补肾填精中药对骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1信号转导蛋白表达影响的实验研究

目的 通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1 的表达变化,探索骨质疏松症的发病机理.方法 实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用补肾填精作用的纳米钙补肾填精中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力作为阳性对照组,以及正常对照组、假手术对照组和模型空白组,并与补脾中药补中益气汤作比较;免疫组化SABC法检测股骨中的Smurf1 蛋白活性表达.结果 与正常组相比较,模空组Smurf1 阳性表达显著下降,P<0.01;用药12周后,与模空组相比较,各用药组均可上调其表达情况,P<0.01.结论 骨组织中Smurf1阳性表达降低可能是骨质疏松症发生的机制之一,补肾填精中药可能通过改善和调控股骨中Smurf1的表达,而起到防治骨质疏松症的作用.     

脉冲电磁场抗骨质疏松作用及对Smurf1表达的影响

目的研究脉冲电磁场(PEMF)对去卵巢骨质疏松(OVX-OP)大鼠的作用及机制。方法将6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组,双侧卵巢切除)、雌激素治疗组(E组,M组基础上进行雌激素治疗)和PEMF组(M组基础上进行PEMF治疗),每组各10只,术后饲养8周后进行治疗,治疗持续8周。称取治疗前后各组大鼠体重;采用双能X射线实验动物骨密度测定仪检测各组大鼠右肱骨骨密度。治疗结束后,采用半自动图像数字化分析仪对胫骨上1/3作静态骨形态计量学检测;采用免疫印迹(WB)检测各组大鼠骨组织Smad泛素化调节因子1(Smurf1)蛋白表达量。结果与S组比较,M组、E组、PEMF组精神状况欠佳,饮食、活动及大小便未见异常。治疗前,与S组比较,M组、E组、PEMF组大鼠体重显著增加(P0. 05),骨密度值显著降低(P0. 05)。治疗后,E组、PEMF组大鼠体重显著降低(P0. 05),骨密度值较治疗前显著增加(P0. 05);与S组比较,M组大鼠骨密度值、BV/TV、Tb.N、Tb. Th显著降低(P0. 05),体重、Tb. Sp、Smurf1蛋白水平显著增加(P 0. 05);与M组比较,E组、PEMF组大鼠骨密度值、BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著升高(P0. 05),体重、Tb.Sp、Smurf1蛋白水平显著降低(P0. 05); E组与PEMF组比较,大鼠各指标差异无统计学意义(P0. 05)。结论 PEMF可增加骨密度、改善骨形态变化,发挥抗骨质疏松的作用,可能与Smurf 1蛋白表达下调有关。     

补肾中药对骨质疏松症大鼠下丘脑BMP-4、Smad6 mRNA及蛋白表达的影响

目的探索肾虚骨质疏松症的病理机制,研究补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠防治作用的机理。方法实验采用去双侧卵巢的方法,建立肾虚骨质疏松症模型。补肾中药复方（高、中、低）剂量对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒、盖天力牡蛎钙作为阳性对照药,并设正常对照组和模型空白组。用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠下丘脑组织中BMP-4、Smad6 mRNA和蛋白表达。结果①与正常组比较,模型空白组大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达水平明显增强;Smad6 mRNA和蛋白表达水平明显降低。②与模型空白组比较,补肾中药组对模型大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达明显降低;而Smad6 mRNA和蛋白表达明显增强。结论肾虚骨质疏松症的病理机制为肾精不足,骨髓、脑髓失养,表现在下丘脑-垂体-靶腺轴的调控失常,包括下丘脑组织的细胞因子及其信号传导通路的异常。     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响

目的 探讨阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1和Smad4表达的影响。方法 制作链脲佐菌素诱导的Wistar糖尿病大鼠模型,将其随机分为3组（对照组、糖尿病非治疗组、糖尿病阿魏酸钠治疗组）,给药8周后将其处死,检测各组大鼠的平均动脉压、血糖、肾功能指标、24h尿蛋白,并检测TGF-β1,及Smad4mRNA表达水平和蛋白定位的表达。结果与对照组相比,糖尿病大鼠平均动脉压、血糖、肾功能指标、24h尿蛋白均升高;肾小球细胞外基质（ECM）明显增多、系膜区扩大（PAS染色）;TGF-β1及Smad4mRNA水平上升;TGF-β1,及Smad4蛋白的表达明显增加。阿魏酸钠治疗后上述指标明显下降。结论 糖尿病肾病患者,TGF-β1／Smad通路被激活,使用阿魏酸钠治疗可以延缓肾脏损害的发生。     

补肾填精中药对骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1信号转导蛋白表达影响的实验研究

目的 通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smurf1 的表达变化,探索骨质疏松症的发病机理.方法 实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用补肾填精作用的纳米钙补肾填精中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力作为阳性对照组,以及正常对照组、假手术对照组和模型空白组,并与补脾中药补中益气汤作比较;免疫组化SABC法检测股骨中的Smurf1 蛋白活性表达.结果 与正常组相比较,模空组Smurf1 阳性表达显著下降,P<0.01;用药12周后,与模空组相比较,各用药组均可上调其表达情况,P<0.01.结论 骨组织中Smurf1阳性表达降低可能是骨质疏松症发生的机制之一,补肾填精中药可能通过改善和调控股骨中Smurf1的表达,而起到防治骨质疏松症的作用.     

食用酒精对大鼠肾组织中水通道蛋白1表达的实验研究

目的 观察水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP 1）在酒精灌胃大鼠肾组织中的表达,探讨酒精性肾损伤的机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组,喂养6周,检测血清学指标.用HE染色观察肾脏组织学改变.免疫组化方法检测AQP 1的表达,计算机分析技术计算AQP 1的平均光密度.结果 ①低剂量和高剂量酒精组丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）明显高于对照组（P＜0.05）;②苏木精伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色与对照组相比,低剂量酒精组和高剂量酒精组光镜下观察相似,近曲小管管壁上皮细胞形状不规则,细胞核排列无秩序,近曲小管管腔变大;③免疫组化染色AQP 1在对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组肾组织中均有表达,定位于肾小球毛细血管内皮细胞、近曲小管的上皮细胞,在对照组中染色较深呈棕黄色,在低剂量酒精组染色颜色变浅,在高剂量酒精组染色最浅;④对照组平均光密度为（0.055±0.384）,低剂量酒精和高剂量酒精组平均光密度分别为（0.278±0.047）、（0.279±0.044）,对照组与低剂量和高剂量酒精组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;低剂量酒精和高剂量酒精组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 大量饮酒可导致肾小管中AQP 1表达减少,AQP 1表达减少可能是酒精性肾损伤机制之一.     

MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞Smad泛素化调节因子2和Smad7的影响

近来发现在肾纤维化模型（UUO）中Smad泛素化调节因子2（Smad ubiquitin regulatory factor2，Smurf2）表达增强，Smad7蛋白表达明显降低，Smurf2能通过泛素蛋白酶体途径增加Smad7降解。Smad7是TGF-β信号转导途径中的主要抑制性调控蛋白，因此阻断Smurf2的表达，有可能会起到抗纤维化的作用。MG132是一种有效、可逆的醛基肽类特异性蛋白酶体抑制剂，能阻断泛素蛋白酶体通路。我们主要研究MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）表达Smurf2、Smad7及Ⅳ型胶原的影响，为肾纤维化的防治寻找新的靶点。     

普罗布考对糖尿病大鼠肾组织Smads蛋白表达的影响

目的：观察链脲佐菌素（STZ）造模的糖尿病大鼠以及普罗布考（之乐）干预的糖尿病大鼠肾脏组织中Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达,探讨普罗布考在糖尿病肾病中的作用机制。方法：36只6周龄雄性SD大鼠（清洁级）,将其随机分为3组（对照组、糖尿病模型组、糖尿病之乐治疗组）,12周末将其处死,检测各组大鼠血糖（GLU）、血尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、血三酰甘油（TG）,以免疫组化的方法观察各组大鼠肾脏Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达。结果：糖尿病模型组、糖尿病之乐治疗组GLU、BUN、Scr较正常组明显升高,糖尿病之乐治疗组TG较正常组下降;糖尿病模型组的Smad4、Smad7在肾脏组织的表达较正常组明显增高,糖尿病之乐治疗组Smad4、Smad7在肾脏组织的表达不明显,Smad2在各组间相比差异无统计学意义。STZ诱导的糖尿病大鼠出现了明显的糖尿病肾病的病理变化,糖尿病之乐治疗组也有明显的糖尿病肾病的病理变化,但较糖尿病模型组轻。结论：TGF-β1/Smads信号通路在糖尿病肾病时是激活的,普罗布考可以通过影响糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1/Smads信号通路中的TGF-β1、Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达而起到抑制纤维化的作用,延缓糖尿病肾病的进展。     

糖尿病大鼠肾组织podocin mRNA和蛋白的表达

糖尿病肾病是严重的糖尿病并发症之一.定位于裂孔膜的podocin分子由足细胞分泌产生,是裂孔膜铰链样结构的重要成分,对维持足突结构和裂孔膜的完整性起关键作用.     

信号调节蛋白α1在大鼠肝再生过程中表达的实验研究

目的：观察信号调节蛋白α1（SIRPα1）在大鼠肝再生过程中的表达变化。方法：选取雄性SD大鼠120只，随机分为两组：假手术组（SO）和肝切除手术组（OP），每一组又分为10个时间点，即手术后2、6、12、24、30、48、72、120、168和240h，每一时间点6只，切除大鼠70％肝脏（肝左叶和中叶）建立肝再生模型，术后在预定时间点分别取肝组织固定石腊包埋切片，采用免疫组织化学方法测定肝组织SIRPα1表达。结果：再生肝组织12h肝实质可见局灶散在肝细胞膜棕黄色着色，24h弥漫性肝细胞膜着色，120h以后肝细胞膜着色逐渐减弱。结论：SIRPα1作为一种负向调控因子参与了肝细胞再生，可能与肝再生终止有关，但关于其详细调控机制及其与其他因子相互作用的机制有待于进一步研究。     

复方尼尔雌醇片预防去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究

目的 探讨复方尼尔雌醇片（Compound nylestriol tablet,CNT；每片含尼尔雌醇0.5mg，左炔诺酮0.15mg)，对去卵巢（OVX）大鼠骨质疏松的预防作用。方法 建立OVX大鼠骨质疏松模型，分组分剂量予以CNT，尼尔雌醇和左炔诺酮治疗14周，观察其对全身，左股骨骨密度校正指数（ADJBMD；adjusted bone mineral density)，骨Ca,P和血清Ca,P,ALP的影响。结果 CNT0.039-0.39mg/kg可增加全身及离体左股骨ADJBMD，且具有剂量依赖性；CNT0.117-0.39mg/kg可增加骨Ca含量，增高血Ca水平（P＜0．05或P＜0．01）。单用CNT中所含相应剂量的尼尔雌醇，也可增加ADJBMD，增加骨Ca含量及增高血Ca水平的作用，但程度不如CNT。结论 CNT对OVX大鼠骨质疏松模型有预防作用，其疗效优于单独使用尼尔雌醇及左炔诺酮。     

绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1 mRNA的表达研究

目的研究绝经后骨质疏松症肾阴虚证差异表达基因CLCF1、ASB1和PROK2的mRNA表达水平。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阴虚证组30例,27例健康绝经后妇女为对照组,RT-PCR法检测外周血CLCF1、ASB1和PROK2 mRNA的表达。结果肾阴虚组CLCF1 mRNA表达水平明显低于对照组(Z=-2.621,P=0.009);肾阴虚组ASB1mRNA表达与对照组比较,有降低趋势,但差异无统计学意义;与健康对照组比较,肾阴虚组PROK mRNA表达差异无统计学意义。结论骨质疏松症肾阴虚证与CLCF1 mRNA表达下调关联。     

经方青娥丸对去势大鼠骨质疏松作用机制的实验研究

目的探讨经方青娥丸治疗雌性大鼠卵巢切除后所致骨质疏松的作用机制。方法采用卵巢切除术建立绝经后骨质疏松大鼠模型,建模8周后,分别进行药物干预12周后,双能X线法测定各组大鼠的骨密度、骨组织形态计量学测定骨微结构变化、ELISA检测血清中骨代谢标志物BALP、CTX-1表达情况、以及雌激素E2水平变化。结果 1.骨密度:与治疗前比较,OVX组股骨及椎骨骨密度值均显著降低;雌激素组治疗后股骨和椎骨骨密度值较治疗前均有明显升高;青娥丸组治疗后股骨和椎骨骨密度值也均有一定程度升高。2.骨组织形态计量学:与OVX组比较,QEW组、E2组TBV%均显著升高,TRS%、TFS%、MAR、m AR和OSW均显著降低。与SHAM组比较,QEW组和E2组TBV%均显著降低,TRS%、TFS%均显著增高;QEW组MAR显著增高,E2组则无明显差异;E2组m AR和OSW均显著增高,而QEW组则无明显差异。3.血清骨代谢生化标志物水平:E2组和QEW组BALP水平较OVX组均显著升高、CTX水平均显著降低,QEW组CTX水平显著高于E2组。4.雌激素水平:E2组和QEW组雌激素水平较OVX组均显著升高,而QEW组雌激素水平显著低于E2组。结论青娥丸治疗绝经后大鼠骨质疏松症可能与改善骨微结构、调节骨代谢、雌激素样作用相关。     

补肾益髓中药对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨组织Runx2的mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠模型骨组织Runt相关基因2(Runx2)mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药的疗效及其调控作用.方法 采用后肢肌注地塞米松(2.5 mg/kg,每周2次,连续9w)的方法复制GIOP大鼠模型,按体重分层随机分为正常组、模型空白组、补肾益髓中药组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组.灌胃给药9w.应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,以评价动物模型的成立及药物疗效.实时定量RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR)检测骨组织Runx2 mRNA表达,Western blot检测骨组织Runx2蛋白表达.结果 (1)股骨骨密度:与正常组比较,模型空白组明显降低(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药组明显升高(P<0.01),骨疏康颗粒阳性对照组明显升高(P<0.05),补中益气颗粒组和血府逐瘀胶囊组虽有升高趋势,但无统计学意义(P>0.05).(2)骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达:与正常组比较,模型空白组明显降低(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药组明显上调(P<0.01),骨疏康颗粒阳性对照组也有明显上调(P<0.05),补中益气颗粒组和血府逐瘀胶囊组虽有所升高,但无统计学意义(P>0.05).结论 (1)肌注地塞米松可以成功复制GIOP大鼠模型,(2)骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达水平降低可能是GIOP的发病机制之一,(3)应用补肾益髓中药具有明显防治效果,疗效优于健脾中药和活血中药,其作用机理与上调骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达密切相关.     

绝经后骨质疏松症肾阳虚证的关联基因LTBP1 mRNA 的表达研究

目的研究绝经后骨质疏松症肾阳虚证的关联基因LTBP1及PCSK6的mRNA表达水平,探讨绝经后骨质疏松症肾阳虚证与LTBP1及PCSK6基因表达的关联性。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阳虚证组25例,32例健康绝经后妇女为对照组,RT-PCR法检测外周血LTBP1及PCSK6 mRNA的表达。结果肾阳虚证组LTBP1 mRNA表达水平低于健康对照组(F=7.473,P=0.008),差异有统计学意义;肾阳虚证组PCSK6 mRNA表达水平较健康对照组比较,有降低趋势,但差异无统计学意义;通过GO分析参与到的生物途径有细胞外组织形成、代谢过程、磷酸化作用、蛋白磷酸化、TGF-β的细胞外基质合成、BMP信号通路、细胞分泌等;通过Pathway分析参与到弹性纤维形成、细胞外基质组织、整合胰腺癌的通路、TGF-β信号通路、发育生物学、神经生长因子信号转导等通路相关。结论骨质疏松症肾阳虚证与LTBP1基因表达下调相关联。     

绝经后妇女骨质疏松症肾阳虚证的关联蛋白LTBP1的表达及其cDNA测序的研究

目的 探讨绝经后骨质疏松症肾阳虚证与LTBP1蛋白表达及cDNA变化的关联性。方法 随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阳虚证组27例,27例健康绝经后妇女为对照组,Westeen -blot法检测外周血LTBP1的蛋白表达,对cDNA 片段进行测序。结果 肾阳虚证组LTBP1蛋白表达水平(0. 365 ±0. 278)低于健康对照组(0. 675 ±0. 583)(P <0. 05),差异有统计学意义。cDNA测序在健康对照组与肾阳虚证组中碱基无有意义的突变。结论 绝经后骨质疏松症肾阳虚证与LTBP1蛋白表达下调相关联,测序发现与碱基突变无关。     

鼠龄对大鼠去卵巢骨质疏松模型的影响

目的 探讨鼠龄对大鼠去卵巢后骨质疏松的影响.方法 3月龄和6月龄Wistar雌性大鼠各16只,分别分为去卵巢组和假手术组.去卵巢组行双侧卵巢切除,6个月后,测定大鼠骨密度、骨矿含量、股骨生物力学和股骨远端形态结构的变化.结果 与假手术组相比,去卵巢组全身及脊柱骨密度、骨矿盐含量、股骨最大压缩载荷、最大压缩应力、弹性模量均明显下降(P＜0.01);骺板下骨小梁结构排列稀疏,骨小梁间的连接性变差,总量明显减少,6月龄组更明显.结论 3月龄和6月龄大鼠去卵巢6个月.均可发生骨质疏松症.6月龄大鼠骨质疏松程度更严重.     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾间质细胞浸润及肾组织ICAM-1和MCP-1 mRNA表达的影响

炎症反应是糖尿病肾病（DN）发生的重要环节，细胞间黏附分子（ICAM）和单核细胞趋化因子（MCP）表达增加是导致单核细胞及巨噬细胞浸润肾组织的两个重要因素。近年来发现霉酚酸酯（MMF）有抗炎作用，所以在理论上可以用于包含糖尿病肾病在内的一些非移植性疾病的治疗。本研究的目的主要在于探讨MMF对糖尿病大鼠肾脏ICAM-1和MCP-1m RNA表达的影响及其对肾脏的保护作用。