rAAV／HCV核心抗原基因转染树突状细胞的免疫功能研究

目的 研究通过rAAV／HCV（hepatitis Cvirus,HCV）核心抗原基因（Coregene）转染树突状细胞（dendritic cell,DC）制备DC疫苗的免疫功能。方法分离外周血单个核细胞（DC前体细胞）,以rAAV／Core／Neo病毒转染DC前体细胞（基因转染组）,同时设293细胞裂解物刺激为对照组,转染12h后,均采用GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导成熟。7天后收集细胞,流式细胞仪检测rAAV／Core／Neo病毒转染效率（即HCV核心抗原表达率）及DC表面标志CDl4、CD40、CD80、CD83、CD86的表达情况,混合淋巴细胞实验检测DC刺激自体T细胞增殖的能力,^51Cr释放法检测CTL对抗原阳性靶细胞的杀伤效率及特异性。结果rAAV／Core／Neo转染DC的效率超过90％,成熟DC高表达CD40、CD80、CD83、CD86,转染后的DC具有较强的刺激自体T细胞增殖能力,其CTL对HCV核心抗原阳性靶细胞具有很高的杀伤率及抗原特异性。结论rAAV／Core／Neo能够高效转染DC,转染后的DC能刺激自体T细胞增殖,使CTL对HCV核心抗原阳性靶细胞具有杀伤活性。     

日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞功能的影响

目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响。方法利用脂质体介导的基因转染技术将日本血吸虫Sj26基因转染DC,流式细胞术(FACS)检测Sj26基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测Sj26基因转染的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用。结果Sj26基因转染后Sj26蛋白在DC中高表达,摄取抗原的能力降低,与pcDNA3转染的DC和未转染的DC相比,Sj26基因转染的DC能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论Sj26基因转染DC后能促进DC的活化,增强DC的生物学活性。     

TGF-β1基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）基因转染后对大鼠树突状细胞（DC）生物学特性的影响。方法将TGF-β1基因导入大鼠DC,G418筛选,检测转染细胞TGF-β1的表达及其生物学活性,并进行混合淋巴细胞反应（MLR）。结果TGF-β1基因转染的DC可以分泌TGF-β1,而且可特异性抑制血管内皮细胞,对T淋巴细胞的增殖有抑制作用。结论利用构建的TGF-β1表达质粒转染大鼠DC,转入的TGF-β1基因可以在DC内稳定表达,并且使DC的生物学特性发生相应的改变。     

肝癌抗原肽冲击转染p53的树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响

树突状细胞（DC）是体内功能最强大的专职性抗原呈递细胞，它们能高效摄取、处理抗原，并将多肽呈递给静息型T细胞，引起针对此抗原的特异性免疫反应。我们将全长野生型p53基因（wt—p53）转染小鼠骨髓来源的DC，然后用肝癌抗原肽修饰已转染野生型p53的DC（wt—p53DC），利用这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。     

重组人组织激肽释放酶基因转染人脐静脉内皮细胞

目的　探讨重组人组织型激肽释放酶 (HK)基因腺相关病毒载体 (rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作用。方法　将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒 pAAV MCS中 ,形成重组腺相关病毒 (rAAV HK)质粒 ,经聚合酶链反应 (PCR)检测和DNA测序后 ,将rAAV HK、pAAV Helper和 pAAV RC 3种质粒通过脂质体共转染 2 93细胞 ,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK ,采用 β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT10 80中的表达 ,间接计算病毒滴度 ,并观察转染基因在传代细胞中的表达。在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组 )和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组 ) 4 8h ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测两组HUVECsHKmRAN的表达 ,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果　rAVV/HK病毒滴度为 6 .2× 10 7个 /mL ,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT10 80细胞内稳定持续表达。与对照组比 ,HK转染组HUVECsHKmRNA表达增加 (P <0 0 0 1) ;而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。结论　HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HU VECs ,使其HKmRNA表达增加 ,NOS活性和NO含量升     

重组腺相关病毒(rAAV)介导的基因转染的遗传影响研究

目的：重组腺相关病毒载体（rAAV）是治疗遗传性疾病和慢性病最有前途的基因载体，本文研究重组腺相关病毒介导的基因转染的遗传效应。方法：将成年的2月龄雄性昆明小鼠分为三组，分别自尾静脉注入rAAV-D（＋）-HK、rAAV-D（＋）-GFP病毒颗粒和生理盐水，两周后将其以1：1的比例与成年的雌性昆明小鼠合笼。观察各组小鼠在一周内的受孕率、各组产仔情况、第一代及其子代的主要脏器组织形态学特性、HK基因在第一代及其子代的表达情况，以及HK基因的整合情况等。结果：重组腺相关病毒对基因转染小鼠的受孕率、产仔情况无影响；重组腺相关病毒携带的目的基因可以在第一代和第二代小鼠中实现稳定表达，并可整合到第一代和第二代小鼠的基因组中，基因转染的第一代和第二代小鼠的主要脏器病理学检查均未见明显异常；重组腺相关病毒并未影响第二代小鼠的生长发育。结论：重组腺相关病毒载体可通过昆明小鼠的血-睾屏障，在第二代小鼠中实现稳定表达。且在第一代和第二代昆明小鼠中均未观测到明显的毒性反应。     

树突状细胞负载甲胎蛋白、细胞毒性T细胞表位肽后的免疫应答

目的 用负载hAFP 218-226位LLNQHACAV九肽的树突状细胞（dendritic cells,DC)诱导自身淋巴细胞，使之活化为肝细胞癌（HCC）特异性细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL)，并特异性杀伤HCC细胞。方法 在体外用GM-CSF和IL-4诱导HLA-A2^ 健康志愿者外周血单核细胞，使其分化为高纯度DC。用负载hAFP 218-226位LLNQHACAV九肽的DC诱导自身淋巴细胞，使之成为HCC特异性CTL。结果 诱导的DC分泌较高水平的IL-12（17.6-21.5pg/ml)，其中以第7天为最高（21.5pg/ml)，经DC和DC负载AFP表位肽后活化的淋巴细胞培养上清液中TNF水平均比在IL-2条件下培养的未活化淋巴细胞高。L929细胞死亡百分率分别为80.65和11.6%；经DC和DC负载AFP表位肽后活化的淋巴细胞培养上清液中IL-12水平分别为20.5pg/ml和46.9pg/ml，经DC活化后淋巴细胞增殖指数大于3。活化后的淋巴细胞不但特异性杀伤HLA-A2^ 的HCC细胞HepG2和负载AFP表位肽的T2细胞，而且还不同程度杀伤HLA-A3^ HCC细胞Alexander和其它表型HCC细胞，对NK细胞敏感的靶细胞慢性髓原白血病细胞K562也有较强的杀伤作用。结论 负载hAFPHLA-A2限制性CTL九肽的DC对表达AFP HCC的研究和治疗有潜在应用价值。     

树突状细胞疫苗治疗肝细胞癌的现状

树突状细胞（Dendritic cell，DC）是目前发现的抗原递呈功能最强的专职抗原递呈细胞，在抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用。随着体外扩增DC和制备DC疫苗技术的发展，DC疫苗日益成为肝癌和其它肿瘤治疗的研究热点。本文就DC的生物学特性、肝癌患者DC的特点、抗原的负载方法及其研究现状等作一综述     

Ghrelin增强树突状细胞的免疫功能

目的 探讨Ghrelin能否调节树突状细胞(DC)的免疫功能.方法 自人外周血单核细胞制备DC;以TNF-α诱导DC成熟,然后以Ghrelin刺激DC;检测经Ghrelin刺激后DC表面B7-H1的表达和细胞因子的表达,并进一步检测该DC诱导T淋巴细胞增值能力.结果 Ghrelin下调TNF-a诱导的B7H1的表达,并进一步增强其诱导T淋巴细胞增殖活性;抗B7-H1抗体能增强该DC诱导T淋巴细胞增值活性;特异性的PKC抑制剂能逆转Ghrelin对DC免疫功能的调节.结论 Ghrelin通过抑制B7-H1表达增强DC的免疫功能,提示Ghrelin将可能在肿瘤和感染性疾病中发挥重要作用.     

支气管哮喘患儿外周血树突状细胞上前列腺素D2受体改变研究

目的研究不同病期支气管哮喘（简称哮喘）患儿单核细胞衍生的树突状细胞（dendritic cells,DC）上前列腺素D2受体（DP／CRTH2）结合容量改变,探讨其对Th2极化的影响。方法随机病例对照研究。分哮喘急性发作期组32例,平均年龄（6．1±3．5）岁,缓解期组30例,平均年龄（5．8±2．6）岁,正常对照组34例,平均年龄（7．2±3．8）岁。用放射配体结合分析法测定外周血DC上DP1／CRTH2结合容量;用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定外周血白介素4（IL-4）、IL-5和γ干扰素（IFN-γ）。结果哮喘发作期和缓解期组DC上总结合和CRTH2受体结合容量比正常对照组显著增加,DP总结合为：（532．42±123．87）fmol／10^6细胞、（491．78±110．64）fmol／10^6细胞、（274．61±87．16）fmol／10^6细胞;CRTH2为：（355．66±99．19）fmol／10^6细胞、（316．83±81．42）fmol／10^6细胞、（123．74±49．27）fmol／10^6细胞;而DPI差异无统计学意义（P〈0．01）。发作期和缓解期组Th2细胞因子IL-4、IL-5比正常对照组显著增加,IL-4为：（12．76±3．54）ng／L、（11．44±2．65）ng／L、（7．49±1．45）ng／L;IL-5为：（36．28±10．21）ng／L（32．11±11．56）ng／L、（18．48±5．65）ng／L（P〈0．01）;发作期和缓解期组Th1细胞因子IFN-7比正常对照组显著减少,IFN-γ为：（7．47±2．49）ng／L（7．56±1．41）ng／L、（13．13±1．44）ng／L（P〈0．01）。结论哮喘患儿发作期和缓解期外周血DC上CRTH2受体表达和Th2细胞因子IL-4、IL-5分泌增加。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)的免疫功能.方法从慢性乙型肝炎患者外周血中分离单个核细胞,用无血清培养法分离培养DC,用流式细胞仪检测DC表型,用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用,用ELISA法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中细胞因子的分泌水平.结果患者组DC的CD86的表达率为(70.2±5.2)%,明显低于正常人组(95.3±3.8)%,P＜0.01;其诱导T细胞增殖能力每分钟液闪计数cpm为10000±2000,明显低于正常人组(cpm为30000±3000),P＜0.01患者MLR中IL-12为(120.0±19.7)pg/ml,γ-干扰素为(799.0±161.3)pg/m1,明显低于正常人组的(280.0±41.1)pg/ml和(3359.0±635.4)pg/ml,P＜0.01.结论慢性乙型肝炎患者外周血DC免疫功能低下,并与DC表面CD86的表达率下降及DC分泌IL-12减少密切相关.     

e抗原阳性慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞干扰素β的表达

目的探讨慢性乙型肝炎患者树突状细胞干扰素β（IFN—β）表达与乙型肝炎病毒（HBV）感染后宿主免疫清除障碍的关系。方法选择e抗原阳性慢性乙型肝炎患者52例,健康对照48例,用免疫磁珠细胞分选乙型肝炎e抗原（HBeAg）法从外周血获得纯化的CD14^＋单核细胞,并用hOMCSF、hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的髓样树突状细胞（mDC）,加入polyI：C（25ug／ml）刺激后获得成熟的mDC,在刺激后0h、12h、24h、48h用流式细胞仪检测细胞表面分化抗原CD86、HLA-DR、CD1a,real—time PCR检测IFN8的表达变化。用ELISA方法检测mDC细胞上清液中IFN-β、IL-12、IL-10的浓度变化。结果两组mDC上0h IFN-β mRNA表达水平及细胞上清液中IFN—β浓度差异无统计学意义（P〉0．05）。健康对照组mDC在12hIFN—β mRNA表达水平及IFN-β浓度与0h相比显著升高（P〈0．05）,较患者组0h、12h、24h、48h IFN—β表达显著升高（P〈0．05）。而患者组mDC刺激后12h、24h和48hIFN—β mRNA及IFN-β表达水平与0h相比无显著变化。与0h比较,健康对照组12h、24h、48hCD86表达水平较患者组显著上升（P〈0．05）。两组之间CD1a、HLA—DR表达差异无统计学意义。二组IL-10及IL-120h表达水平差异无统计学意义（P〉0．（15）,患者组IL-10表达24h及48h与0h相比明显上升（P〈0．05）。而对照组12h、24h、48hIL-10表达水平没有明显上升。与之相反,患者组12h、24h、48hIL-12表达与0h相比表达水平没有明显上升,对照组在12hIL-12表达水平与0h相比差异有统计学意义（P〈0．05）,24h、48hIL-12表达水平继续升高（P〈0．05）。结论慢性HBV感染者mDC受polyI：C刺激后IFN-β表达异常,协同刺激因子CD86表达低下,可能造成宿主对HBV感染的免疫清除障碍,导致疾病慢性化。     

Interferon-gamma production by human cord blood monocyte-derived dendritic cells

Interferon (IFN)-gamma is produced by T cells and natural killer cells and activates monocytes and dendritic cells (DCs). Recently, IFN-gamma has been shown to be produced by mouse DCs following stimulation with interleukin (IL)-12, which is markedly augmented by the addition of IL-18. We here analyzed whether human DCs secrete IFN-gamma in response to IL-12 and/or IL-18. Human immature DCs, generated from cord blood CD14(+) monocytes by treating with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and IL-4, were incubated with IL-12 and/or IL-18 and assayed for IFN-gamma production. IL-12, but not IL-18, weakly induced IFN-gamma production, while IL-12 together with IL-18 induced high levels of IFN-gamma production. Similar results were obtained with mature DCs, although levels of IFN-gamma production were less than those in immature DCs. Also with mature and immature DCs, IL-12 upregulated the expression of IL-18 receptor alpha (Ralpha), and costimulation with IL-12 and IL-18 upregulated CD40 expression. Anti-IL-18Ralpha antibody abrogated both the IFN-gamma induction and the CD40 upregulation by IL-12 plus IL-18. These findings suggest that IL-12 upregulates IL-18Ralpha expression on human DCs and acts synergistically with IL-18 to induce high levels of IFN-gamma, which subsequently enhances CD40 expression on DCs in an autocrine manner.     

Immunotherapy with dendritic cells and cytokine-induced killer cells for hepatocellular carcinoma: A meta-analysis

BACKGROUND Hepatocellular carcinoma(HCC) has been revealed as the second most common cause of cancer-related deaths worldwide. The introduction of cell-based immunotherapy, including dendritic cells(DCs) and cytokine-induced killer cells(CIKs), has brought HCC patients an effective benefit. However, the efficacy and necessity of cellular immunotherapy after different interventional therapy remains to be further explored.AIM To investigate the efficacy of cellular immunotherapy, involving DCs and CIKs,combined with different conventional treatments of HCC.METHODS We performed a literature search on PubMed and Web of Science up to February15, 2019. Long-term efficacy(overall survival and recurrence) and short-term adverse effects were investigated to assess the effectiveness of immunotherapy with DCs and/or CIKs. Review Manager 5.3 was used to perform the analysis.RESULTS A total of 22 studies involving 3756 patients selected by eligibility inclusion criteria were forwarded for meta-analysis. Combined with the conventional clinical treatment, immunotherapy with DCs and/or CIKs was demonstrated to significantly improve overall survival at 6 mo [risk ratio(RR) = 1.07; 95%confidence interval(CI): 1.01-1.13, P = 0.02], 1 year(RR = 1.12; 95%CI: 1.07-1.17, P 0.00001), 3 years(RR = 1.23; 95%CI: 1.15-1.31, P 0.00001) and 5 years(RR =1.26; 95%CI: 1.15-1.37, P 0.00001). Recurrence rate was significantly reduced by cellular immunotherapy at 6 mo(RR = 0.50; 95%CI: 0.36-0.69, P 0.0001) and 1 year(RR = 0.82; 95%CI: 0.75-0.89, P 0.00001). Adverse effect assessment addressed that immunotherapy with DCs and/or CIKs was accepted as a safe,feasible treatment.CONCLUSION Combination immunotherapy with DCs, CIKs and DC/CIK with various routine treatments for HCC was evidently suggested to improve patients' prognosis by increasing overall survival and reducing cancer recurrence.     

肝细胞癌患者外周血单个核细胞Foxp3 mRNA水平变化*

目的 检测初发现未治疗肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中 Foxp3 mRNA水平变化及其与血清AFP水平的关系。方法 在HCC患者60例和健康人20例,采用RT-PCR法检测PBMCs中Foxp3 mRNA水平,常规检测血清AFP水平。结果 HCC患者和健康对照组外周血Foxp3 mRNA水平分别为（0.976±0.073）和（0.772±0.083）,差异有统计学意义（P<0.01）;经Pearson相关性分析显示,HCC患者外周血Foxp3 mRNA水平与AFP水平呈正相关（r＝0.226,P＝0.025）。结论 HCC患者PBMCs 中Foxp3水平明显升高,对肿瘤的发生发展可能具有一定的预测作用。     

瓜氨酸化波形蛋白对类风湿关节炎患者外周血来源树突状细胞的干预作用

目的 探讨波形蛋白瓜氨酸化前后在体外对类风湿关节炎(RA)患者外周血来源树突状细胞( DCs)的细胞形态、表型和功能的影响.方法 分离外周血单个核细胞(PBMCs),粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4体外培养制备未成熟DCs(imDCs),分别用脂多糖、瓜氨酸化波形蛋白(cVim)和波形蛋白刺激培养的imDCs,磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照,流式细胞仪检测DCs表面标志CD14、CD80、CD83、CD86、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ、MHCⅡ表达变化.将实验组获得的DCs和同种异体T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过单溶液细胞增殖分析(MTS)法检测T细胞的增殖情况.采用t检验.结果 以阴性对照组imDCs的各个免疫表型阳性率作为1,脂多糖能显著诱导RAimDCs表面MHCⅡ、CD80、CD83、CD86表达(1.07±0.14,1.25±0.13,1.90±1.08,2.44±0.65,P均＜0.05);cVim诱导MHCⅡ(1.18±0.09)、CD83( 1.97±0.99)表达水平上调(P＜0.05,P＜0.01);波形蛋白对MHCⅡ及CD83、CD86表达无影响(0.950.11,0.90±0.29,1.04±0.06),仅抑制CD80表达(0.82±0.18,P＜0.01).与脂多糖组相比,cVim组的MHCⅡ表达水平显著增高(P＜0.05),而CD80、CD86(0.83±0.36、1.32±0.15)的表达水平则低于脂多糖组(P＜0.01,P＜0.05);cVim组MHCⅡ和CD83的表达水平显著高于波形蛋白组(P均＜0.05).混合淋巴细胞反应显示经脂多糖和cVim诱生的DCs对同种异体T细胞具有明显刺激增殖作用,且随着DCs细胞浓度的增加而作用增强;波形蛋白诱生的DCs则无刺激增殖作用.结论cVim可诱导imDCs成熟,并且能够提高细胞表面共刺激分子的表达.     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞的培养鉴定和功能特点

目的：研究慢性乙型肝炎患者树突状细胞（DC）的功能特点,探讨其与肝炎发病机制的关系。方法：分离获得18例慢性乙型肝炎患者和10例正常人外周血单个核细胞（PBMC）,在体外培养条件下,加入细胞因子重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）,IL－4,胎肝酪氨酸激酶受体的配体（FLt3-L)和肿瘤坏死因子α（TNFα）,使DC细胞增殖,成熟,用流式细胞仪检测DC的表面标志,同时检测DC在混合淋巴细胞反应（MLR）中的刺激能力和细胞因子的分泌。结果：DC在体外经细胞因子的刺激可明显增殖,但慢性乙型肝炎患者DC的增殖速度低于正常人;DC表面标志人组织相容性复合物Ⅱ类分子（HLA－DR）,CD－80（B7－1）,CD－86（B7－2）和CD－1α的表达较正常对照组均明显降低（P＜0．001）,尤以CD－1α的降低更为显著,DC在MLR中的刺激能力亦明显低于正常对照。并且与正常对照相比,其产生的IL－12水平降低,而NO水平却增高（P＜0．05）。结论：慢性乙型肝炎患者DC的表型不成熟和功能的缺失,由此导致IL－12的产生和刺激T细胞增殖能力的降低,可能是HBV感染持续发展的原因之一。     

脂多糖对人外周血树突状细胞成熟的影响

目的 通过研究内毒素的不同作用方式,模拟慢性乙型肝炎肠源性内毒素血症,探讨脂多糖(LPS)对人外周血树突状细胞(DC)成熟的影响.方法 用重组人粒细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4、酪氨酸激酶受体3配体和肿瘤坏死因子α体外诱导、培养人外周血单个核细胞.分为持续刺激组:于1、4、7、9 d加入LPS 1 μg/ml;短期刺激组:于7、8 d加入LPS 1 μg/ml;对照组:不加LPS.观察细胞形态,用流式细胞仪检测细胞表型,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T淋巴细胞的能力,用酶联免疫吸附法检测DC分泌细胞因子的水平.组间比较采用SPSS10.0统计学软件进行单因素方差分析,进一步两两比较用SNK法.结果 DC表达人白细胞-DR抗原、CD86、CD80、CD83分子水平,持续刺激组分别为65.81%±10.96%、48.81%±18.13%、13.56%±5.48%、11.52%±5.09%,对照组分别为78.43%±20.34%、51.29%±15.75%、15.22%±5.53%、15.64%±5.26%,短期刺激组分别为89.83%±16.99%、69.90%±24.05%、25.97%±10.81%、25.96%±10.59%,持续刺激组DC表面分子表达水平低于短期刺激组和对照组,各组比较,F值分别为3.376、3.823、4.535、5.320,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.3组DC诱导同种异体混合T淋巴细胞的增殖指数分别为1.593±0.303、1.949±0.240、1.548±0.365,各组比较,F=3.572,P=0.049,差异有统计学意义.3组DC表达干扰素γ水平短期刺激组为(40.52±11.38)pg/ml,高于对照组和持续刺激组[分别为(21.57±7.68)pg/ml、(15.6±5.83)pg/ml],各组比较,F=3.403,P=0.019,差异有统计学意义.3组DC表达白细胞介素12水平短期刺激组为(84.45±31.28)pg/ml,高于对照组和持续刺激组[分别为(54.42±20.34)pg/ml、(51.77±11.02)pg/ml],各组比较,F=2.212,P=0.088,差异有统计学意义.结论 LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟,可能是肠源性内毒素血症患者细胞免疫功能低下的原因所在.     

e抗原阳性慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞Toll样受体3的表达及意义

目的探讨Toll样受体3（TLR3）的表达与HBV感染后宿主免疫清除障碍的关系。方法选取轻度CHB患者50例,健康对照者48名,其外周血用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的CD14^＋单核细胞,用RPMI 1640培养基培养,并且用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的髓样树突状细胞（mDC）,加入聚肌胞刺激后获得成熟的mDC。分别在剌激后0、12、24、48h用流式细胞仪检测TLR3、CD86、HLA-DR和CD1a的表达,实时PCR检测TLR3的表达变化。结果健康对照组中mDC在刺激后24h,TLR3表达较0 h时上调显著（P〈0.05）,48h时TLR3的表达与0h相比差异无统计学意义（P〉0.05）;患者组在刺激后12、24h TLR3的表达与0h时相比,上调不明显,48h时TLR3的表达显著上调（P〈0.05）。实时PCR检测mDC上TLR3 mRNA结果发现,对照组TLR3 mRNA在刺激后12h的表达水平较0h显著上升（P〈0.05）,也显著高于患者组刺激后0、12、24h的表达水平;患者组刺激后48h的TLR3 mRNA表达水平较0h显著上升（P〈0.05）。与0h比较,健康对照组在刺激后12、24h和48h,CD86的表达水平显著高于患者组（P〈0.05）。患者组与对照组间CD1a和HLA-DR的表达差异无统计学意义。结论慢性HBV感染者mDC受聚肌胞刺激后TLR3表达异常,协同刺激因子CD86表达低下,可能造成宿主对HBV感染的免疫清除障碍,导致疾病慢性化。