产ESBL肺炎克雷伯菌16SrRNA甲基化酶分布与耐药性研究

目的探讨产ESBL肺炎克雷伯菌临床分离株16SrRNA甲基化酶基因分布以及与耐药谱的关系。方法采用PCR法检测苍南县人民医院临床分离出的69株非重复产ESBL肺炎克雷伯菌中的16SrRNA甲基化酶基因（rmtB和annA）,通过DNA测序,确定ESBL基因及整合子基因;质粒接合试验和质粒消除试验确定16SrRNA甲基化酶基因传播途径,ERIC-PCR技术进行基因分型。结果69株产ESBL肺炎克雷伯菌rmtB阳性菌20株（28．99％）,其中2株同时携带有rmtB和amA。20株检测mtB阳性株均携带有CTX-M基因,14株为CTX-M-14基因,6株为CTX-M-15基因;14株携带TEM-l基因;8株携带SHV基因中,5株SHV-12基因,3株SHV-11基因;3株携带OXA-10基因;3株携带VBE-1基因。另有12株携带有intl阳性,含有5种不同耐药基因盒,分别携带drfA25、drfAl、drfAl2、aadAl、aadA2、sat和blavEB-基因。ERIC-PCR法显示20株16SrRNA甲基化酶基因阳性的肺炎克雷伯菌主要分为5型,A型为优势克隆菌株。质粒接合和消除试验发现A型克隆株KP5和KPl6rmtB均位于一质粒上并通过接合传播。结论产ESBL肺炎克雷伯菌临床分离株中普遍存在16SrRNA甲基化酶基因mtB,导致对多种氨基糖苷类抗生素高水平耐药。rmtB通过水平基因传播和克隆传播两种方式进行播散,并且存在同时产ESBLs、16SrRNA甲基化酶和I类整合子肺炎克雷伯菌传播。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的 对产超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药现状进行分析研究，对耐药株进行基因分型流行病学研究。方法 对临床分离的195株肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测并采用微量稀释法测定MIC值，判断细菌的耐药性；对产ESBLs菌株以随机扩增多态性DNA分型法（RAPD）进行基因分型。结果 产ESBLs肺炎克雷伯菌占23％，其中51％来源于重症病房（ICU）；ESBLs阳性细菌对12种抗生素的耐药性远远高于ESBLs阴性菌；20株产ESBLs肺炎克雷伯菌分为11型。结论 本院神经外科SICU、呼吸科RICU存在产ESBLs肺炎克雷伯菌的流行；合理使用抗生素，加强重点病区的消毒隔离措施，是控制医院感染流行的重要措施；RAPD是从分子水平对耐药细菌进行流行病学研究的一种经济、快速、可靠的基因分型方法。     

ICU和非ICU患者感染肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶和碳青霉烯酶检测

目的比较分析医院ICU和非ICU患者分离的肺炎克雷伯菌的耐药性、以及产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和碳青霉烯酶的情况。方法收集2016年1-12月医院ICU和非ICU患者感染的肺炎克雷伯菌50株,其中来自ICU患者20株,非ICU患者30株,经VITEK-2Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定;应用K-B纸片扩散法对抗菌药物进行敏感性测定;表型确证试验筛选ESBL;改良Hodge试验(MHT)检测碳青霉烯酶活性;聚合酶链反应(PCR)实验进一步确证KPC型碳青霉烯酶。结果 ICU患者和非ICU患者分离的肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素耐药率均在90.00%以上,对亚胺培南和美罗培南耐药的肺炎克雷伯菌仅来自于ICU患者;分离菌株中共有39株为ESBL表型确证实验阳性,其中来自ICU患者的有15株(75.00%),来自非ICU患者的有24株(80.00%),两组肺炎克雷伯菌在产ESBL方面差异无统计学意义,分离菌株中共有6株为MHT试验阳性,均来自ICU患者,其中有一株同时产ESBL和碳青霉烯酶,ICU患者和非ICU患者中分离的肺炎克雷伯菌在产碳青霉烯酶方面差异有统计学意义(P0.05),6株MHT试验阳性菌株中,仅有3株为KPC型碳青霉烯酶,检出率为50.00%。结论 ICU患者分离的肺炎克雷伯菌对头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素和环丙沙星的耐药率要高于非ICU患者,ESBL依然是临床分离肺炎克雷伯菌产生高耐药率的主要原因之一,耐碳青霉烯类抗菌药物肺炎克雷伯菌仅出现于ICU患者,KPC型碳青霉烯酶是原因之一。     

某医院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的了解某医院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌检出率,确定其基因型,并对其相关流行病学进行研究。方法收集2004年10月—2005年7月医院临床标本分离的多重耐药大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌134株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NC-CLS)所推荐的方法进行表型确证试验,以聚合酶链反应(PCR)法进一步检测CTX-M酶基因型,PCR产物测序并确定其基因型。随机扩增多态DNA(RAPD)对携带CTX-M酶的阳性菌株作流行病学分析。结果112株ESBLs表型阳性的肠杆菌科细菌中90株携带CTX-M基因,共检出3种基因型,即CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。RAPD共测40株菌,19株大肠埃希菌有7种RAPD类型,11株肺炎克雷伯菌有5种RAPD类型,10株阴沟肠杆菌有7种RAPD类型。结论肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs相当普遍,主要为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。CTX-M酶存在克隆传播。     

煤工尘肺住院患者感染肺炎克雷伯菌的检测分析

目的探讨煤工尘肺住院患者感染肺炎克雷伯菌的原因。方法检测2001~2002年与2003~2004年2个阶段中住院的煤工尘肺肺部感染患者的合格痰标本,对培养分离获得的肺炎克雷伯菌进行检测分析。结果2001~2002年检出致病菌株570株,分离到肺炎克雷伯菌146株;2003~2004年检出致病菌株706株,分离到肺炎克雷伯菌330株,分离到肺炎克雷伯菌占致病菌数的百分比分别是25.61%,46.74%,呈明显增加趋势。其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌株检出率分别为10.27%,29.39%。结论煤工尘肺住院患者感染肺炎克雷伯菌与煤工尘肺肺部弥漫性纤维化程度呈正相关,感染产ESBL菌株可能与院内交叉感染有关。     

肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶基因检测与分析

目的回顾性分析医院临床分离的肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶基因型。方法收集2008年1-12月医院临床分离耐头孢西丁非重复肺炎克雷伯菌68株,三维试验筛选产AmpC酶菌株,采用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序分析检测质粒AmpC酶基因型别。结果三维试验检出18株AmpC酶菌株,经PCR扩增18株菌均在405 bp处出现阳性条带,经DNA测序证实为DHA型质粒AmpC酶。结论医院临床分离的肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶均为DHA型,其耐药基因可在同种或不同种传播。     

8株医院血流感染肺炎克雷伯菌的PFGE分型

目的应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对某医院同一外科病房临床分离的8株肺炎克雷伯菌进行同源性分析,为医院感染控制提供依据。方法对此8株肺炎克雷伯菌,采用微量肉汤稀释法和K B法进行药物敏感试验,并以PFGE技术进行基因分型。结果药物敏感试验结果显示,除菌株Kp1外,菌株Kp2等其他7株肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物具有相同的药敏谱,且为多重耐药菌;PFGE分析亦显示此7株菌为同一谱型。结论此外科病房临床分离的8株肺炎克雷伯菌中有7株来源于同一克隆株,提示可能是一次医院感染暴发流行。     

K1型肺炎克雷伯菌毒力基因及分子分型研究

目的研究荚膜多糖分型K1型肺炎克雷伯菌的毒力基因及其分子分型情况。方法收集2013年3—12月期间浙江大学医学院附属第二医院健康体检中心429份健康体检者粪便标本,按不同年龄组计算肺炎克雷伯菌肠道分离率;"拉丝"试验检测高产黏液菌株;聚合酶链反应(PCR)扩增K1、K2、K5、K20、K54、K57、rmp A、mag A和wca G;K-B纸片法检测K1型菌株药物敏感性;采用多位点序列分型(MLST)对K1型肺炎克雷伯菌进行分型。结果粪便标本肺炎克雷伯菌分离率为22.61%。97株肺炎克雷伯菌中"拉丝"阳性率为39.18%。共检测到11株携带K1毒力基因的肺炎克雷伯菌,4株同时携带mag A、wca G和rmp A,9株同时携带wca G和rmp A。12岁组中未发现毒力基因存在。药敏结果显示K1型菌株除对氨苄西林耐药以外,对碳青霉烯类、喹诺酮类和头孢菌素类等抗生素均敏感。11株K1型菌株中有7株"拉丝"试验阳性。K1型菌株MLST分型结果,除1株为ST600外,其他均为ST23。结论粪便中分离的K1型肺炎克雷伯菌往往同时携带毒力基因rmp A、mag A和wca G,对临床常用抗菌药物敏感,ST23为其主要的临床流行株。     

大肠埃希菌和克雷伯菌属超广谱β-内酰胺酶的检测

目的 探讨超广谱β－内酰胺酶（ESBLs)介导的耐药性在临床分离的大肠埃然菌、克雷伯菌属中的作用。方法 收集耐氨苄西林的大肠埃然菌和克雷伯菌属146株,对其中119株β－内酰胺酶阳性的细菌用双纸片扩散法筛选产ESBLs菌株,阳性菌再用Etest复检;同时对36株含SHV基因的克雷伯菌用PCR－Nhe I酶切的方法从基因水平检测SHV－ESBL。结果 共筛选出28株细菌产ESBL,占产酶菌的23．5％,其中双纸片扩散法、Etest均阳性的细菌有25株,PCR－Nhe I酶发反应结果阳性的1株（155K）,DNA测序结果证实其所含SHV基因为SHV－2。结论 目前,大肠埃希菌、克雷伯菌属中SHV－ESBL介导的耐药性尚未占主要地位。     

肺炎克雷伯菌抗药基因检测与消毒剂抗性相关性分析

目的 研究医院临床分离及环境检出的肺炎克雷伯菌对消毒剂抗性水平和抗药基因携带的关系.方法 采用最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、聚合酶链反应(PCR)等试验方法,分析临床分离及环境中检出的肺炎克雷伯菌qacE△1-sulI基因携带和对消毒剂的抗性.结果 10株肺炎克雷伯菌中有2株临床分离的多药耐药菌qacE△1-sul I基因为阳性,8株环境检出菌株均为阴性;三氯异氰尿酸对10株肺炎克雷伯菌的MIC、MBC值均为500～1000 mg/L,标准菌株为500 mg/L;聚乙烯吡咯烷酮碘对10株肺炎克雷伯菌的MIC值为200～800 mg/L,标准菌株为400 mg/L;戊二醛对10株肺炎克雷伯菌的MIC值为1250～2500 mg/L,标准菌株为1250 mg/L.结论 临床分离的肺炎克雷伯菌qacE△-sul I基因携带率高于环境检出菌株,部分抗药基因阳性菌株对消毒剂产生抗性.     

随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究

目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法     

Randomly amplified polymorphic DNA typing: a useful tool for rapid epidemiological typing of Klebsiella pneumoniae.

Discriminatory typing methods are invaluable in the investigation of outbreaks of infectious diseases. Single primers were used to generate randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles from Klebsiella pneumoniae isolates of various serotype and K. pneumoniae isolates from cases of sepsis at a Malaysian hospital and two English hospitals. RAPD profiles of acceptable reproducibility, a maximum of three minor band variations, were produced using a rapid DNA extraction method. RAPD typing of K. pneumoniae was shown to be as discriminatory as restriction fragment length polymorphism analysis using pulsed field gel electrophoresis yet quicker and less costly. The findings suggest that RAPD typing may be a useful tool for the epidemiological typing of K. pneumoniae.     

重症监护室内鲍曼不动杆菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的：建立鲍曼不动杆菌随机扩增DNA多态性（RAPD）分型技术,以用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法：收集6个月内从ICU内分离出的14株鲍曼不动杆菌,提取DNA后进行RAPD分型;同时进行生物学分型和抗生素敏感性实验,结果：14株菌株被分为5种RAPD型,其中有5株属于同一种类型（A型）,有6株属于另外同一种类型（B型）,其他3株分别属于另3种不同类型（C,D,E型）,而生物学分型只有两种类型（生物型1,9）,抗生素敏感性实验表明14株菌株均为仅对亚胺培南／西司他丁（泰能）,头孢哌酮/舒巴坦（舒普深）等少数几种抗生素敏感的多重耐药菌株。结论：ICU内存在鲍曼不动杆菌暴发流行,RAPD分型技术分型率高,分辨力强,简便快速,具有分子流行病学研究的应用价值。     

随机引物扩增DNA多态性技术在分析金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌多态性中的应用

金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌是医院内感染的主要条件致病菌 ,常常引起院内感染及暴发流行。本实验以一条含 10bp的随机引物将 5 2株肺炎杆菌和 2 8株金黄色葡萄球菌的DNA进行随机引物扩增DNA多态性 (RAPD)扩增 ,进行多态性分析 ,得到不同的带谱 ,在肺炎杆菌中存在很强的多态性 ,出现了 41种带型 ,通过肺炎杆菌间相似系数计算 ,绘制出表达菌株亲缘关系的系统树 ,图中可见各菌间的相似系数 ,5 2株菌分成 7个型 ;金黄色葡萄球菌出现了三条特征带。本实验说明RAPD技术能够追溯传染源 ,进行分子流行病学研究     

RAPD用于新生儿病房产气肠杆菌分子流行病学研究

目的 建立产气肠杆菌RAPD技术,用于新生儿病房产气肠杆菌分子流行病学研究.方法 在具有10张床位的新生儿病房,于同一时间采自4例同期住院患儿分离出5株产气肠杆菌,做RAPD分析及药敏试验,找出流行相关菌株及分析耐药情况.结果 两株具有相同RAPD指纹图谱的产气肠杆菌是流行相关菌株,分别采自住院第4天和第10天的两例患儿,在新生儿病房内获得;所有菌株不同程度地对氨基苷类、哌拉西林、三代头孢菌素耐药.结论 RAPD技术为产气肠杆菌分子流行病学研究提供了简便、可靠的手段,菌株的耐药情况可能与标本采集之前抗菌药物的应用有关.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及分子流行病学研究

目的了解广州市某医院烧伤科病房亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的耐药谱特点及分子流行病学情况。方法采用Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,应用随机扩增DNA多态性分析(RAPD)技术,对从不同患者连续分离到的48株耐药菌进行DNA分型。结果48株亚胺培南耐药菌株均为多重耐药菌,对临床常用的多种抗菌药物耐药,敏感率由高到低依次为CIP、TOB、AMK、GEN和FEP;RAPD图谱显示48株菌分别属于A、B、C、D 4个不同克隆,其中A型、B型是主要流行克隆。结论该院烧伤科病房亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的流行主要是医院感染所致,流行株呈多重耐药。     

Typing of Acinetobacter baumannii isolated from hospital-acquired respiratory infections in a tertiary care centre in southern India

In an attempt to define the epidemiology of Acinetobacter baumannii infection, 27 isolates, obtained from hospital-acquired respiratory infections, were typed using random amplified polymorphic DNA (RAPD) profile and antimicrobial susceptibility patterns. Ten different patterns were obtained with ERIC2 primer: 14 isolates had a similar profile representing a single strain. Within RAPD types, isolates could be further classified based on their antibiogram; however, strains of different types had similar antibiograms. This study showed that many different genetic types of A. baumannii are prevalent in our hospital. While antibiograms alone are not sufficiently discriminatory, RAPD typing helps in identifying outbreaks and in assessing infection control procedures within a hospital.     

重庆地区肺炎链球菌耐药性和分子流行病学调查

目的调查重庆地区肺炎链球菌在社区获得性感染患者中的分离率及对抗生素的敏感性。方法采集社区获得性感染患者的痰、鼻咽拭子标本,培养、分离和鉴定肺炎链球菌。琼脂二倍稀释法测定肺炎链球菌对11种抗生素的耐药性。通过聚合酶链反应(PCR)扩增肺炎链球菌BOX重复元件对其进行分子流行病学分型。结果680份临床标本中,分离出39株肺炎链球菌,阳性率为5.7%。34株(有5株在保存过程中死亡)肺炎链球菌中有2株对青霉素低度耐药(MIC为0.125mg/L),1株青霉素敏感株对左氧氟沙星耐药(MIC为8mg/L)。肺炎链球菌对大环内酯类抗生素和克林霉素表现出较高的耐药率,且均为高度耐药(MIC≥64mg/L),对所测其他β内酰胺类和万古霉素均呈敏感。盒式PCR显示了较高的分辨率,能快速、可靠地检测菌株间的亲缘关系。35株肺炎链球菌共分为25个型,29个亚型,最多见的为A型图谱(3株),2株青霉素低度耐药株分属不同的型。结论重庆地区分离的临床肺炎链球菌对青霉素耐药率较低,但对大环内酯类抗生素和克林霉素耐药却非常普遍。盒式PCR能快速、可靠地对肺炎链球菌进行分子流行病学分型,重庆地区耐药克隆没有明显的优势株。