流产模型孕鼠脾脏调节性T细胞分离纯化方法的初步建立

目的探索流产模型孕鼠CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞快速高效的分选方法。方法采用免疫磁珠两步法分离流产模型孕鼠脾脏中T细胞,分离后的细胞经台盼蓝染色检测细胞存活率,经流式细胞仪检测分离的纯度。结果流产模型孕鼠脾脏细胞经过免疫磁珠细胞分选法2次分选得到CD4+/CD25+调节性T细胞纯度为(93.51.1)%,CD4+/CD25-T细胞纯度为(96.60.6)%。结论采用免疫磁珠细胞分选法能够快速高效的得到高纯度的CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞。     

CD4＋T淋巴细胞分选方法的效果评价

目的 建立一种准确且对细胞活性影响小的分离人外周血CD4＋T细胞的分选方法.方法 对人外周血依次采用密度梯度离心（density gradient centrifugation,DGC）和免疫磁珠分选（magnetic-activated cell sorting,MACS）进行CD4＋T细胞分选.分选后的细胞用流式细胞仪（flow cytometry,FCM）、倒置显微镜及细胞周期分析进行分选纯度和生长状态检测.结果 Percoll密度梯度离心法收集的单个核细胞中CD4＋T细胞纯度为（38.8±2.7）％,免疫磁珠分选后CD4＋T细胞纯度为（96.2±0.7）％,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）,且分选后细胞形态及功能完好,24 h内活性最高.结论 密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高CD4＋T细胞的分选纯度及保持其活性,可继续用于相关功能研究.     

Percoll分离法结合免疫磁珠法分离提纯人外周血中性粒细胞方法的建立

目的:探讨采用Percoll分离法结合免疫磁珠负性筛选法分离人外周血中性粒细胞的可行性.方法:采用台盼蓝染色观察活力,流式细胞仪检测荧光标记的CD62L表达阳性率.结果:分选后CD62L表达阳性细胞纯度达(95.5±2.2)％,细胞活力为(98.8±2.7)％.结论:Percoll分离法结合免疫磁珠负性筛选法分选系统提纯人外周血中性粒细胞,细胞纯度高并对细胞的生物活性无明显影响,是一种更加有效的人外周血中性粒细胞分离提纯方法.     

免疫磁株法联合荧光原位杂交检测微小残留病

目的 探讨联合免疫磁珠分选和荧光原位杂交(FISH)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)患者微小残留病的敏感性.方法 采集10例CML患者的骨髓,利用免疫磁珠法纯化CD34阳性细胞,对比分析纯化前后FISH检测结果.结果 CD34阳性细胞纯化前占细胞百分数为(0.7 ±0.2)%,纯化后为(93.4±2.5)%(P＜0.05).CD34阳性细胞纯化前FISH检测4例阳性,纯化后9例阳性(P＜0.05).结论 免疫磁珠技术联合FISH技术可提高检测CML患者微小残留病的敏感性.     

氮网球花定碱盐酸盐对活化T细胞增殖的抑制作用

目的 探究氮网球花定碱盐酸盐(NMHC)抑制活化T细胞增殖的作用机制.方法 Ficoll法提取分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法纯化出PBMC中的T细胞,抗人CD3/CD28抗体活化纯化后的静息T细胞.NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L-1与静息T细胞作用,用流式细胞术检测细胞毒性(96 ...     

西罗莫司体外选择性扩增人体天然CD4~+CD25~+调节性T细胞

目的探讨西罗莫司(SIR)对人类天然CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的存活及扩增的作用。方法初次亲属活体供肾移植受者8例,应用MACS免疫磁珠法分选CD4+CD25-和CD4+CD25+T细胞,流式细胞仪进行检验,体外培养两种细胞,并在后者中非别加入SIR与环孢素(CsA)。单向混合淋巴细胞培养验证培养前后调节性T细胞的免疫抑制功能。结果CsA组Treg占CD4+T细胞的(2.92±0.55)%,低于空白对照组(7.67±0.91)%(P<0.01);SIR组Treg占CD4+T细胞的(10.81±1.05)%,高于空白对照组和CsA组(P<0.01)。体外混合淋巴细胞培养结果表明体外SIR扩增前后的Treg加入CD4+CD25-细胞MLR培养体系中,其CPM值分别为8345±2079及9418±2274,两者间差异无显著性,但均低于CD4+CD25-细胞正常MLR培养(P<0.05)。结论SIR体外对人体天然CD4+CD25+T细胞亚群有促增殖效应,而CsA则具有抑制效应,扩增后的CD4+CD25+T细胞与天然CD4+CD25+T细胞有相同的免疫抑制作用。     

CD133阳性肝癌细胞周期分析

目的:免疫磁珠分选法分选肝癌细胞系SMMC7721中CD133+细胞,并检测CD133+和CD133-细胞周期.方法:采用免疫磁珠分选法分选肝癌细胞系SMMC7721中CD133+和CD133-细胞,乙醇固定,PI染色,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期.结果:CD133+细胞在SMMC7721中所占比例为0.9%,FCM检测显示SMMC7721细胞株中CD133.细胞周期处于G0/G1期的比例为85.3%,而CDl33.细胞G0/G1期的比例相对较低,为61.6%,未分选细胞居中,为68.9%.结论:人肝癌细胞系SMMC7721中CD133+亚群,比例约为0.9%,且CD133.细胞多处于静止期,具有一般干细胞的特性.     

小鼠CD8＋记忆性T淋巴细胞的分离、纯化和体外功能检测

目的分离CD8＋记忆性T淋巴细胞,检测其体外部分功能。方法建立小鼠皮肤移植模型,制备受体脾细胞悬液,采用免疫磁珠方法分离Tm细胞、台盼蓝细胞染色检测其细胞活性、流式细胞仪检测分选所得细胞纯度,ELISA方法检测不同抗原刺激Tm细胞后的IL-2和IL-10的浓度。结果小鼠皮肤移植存活率为93.0%（28/30）,皮肤移植皮片平均存活时间（12.18±1.03）d;CD8＋Tm的活细胞百分率为98.5%;流式细胞术检测表型CD8＋CD4＋细胞比例占（97.75±0.9）%,CD8＋CD4-细胞比例占（96.0±1.02）%;在供体脾细胞、刀豆素A、Wistar大鼠脾细胞和无刺激物作用下,2×107mL-1的CD8＋Tm液中细胞因子IL-2和IL-10的浓度分别为：（57.32±6.52）,（38.34±5.21）,（13.51±3.35）,（11.32±2.51）;（9.21±1.02）,（11.52±2.15）,（35.42±4.59）,（39.21±7.3）;差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论通过免疫磁性分离技术和流式细胞技术可分离出高纯度的CD8＋Tm细胞,具有良好的细胞特性,为Tm在移植免疫方面的研究提供了技术方法。     

T细胞人类白细胞抗原-G过表达对T细胞共培养胃癌MGC-803细胞的免疫杀伤作用

目的 研究T细胞人类白细胞抗原-G(HLA-G)过表达后对共培养胃癌MGC-803细胞的免疫杀伤作用.方法 处死各组小鼠后分离淋巴细胞,通过免疫磁珠纯化T淋巴细胞,其纯度用流式细胞仪测定.将转染试剂、NC质粒、HLA-G重组载体分别转染至T淋巴细胞分为对照(Control)组、NC转染组、HLA-G转染组,细胞转染效率...     

白血病多药耐药小鼠模型的构建及鉴定

目的 探讨白血病多药耐药(MDR)小鼠模型的构建方法并对其进行鉴定。方法 常规培养白血病MDR细胞系K562/A02,采用免疫磁珠法分选CD34⁺CD38^-细胞亚群，流式细胞术检测CD34⁺CD38^-细胞比例，CCK-8法检测CD34⁺CD38^-细胞亚群耐药性。采用移植瘤皮下包埋方法构建白血病MDR小鼠模型(A组，10只),同时设注射生理盐水的正常对照组(C组，10只)。记录小鼠肿瘤体积生长曲线及外周血细胞计数，流式细胞术检测小鼠骨髓细胞中CD34⁺CD117⁺细胞比例，CCK-8法检测移植瘤组织细胞耐药性，HE染色观察肝脏、脾脏及骨髓病理学变化。结果K562/A02细胞分选后CD34⁺CD38^-细胞比例高于分选前(P<0.05),而分选前后对多柔比星的细胞半抑制浓度差异无统计学意义(P>0.05)。A组小鼠接种10 d时肿瘤体积开始生长，13 d时出现明显...     

尖锐湿疣患者细胞免疫功能检测的意义

目的探讨尖锐湿疣患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞活性的变化及意义。方法采用直接免疫荧光法,应用流式细胞仪对30例健康人、120例电灼术治疗前的尖锐湿疣患者进行外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的检测,检测后对所有患者均行电灼术消除疣体并于3个月后复查相同检测项目。结果与正常对照组比较,尖锐湿疣患者在电灼术治疗前外周血中CD^3＋（62．81±9．21）％、CD0＋细胞（31．72±8．29）％、CD^4＋／CD^8＋比值（1．22±0．63）及NK细胞活性降低（15．57±1．62％）（P〈0．05）;而CD^8＋细胞增高（30．53±8．34）%（P〈0．05）。应用电灼术消除疣体后3个月,复发46例,未复发74例。与未复发组相比,尖锐湿疣患者复发组CD^4＋细胞（29．86±6．3）％、CD^4＋／CD^8＋比值（0．87±0．67）及NK细胞活性降低（14．01±2．33）％（P〈0．05）,CD^8＋细胞升高（32．85±8．2）％（P〈0．05）。结论T淋巴细胞亚群及NK细胞活性检测结果提示尖锐湿疣患者细胞免疫功能受抑制,了解其抑制情况及程度,将对尖锐湿疣患者免疫功能评估、预防复发及免疫调节剂的使用都具有重要意义。     

自身免疫性肝炎患者外周血T细胞PD-1的表达及与肝功能指标的相关性

目的：研究自身免疫性肝炎（AIH）患者外周血CD4＋、CD8＋T细胞表面程序性死亡受体1（PD-1）的表达,并探讨其与肝功能指标的相关性。方法收集43例AIH患者（包括活动期31例和缓解期12例）,并选择18例健康体检者为对照组。采用流式细胞术检测外周血 CD4＋、CD8＋T细胞表达PD-1的细胞百分比。结果 AIH 组外周血 CD4＋、CD8＋T 细胞表达 PD-1的细胞百分比（分别为7.36±4.45％、6.71±3.84％）显著高于对照组（分别为3.78±2.32％、3.47±2.18％）（P均＜0.05）;AIH活动期组外周血 CD4＋、CD8＋T细胞表达PD-1的细胞百分比（分别为8.73±6.81％、7.44±2.75％）明显高于缓解期组（分别为5.42±2.14％、4.82±2.04％）和对照组（分别为3.78±2.32％、3.47±2.18％）（P均＜0.05）,且缓解期组高于对照组（P＜0.05）。 AIH患者外周血CD4＋、CD8＋T细胞 PD-1表达与 TBIL、ALT、AST及 IgG水平均成正相关关系（r分别为0.781、0.887、0.825、0.893,P均＜0.05）。结论 AIH患者外周血 CD4＋、CD8＋T 细胞表面 PD-1表达上调,且与肝功能指标成正相关,提示PD-1可能在AIH的发生及发展中发挥重要作用。     

T细胞免疫球蛋白域和黏液素样域-1表达的研究

目的探讨人辅助性T细胞(Th细胞)表达T细胞免疫球蛋白域和黏液素样域-1(TIM-1)在变应性鼻炎(AR)中的作用。TIM-1基因被认为是一种特应性疾病易感基因。方法密度梯度离心分离25名健康人和25例AR患者外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选CD4+T细胞(Th细胞),CD4+CD45RA+T细胞(初始T细胞),免疫荧光和流式细胞仪检测TIM-1阳性细胞。对比植物血凝素(PHA,20μg/ml)非特异性刺激上述细胞后表达TIM-1阳性细胞的差异。结果AR患者组CD4+T细胞中TIM-1阳性CD4+T细胞(9.5±1.5)%,高于健康组(3.1±0.3)%(P<0.05);PHA刺激后两组表达TIM-1的CD4+T细胞均高于刺激前(P均<0.05)。结论AR患者中表达TIM-1的辅助性T细胞高于健康者,提示TIM-1的蛋白表达与驱动辅助性T细胞分化有关,从而影响变应性鼻炎免疫机制发生。     

An activated set point of T-cell and monocyte inflammatory networks in recent-onset schizophrenia patients involves both pro- and anti-inflammatory forces

We recently described a pro-inflammatory gene expression signature in the monocytes of 60% of patients with recent-onset schizophrenia (SCZ). Here we investigated whether the T-cell system is also in a pro-inflammatory state. A detailed fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis, e.g. of CD3+CD25+ T cells, IFN-γ+, IL-4+, IL-17A+ (CD4+) lymphocytes and CD4+CD25highFoxP3+ regulatory T cells, was performed on peripheral blood of 26 patients with recent-onset SCZ (in 19 of whom the inflammatory gene expression signature of the monocyte had been determined) and in age-/gender-matched healthy controls. Various relevant T-cell cytokines, e.g. sCD25, IFN-γ, IL-17A and IL-4, were measured in serum by a multiplex assay. We detected: (a) not only higher percentages of pro-inflammatory-prone monocytes, activated CD3+CD25+ T cells and pro-inflammatory Th17 cells in patients, but also higher percentages of anti-inflammatory CD4+CD25highFoxP3+ regulatory T cells and IL-4+ lymphocytes; (b) that this activated T-cell set point was reflected in significantly raised serum levels of sCD25; (c) that the up-regulation of IL-4+-containing lymphocytes was predominantly found in patients characterized by a monocyte pro-inflammatory set point; and (d) that regulatory T-cell and Th17-cell numbers were higher in patients irrespective of the pro-inflammatory state of the monocytes. Our data do not support the concept that the T-cell system is in a simple pro-inflammatory state in recent-onset SCZ, but do show that the monocyte and T-cell networks are activated and involve both pro- and anti-inflammatory forces. This suggests control within an activated inflammatory system.     

类风湿关节炎患者外周血T淋巴细胞亚群与临床相关性分析

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血T细胞亚群的变化情况,了解其变化在RA发病及炎症活动中的意义.方法 采用流式细胞仪荧光抗体标记法分别对197例RA患者的外周血淋巴细胞进行CD3/CD8/CD45/CD4及CD3/CD16+56/CD45/CD19四色荧光抗体(B.D)标记,分析比较RA患者外周血淋巴细胞比例情况,并与RA疾病活动性评分(DAS28-4)、压痛关节数、肿胀关节数、晨僵时间、医生和患者对疼痛程度的视觉模糊评分(VAS)、血红细胞沉降率、C反应蛋白及血清学抗体行相关分析.结果 RA患者外周血淋巴细胞中CD3+CD19-、CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞占总淋巴细胞的百分率分别为(71.06±12.07)%、(45.13±36.14)%和(26.56±9.54)%,RA患者CD3+CD19-T细胞与DAS28-4、压痛关节数、肿胀关节数及患者VAS存在负相关(P<0.05).RA患者外周血CD3+CD4+T(Th)淋巴细胞与抗环瓜氨酸肽抗体呈明显负相关(r=-0.156,P=0.029),与抗角蛋白抗体、人抗核周因子抗体、类风湿因子无明显相关.合并肺间质病变组与未合并肺间质病变组T细胞和Ts细胞差异有统计学意义(Z=-2.159和-2.031,P=0.031和0.042),合并干燥综合征组与未合并干燥综合征组的免疫功能差异无统计学意义(P>0.05).结论 RA思者外周血T淋巴细胞存在比例的失衡,T淋巴细胞数量的异常可能是RA发病及炎症活动的重要影响因素.

Abstract：

Objective To study the change of T cell subsets in peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis (RA) and investigate the significance of T cell 1 subsets change in the incidence and inflammatory activity of RA. Methods Four-color fluorescence flow cytometry was used to detect the CD3/CD8/CD45/CD4 and CD3/CD16 +56/ CD45/CD19 markers in the peripheral blood lymphocytes of 197 RA patients. The proportion of peripheral blood lymphocytes in RA patients was compared and correlation analysis was conducted between T cell subsets and disease activity indices which include disease activity score(DAS28-4) ,tender joint count (TJC) .swollen joint count(SJC) , time of morning stiffness, patient's global assessment of disease activity on a 100 mm VAS by doctor and patients, erythrocyte sedimentation rate, C-reactive protein and serum antibody. Results The proportions of CD3+CD19- , CD3+ CD4+ and CD3+ CD8+ T cells in peripheral lymphocytes were (71.06 ±12.07)% , (45.13 ±36.14)% and (26.56 ±9.54)% respectively in RA group. Correlation analysis indicated significant negative correlations of the proportions of CD3+ CD19- cells with DAS28-4, TJC, SJC and patient's global assessment of disease activity a 100 mm VAS by patients (P <0.05 ). Furthermore, CD3+ CD4+ T cells still showed significant negative correlation with the anti-CCP antibody (r =-0. 156,P =0. 029) , and no correlation with AKA, APF and RF. CD3+ CD19-and CD3+CD8 + T cells showed significant differences between the interstitial lung disease group and control group (Z=-2. 159 and -2.031, P= 0. 031 and 0.042). There was no significant difference between the Sj(o)gren' s Syndrome group and control group(P>0.05). Conclusion The proportion of T lymphocytes in peripheral blood of patients with RA and the abnormality of T lymphocytes may play an important role in the incidence and inflammatory activity of RA.     

慢性乙型肝炎患者血CD4+CD25+调节性T细胞检测的临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg)检测的临床意义。方法 慢性HBV感染者48例（慢性HBV携带者10例为慢性HBV携带者组、慢性乙型肝炎18例慢性乙型肝炎组和乙肝肝硬化为乙肝肝硬化组20例）,以流式细胞仪检测血CD4+CD25+Treg细胞频率,实时荧光定量聚合酶链反应检测血HBV DNA载量。结果 血CD4+CD25+Treg细胞百分率：慢性HBV携带者组为(6.72±2.60)％、慢性乙型肝炎组为(8.56±3.12)％、乙肝肝硬化组为(11.59±4.34)％,组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。血HBV DNA载量：慢性HBV携带者组为1.7 ×106拷贝/ml、慢性乙型肝炎组为4.3 ×105拷贝/ml、乙肝肝硬化组为6.8 ×104拷贝/ml,组间差异有统计学意义(P＜0.01);慢性肝病患者血CD4+CD25+调节性T细胞百分率与HBV DNA滴度正相关。结论 慢性肝病患者血Treg细胞频率与HBVDNA滴度正相关,提示Treg细胞在慢性乙型肝炎致病机制中起重要作用。     

放疗对肿瘤患者免疫功能的影响及临床意义

目的 研究放射治疗对肿瘤患者免疫功能的影响.方法 选取本院120例恶性肿瘤患者为研究对象,采取流式细胞仪检测患者放疗前后免疫功能指标CD3、CD4、CD8、CD56、CD4/CD8,比较放疗对免疫功能的影响,同时根据不同靶体积、放疗剂量及是否出现骨髓抑制进行分组,比较组间免疫功能的差异,以分析不同放疗信息患者之间免疫功能的具体差异.结果 120例患者放疗前后CD3比较无统计学意义(P＞0.05),放疗后CD4、CD56及CD4/CD8分别为(26.88±1.76)％、(10.26±0.97)％、(0.74±0.02),与放疗前[(34.66±2.02)％、(19.25±2.01)％、(1.24±0.05)]比较显著降低(P＜0.05),CD8放疗后为(34.02±1.98)％,与放疗前[(28.55±1.96)％]比较显著升高(P＜ 0.05);＜60Gy放射剂量患者CD56低于≥60 Gy者(P＜0.05),而CD4/CD8高于≥60 Gy者(P＜0.05),靶体积＜397cm3者CD4、CD56、CD4/CD8高于靶体积≥397 cm3者(P＜0.05),CD8低于靶体积≥397 cm3者(P＜ 0.05);120例患者中,共47例在放疗中或放疗后出现骨髓抑制,与无骨髓抑制患者比较,骨髓抑制患者CD4显著较低(P＜0.05),其他免疫指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 放疗可导致恶性肿瘤患者免疫功能降低,放疗剂量及靶体积对免疫功能均有不同程度影响,其中以靶体积影响更为显著,放疗剂量越高、靶体积范围越大,则免疫抑制越明显,而有关骨髓抑制与免疫抑制的相关性仍需要更大样本的研究.