Angiostatin基因联合反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的研究Angiostatin基因联合反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤的协同抑制作用。方法用人肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。四组荷瘤裸鼠分别注射质粒PcDNA3、Angiostatin/PcDNA3、HIF-1α/PcDNA3B、Angiostatin/ PcDNA3 HIF-1α/PcDNA3B。观察肿瘤生长曲线,检测肿瘤的Angiostatin、血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1α表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果Angiostatin基因治疗在早期具有抑制肿瘤生长的作用;Angiostatin基因治疗组的MVD(24.8±2.8)低于空质粒对照组(30.2±4.1),VEGF表达高于空质粒对照组,细胞凋亡指数(2.87±0.48)高于空质粒对照组(1.55±0.43);联合治疗组有明显抑制肿瘤生长的作用,HIF-1α局部低表达,MVD (14.6±2.1)低于Angiostatin基因治疗组(24.8±2.8),VEGF表达低于单独治疗组,细胞凋亡指数(5.12±0.63)高于单独治疗组。结论肿瘤对Angiostatin基因治疗可以产生耐受性;反义HIF-1α基因阻断肿瘤的缺氧适应途径在一定程度上解决了抗血管生成治疗的耐药性问题。     

反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

摘要：目的:探讨反义HIF-1α基因对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法:使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。待肿瘤生长至直径约0.4cm时，将荷瘤裸鼠随机分为3组，分别注射生理盐水、质粒PcDNA3和HIF-1α/PcDNA3B，质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线；取肿瘤标本作免疫组织化学检查（SABC法）及蛋白质印迹检查，检测各组肿瘤的VEGF和HIF-1α表达及微血管密度（MVD）和细胞凋亡。结果:HIF-1α/PcDNA3B治疗组各时点的肿瘤体积，以及肿瘤组织中HIF-1α蛋白、MVD，VEGF表达均低于对照组，而细胞凋亡指数高于对照组，差异均有显著性（P＜0.05）。结论:通过阻断癌细胞的缺氧适应途径，反义HIF-1α基因治疗肝癌有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤血管生成及诱导细胞凋亡的作用。     

pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因靶向性治疗人原发性肝癌的实验研究

目的研究pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因对人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治疗作用。方法建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成肿瘤对照组、空质粒组、丙氧鸟苷（GCV）组、pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/TK/Angio组5组。于瘤体内分别直接注射不同的质粒,同时于裸鼠腹腔内注射GCV,观察不同时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查,免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）以及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达量,原位末端标记（TUNEL）法检测细胞原位凋亡。放免法检测裸鼠血清甲胎蛋白（AFP）的变化,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化。结果裸鼠皮下成瘤率100%;pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/TK/Angio组的肿瘤体积、血清AFP含量、肿瘤MVD和VEGF表达强度均明显低于对照组、空质粒组和GCV组（P〈0.05）,细胞凋亡指数都明显高于后3组（P〈0.05）,可见较多的凋亡细胞。而pcDNA3/AFP/TK/Angio组的肿瘤体积、AFP、MVD及VEGF表达强度又明显低于pcDNA3/TK/An-gio组（P〈0.05）,凋亡指数高于后者（P〈0.05）。结论pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因系统可显著抑制肿瘤的生长,有望成为治疗原发性肝癌的新型生物制剂之一。     

靶向IGFIR的siRNA抑制人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探讨人胰岛素样生长因子1类受体（IGFIR）干扰质粒(PSUPER-siRNA-IGFIR)对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型，将PSUPER-siRNA-IGFIR质粒转染入移植瘤中，观察对肿瘤生长的作用。结果:PSUPER-siRNA-IGFIR对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤有生长抑制作用。与对照组相比IGFIR和MVD的表达明显下降。结论: PSUPER-siRNA-IGFIR能抑制肝癌裸鼠移植瘤的生长。     

TRAIL真核表达质粒的构建及抑制肝癌生长的实验研究

目的构建TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的真核表达质粒，观察其对BALB／c裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤模型的抑瘤作用。方法提取U937细胞总RNA．用RT-PCR方法扩增出胞外区(114—281aa)，连入溶菌酶信号肽序列，构建分泌型TRAIL重组质粒；建立裸鼠7402肝癌细胞皮下移植瘤模型，纯化后的质粒DNA与脂质体聚乙烯胺混合后经肌肉注射进行基因转染，体内验证重组蛋白的抑瘤活性，采用TUNEL法进行肿瘤组织细胞凋亡检测。结果肿瘤体积测定结果显示．TRAIL对肝癌细胞生长有抑制作用；凋亡检测光镜下可见有棕褐色凋亡细胞，细胞凋亡指数增高。结论重组TRAIL质粒能引起肿瘤细胞的凋亡，抑制7402肝癌细胞的生长。     

腺病毒介导反义c-myc基因抑制人肝癌细胞生长的研究

目的观察重组腺病毒介导反义c-myc基因(Ad-ASmyc)对体外培养人肝癌细胞的生长抑制作用和裸鼠体内移植肝肿瘤的治疗效果.方法Ad-ASmyc感染人肝癌细胞系后,观察细胞生长形态变化,通过细胞生长曲线、流式细胞仪分析、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分析Ad-ASmyc对人肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-9204细胞生长、c-myc和bcl-2基因表达的影响;裸鼠皮下移植瘤内注射3种不同剂量Ad-ASmyc(1×109pfu-A组,1×108pfu-B组,1×107pfu-C组)抑制裸鼠肿瘤生长的差异.结果Ad-ASmyc可高效转导人肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-9204,抑制细胞生长(抑制率分别为48.72%和56.88%),诱导肝癌细胞G1期阻滞和凋亡,c-myc、bcl-2 RNA及c-myc蛋白水平下降;瘤内注射3种不同剂量Ad-ASmyc均可明显抑制裸鼠皮下移植肿瘤生长,抑制率分别为47.1%、77.3%和82.6%(与对照组比较,P＜0.01).结论重组腺病毒介导的反义c-myc基因能够引起人肝癌细胞c-myc、bcl-2 RNA及c-myc蛋白表达下调和细胞生长抑制,瘤内注射Ad-ASmyc治疗裸鼠皮下移植肝癌有效.     

RNAi沉默STAT3基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 采用裸鼠前列腺癌模型模拟siRNA—STAT3基因治疗实验，观察siRNA—STAT3重组质粒的抗瘤疗效，Western blot法检测重组质粒对STAT3基因表达的影响，HE及Tunel染色方法观察肿瘤组织形态及细胞凋亡情况。结果 肿瘤接种后第49天重组质粒组肿瘤体积为（391±56）mm^3，盐水对照组为（1111±182）mm^3，空质粒对照组为（981±169）mm^3，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒抑制瘤体内STAT3及pTyr-STAT3基因表达率分别为77％及68％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。HE染色证实重组质粒组出现大片细胞核固缩、破碎等凋亡征象，Tunel染色显示癌组织出现大量细胞凋亡。结论 pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的生长，具有良好的应用前景。     

survivin siRNA对裸鼠乳腺癌细胞移植瘤微血管生成的影响

目的：探讨含survivin siRNA的PcDNA3-siRNA对裸鼠人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤微血管生成的影响。 方法：制作裸鼠MCF-7细胞移植瘤模型, 然后随机分为PcDNA3-siRNA处理组,PcDNA3处理组,空白对照组, 成瘤后分别将PcDNA3-siRNA质粒,、PcDNA3空质粒,生理盐水注入裸鼠MCF-7移植瘤中。采用RT-PCR及Western blot半定量法检测各组移植瘤组织中survivin mRNA及survivin蛋白的表达； SP免疫组化法检测各组移植瘤中的微血管密度（MVD）。 结果：PcDNA3-siRNA 组survivin mRNA及survivin蛋白的表达量较PcDNA3组及空白对照组明显降低（P﹤0.05）, 且PcDNA3-siRNA 组MVD明显低于PcDNA3组及空白对照组（P﹤0.05）； PcDNA3组与空白对照组survivin mRNA,survivin蛋白及MVD值差异无统计学意义（P﹥0.05）。 结论：PcDNA3-siRNA可抑制裸鼠MCF-7细胞移植瘤survivin的表达, 而且对移植瘤的微血管生成具有明显的抑制作用。     

内皮抑素基因对鼠移植性肝癌抑制作用的实验性研究

目的:探讨血管内皮抑素endostatin对体内人肝癌细胞在体内的影响。方法:将以pcDNA3.1为载体的鼠源性endostatin基因转染人肝癌细胞SMMC7721建立的裸鼠的肝癌模型。应用免疫组化和Westernblot检测endostatin的转染和表达。用免疫组化计数肿瘤血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的阳性率。同时观察转基因肿瘤的生长情况。结果:可见endostatin在肝癌细胞的稳定表达和分泌,其MVD显著低于对照组(P<0.05),VEGF同对照组比较差异亦有显著性(P<0.05)。结论:en-dostatin基因对人肝癌细胞SMMC7721在裸鼠体内的生长有显著的抑制作用,endostatin能减慢肿瘤生长速度,但不能完全消除肿瘤。     

大蒜素对肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨大蒜素对肝癌细胞生长的影响及相关机制。方法：(1)体外实验：MTT法测定不同浓度大蒜素对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用;荧光定量PCR法测定大蒜素对HepG2细胞VEGF mRNA及ICAM-1 mRNA表达的影响。（2）在体实验：建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、大蒜素处理Ⅰ组［1 mg/(kg·d)］和大蒜素处理Ⅱ组［10 mg/(kg·d)］（n=8）,4周后观察其对肿瘤生长的影响。结果：体外实验显示,不同浓度的大蒜素均能抑制肝癌细胞的生长（P＜0.01)。高浓度大蒜素能直接杀死HepG2细胞。大蒜素能下调肝癌细胞VEGF mRNA和ICAM-1 mRNA的转录（P＜0.01)。在体实验显示,小剂量和大剂量大蒜素对肝癌裸鼠皮下移植瘤均有抑制作用。对照组、大蒜素Ⅰ组和Ⅱ组肿瘤体积分别为(1 923.44±101.25) mm,(918.43±90.65) mm和(604.28±77.41）mm（P＜0.01)。结论：大蒜素在体内和体外均可抑制肝癌细胞的生长;其机制与大蒜素抑制细胞增殖和下调肝癌细胞VEGF mRNA和ICAM-1 mRNA转录有关。     

人工关节表面涂层研究现状

生物固定型人工关节假体表面涂层的研究成为目前人工关节领域研究的热点。随着组织工程学、材料学的发展,在人工关节表面用材、涂层类型及其处理方式等方面都有很多成果出现,本文就以上几个方面加以综述。     

声热处理灭酶试验

研究了声热处理钝化毛豆过氧化物酶.实验条件为:温度60～90℃、超声波频率25kHz、功率800 W.以在不同温度(60～100℃)下热处理过氧化物酶的活性作为对照,研究超声波协同热力灭酶的机理.响应面分析结果表明:在25 kHZ、800 W的超声波、83℃下处理1.52 min,过氧化物酶钝化效果最佳.目前的研究有助于声热作用作为新加工工艺逐渐取代传统热加工处理.     

Comment on EBPG guideline on dialysis strategies

Sir, In the EBPG guideline on dialysis strategies (Nephrol Dial Transplant2007; 22 [Suppl 2]: ii5–15) is stated on ii12: ‘Indeed,several randomized trials conducted in the last years have confirmed