胶质瘤单链抗体的基因构建及表达

单链抗体 (ＳｃＦｖ)因其能较好地保持对抗原亲和活性 ,分子量小 ,穿透力强 ,抗原性弱 ,且易与效应分子相拼接 ,是构建免疫毒素和双功能抗体的较理想元件。我们在已克隆抗胶质瘤单抗ＳＺ39重链可变区 (ＶＨ)和轻链可变区(ＶＬ)基因的基础上 ,构建了抗人脑胶质瘤ＳｃＦｖ基因 ,并克隆于表达载体ｐＧＥＸ 5Ｘ 1,在大肠杆菌中诱导表达 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :(1)菌种与质粒载体 :ｐＧＥＭ Ｔ 39ＶＨ、ｐＧＥＭ Ｔ 39ＶＬ为含有ＶＨ、ＶＬ基因的克隆质粒 ,由本室构建。ｐＳＷ1 ＳｃＦｖ为含有一编码疏水性多肽接头 (Ｇｌｙ4 …     

重组抗人结肠癌单链抗体的表达与鉴定

我们在构建了抗人结肠癌单链抗体 (ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎＦｖ ,ｓｃＦｖ)ＣＬ 3的基础上 ,对ｓｃＦｖＣＬ 3在大肠杆菌中的表达及其复性和纯化进行研究 ,为进一步提高ｓｃＦｖ的表达效率 ,使之能用于肿瘤的放射免疫引导外科手术提供依据[1] 。一、材料与方法1.材料 :大肠杆菌ＢＬ2 1(ＤＥ3)细胞系、质粒 ｐＥＴ 5ａ及重组噬菌粒ＰＣＡＮＴＡＢ 5Ｅ ＣＬ 3由中国科学院微生物研究所闫锡蕴研究员提供 ,酶及其他试剂分别购自Ｐｒｏｍｅｇａ等公司。ｓｃＦｖ基因扩增引物由Ｃｙｂｅｒｓｙｎ公司合成。快速蛋白液相层析 (ＦＰＬＣ)蛋白纯化系统…     

单核细胞趋化蛋白-1在肾小球内皮细胞中表达的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对培养的人肾小球内皮细胞（ＨＵＧＥＣ）表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ１）的影响以及ＨＵＧＥＣ的条件培养基对单核细胞（ＭＣ）的趋化作用及抗ＭＣＰ１抗体对单核细胞迁移的影响。方法（１）采用原位杂交技术、免疫细胞化学、细胞ＥＬＩＳＡ法观察ＭＣＰ１基因及蛋白表达。（２）用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室微孔滤膜法测定ＴＮＦα刺激ＨＣＧＥＣ后的条件培养基对ＭＣ的趋化作用及抗ＭＣＰ１抗体对ＭＣ迁移的影响。结果（１）在不加刺激条件下培养的ＨＵＧＥＣ弱表达ＭＣＰ１基因及蛋白,５０ｎｇ／ｍｌＴＮＦα刺激后,６小时即有ＭＣＰ１蛋白表达增强,于１２小时达高峰,不同浓度的ＴＮＦα（２５、５０、１００ｎｇ／ｍｌ）刺激ＨＵＧＥＣ６小时后,与正常对照组相比差异显著（Ｐ＜００１）。（２）ＴＮＦα刺激ＨＵＧＥＣ后的条件培养基对ＭＣ有明显趋化作用,并被抗ＭＣＰ１抗体抑制。结论ＨＵＧＥＣ在ＴＮＦα诱导下,其ＭＣＰ１的表达增强,其条件培养基对ＭＣ有趋化作用,从而可能招引单核细胞迁入内皮下间隙。     

CsA、MPA和RPM对CD_(28)通路共刺激后淋巴细IL-4 mRNA表达的影响

目的　观察环孢素Ａ（ＣｓＡ） 、霉酚酸（ ＭＰＡ） 和雷帕霉素（ＲＰＭ） 对ＣＤ２８ 通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　以ＰＣＲ 扩增方法获得ＩＬ４ 特异的ｃＤＮＡ 片段,并将其克隆至ＰＧＥＭ３Ｚ 载体中。以此作为探针对ＲＴＰＣＲ 产物进行杂交定量,比较三种免疫抑制剂对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　结果　以抗ＣＤ３ ｍ Ａｂ ＋ 抗ＣＤ２８ ｍ Ａｂ 共刺激后,发现淋巴细胞稳定地表达ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ;ＣｓＡ 和ＭＰＡ 未能抑制淋巴细胞ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 的表达,而ＲＰＭ则能产生显著抑制。　结论　ＲＰＭ 能抑制ＣＤ２８ 通路共刺激后ＩＬ４ ｍ ＲＮＡ 的表达,而ＣｓＡ 和ＭＰＡ对这一过程无抑制作用。     

类风湿关节炎与骨性关节炎成纤维样滑膜细胞蛋白酪氨酸磷酸化状态的比较

目的 比较类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ）与骨性关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＯＡ）成纤维样滑膜细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ,ＦＬＳ）蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异。方法滑膜细胞原代培养,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别,提取蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单向电泳和ＩＣＥ－ＰＡＧＥ双向电泳分离后,应用抗蛋白酪氨酸磷酸化抗体进行ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测。结果 滑膜细胞原代培养至第三代时,ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ｖｏｎ Ｗｉｌｌｉｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ阳性细胞比例小于１％,ＲＡ ＦＬＳ蛋白酪氨酸磷酸化程度是ＯＡ ＦＬＳ的４～６倍。结论 滑膜细胞原代培养至第三代时即可以获得型别均一的ＦＬＳ,ＲＡ ＦＬＳ酪氨酸磷酸化程度较ＯＡ ＦＬＳ明显增     

人膀胱癌细胞耐药株多基因蛋白表达的意义

为研究膀胱肿瘤细胞耐药机制，使用药物浓度递增的方法，分别采用阿霉素（ＡＤＭ）或足叶乙甙（ＶＰ１６）建立了人膀胱癌耐药细胞株ＢＩＵ８７／Ａ和ＢＩＵ８７／Ｖ，并进行了耐药倍数分析。ＢＩＵ８７／Ａ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为５７４、５９４；ＢＩＵ８７／Ｖ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为６５、５４。采用免疫组化的方法分析Ｐ５３、ｂｃｌ２蛋白和Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）在细胞中的表达，结果显示ＢＩＵ８７三种蛋白均阴性，而ＢＩＵ８７／Ａ、ＢＩＵ８７／Ｖ的三种蛋白均阳性，且ＢＩＵ８７／Ａ的表达量均多于ＢＩＵ８７／Ｖ。结果说明突变型Ｐ５３蛋白、ｂｃｌ２蛋白和Ｐｇｐ表达在细胞耐药机制中可能起重要作用     

对于严重股骨骨质溶解应用带骨水泥的CHARNLEY翻修关节成形术

对于严重股骨骨质溶解应用带骨水泥的ＣＨＡＲＮＬＥＹ翻修关节成形术ＣＥＭＥＮＴＥＤＣＨＡＲＮＬＥＹＲＥＶＩＳＩＯＮＡＲＴＨＲＯＰＬＡＳＴＹＦＯＲＳＥＶＥＲＥＦＥＭＯＲＡＬＯＳＴＥＯＬＹＳＩＳＶＶＲＡＵＴ，ＰＤＳＩＮＥＹ，ＢＭＷＲＯＢＬＥＷＳＫＩ我们对１...     

肝门部胆管癌组织内血管形成与细胞凋亡相关性的研究

目的　研究肝门部胆管癌中细胞凋亡和血管形成的相互关系。方法　采用原位末端标记技术和抗因子Ⅷ的抗体分别检测肝门部胆管癌细胞凋亡指数和瘤内微血管的密度,同时用免疫组化法检测血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ） 和胆管癌细胞凋亡调控基因ｂｃｌ２ 的表达。结果　肝门部胆管癌组织ＶＥＧＦ阳性表达率５５－５６％ （２０／３６）,ＶＥＧＦ阳性表达与ＭＶＤ呈正相关（Ｐ＜ ０－０１） 。高血管组的ｂｃｌ２ 阳性表达明显高于低血管组（ Ｐ＜ ０－０５）,而低血管组的细胞凋亡指数高于高血管组（ Ｐ＜０－０１）。ｂｃｌ２ 表达丰富的区域,ＶＥＧＦ的表达率高。结论　肝门部胆管癌血管形成影响细胞凋亡的敏感性和发生率。     

抗肾小球基底膜抗体在各类肾小球疾病中的检测及其致病性研究

抗肾小球基底膜抗体在各类肾小球疾病中的检测及其致病性研究吕红，郭怡清，吴长龙，江世益，钟慈声，杨俊华ＴＨＥＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮＡＮＤＲＥＳＥＡＲＣＨＯＦＡＮＴＩＢＯＢＹＯＦＡＮＴＩＧＢＭＯＮＤＩＦＦＥＲＥＮＴＧＬＯＭＥＲＵＬＡＲＤＩＳＥＡＳＥＬ...     

蝮蛇抗栓酶治疗肾病综合征高粘血症近期疗效观察

蝮蛇抗栓酶治疗肾病综合征高粘血症近期疗效观察徐刚，钱桐荪，徐学康ＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＳＨＯＲＴＴＩＭＥＥＦＦＥＣＴＯＦＦＵＳＨＥＫＡＮＧＳＨＵＡＮＭＥＩＩＮＴＲＥＡＴＩＮＧＢＬＯＯＤＨＹＰＥＲＶＩＳＣＯＳＩＴＹＯＦＮＥＰＨＲＯＴＩＣＳＹＮＤＲＯ...     

1，25二羟维生素D3对乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的　研究１ ，２５ 二羟维生素 Ｄ３［１ ，２５（ Ｏ Ｈ）２ Ｄ３］ 对乳腺癌细胞株 Ｍ Ｃ Ｆ７ 生长及凋亡的影响。　方法　采用四唑氮蓝比色（ Ｍ Ｔ Ｔ） 法检测细胞增殖，光镜和电镜形态学观察，流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率，末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记（ Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ） 法计数凋亡细胞，免疫印迹法检测ｂｃｌ２ 蛋白表达。　结果　１０ － ７ ｍｏｌ／ Ｌ 的１ ，２５（ Ｏ Ｈ）２ Ｄ３ 就可以抑制 Ｍ Ｃ Ｆ７ 增生，改变细胞周期时相分布，致 Ｇ０／ Ｇ１ 期阻滞，加强细胞毒性化疗药阿霉素（ Ａｄｒ） 的作用，促进细胞凋亡，下调ｂｃｌ２ 蛋白表达。　结论　１ ，２５（ Ｏ Ｈ）２ Ｄ３ 可以作为细胞调亡诱导剂成为新一类乳腺癌激素治疗药。     

抗精浆免疫抑制物抗体的抗生育机理研究

为了探讨抗精浆免疫抑制物抗体（ＳＰＩＭ－Ａｂ）的抗生育机理，对１００例不育症患者和３０例正常对照进行了ＳＰＩＭ－Ａｂ的补体结合功能测定（ＣＦＡ）和ＳＰＩＭ－Ａｂ对精子凝集、制动、穿透力和杀精子影响的研究。结果：ＳＰＩＭ－Ａｂ阳性不育患者（ｎ＝２９）ＣＦＡ值为６．４７±１．５５ｋＵ／Ｌ，明显低于ＳＰＩＭ－Ａｂ阴性患者（ｎ＝７１，８．１１±１．６２ｋＵ／Ｌ）和对照组（ｎ＝３０，８．６０±１．８０ｋＵ／Ｌ），Ｐ＜０．０１。经ＳＰＩＭ－Ａｂ阳性血清和ＳＰＩＭ－Ａｂ阴性血清作用后，两组精子凝集，制动和死精子百分率分别为４１．４％、２１．１％，６９．０％、１６．９％，６２．１％、４．２％，精子穿透高度分别为３１．６±１３．０ｍｍ、３８．０±１２．９ｍｍ，有显著性差异（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。结论：ＳＰＩＭ－Ａｂ能够以抗原抗体复合物形式激活补体，对精子凝集、制动、杀伤和穿透力的影响是干扰生育的重要原因之一。     

用~（125）I－HOSMcAb在骨移植成骨肉瘤组织的裸鼠体上的放射免疫显像

将人成骨肉肩细胞（ＨＯＳ－８６０３）注射入裸鼠骨髓腔，建立了裸鼠骨荷人成骨肉瘤模型，并以￣（１２５）Ｉ标记抗人成骨肉启单克隆抗体（￣（１２５）Ｉ－ＳＩＨＯＳＭｃＡｂ－Ｂ＿４），对该模型进行放射免疫显像，结果表明ＨｏＳＭｃＡｂ－Ｂ＿４对人成骨肉瘤组织的结合特异性较强，核素明显聚集于肿瘤处，而标记正常鼠ＩｇＧ对荷人成骨肉瘤模型及标记抗体对荷人肝癌模型均未见肿瘤部位显像。这些结果提。示ＨｏＳＭｃＡｂ－Ｂ＿４抗体可用于成骨肉瘤的定位显像诊断及导向治疗的载体。     

人精子有效抗原基因表达克隆的研究

我们从人睾丸组织中提取ＲＮＡ，并进一步纯化出ｍＲＮＡ；以此为模板，在反转录酶和ＤＮＡ多聚酶的作用下，合成ｃＤＮＡ；将ｃＤＮＡ与λｇＩＩ载体重组后转染大肠杆菌，构建人睾丸ｃＤＮＡ表达文库。运用遗传显色法和噬菌斑原位杂交法鉴定表达文库后，用兔抗人精子抗体筛选人精子抗原基因表达克隆（ＨＳＧ）。对ＨＳＧ表达抗原（ＨＳＧＡｇ）和特异抗体（ＨＳＧＡｂ）进行纯化和抗生育效应的测定。结果显示：（１）人睾丸ｃＤＮＡ表达文库容量为１．８２Ｘｌ０６ｐｆｕ，遗传显色法示重组率为６７％，噬菌斑原位杂交法示重组率为５１％。（２）经兔抗人精子抗体筛选２Ｘｌ０４ｐｆｕ，得８株人精子抗原基因表达克隆。（３）人血清、兔血清ＨＳＧ２Ａｂ和兔血清ＨＳＧ８Ａｂ对人精子具有补体依赖细胞毒作用。（４）兔血清ＨＳＧ３Ａｂ能阻断人精子在顶体反应时顶体后区ＣｏｎＡ受体的暴露。结果提示，ＨＳＧ２、ＨＳＧ３和ＨＳＧ８克隆的表达抗原是精子有效抗原，能作为精子免疫避孕疫苗的候选成分。     

虫草对慢性肾衰大鼠肝脏和肌肉蛋白合成速率的影响

观察人工虫草醇提液治疗４／６肾截除肾衰大鼠肝脏和肌肉蛋白合成速率（ＳＬ％／ｄ，ＳＭ％／ｄ）。方法虫草治疗９０天时，用大剂量３Ｈ苯丙氨酸（３Ｈｐｈｅ）注入，测定组织蛋白标记物的掺入量，以观察大鼠ＳＬ％／ｄ，ＳＭ％／ｄ。结果虫草能有效地降低Ｓｃｒ和ＢＵＮ，减慢Ｃｃｒ下降，提高Ａｌｂ和Ｈｂ，减少尿蛋白量，纠正脂质代谢紊乱。ＳＬ％／ｄ和ＳＭ％／ｄ明显高于ＣＲＦ对照组，但低于正常组。结论虫草醇提液能减少ＣＲＦ大鼠蛋白尿，纠正脂代谢紊乱，改善贫血和提高ＳＬ％／ｄ和ＳＭ％／ｄ。     

在正常和多囊性卵巢综合征卵巢编码胰岛素样生长因子（IGF－I，II），IGF及胰岛素受体和IGF结合蛋白1－6的其基因表达及基因产物的定位

在正常和多囊性卵巢综合征卵巢编码胰岛素样生长因子（ＩＧＦ－Ｉ，ＩＩ），ＩＧＦ及胰岛素受体和ＩＧＦ结合蛋白１－６的其基因表达及基因产物的定位ＡＬＢＥＲＴＥＬ－ＲＯＥＩＹ，ＸＩＡＯＨＯＵＣＨＥＮ，ＶＥＲＯＮＩＣＡＪ．ＲＯＢＥＲＴＳＳＨＵＮＩＣＨＩＳＨＩＭ...     

晚期糖基化终产物受体介导AGE-β2微球蛋白与人成纤维细胞的结合

目的探讨被晚期糖基化终产物修饰的β２微球蛋白（ＡＧＥｓβ２Ｍ）与人类成纤维细胞的相互关系。方法用去垢剂提取人成纤维细胞系（ＨＳＦｓ）膜成份。用免疫印迹法和免疫荧光法鉴定细胞ＡＧＥ受体（ＲＡＧＥ）。用放射性配体结合法观察ＡＧＥβ２Ｍ与ＨＳＦｓ的相互关系。结果ＨＳＦｓ膜表面表达ＲＡＧＥ。ＡＧＥβ２Ｍ能以特异、剂量依赖的方式与ＨＳＦｓ结合［亲和常数（Ｋｄ）≈８６５ｎｍｏｌ／Ｌ］，这一过程可被抗ＲＡＧＥ抗体所抑制，提示该结合是由ＲＡＧＥ所介导。结论成纤维细胞及其相关的间质细胞可能是ＡＧＥβ２Ｍ病理生物学效应的靶细胞，从而可能参与了透析相关性淀粉样变（ＤＲＡ）的发生。     

用^125I—HOSMcAb在骨移植成骨肉瘤组织的裸鼠体上的放射免疫…

将人成骨肉细胞注射入裸鼠骨髓腔，建立了裸鼠骨荷人成骨肉瘤模型，并以＾１２５Ｉ标记抗人成骨肉单克隆抗体，对该模型进行放射免疫显像，结果表明ＨＯＳＭｃＡｂ－Ｂ４对人成骨肉瘤组织的结合特异性较强，核素明显聚集于肿瘤处，而标记正常鼠ＩｇＧ对荷人成骨肉瘤模型及标记抗体对荷人肝癌模型均未见肿瘤部位显像。这些结果提示ＨＯＳＭｃＡｂ－Ｂ４抗体可用于成内肉瘤的定位显像诊断及导向治疗的载体。     

不同妇科疾病患者抗精浆免疫抑制物抗体水平的分析

不同妇科疾病患者抗精浆免疫抑制物抗体水平的分析史轶超，黄邱朝，党洁民精浆免疫抑制物（ＳＰＩＭ）参与抑制局部和全身的细胞、体液免疫应答［１～３］。精浆中存在抗ＳＰＩＭ的自身抗体（ＳＰＩＭ－Ａｂ），能抑制ＳＰＩＭ活性，降低精子活率和精子密度［４］。我们用...     

抗CD3与抗CD28单克隆抗体共刺激对淋巴细胞免疫活化基因mRNA表达的影响

目的　观察ＣＤ２８ 共刺激信号对淋巴细胞免疫活化基因表达的影响及环孢素Ａ（ＣｓＡ）对它们的抑制作用。方法　分离健康人外周血单个核细胞, 分别给予抗ＣＤ３ 单克隆抗体（ 抗ＣＤ３ｍＡｂ） 单刺激或抗ＣＤ３ ｍＡｂ＋ 抗ＣＤ２８ 单克隆抗体（抗ＣＤ２８ ｍＡｂ）共刺激培养; 加或不加入ＣｓＡ。于培养后６ ｈ 和２４ ｈ 收集细胞。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测βＡｃｔｉｎ、ＣＤ４０Ｌ、ｂｃｌｘＬ、ＴＧＦβ１ 、Ｆａｓ、ＦａｓＬ、穿孔素和颗粒酶ＢｍＲＮＡ 表达水平。结果　ＣＤ２８ 共刺激信号能显著增强免疫活化基因ｍＲＮＡ 的表达;ＣｓＡ 对ＦａｓＬ和颗粒酶Ｂ的ｍ ＲＮＡ表达能产生抑制, 而对共刺激后其余免疫活化基因的表达无明显抑制。结论　ＣＤ２８ 共刺激信号通过提高多种Ｔ 淋巴细胞相关的免疫活化基因的表达水平, 而使免疫反应的活化、增殖和效应过程均得到增强;ＣｓＡ 对这一过程并非完全无效, 仍可能具有调节作用。