Fas/APO-1 在泌尿系肿瘤细胞中的表达

为了探讨Ｆａｓ／ＡＰＯ１在泌尿系恶性肿瘤发生发展中的作用，采用免疫细胞化学方法对６种泌尿系肿瘤细胞，膀胱癌（Ｔ２４，ＥＪ，ＢＩＵ８７），肾癌（ＧＲＣ１，ＲＣＣ９４９），前列腺癌（ＰＣ３Ｍ）和一种原代培养正常肾间质成纤维细胞Ｆａｓ／ＡＰＯ１分子的表达进行了检测。结果显示原代培养正常肾间质成纤维细胞和Ｔ２４细胞系Ｆａｓ／ＡＰＯ１分子表达较强，ＰＣ３Ｍ属中等强度表达，ＲＣＣ９４９与ＢＩＵ８７属微弱表达，而ＥＪ及ＧＲＣ１则不表达。Ｆａｓ／ＡＰＯ１在泌尿系恶性肿瘤培养细胞中的表达强度偏低或完全不表达，可能参与了泌尿系恶性肿瘤的发生和发展。     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因在肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录ＰＣＲ、流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用ＭＴＴ法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１、ＭＲＰ、ＬＲＰ、ＧＳＴＰ１和ＴｏｐｏⅡα基因。ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰ ｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍＲＮＡ≥０．８、ＧＳＴＰ１ ｍＲＮＡ≥０．７Ｔ ＴｏｐｏⅡαｍＲＮＡ≤０．４为耐药联合诊断标准,符合率为９８．００％。结论 多重ＭＤＲ是肝癌耐药的主要形式。用逆转录ＰＣＲ方法联合检测５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ表达在肝癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

人胰腺癌细胞nm23 mRNA的表达与其转移潜能的关系

目的　研究人胰腺癌细胞中ｎｍ２３ ｍＲＮＡ的表达与其转移潜能的关系。 方法　在建立不同转移潜能的人胰腺癌ＪＦ３０５ 单克隆细胞亚系的基础上,应用定量逆转录多聚酶链式反应技术（ＲＴＰＣＲ）检测不同转移潜能的人胰腺癌ＪＦ３０５ 单克隆细胞亚系细胞中ｎｍ２３ ｍＲＮＡ 的表达。 结果　ｎｍ２３Ｈ１ 基因ｍＲＮＡ在低转移潜能的ＪＦ３０５Ｃ细胞系中的表达（１－９０ ±０－０９）明显高于其在高转移潜能的ＪＦ３０５Ａ 细胞系中的表达（１－６３±０－１０,Ｐ＜ ０－０１）;ｎｍ２３Ｈ２ 基因ｍＲＮＡ的表达,在高、低转移潜能的细胞亚系间差异无显著意义（０－７９ ±０－１０ ,０－７７±０－０６,Ｐ＞０－０５）。 结论　ｎｍ２３ 基因,主要是ｎｍ２３Ｈ１ 基因,在人胰腺癌中起转移抑制作用     

大肠癌组织中结直肠癌缺失基因mRNA及增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨结直肠癌缺失基因（ＤＣＣＧ）及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与大肠癌的临床病理特征关系，方法 用逆转录ＰＣＲ及免疫组织化学染色方法，分别检测ＤＣＣＧｍＲＮＡ及ＰＣＮＡ在３３例大肠腺癌及正常粘膜组织中的表达状况。结果 （１）ＤＣＣＧｍＲＮＡ表达缺失率为６１％，ＰＣＮＡ指数为３％～９７％。（２）大肠癌组织ＤＣＣＧｍＲＮＡ表达缺失及及ＰＣＮＡ指数与肿瘤分化程度，浸润深度和转移情况有显著相关性（Ｐ〉     

生长因子Wnt-5A在六种泌尿肿瘤细胞系中的异常表现

为了探讨生长因子Ｗｎｔ５Ａ在泌尿系肿瘤发生中的作用,采用半定量ＲＴＰＣＲ（逆转录多聚酶链反应）方法对６种泌尿肿瘤细胞系、一种原代培养肾纤维母细胞（ＰＲＦ）及１例正常人肾组织（ＮＲＴ）进行Ｗｎｔ５Ａ检测。材料与方法　６种泌尿恶性肿瘤细胞系：膀胱癌（Ｔ２４、ＥＪ、ＢＩＵ８７）、肾细胞癌（ＧＲＣ１、ＲＣＣ９４９）和前列腺癌（ＰＣ３Ｍ）取自本所免疫室。所有的细胞系均用ＲＰＭＩ１６４０含有１６％ＦＣＳ,１０ｍｍｏｌ／ＬＨｅｐｅｓ和２ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺的培养液培养于３７℃的ＣＯ２孵箱内。取…     

移植肾间质中浸润细胞免疫标记蛋白的变化与急性细胞性排异的关系

观察移植肾发生急性细胞性排异（ＡＣＲ）和无ＡＣＲ时，肾间质浸润细胞中一组标记蛋白的变化，及其与间质浸润ＣＤ４或ＣＤ８细胞的关系。方法选择１７例肾移植患者，定期行移植肾活检，采用ＰＡＰ四层法对一组标记蛋白进行观察。结果无ＡＣＲ的肾组织中，增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和ＤＲ蛋白仅轻度增加，原癌蛋白２（Ｂｃｌ２）、ＩＬ２Ｒ和细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）的增加不明显。当移植肾出现ＡＣＲ时，上述标记蛋白均明显增加，尤以ＰＣＮＡ和ＩＬ２Ｒ增加最为显著，并与间质浸润的ＣＤ８密切相关。结论移植肾的免疫组化检查对移植肾急性细胞性排异反应有一定的意义；ＩＬ２Ｒ对于ＡＣＲ的诊断及鉴别诊断具有一定的临床应用价值。     

黄芪当归合剂降低肾病综合征大鼠血脂机制的探讨

目的　探讨黄芪当归合剂降低肾病综合征（ＮＳ）大鼠血脂的机制。方法　采用加速型肾毒血清肾炎致ＮＳ模型。治疗组灌服黄芪当归合剂,正常组和肾病对照组灌水。检测各组血清脂谱,以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交检测肝脏羧甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧＣｏＡ） 还原酶和低密度脂蛋白受体（ＬＤＬＲ）ｍＲＮＡ表达。结果　肾病大鼠呈高脂蛋白血症,该组肝脏ＨＭＧＣｏＡ还原酶的ｍＲＮＡ在早期呈短暂上调（ Ｐ ＜ ０－００１） ,ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达随病程逐渐下调（ Ｐ ＜ ０－００１）;黄芪当归治疗组,血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白低于肾病对照组,虽肝脏ＨＭＧＣｏＡ 还原酶ｍＲＮＡ 无明显变化,但ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ表达较肾病对照组显著上调（ Ｐ＜ ０－０１） 。结论　黄芪当归组显著降低ＮＳ大鼠血脂水平,这一改善脂代谢紊乱的作用可能部份是通过肝脏ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ 表达上调而实现。     

增殖性肾炎患者肾小球细胞胰岛素样生长因子—1的表达及其意义

目的　探讨人类增殖性肾炎（ＰＧＮ） 肾小球中胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ１） 的表达及其意义。方法　采用原位杂交、免疫组织化学方法检测肾活检组织中ＩＧＦ１ ｍＲＮＡ及其蛋白质表达，并分析其与患者肾小球内细胞外基质（ＥＣＭ） 增生的关系。结果　增殖性肾炎组中ＩＧＦ１ 的表达水平显著高于非增殖性肾炎组和正常组（ Ｐ＜０－０１），ＩＧＦ１ 表达水平与ＥＣＭ 增生程度呈正相关。结论　肾小球局部ＩＧＦ１ 基因异常表达参与了ＰＧＮ的发病机制。     

逆转录病毒载体介导HSV—TK基因在膀胱癌细胞的表达和作用

应用基因工程技术构建了带ＨＳＶＴＫ基因的逆转录病毒重组体ｐＬＮＳＸＴＫ，磷酸钙沉淀法转染ＰＡ３１７细胞，建立了重组病毒的载体产生细胞系ＰＡ３１７／ＴＫ细胞。用病毒上清感染人的膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７，Ｇ４１８筛选抗性克隆ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞。提取ＰＡ３１７／ＴＫ和ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞的ＤＮＡ，用ＤＩＧ标记检测证实整合了ＨＳＶＴＫ基因，在病毒上清用ＲＴＰＣＲ检测到目的基因的转录。转导ＨＳＶＴＫ基因的膀胱癌细胞获得对ＡＣＶ的化学敏感性，给予ＡＣＶ可有效地杀伤肿瘤细胞。     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及其意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１,ＭＲＰ,ＬＲＰ,ＧＳＴｐ１和ＴｏｐｏⅡα基因,ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍｒｎＡ     

Fas配体在泌尿生殖肿瘤细胞系及肾癌组织中的表达

目的 明确Ｆａｓ配体在泌尿生殖肿瘤细胞系及肾癌组织中的表达情况。方法 采用免疫细胞化学和反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测膀胱癌（Ｔ２４、ＢＩＵ－８７、ＥＪ）、肾癌（ＧＲＣ－１、ＲＣＣ－９４９）、前列腺癌（ＰＣ－３Ｍ）及１０例肾癌组织上Ｆａｓ配体的表达。结果 免疫细胞化学方法检测细胞系中Ｆａｓ配体表达于ＢＩＵ－８７、ＲＣＣ－９４９和ＧＲＣ－１细胞,而以ＢＩＵ－８７和ＲＣＣ－９４９细胞系表达较强,在     

EZH2基因在膀胱移行细胞癌细胞株和癌组织标本中的表达及意义

目的 探讨EZH2基因在膀胱癌发生及进展中的作用. 方法 应用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫细胞化学方法,以前列腺癌细胞株PC-3M作为阳性对照,检测EZH2基因在人膀胱移行细胞癌细胞株T24、EJ、MGH-U1、BIU-87中的表达;采用RT-PCR方法检测45例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱黏膜组织中EZH2基因表达情况.45例膀胱移行细胞癌中表浅性癌(Tis、Ta、T1)31例(68.9%),浸润性癌(T2～T4)14例(31.1%);病理分级G1 13例(28.9%),G2 21例(46.7%),G3 11例(24.4%). 结果 4种膀胱癌细胞株中均有EZH2基因表达.EZH2基因在膀胱移行细胞癌组织中的表达率(82.2%)明显高于正常膀胱黏膜(8.3%,P<0.05),在表浅性膀胱癌中的表达率为74.2%,浸润性膀胱癌中为100.0%,差异无统计学意义(P>0.05).EZH2基因在G1,G2和G3级肿瘤中的表达率分别为61.5%,85.7%和100.0%.随细胞分级程度升高.EZH2表达率有增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05). 结论 EZH2基因可能在膀胱癌的发生及进展中起重要作用,可能成为膀胱癌一个潜在的基因治疗靶点.     

NNMT在肾透明细胞癌的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究NNMT在肾透明细胞癌中的表达情况及对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常肾小管上皮细胞株HKC、肾癌细胞株786-O及30例肾透明细胞癌组织、相应癌旁组织中NNMT的mRNA和蛋白的表达水平,并分析NNMT的mRNA水平与临床病理参数的关系。化学合成针对NNMT特异的siRNA序列,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染进786-O细胞中,利用RT-PCR和Western blot法检测NNMT在786-O细胞中的表达水平,用Transwell小室法检测肾癌细胞786-O侵袭能力的变化。结果:NNMT在肾癌细胞786-O中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞株HKC(P<0.001);肾透明细胞癌组织和对应的癌旁组织中NNMT的mRNA相对表达量分别为(1.582±0.2145)、(0.1269±0.04279),两组比较P<0.001。NNMT的mRNA水平与肿瘤大小、临床分期有关(P<0.05);Tran-swell法检测结果显示降低NNMT的表达后786-O细胞的侵袭能力明显下降。结论:NNMT在肾透明细胞癌组织和细胞中表达升高,可能在肾癌发生、发展过程中发挥重要作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在肾癌组织中的分布及其意义。方法：采用RT－PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织,肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中的表达。结果：死亡受体DR4、DT4在肾癌组织及正常肾组织、肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-2未见表达。结论TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。     

丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞Mta-1 mRNA、Mta-1蛋白表达的影响及意义

目的研究人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达,及丝裂霉素C（MMC）对人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mat-1蛋白表达的影响。方法人膀胱癌T24细胞株培养,MMC干预,用原位杂交和免疫组化检测Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达。结果人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA阳性细胞表达率MMC组（35.1±9.0）%明显低于对照组组（61.9±12.8）%;Mta-1蛋白阳性细胞表达率MMC组（36.0±8.03）%亦明显低于对照组（57.7±10.1）%,P〈0.01。结论人膀胱癌T24细胞株中存在Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的高表达,MMC对人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达具有抑制作用。     

A study of intercellular communication of human transitional cell carcinoma cell lines

Intercellular communication (IC) was investigated by a dye transfer method in 5 human bladder carcinoma cell lines, JTC-29, JTC-30, JTC-32, HUB-41 and T-24 which showed various histological anaplasia when transplanted into nude mice. IC was investigated as follows; 1) IC among cells of each bladder carcinoma cell lines, 2) IC between various combination of different cell lines and 3) IC between cells of bladder carcinoma cell lines and fibroblasts prepared from the human skin or prostate. High IC was observed among JTC-30 cells which showed a differentiated pattern when transplanted into nude mice. JTC-32 and HUB-41, of which transplanted tumors showed poorly differentiated patterns, demonstrated lower IC than JTC-30. Statistical significance was present only between JTC-30 and JTC-32 cells (p less than 0.05). T-24 which formed histologically anaplastic tumor in nude mice demonstrated markedly poor IC. Second, IC between two different cell lines was demonstrated only between JTC-30 and JTC-32. Third, fibroblast from the skin and prostate had high IC but showed apparent IC with none of bladder carcinoma cell lines. These findings indicate that ICs of bladder tumor cells vary with cell lines tested and appear to decrease with progress of malignant anaplasia. Furthermore, the fact that there is sometimes high IC and sometimes lack of IC between differentiated and undifferentiated tumor cells suggests a possible role of IC in prevention of malignant progression. The present study provides no evidence of IC between bladder tumor cells and fibroblasts, which in some reports have been suggested to be an important phenomenon in evaluating the metastatic capacity of cancer cells.     

c-myc反义RNA对肾癌细胞GRC-1的体外生物学影响

目的探讨ｃｍｙｃ反义ＲＮＡ对肾癌细胞系ＧＲＣ１的体外生物学影响。方法利用重组基因技术构建含ｃｍｙｃ反义ＲＮＡ的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３／ｍｙｃＡＳ,再通过脂质体介导完成重组体的细胞转染。结果与对照组相比,转染反义ＲＮＡ后的细胞体外生长速度减慢,软琼脂集落形成能力降低,部分细胞恢复生长接触性抑制;流式细胞仪显示肿瘤细胞Ｓ期百分率下降,细胞阻滞于Ｇ０／Ｇ１期;细胞ＤＮＡ合成减慢,３ＨＴｄＲ掺入率降低;原位杂交检测证实,转染后细胞内源性ｃｍｙｃ基因转录水平降低;被转染细胞在超微结构上也有相应改变。结论ｃｍｙｃ反义ＲＮＡ确能在体外实验中抑制肾癌细胞生长和逆转肿瘤恶性表型。     

gp130在肾癌细胞系RCC-949中的表达缺陷

目的 探讨白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体系统在肾癌细胞系ＲＣＣ－９４９中表达的意义。方法 应用免疫细胞化学方法检测肾癌细胞系ＲＣＣ－９４９中ＩＬ－６蛋白的表达,观察ｒｈＩＬ－６对ＲＣＣ－９４９生长的作用,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测其ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ和ｇｐ１３０ ｍＲＮＡ的表达。结果 肾癌细胞系ＲＣＣ－９４９可以在转录和翻译水平表达ＩＬ－６,但该细胞系的ｇｐ１３０ ｍＲＮＡ表达     

bcl—２及ＭＤＲ—１基因产物在肾癌组织中的表达及其意义

目的：探讨基因 bcl-２和ＭＤＲ－１产物在肾癌组织中表达的意义及相关关系,了解肿增残与耐药的特点,方法：采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法对４８例肾癌和１０例正常肾组织的石蜡包埋标本切片进行bcl-2和ＭＤＲ－１基因产物表达的统计研究,结果：bcl-2在肾癌组织中阳必表达率为７７．１％,与正常肾组织（４０．０％）相比,差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）,但其表达与肿瘤分级、分期及预后无关（P＞０．０５）,ＭＤＲ－１在肾癌组织和肿瘤病理分级及预后无关（Ｐ＞０．０５）。结论：bcl-2蛋白在大多数肾癌组织中呈高表达,其表达在肾肿瘤形成中可能起作用,进一步证实ＭＤＲ－１基因在肾细胞癌抵抗化疗中起作用,与bcl-2无显著相关性,肾癌化疗、放疗不敏感可能涉及ＭＤＲ－１和bcl-2的双重作用。