛根素在0.559 5～111.9 mg·L-1进样质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8,n=6),葛根素平均回收率为98.85％(n =6 RSD 0.83％);精密度试验(RSD 0.52％,重复性试验RSD 0.57％).结论:方法快速、简便、准确、专属性强、重复性好,可测定柴芩软胶囊中葛根素的含量.     

HPLC测定葛根饮片中5个成分的含量

目的:建立HPLC测定葛根饮片中3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷和大豆苷5个成分含量的方法.方法:采用Zorbax C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm),以甲醇-0.02％磷酸(25∶75)为流动相,检测波长250 nm.结果:方法学考察合格,并测定了12批葛根饮片中5个成分的含量.结论:该方法简便、快速、准确度高,可作为葛根饮片的质量标准.     

HPLC法测定心血顺宁颗粒中葛根素的含量

目的　建立高效液相色谱法测定心血顺宁颗粒中葛根素的含量。方法　采用 Sim- pack CL C C1 8色谱柱 (15 0× 4 .6 m m,5 μm) ,甲醇 - 0 .1%磷酸溶液 (2 2∶ 78)为流动相 ,检测波长为 2 5 0 nm。结果　葛根素在10 .72 8～ 5 3.6 4 0 μg· m L- 1在范围内与峰面积呈良好的线性关系 (r=0 .9995 ) ,平均回收率为 99.97% ,RSD=1.5 5 %。结论　本法简便、准确、重复性好 ,可用于该制剂的质量控制     

RP-HPLC法同时测定复方升麻颗粒中异阿魏酸、葛根素和芍药苷

目的建立一种同时测定复方升麻颗粒(升麻、葛根、白芍、荆芥、防风等)中葛根素、芍药苷和异阿魏酸的反相-高效液相色谱法。方法 Kromasil-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)为流动相。采用等度洗脱,同时变体积流量和变波长:1～11 min,体积流量为1.0 mL/mi,波长为230 nm;11.01～20.0 min体积流量为1.5 mL/min,波长为317 nm。结果葛根素、芍药苷和异阿魏酸在上述色谱条件下能完全分离。葛根素、芍药苷和异阿魏酸的线性范围分别为10～160μg/mL、20～320μg/mL和5～80μg/mL;平均回收率分别为100.6%,102.4%和96.5%;RSD分别≤1.9%、≤1.2%和≤1.8%。测得3份样品中葛根素为2.79～2.85 mg/g,芍药苷为15.5～15.7 mg/g,异阿魏酸为1.61～1.64 mg/g。结论该方法操作简便,可同时测定复方升麻颗粒中芍药苷、葛根素、异阿魏酸,精密度和回收率高,重复性好,结果符合要求。     

RP-HPLC法测定心痛平颗粒中葛根素的含量

目的建立心痛平颗粒中葛根素含量测定方法。方法采用HPLC法测定心痛平颗粒中葛根素的含量,色谱柱:AlltimaC18(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-0.3%磷酸溶液(26∶74),流速:1 mL/min,检测波长为250 nm。结果进样量在0.041 8~1.003 2μg范围内葛根素量与峰面积响应值呈良好的线性关系,r=0.999 9;平均回收率为99.6%,RSD为1.8%(n=6)。结论本方法简便、准确,可作为该制剂的质控方法。