人脑恶性胶质瘤细胞体外长期传代培养的研究

报告SHG-44(星形细胞瘤Ⅱ～Ⅲ级)细胞的建系经过。该系的细胞生长旺盛,每7～10天传代一次,每8天细胞数增加8～9倍。细胞的形态有星形和梭形两种。动物异种移植成功率在60%以上,移植瘤经光镜和电镜证实与原来的人脑恶性胶质瘤相似。生化学提示培养细胞和移植瘤的LDH同功酶呈M形。培养细胞中存在胶质细胞标记蛋白S-100蛋白。染色体以超三倍体为主。从移植能、形态学、生化学等提示SHG-44细胞较好地保持了人脑恶性胶质瘤细胞的特征,为我国进一步研究人脑恶性胶质瘤提供了一个工具。     

荷人脑瘤裸小鼠模型（NHG—1）的移植瘤染色体分析

为探讨荷人脑恶性胶质瘤裸小鼠模型长期体内生长传代过程中移植瘤的染色体特性，我们对SHG－44第67代细胞及由该细胞接种于裸小鼠以后建立的NHG－1第1、22、35、40、45和50代移植瘤细胞进行染色体分析。结果染色体分布，SHG－44第67代细胞超三倍体染色体高达83％；NHG-1第1代移植瘤细胞仍以超三倍体染色体为主，占46％；第22代移植瘤细胞则以亚三倍体染色体为主，占70％；第35代以后各代移植瘤细胞均以亚二倍体染色体为主，染色体分布稳定。染色体核型，SHG－44细胞10个G显带分析，均可见到3条较长的亚中部着丝点标记染色体。NHG－1移植癌细胞每代5个细胞G显带核型分析，发现存在着人脑染色体。     

敏感化疗与增敏放疗治疗脑瘤的疗效观察

目的探讨脑胶质瘤术后敏感药物间质化疗联合增敏放疗的临床疗效。方法恶性脑胶质瘤158例最大限度地全切或次全切,术中于瘤残腔内安置化疗囊,术后第2、4、6、8周分别注射一次经MTT法筛选出的敏感化疗药物ACNU,BCNU,VM26,DDP,5-FU,MMC,ACR,ADM和BLM中的一种,生理盐水2～4ml稀释后穿刺化疗囊,微泵调控注射6～8h．同时行全脑增敏放疗,2Gy／次,5次／周,总量55～60Gy,以后成倍延长间质化疗时间间隔．结果158例平均随访3年,无明显不良反应,其中显效(肿瘤完全消失)46例,有效(肿瘤部分消失)78例,无变化19例,恶化15例、平均生存时间66周,总有效率78．5％、结论手术后敏感药物间质化疗联合增敏放疗治疗恶性脑胶质瘤安全有效。     

恶性胶质瘤术后放疗

目的分析恶性胶质瘤术后的临床疗效及预后因素。方法72例术后恶性胶质瘤，经术后病理组织学证实，术后尽早开始放疗，用6或8MVX线先全脑照射DT36—40Gy／4周，再局部照射DT20～24Gy／2～3周。加用化疗者，局部照射开始时加用MVF方案化疗1周期，以后每4～6周重复1次，共2～3个周期。结果全组病例1、3、5年生存率分别为58．3％、21．3％、16．8％。死亡原因以肿瘤局部复发为主，其次为脊髓种植和其他系统转移。单因素和多因素分析显著影响顸后因素为：放疗时机、是否加化疗、切除程度、病理分级。结论恶性胶质瘤的临床治疗应在不影响功能的前提下尽可能彻底切除，术后尽早放疗加化疗能够改善生存。     

大鼠额叶C6胶质瘤模型建立及应用

目的：采用立体定向技术建立Wistar大鼠额叶C6胶质瘤模型,观察成瘤动物的生物学特性,总结建立此模型的成功经验。方法：利用立体定向技术于纯种Wistar大鼠额叶接种C6胶质瘤细胞,观察大鼠的生物学特性,取脑标本行常规HE染色及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色,观察肿瘤标本的病理特征和GFAP阳性情况。结果：大鼠脑内接种C6胶质瘤细胞的成功率为100％,成瘤大鼠的平均生存期为4周,肿瘤内部出现大片的坏死灶,坏死灶与肿瘤灶相间分布,采用免疫荧光检查发现,坏死灶不显影,而肿瘤灶呈条索状的免疫荧光条带。结论：立体定向技术可有效地建立Wistar大鼠额叶C6胶质瘤模型,其病理学特征符合胶质瘤的形态学特性,该模型在研究胶质瘤治疗方面有广泛的用途。     

9L/F344大鼠脑胶质瘤模型的建立和增强MRI对种植瘤生长的动态观察

目的建立9L/F344大鼠颅内脑胶质瘤模型,用增强MRI动态观察肿瘤生长。方法应用大鼠立体定向仪,在F344大鼠右侧尾状核区接种9L胶质瘤细胞1×105个;观察大鼠的生存状态、体重及活动等情况;分别于大鼠接种后第8、12、17、20、23天在小动物线圈下行大鼠头部强化MRI检查,动态观察肿瘤的生长情况;第20天,取肿瘤标本做组织病理学和神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化检查。结果大鼠平均生存期25d。大鼠成瘤率100%。增强MRI动态观察显示同一时期内大鼠的肿瘤体积均一,肿瘤的生长速度和形态符合胶质瘤生长特性;肿瘤组织病理学上接近人恶性脑胶质瘤的病理特点。结论该方法建立的9L/F344大鼠脑胶质瘤动物模型稳定性好,移植瘤生长均一,适合用于胶质瘤的基础研究。     

Dynamic observation of intracerebral glioma xenografs growth with enhanced MRI in 9L/F344 rats

目的 建立9L/F344大鼠颅内脑胶质瘤模型,用增强MRI动态观察肿瘤生长.方法 应用大鼠立体定向仪,在F344大鼠右侧尾状核区接种9L胶质瘤细胞1×105个;观察大鼠的生存状态、体重及活动等情况;分别于大鼠接种后第8、12、17、20、23天在小动物线圈下行大鼠头部强化MRI检查,动态观察肿瘤的生长情况;第20天,取肿瘤标本做组织病理学和神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化检查.结果 大鼠平均生存期25d.大鼠成瘤率100％.增强MRI动态观察显示同一时期内大鼠的肿瘤体积均一,肿瘤的生长速度和形态符合胶质瘤生长特性;肿瘤组织病理学上接近人恶性脑胶质瘤的病理特点.结论 该方法建立的9L/F344大鼠脑胶质瘤动物模型稳定性好,移植瘤生长均一,适合用于胶质瘤的基础研究.     

内皮抑素对胶质瘤病理特征影响的实验研究

目的探讨内皮抑素对胶质瘤病理特征的影响及分子药理学机制。方法利用经抗性筛选可表达内皮抑素的C6细胞裸鼠皮下注射制作胶质瘤模型,光镜和电镜观察其病理特征,ELISA法检测瘤组织中VEGF含量。结果转染有内皮抑素cDNA片段的C6胶质瘤组织中VEGF含量明显低于仅转染有空载体的C6胶质瘤组(P<0.01)。前者肿瘤边界清楚,瘤体未见明显的出血和囊性变,瘤体和瘤周均无明显的水肿;瘤组织内血管稀少,未见类微血管样结构;瘤体内可见大片不规则坏死,但坏死灶周和瘤周均无明显的血管反应,瘤周侵袭少见,可见凋亡瘤细胞;血管内皮细胞胞质内未见内VVO样结构,基板不连续,基底膜疏松。而仅转染有空载体的C6胶质瘤瘤周血管反应明显,瘤体和瘤周水肿严重,瘤细胞可侵袭瘤周组织,瘤内组织明显出血坏死,且可见瘤细胞形成类微血管样结构,血管内皮细胞胞质内VVO样结构较多,水肿越明显VVO样结构越多见,并与移植瘤组织中VEGF表达相一致,血管基板完整、连续,多数基质疏松,呈多层排列,外层可见少量胶原纤维。所观察的几种肿瘤中的微血管内皮细胞孔窗及血管周胶原纤维与转染的目的基因无明显的关系,且内皮细胞的凋亡均不明显。结论内皮抑素不会直接诱导胶质瘤组织内血管内皮细胞的凋亡,但可通过诱导VEGF的表达的下调而抑制瘤周血管反应和肿瘤新血管的生成。     

SHG-44细胞体内外实验中KDR mRNA 的表达及意义

目的探讨插入型激酶受体(KDR)mRNA在裸小鼠可移植人脑胶质瘤不同生长阶段与不同组织区域中的表达规律,以及探讨其与肿瘤血管形成的作用关系,以期从肿瘤间质角度为胶质瘤选择治疗靶点提供实验依据.方法利用恶性人脑胶质瘤SHG-44细胞进行裸小鼠体内实验:在30只裸小鼠(10组)皮下建立SHG-44细胞移植瘤动物模型,每5天取一组标本,以KDR mRNA原位分子杂交技术处理移植瘤石蜡标本.同时在体外进行SHG-44细胞原位杂交,所得结果和移植瘤比较分析.结果 KDR mRNA高表达于移植瘤中内皮细胞和部分瘤细胞,且在移植的早期(5-15d)和晚期(35-50d)以及在缺氧瘤组织区域上存在相对高表达.体外SHG-44细胞不表达KDR mRNA.结论 KDR mRNA在移植性人脑胶质瘤细胞中有较高表达,在不同的生长阶段和不同的瘤组织区域上存在差异表达的规律性,对肿瘤血管形成具有重要作用.KDR可作为抗胶质瘤血管形成的治疗靶点.     

人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌SW480细胞移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性。方法将处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞接种于10只裸鼠右侧背部皮下,待瘤体生长至直径1～2 cm时处死裸鼠,取出肿瘤组织,将其磨碎并与培养基混合、过滤,滤液与基质胶混合,再将基质胶细胞悬液接种于30只裸鼠右侧背部皮下7,d后处死裸鼠,观察肿瘤大体特征,光镜及电镜下观察肿瘤病理学特征。结果接种SW480细胞的裸鼠于接种后4周有3只成瘤。接种基质胶细胞悬液的裸鼠在接种后7 d有28只成瘤,瘤体形状规则,肿瘤组织呈现典型癌变特征。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,该模型成瘤率高,瘤体形状规则,病理学改变与临床非常相似,为研究人结肠癌干预措施提供了较为理想的动物模型。     

在免疫功能健全的正常小鼠肾被膜下人体肿瘤异种移植物的生长

作者基于在无毛小鼠中11天时间规程的肾被膜下试验,成功地预示皮下异种移植物的化疗反应这一事实及免疫基本过程,设计了将人体肿瘤移植于免疫功能健全的正常小鼠肾被膜下,以筛选药物。方法:将瘤块(1mm~2)移植于免疫功能健全的正常小鼠肾被膜下,次日开始给药,至接种后第6天终止实验,摘除荷瘤肾脏,用带有目镜测微尺的立体显微镜原位测量瘤块大小,以给药前后瘤块平均长、短径之差表示肿瘤生长情况。另一组则在接种前24小时注射一次免疫抑制剂环磷酰胺(150mg/kg)。结果表明,被移植的五种人体肿瘤的大小在6～9天内达到峰值,给环磷酰胺组的瘤块长得较大且达到峰值也较晚,但两组肿瘤的生长率没有明显差异。接种于正常小鼠(6天)的瘤块的生长率与无毛小鼠(11天)相似。在无毛小鼠和正常小鼠肾被膜下31例手术标     

抑制组蛋白去乙酰化酶与DNA甲基转移酶活性对胶质瘤恶性表型的影响

目的:探讨阻断组蛋白去乙酰化酶与DNA甲基转移酶的活性后对胶质瘤恶性表型的抑制作用.方法:选择丙戊酸(VPA)为组蛋白去乙酰化酶抑制剂,5-氮杂-2'-脱氧胞苷(Aza)为DNA甲基转移酶抑制剂.将U251胶质瘤细胞分为对照组、VPA治疗组、Aza治疗组和VPA+Aza联合治疗组.采用四唑盐(MTT)比色法分析肿瘤细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V-FITC染色检测细胞凋亡,2D Matrigel、3D Matrigel、Transwell法检测胶质瘤细胞侵袭能力,并建立U251细胞裸鼠皮下移植瘤模型,进行肿瘤局部多点注射上述药物治疗,治疗24 d,每4天测量肿瘤体积.结果:与对照组比较,在治疗2d后各治疗组肿瘤细胞的增殖均出现明显抑制,S期和G2/M期细胞比例减少,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,治疗组细胞凋亡率明显下降,侵袭和运动迁移能力均明显下降,各治疗组鼠移植瘤体积增长较对照组明显减缓,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).以上结果均以VPA+Aza联合治疗组最为显著.结论:联合阻断DNA甲基转移酶和组蛋白去乙酰化酶活性可抑制胶质瘤表观遗传学特征,抑制胶质瘤恶性表型.     

个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立

目的:建立人肺癌个体化可传代组织块动物模型.方法:组织块移植组将直径2mm的人肺癌新鲜标本癌组织块移植于BALB/C裸鼠背部皮下组织内,每例人肺癌新鲜标本均移植入5只裸鼠体内,成瘤者为第1代.取第1代移植瘤组织块以相同方法每例标本移植于另5只BALB/C裸鼠背部皮下组织内,成功者为第2代.重复上述传代方法得到第3代移植瘤.将人肺癌细胞株A549、H1795分别移植于BACLC裸鼠背部皮下组织内,成瘤达500 mm3后取癌组织块.分别取实验组的原代人肺癌肿瘤及第1、2、3代移植瘤部分组织,及作为对照的细胞系移植瘤组织,固定于10％福尔马林溶液中,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察比较其形态异同.结果:组织块移植组瘤细胞不仅保留了人肺癌细胞的异型性,还保持原有排列结构；而作为对照的细胞系移植瘤细胞失去了原有的排列结构,仅保留了癌细胞的异型性.结论:利用不同患者的手术切除肺癌标本所建立的裸鼠荷人肺癌肿瘤模型具有个体化特征,为肺癌个体化治疗的研究提供依据.     

小鼠乳腺癌TM40D细胞株移植模型建立及其C-erbB-2的测定

目的　建立乳腺癌TM 4 0D细胞BALB/c小鼠移植模型 ,并检查其癌基因C erbB 2状况。方法　采用来源于BALB/c小鼠的乳腺癌TM4 0D细胞接种于BALB/c小鼠胸壁第 5～ 6肋间皮下 ,细胞数为 1× 10 6/只 ,观察成瘤情况。切除肿块作病理、C erbB 2免疫组织化学检查。结果　接种后 14d在接种部位可见肿块 ,直径 3～ 5mm ,肿瘤移植成功率为 93 33% (2 8/30 )。病理检查为乳腺癌 ,免疫组织化学C erbB 2阳性。结论　该方法建立的小鼠乳腺癌移植模型成瘤率高 ,为乳腺癌研究、尤其是以C erbB 2为靶的乳腺癌研究建立了一个很有价值的模型     

恶性胶质瘤术后早期放射治疗疗效观察

目的　对恶性胶质瘤手术后早期放射治疗的效果观察。方法　 2 0 0 1～ 2 0 0 3年间收治的 2 5例恶性胶质瘤病人行手术切除后 6～ 8天开始进行的局部的放射治疗 ,放射剂量为 4 0～ 6 0Gy。每 3个月复查颅脑MRI或强化CT。 结果　 3个月 ,6个月 ,9个月复查均未发现有复发的影像学改变 ;2 4个月复发 5例 ,占 2 0 % ,3年无病生存率占 80 %。结论　恶性胶质瘤手术后采用早期放射治疗可明显提高病人的生存期     

省神经外科学术会议在连云港市召开

江苏省神经外科学术会议于1984年10月11日～13日在连云港市召开,出席大会的正式代表53人,列席代表25人,收到论文74篇,其中实验性研究的论文较以前明显增多。苏州医学院报告的脑胶质瘤细胞裸小鼠移植实验研究,三年来已传代移植22代,移植成功率稳定在100％,并且具有稳定的生物学特征。南通医学院报告的脑缺血状态下大网膜移植的实验研究,证明了在大网膜移植于缺血脑皮层后3天,就能建立     

外源性H2S促进大鼠恶性胶质瘤的血管新生*

目的探讨外源性硫化氢（H2S）对大鼠恶性胶质瘤内血管新生的影响。方法成年雄性SD大鼠20只,随机分成肿瘤组和肿瘤-H2S组,每组10只。2组大鼠均脑内注射C6细胞,1周后,肿瘤组腹腔注射生理盐水,肿瘤-H2S组腹腔注射外源性H2S,即硫氢化钠（NaHS）溶液。均正常饲养,3周后断头取脑。组织病理学观察瘤体结构以及瘤内微血管生成情况,免疫组化评估瘤体内CD34及基质金属蛋白酶（MMP）-2的表达情况;并计数瘤内微血管密度（MVD）。结果肿瘤组与肿瘤-H2S组大鼠脑内均可见明显的肿瘤组织;与对侧正常脑组织相比,瘤内毛细血管明显增多;肿瘤-H2S组瘤体内有更多的CD34和MMP-2表达,肿瘤-H2S组瘤内MVD明显高于肿瘤组（均P＜0.01）。结论外源性H2S能促进大鼠恶性胶质瘤内的血管新生,其机制可能与H2S促进瘤体内MMP-2的表达有关。     

替莫唑胺可阻止神经胶质瘤生长

美国芝加哥西北大学Feinberg医学院神经科Stern医师报告 ,烷化剂替莫唑胺 (temozolomide)治疗恶性神经胶质瘤具有长期的安全性和疗效 ,它使胶质瘤的长期治疗成为现实。该项研究纳入了 1 6例 2 6～ 5 2岁的神经胶质瘤病人 ,其中 1 4例病人的恶性度为 3级或 4级 ,2例为低度恶性。     

无明显周围水肿的脑胶质瘤25例临床分析

目的：探讨部分脑胶质瘤病灶周围无水肿的原因和影象学特点。方法：回顾性分析近十年收治的无明显周围水肿的脑胶质瘤25例。结果：25例均经手术和病理证实,少枝胶质细胞瘤6例、星形细胞瘤Ⅰ级9例,Ⅰ～Ⅱ级5例,Ⅱ级4例,胶质增生1例;影象学特点：21例病灶周围无水肿、4例轻度水肿;25例中线结构均无移位。结论：低度恶性的脑胶质瘤部分患者病灶周围无明显水肿,无明显占住效应,瘤周水肿的程度与肿瘤的大小无线性关系,生长在静脉或静脉窦附近的肿瘤易发生周围水肿,肿瘤恶性程度越高、生长越快病灶周围水肿越重。     

雷公藤红素抑制可移植性人脑胶质瘤生长相关分子

目的 研究雷公藤红素在裸鼠胶质瘤动物模型治疗人脑胶质瘤的可行性.探讨雷公藤红素抑制SHG-44胶质瘤裸鼠移植瘤生长的作用机制.方法 建立BALB/c裸小鼠SHG-44胶质瘤移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为5组,采用腹腔内注射给药方法.雷公藤红素按4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg三种浓度分组给药;阳性对照顺铂组按2mg/kg给药.定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率.全部SHG-44裸鼠移植瘤石蜡标本用SP法免疫组化染色,检测移植瘤组织中的微血管计数(MVD)、以及bFGF、周期蛋白D1和PCNA的蛋白表达.结果 与溶媒对照组相比,雷公藤红素4mg/kg组、2mg/kg组均能抑制肿瘤生长(P＜0.05),其体积抑瘤率分别为35%和26.9%.雷公藤红素高剂量组能下调移植瘤组织中bFGF的蛋白表达(P＜0.05);MVD也随之降低(P＜0.05),呈剂量依赖关系.PCNA、周期蛋白D1在雷公藤红素高、中剂量组及阳性对照组移植瘤中的蛋白表达明显低于溶媒对照组(P＜0.05),呈剂量依赖关系.结论 雷公藤红素能明显抑制SHG-44裸鼠移植瘤生长,并存在剂量依赖性.其机制可能是下调bFGF的蛋白表达,抑制肿瘤血管生成,下调周期蛋白D1、PCNA的蛋白表达,对肿瘤细胞周期进行调控.