抗癌基因p53在肾癌组织的异常表达及其意义

研究表明，ｐ５３基因缺失或突变与众多肿瘤有关。我们采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法对肾癌组织的ｐ５３ｍＲＮＡ进行了检测。结果显示，在２１例肾癌组织中，１２例（５７％）ｐ５３ｍＲＮＡ表达异常，其中７例明显增高，５例缺失或表达明显低于正常对照。ｐ５３基因发生改变的多数是晚期和分化较差的肾癌组织，包括１例肾癌转移病灶和３例有肾静脉癌栓或肾门淋巴结转移的肾癌组织。这提示ｐ５３基因失活与肾癌密切相关，可能是肿瘤细胞向恶性发展或具有转移倾向的潜在因素之一。     

P53蛋白和增殖细胞核抗原在肾癌中的表达及意义

采用免疫组化法对５３例肾癌组织中Ｐ５３蛋白及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。发现肾癌组织Ｐ５３蛋白表达与细胞类型、分级、分期及预后均无关。肾癌ＰＣＮＡ表达与细胞类型、分级、分期及预后均相关，透明细胞癌与颗粒细胞癌差异无显著性，梭形细胞癌呈高表达；随肿瘤分级增高，ＰＣＮＡ表达呈明显上升趋势；肿瘤高分期组（Ⅲ、Ⅳ）的ＰＣＮＡ表达明显高于低分期组（Ⅰ，Ⅱ）；ＰＣＮＡ高表达组（３、４级）术后５年生存率明显低于低表达组（１、２级）。结果表明：Ｐ５３蛋白表达在肾癌发生中并不起主导作用或只是多种因素之一，ＰＣＮＡ是判定肾癌恶性度及预后的客观指标，同时发现肾癌Ｐ５３蛋白与ＰＣＮＡ表达间无相关。     

耐药相关蛋白在肾癌中的表达

为探讨耐药相关蛋白（ＭＲＰ）在肾癌中表达的意义，应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测２０例肾癌组织中ＭＲＰ表达。结果：ＭＲＰ阳性表达率为６０％，在胞浆和胞膜上均见表达，但以胞浆中（粗颗粒状）更显著。晚期肾癌（Ⅲ、Ⅳ期）阳性表达率为８９％，明显高于早期肾癌（Ⅰ、Ⅱ期）的３６％，Ｐ＜００５。结果认为ＭＲＰ与肾癌浸润转移相关，并可能是其内源性耐药的重要机制之一     

甲状腺癌中p53基因248位密码子突变及其蛋白过度表达的临…

对５４例甲状腺癌标本分别用ＤＮＡ聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法检测ｐ５３基因第２４８位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ５３蛋白，并用时序检验分析ｐ５３基因突变和ｐ５３蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１５例（２７．８％）有ｐ５３基因突变和３０例（５５．６％）有ｐ５３蛋白过度表达，临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，ｐ５３抑癌基因突变和ｐ５３蛋白阳性病     

甲状腺癌中p53基因248位密码子突变及其蛋白过度表达的临床意义

对５４例甲状腺癌标本分别用ＤＮＡ聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法检测ｐ５３基因第２４８位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ５３蛋白，并用时序检验分析ｐ５３基因突变和ｐ５３蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１５例（２７８％）有ｐ５３基因突变和３０例（５５６％）有ｐ５３蛋白过度表达，临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，ｐ５３抑癌基因突变和ｐ５３蛋白阳性的病例有较高的复发率和死亡率。表明ｐ５３基因突变及其蛋白过度表达在甲状腺癌的发生和发展过程中起重要作用，是预后不良的标志。     

肾母细胞瘤和神经母细胞瘤p53蛋白表达研究

作者应用ＡＢＣ免疫组化方法，对４８例肾母细胞瘤，３２例神经母细胞瘤进行ｐ５３蛋白表达检测。结果显示１１例肾母细胞瘤呈阳性反应，３２例神经母细胞均为阴性。在与临床病理指标的相关分析中发现，肾母细胞瘤ｐ５３蛋白异常表达与ＮＷＴＳ－Ⅱ分类、ＮＷＴＳ－Ⅲ临床病理分期以及有无转移呈显著性相关。结果表明，ｐ５３蛋白表达不仅与肾母细胞瘤的发生有关，而且在肾母细胞瘤的细胞分化和转移中起重要作用，可作为临床预后判断的指标之一；在神经母细胞瘤的发生发展中可能不起重要作用。     

肾癌原癌基因C－erb B－2蛋白产物的表达及意义

为探讨肾癌原癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白产物的表达及意义，采用免疫组化Ｓ－Ｐ（过氧化物酶－链霉卵白素）法对５５例肾癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白进行检测。显示Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白呈局限性弱染色，表达率为２１．８％，与肿瘤直径相关（Ｐ＜０．０１），Ｒｏｂｓｏｎ分期Ｉ，Ⅱ期肿瘤阳性表达率明显高于Ⅲ、Ⅳ期肿瘤（Ｐ＜０．０５），随肿瘤分级增高阳性表达率呈递减趋势，颗粒细胞癌阳性表达率明显高于透明细胞癌（Ｐ＜０．０１），阳性表达组与阴性表达组预后无差异。结果提示：ＣｅｒｂＢ－２癌基因可能参与了肾癌发生的初始事件，而与晚期事件无关，强调颗粒细胞癌可能与Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因关系密切。     

肿瘤抑制基因P53突变与肾细胞癌的关系

采用ＤＮＡ聚合酶链反应－单链构象多态性分析和直接序列测定技术，检测２５例肾细胞癌组织中Ｐ５３基因５－８外显子，２５例肾细胞癌仅有２例肿瘤组织存在Ｐ５３基因点突变，分别位于１５４和２７３密码子上，核苷酸序理分析突变形式分别为Ｇ→Ｔ，Ｃ→Ｔ。结果提示：肾细胞癌组织中Ｐ５３基因突变并不显著，表明肾细胞癌的发生可能是一个多基因变化的过程。     

p16蛋白及PCNA在肾癌中的表达及意义

目的探讨肾癌中p16蛋白与PCNA的表达与肾癌组织学类型、临床分期、病理分级及预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测41例肾癌及18例癌旁正常肾组织中p16蛋白及PC－NA的表达。结果p16蛋白在肾癌及癌旁正常肾组织中的阳性表达率间具有显著性差异（P＜0.05）,p16蛋白表达在肾透明细胞癌及颗粒细胞癌间无显著性差异,随肾癌分级、分期升高而明显降低,p16阳性表达组术后5年生存率明显高于阴性表达组;肾癌及癌旁肾组织中PCNA的阳性表达率增高,与预后有关,与肾癌的组织类型及分期无关。结论p16基因及蛋白的检测可作为肾癌的辅助诊断及预后判断的参考指标;PCNA可作为肿瘤恶性程度的判断及预后的参考指标。     

Ki-67及bcl-2基因产物在肾癌组织中的表达及其意义

目的探讨基因Ｋｉ６７和ｂｃｌ２产物在肾癌组织中表达的意义及相关关系,了解肿瘤增殖与凋亡的特点。方法采用免疫组化ＳＡＢＣ法,对４３例肾癌与１０例正常肾组织的石蜡包埋标本切片对照,进行与产物表达的统计研究。结果ｂｃｌ２在肾癌组织中阳性表达率为８０％,与正常肾组织（４２％）相比,差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。但其表达与肿瘤分级,分期无关（Ｐ＞０．０５）。Ｋｉ６７的表达与肿瘤分级,分期及预后密切相关（Ｐ＜０．０５）,随恶性程度增加,其表达强度也增加。Ｋｉ６７与ｂｃｌ２的表达无显著相关性（ｒ＝０．２４１）。结论检测肾癌组织中Ｋｉ６７产物表达可以作为预后的评价指标;ｂｃｌ２可能参与了肾组织由良性向恶性转化的过程,但与癌细胞恶性分化程度无关。     

肉瘤样肾细胞癌组织中P53基因突变

为了明确Ｐ５３基因突变与肾癌发生发展的关系，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法和免疫组织化学方法对３７例肾癌新鲜标本进行Ｐ５３基因检测。结果显示：７例Ｐ５３ｍＲＮＡ表达明显高于正常对照，９例（２４．３％）Ｐ５３蛋白过表达；３７例肾癌组织中３例为肉瘤样肾细胞癌或组织中含肉瘤样癌细胞成分，此３例（１００．０％）均有Ｐ５３ｍＲＮＡ和Ｐ５３蛋白过表达，都有肾门或腹膜后淋巴结转移；３４例透明细胞和颗粒细胞癌中４例（１１．８％）Ｐ５３ｍＲＮＡ高表达，６例（１７．６％）Ｐ５３蛋白过表达，其中１例有肾静脉癌栓，１例有肾门淋巴结转移，另１例取自切口转移癌组织。结果表明：肉瘤样肾细胞癌中有频繁的Ｐ５３基因突变，可能是肾癌细胞向肉瘤样癌细胞转化的关键因素之一。     

突变体p53蛋白与肾细胞癌患者预后

目的 探讨突变体ｐ５３蛋白与肾细胞癌患者预后关系。方法 对９７例根治性切除术的肾细胞癌石蜡包埋标本采用免疫组化ＬＳＡＢ法测定ｍｔｐ５３。结果要阳性者３３例，５年生存率６１．５％；阴性者６４例，５年生存率８１．３％。两组生存率差异有显著性（Ｐ〈０．０５），ＣＯＸ比例风险模型分析提示ｍｔｐ５３不是独立预后因素（Ｐ〉０．１０）。结论ｍｔｐ５３对判断肾细胞癌预后有价值，但不是独立预后指标。     

膀胱癌P53基因点突变的观察

为了解Ｐ５３基因突变与膀胱癌的关系，采用扩增突变阻抑系统方法的原理，设计４对分别针对Ｐ５３基因外显子５～８的４个进化保守区内１４６、２４８、２８０、２８５位点的突变引物，测定４６例膀胱癌标本。结果发现：４例标本出现Ｐ５３点突变，其中２４８位点Ｇ→Ａ突变１例、２８０位点Ｇ→Ｃ突变２例、２８５位点Ｇ→Ａ突变１例。４例均为表浅性Ｇ２癌，表明Ｐ５３基因突变在膀胱癌早期即可发生。因膀胱癌Ｐ５３基因的突变点散在，本研究检测范围内未发现突变热点。     

前列腺癌中P53基因突变及蛋白表达的研究

运用免疫组织化学ＬＳＡＢ法（链菌素－生物素标记法），结合ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（ＰＣＲ限制性片段长度多态）、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（ＰＣＲ单链结构多态）技术，探讨了３４例前列腺癌穿刺标本中Ｐ５３蛋白表达及基因（５～８外显子）突变情况，发现３４例前列腺场中７例有Ｐ５３蛋白表达阳性，阳性率为２０．６％。２０例前列腺良性增生及１０例正常前列腺组织中Ｐ５３蛋白表达均为阴性（Ｐ＜０．０５），在前列腺癌高、中分化组及前列腺癌低、未分化组Ｐ５３蛋白表达阳性率分别为５．３％及４０％（Ｐ＜０．０５），在ＰＣＲ－ＲＦＬＰ中提示１例前列腺癌中有Ｐ５３突变，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ中提示３例Ｐ５３基因突变（５～６外显子），一例无Ｐ５３基因扩增产物，高度怀疑为Ｐ５３基因的缺失，３４例前列腺癌中，ＣＴ及骨扫描提示有转移者为１０例，其中５例为Ｐ５３蛋白表达阳性，阳性率５０％，与非转移组阳性率比较Ｐ＜０．０５。本研究表明Ｐ５３基因突变参与前列腺癌的发生发展过程，与其转移的生物学行为关系密切。分析了以上不同方法在检测Ｐ５３基因突变中的价值。     

P53和C－fos蛋白在肾细胞癌中的表达

用免疫组织化学方法对６２例石蜡包埋的肾细胞癌（ＲＣＣ）标本中的Ｐ５３和Ｃ－ｆｏｓ蛋白进行检测。结果：Ｐ５３和Ｃ－ｆｏｓ蛋白表达均位于肿瘤细胞的细胞核内，其中Ｐ５３蛋白阳性３８例占６１．３％，ｃ－ｆｏｓ蛋白阳性３３例占５３．２％。Ｐ５３蛋白和肾细胞癌的病理学分类无关，但Ｐ５３和Ｃ－ｆｏｓ蛋白随透明细胞癌的分期升高而高表达，并和预后有密切关系。     

β-环连蛋白基因在肾癌中的表达及其突变分析

目的 探讨β－环连蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）基因在肾癌中表达，分散其突变情况。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ，ＳＳＣＰ及酶切的方法对２６例肾癌标本进行了研究。结果 ２６例肿瘤标本中β－ｃａｔｅｎｉｎ在ｍＲＮＡ水平并无过表达，而且未见突变发生。结论β－ｃａｔｅｎｉｎ基因在肾癌细胞内的高表达不是由于其生成增多，而是降解减少。     

p16基因修饰的小鼠肾癌细胞体内致瘤性观察

目的　探讨 p16基因修饰后小鼠肾癌细胞体内致瘤性的变化。　 方法　将携带 p16基因腺病毒体外转染的小鼠肾癌Renca细胞 ,p16基因修饰的肾癌细胞、野生型肾癌细胞及对照基因LacZ修饰的肾癌细胞分别接种于小鼠皮下 ,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间 ,每组 10只小鼠。　结果　经p16基因修饰的肾癌细胞在小鼠体内出现肿瘤的时间在Adp16基因实验组比野生型对照组及AdLacZ对照组晚 5天 ,且肿瘤生长缓慢 (P <0 0 5 )。小鼠存活时间 :野生型对照组为 (2 7.0±2 2 )d ,AdLacZ组为 (2 9.0± 2 .5 )d ,Adp16基因实验组为 (5 2 .0± 3 .4)d ,并有 3只小鼠长期存活。肿瘤局部 p16蛋白表达测定显示p16基因已转入肿瘤细胞 ,并在癌体内有效表达。　 结论　p16基因的导入能降低小鼠肾癌细胞的体内致瘤性 ,显著延长荷瘤小鼠的存活期。     

一例前列腺癌P53基因第6外显子中的移码突变

以ＰＣＲ单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）分析及ＰＣＲ直接测序技术，结合免疫组织化学方法，对１例前列腺癌患者治疗前的前列腺穿刺组织及内分泌治疗后复发的手术切除标本中不同部位随机取材的肿瘤组织进行Ｐ５３基因第５，６外显子及Ｐ５３蛋白表达的检测，发现在第６外显子的第２０８密码子存在碱基插入突变（ＧＡＣ→ＧＡＴ），免疫组织化学检测中未发现Ｐ５３蛋白的过量表达。前列腺癌中尚未见有此种Ｐ５３基因突变的文献报道。     

原发性胃癌中MRE11基因的突变筛查

目的:研究染色体不稳定性相关基因MRE11(meiotic recombination 11 homolog A)突变与原发性胃癌的相关性。方法:收集27例原发性胃癌病人的胃癌组织和对应的正常胃黏膜组织,并通过显微切割方法从胃癌组织中获取较纯胃癌细胞。设计扩增MRE11基因外显子的引物共20对,采用PCR产物直接测序方法在胃癌细胞和对应正常胃黏膜组织中对MRE11基因编码区进行突变检测,并运用CGH方法对存在突变的胃癌细胞进行染色体分析。结果:在27例原发性胃癌中,4例存在MRE11基因共4个体细胞水平的错义突变,其中3例为肠型胃癌。CGH显示该4例胃癌均存在5个以上基因组片断的获得或丢失事件。结论:MRE11基因突变可能在某些原发性胃癌的发生发展中起着重要作用,尤其是显示染色体不稳定性的肠型胃癌。