多药耐药基因与膀胱癌

多药耐药基因与膀胱癌吴长利，马腾骧肿瘤化疗是肿瘤临床治疗的一个重要治疗手段。然而肿瘤细胞对化疗药物产生的抗药性是癌症化疗失败的重要因素［１］。肿瘤细胞抗药类型较多，至少涉及以下几种抗药机制［２］：（１）多药耐药基因（ＭＤＲｇｅｎｅ）的过度表达；（２）...     

多药耐药基因在人原发性肝细胞癌中的表达

建立一种敏感性高、特异性强的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，定量检测了３０例原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）患者癌组织周组织中多药耐药基因（ｍｄｒ１）表达水平，其中５例患者术前经肝动脉插管化疗。结果显示：ＰＨＣ癌组织中ｍｄｒ１基因表达较癌周组织高；术前行化疗者癌组织中ｍｄｒ１基因过度表达，同时其癌周组织中ｍｄｒ１的表达较未化疗的癌周组织高。我们认为ｍｄｒ１基因过度表达在ＰＨＣ内在性或获得性药物碱     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及其意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１,ＭＲＰ,ＬＲＰ,ＧＳＴｐ１和ＴｏｐｏⅡα基因,ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍｒｎＡ     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因在肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录ＰＣＲ、流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用ＭＴＴ法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１、ＭＲＰ、ＬＲＰ、ＧＳＴＰ１和ＴｏｐｏⅡα基因。ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰ ｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍＲＮＡ≥０．８、ＧＳＴＰ１ ｍＲＮＡ≥０．７Ｔ ＴｏｐｏⅡαｍＲＮＡ≤０．４为耐药联合诊断标准,符合率为９８．００％。结论 多重ＭＤＲ是肝癌耐药的主要形式。用逆转录ＰＣＲ方法联合检测５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ表达在肝癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

多药耐药基因在人原发性肝细胞癌中的表达

建立一种敏感性高、特异性强的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量检测了30例原发性肝细胞癌(PHC)患者癌组织及癌周组织中多药耐药基因(mdrl)表达水平,其中5例患者术前经肝动脉插管化疗。结果显示:PHC癌组织中mdrl基因表达较癌周组织高;术前行化疗者癌组织中mdrl基因过度表达,同时其癌周组织中mdrl的表达较未化疗的癌周组织高。我们认为mdrl基因的过度表达在PHC内在性或获得性药物耐受的产生中起着一定的作用。     

应用逆转录聚合酶链反应技术检测膀胱癌多项耐药基因的表达

应用逆转录酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，以β－微球蛋白基因为内对照，对２８例术前未接受化疗的膀胱癌标本及１２例正常膀胱粘膜ＭＤ１基因的表达进行了分析，８２．１％（２３／２８）膀胱癌和４１．７％（５／１２）正常膀胱粘膜在１６７ｂｐ处显示ＭＤＲ１基因特异的扩增片段，全部标本在１２０ｂｐ处显示β－微球蛋白基因特异的扩增片段。结果表明，膀胱癌及正常膀胱粘膜存在内源性ＭＤＲ１基因的表达，从而提示膀胱癌患者对化疗药物敏感性的差异可能与其ＭＤＲ１基因的异常表达有关。同时证实ＲＴ－ＰＣＲ技术是一种灵敏的，可靠的ＭＤＲ１基因表达的检测方法。     

转bak基因促膀胱癌多药耐药细胞凋亡的研究

目的　观察转入bak基因对膀胱癌多药耐药 (MDR)细胞的杀伤效果 ,探讨其可能的机制。　方法　用脂质体将bak基因导入MDR细胞 ,通过原位杂交法检测bakmRNA的表达 ,SABC免疫组化法分析bak和bcl 2的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期的变化。荧光染色观察细胞形态。　结果　bak基因可成功转入MDR细胞 ,转染第 3天bakmR NA阳性率 64 % ,bak表达阳性率 60 % ,明显高于对照组 ;转染后细胞中bcl 2表达显著减少 ,P <0 .0 5。转染第 4天EJ/bak细胞抑制率 32 % ,显著高于对照组 ,P <0 .0 5。细胞周期分析可见凋亡峰 ,凋亡率 35 %。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。　结论　转入bak基因可显著促进MDR细胞的凋亡 ,其作用机制与下调bcl 2基因的表达有关     

多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因在食管、贲门癌中的表达

目的　探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在食管癌、贲门癌中表达的临床意义。　方法　采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),对29例食管癌、贲门癌癌组织及癌旁组织中MDR1和MRP的表达进行检测。　结果　癌组织中MDR1阳性率为65.5%,高于癌旁组织中MDR1的阳性率,为37.9%(P<0.05),癌组织MDR1信使核糖核酸(mRNA)表达水平也显著高于癌旁组织(P<0.01);癌组织的MRP阳性率为48.3%,高于癌旁组织(27.6%),但无差异(P>0.05),而癌组织MRPmRNA表达水平与癌旁组织比较则有差异(P<0.05);中、低分化肿瘤的MDR1和MRP表达阳性率增高,两基因的mRNA表达水平显著高于高分化肿瘤(P<0.05)。　结论食管、贲门癌具有内源性多药耐药性;MDR1和MRP表达与食管、贲门癌的组织学类型及TNM分期无关,但可反映其肿瘤组织分化不良的生物学特征     

多药耐药基因产物在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨胃癌组织中胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶π（GST-π）、P-糖蛋白（P-gp）、拓扑异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）、胸苷酸合成酶（TS）及多药耐药相关蛋白（MRP）的表达特点及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测48例胃癌组织和10例正常胃黏膜组织中GST-π、P-gp、Topo-Ⅱ、TS和MRP的表达,并结合其临床病理资料进行综合分析。结果GST-π、P-gp、Topo-Ⅱ、TS和MRP在胃癌组织中的表达阳性率依次为72.9%（35/48）、56.3%（27/48）、83.3%（40/48）、41.7%（20/48）和39.6%（19/48）,而在正常胃黏膜组织中其表达阳性率依次为10.0%（1/10）、0（0/10）、0（0/10）、0（0/10）,其差异均有统计学意义（GST-π：P〈0.01,P-gp：P〈0.01,Topo-Ⅱ：P〈0.01,TS：P〈0.05,MRP：P〈0.05）;它们在胃癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、大小、侵袭深度和淋巴结转移均无关（P〉0.05）,而与肿瘤的分化程度有关（P〈0.01）。结论GST-π、P-gp、Topo-Ⅱ、TS和MRP在胃癌组织中的高表达是胃癌多药耐药产生的基础。GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ、TS和MRP的联合检测可用于指导临床合理选择化疗方案。     

多药耐药基因MDR1在原发性肝癌组织中表达的意义

肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性的原因有几种，其中最主要的是多药耐药基因MDR1。应用免疫组化方法测定30例原发性肝癌（PHC）癌组织和癌周组织中MDR1的表达产物Pgp（P-gly-coprotein，PgP），结果显示，PHC癌组织中MDR1基因表达阳性率（60．0％）远较癌周组织高（23．3％）。化疗后肿瘤组织MDR1阳性率（88．9％）较未化疗瘤的癌组织（47．6％）高。结合临床资料分析，MDR1基因的过度表达在我国PHC的内在性和获得性药物耐受产生中起着一定的作用。关键词:##4多药耐药基因;;原发性肝癌     

PCNA反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞体外增殖活性的影响

目的为探讨基因治疗膀脱癌的新途径,使用增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡聚核苷酸（ASODN）作用于膀优癌细胞系BIU-87。方法应用细胞生长曲线和MTT比色法检测细胞增殖活性,并采用免疫组织化学方法（SABC法）检测PCNA蛋白的表达。结果ASOND（30urn）处理组细胞与对照组比较生长曲线差异有显著性,增殖显著受抑（P＜0．05）,PCNA蛋白表达完全抑制。而SODN组则无此作用（P＞0．05）。结论PCNA反义寡聚核苷酸可以显著抑制BIU-87细胞体外增殖活性,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现。     

PCNA反义cDNA基因转导抑制人膀胱癌细胞增殖的研究

目的 探讨增殖细胞核抗原（PCNA）基因反义cDNA对人膀胱癌细胞体外增殖活性的抑制作用。方法 构建PCNA反义cDNA真核表达载体并转染膀胱癌DJ细胞,通过细胞生长曲线、MTT比色分析、H^3-TdR掺入法检测癌细胞增殖活性,流式细胞仪（FCM）分析细胞周期时相变化,SABC免疫组化观察癌细胞PCNA蛋白表达水平。结果 PCNA反义cDNA导入后,膀胱癌DJ细胞生长速率显著减慢（P＜0．01）,增殖活性抑制率59．02％（P＜0．05）,DNA合成速率降低52．31％（P＜0．01）,S期细胞减少,细胞周期阻滞于G0／G1期,PCNA蛋白表达显著减弱（P＜0．05）,差别均有显著性意义。结论 PCNA反义cDNA基因转导能有效抑制膀胱癌细胞的PCNA蛋白表达及体外增殖活性,为肿瘤基因治疗提供了有效途径。     

稳定转导反义增殖细胞核抗原基因对膀胱癌细胞体外增殖活性的调控作用

目的　探讨反义增殖细胞核抗原 (PCNA)基因对膀胱癌细胞增殖活性的影响。方法脂质体介导PCNA反义真核表达载体转染膀胱癌EJ细胞 72h后 ,G41 8筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/AP ,采用SABC免疫组织化学方法和逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测PCNA基因表达 ,噻唑蓝 (MTT)比色分析、3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法、流式细胞仪、克隆形成实验检测癌细胞体外增殖活性。结果　同EJ细胞比较 ,所获亚克隆EJ/AP中PCNA蛋白及mRNA表达完全抑制 ,癌细胞体外增殖活性抑制 49.38% (P <0 .0 5) ,DNA合成速率降低 47.71 % (P <0 .0 1 ) ,细胞周期阻滞于G0 /G1 期 ,克隆形成能力抑制 64 .73 % (P <0 .0 1 )。结论　稳定转染反义PCNA基因能有效抑制膀胱癌细胞体外增殖活性 ,有望成为膀胱癌基因治疗的有效策略     

反义寡核苷酸防治移植物动脉硬化的作用

目的　探讨防治移植物动脉硬化的途径。方法　通过大鼠胸腹主动脉移植简化模型 ,用各种增殖细胞核抗原 (PCNA)寡核苷酸在脂质体介导下转染大鼠胸主动脉后 ,移植到大鼠腹主动脉 ,于术后 15、3 0和 60d取移植动脉作病理学检查及PCNA逆转录PCR检测。结果　病理学结果示 ,在 3个时相点 ,反义寡核苷酸组移植动脉再狭窄率 (8.3 %、12 .4%、19.5 % )均显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。逆转录PCR结果显示 ,在 3个时相点 ,反义寡核苷酸组PCNAmRNA的表达(5 9.2 4、80 .16、18.5 8)均明显低于对照组 (P >0 .0 5 )。结论　PCNA反义寡核苷酸可明显抑制移植动脉PCNA蛋白的表达 ,抑制动脉内膜增生 ,防治移植物动脉硬化。     

反义增殖细胞核抗原cDNA对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)反义cDNA对人膀胱癌裸鼠移植瘤模型生长的影响。　方法　脂质体介导反义PCNA真核表达载体转染人膀胱癌EJ细胞后 ,接种到裸鼠皮下组织 ,观察体内致瘤及生长情况 ;免疫组化检测瘤体PCNA蛋白表达 ,RT PCR分析瘤体PCNA、wt p5 3、c myc基因mRNA水平 ;并进行瘤体病理学评估。 　结果　反义PCNAcDNA导入后 ,EJ细胞体内致瘤活性降低 ,同对照组比较瘤体体积缩小 5 4 .2 3% (P <0 .0 5 ) ,重量减轻 4 2 .5 4 % (P <0 .0 1) ,瘤组织PCNA蛋白及mRNA水平分别减少 6 1.6 2 % (P <0 .0 1)和 72 .13% (P <0 .0 1) ,c myc基因表达下调4 7.34% (P <0 .0 1) ,wt p5 3表达活性无显著性改变 (P >0 .0 5 ) ,瘤体病理学特征改善。 　结论　转导反义PCNAcDNA能有效逆转肿瘤的恶性表型 ,是膀胱癌基因治疗的合理策略之一     

PCNA反义寡核苷酸抑制人膀胱癌EJ细胞增殖活性的实验研究

目的 探讨全硫代修饰型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对人膀胱癌ＥＪ细胞体外增殖活性及裸鼠体内致瘤性的影响。方法 ＰＣＮＡ－ＡＳＯ在脂质体介导下转染ＥＪ细胞后,运用细胞计数,ＭＴＴ法,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验,流式细胞术（ＦＣＭ）,克隆形成率（ＣＦ）,ＳＡＢＣ免疫组化,建立裸鼠动物模型等方法分析其体内外抗瘤活性及机制。结果 在脂质体介导下,０．４－２．０μｍｏｌ／Ｌ ＰＣＮＡ－ＡＳＯ对人膀胱癌ＥＪ细胞     

转染血小板源生长因子和增殖细胞核抗原反义寡核苷酸抑制移植血管狭窄的实验研究

目的　探讨联合应用血小板源生长因子(PDGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸(AODN)防止移植血管狭窄的作用。方法　将同一只兔的左、右髂外动脉(各1 0cm)对换移植,移植血管用PDGF- AODN和PCNA -AODN转染;移植血管病理切片后测量其内膜厚度、内膜面积和移植血管狭窄率,并分别用原位杂交组织化学和免疫组织化学染色计数PDGF和PCNA阳性细胞数。结果　PDGF- AODN加PCNA- AODN组的移植血管内膜厚度、内膜面积、管腔狭窄程度和PDGF阳性细胞及PCNA阳性细胞数均显著低于对照组(P<0 .01),而且亦明显低于单独转染PDGF- AODN组或PCNA -AODN组(P<0. 05 ),PDGF AODN组和PCNA AODN组间差异无显著意义(P>0. 05 )。结论　联合应用PDGF AODN和PCNA- AODN能有效抑制血管平滑肌细胞增殖,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄。     

增殖细胞核抗原在脑胶质瘤中的表达

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)在不同类型胶质瘤细胞中的表达 ,以及与复发、预后的关系。方法　应用抗 PCNA单克隆抗体 (小鼠IgGza型 ) ,对 61例脑胶质瘤患者病理切片行免疫组织化学染色 ,不同类型胶质瘤PCNA标记指数进行差异分析。结果　不同类型胶质瘤的PCNA标记指数 (LI)不同 ,随着胶质瘤恶性程度增高而增大 ,两者呈显著正相关 (r =0 .895 ,P <0 .0 1) ,各级别间LI的差异非常有显著性 (P <0 .0 1) ;死亡组与存活组间LI差异有显著性 ;肿瘤首发与否、性别、年龄组间差异无显著性 ;恶性程度、PCNA标记指数和放疗与否与预后相关 (P <0 .0 5 )。结论　PCNA可以作为提示胶质瘤预后的指标 ,对确定胶质瘤的生物学特性和肿瘤的分级有指导作用。不同恶性程度胶质瘤间LI差异有显著性 ,与恶性程度正相关 ,与胶质瘤的预后关系密切 ,PCNA的过度表达提示肿瘤恶性程度高 ,预后差。     

PCNA反义寡核苷酸对人不同恶性肿瘤细胞体外增殖活性的影响

目的：探讨增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸(ASO)对人不同恶性肿瘤细胞体外生长的影响。方法：PCNA—ASO在脂质体(1ipofectin)介导下转染膀胱癌EJ细胞、结肠癌HCT—8细胞、肺癌GLC—82细胞及恶性胶质瘤BT—325细胞，运用细胞计数、MTT、流式细胞术、克隆形成及免疫组织化学方法分析其抗瘤活性及机制。结果：PCNA—ASO对上述4种肿瘤细胞的体外生长均有明显抑制作用；不同细胞敏感性差异较大，其中以GLC—82细胞最敏感，HCT—8细胞最不敏感；4种细胞生长均受阻于Gl期。结论：PCNA在恶性肿瘤细胞的增殖中是必需的。PCNA—ASO体外对不同肿瘤细胞具有抗瘤活性。