TWeen-80在体内、外对温热抗肿瘤作用的影响

目的研究Tween-80在体内外与41℃温热协同对B16黑色素瘤细胞的抗肿瘤作用及机理;方法将B16黑色素瘤细胞接种至BALB/C小鼠,建立荷瘤鼠模型,观察Tween-80与41℃温热作用后荷瘤鼠死亡率、存活时间、肿瘤生长曲线以及经血行转移的肺部瘤灶数的变化;用免疫组织化学方法,观察B16细胞在Tween-80与4l℃温热作用后即时、4小时和72小时,c-fos、Ubiquitin(Ub)表达的改变,进行定量分析;结果Tween-80合并41℃温热能明显地抑制荷瘤小鼠黑色素瘤的生长,延长荷瘤小鼠平均存活时间,使荷瘤小鼠死亡率显著下降;小鼠肺部转移瘤灶数降低有极显著意义;但Tween-80和温热单独作用时均无此效果.免疫组织化学染色显示Tween-80与41℃温热合并作用后4小时,cfos、Ub表达明显增加,并持续至72小时,其它各组经测定均无显著变化.结论Tween-80能使温热在低于临界温度时即发挥有效的抗肿瘤效应,明显提高温热的抗肿瘤效应,可成为一种较理想的温热抗肿瘤协同药物.其协同机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有一定关联.     

吐温80合并41℃温热对荷瘤小鼠的抑瘤效应

用B16黑色素瘤接种于小鼠后脚掌部皮下或腹腔内．待成实体瘤后经尾静脉注入吐温80．并局部温热41℃。观察实体瘤的生长曲线及荷瘤动物的半数存活时间及半数致死时间．还观察吐温80．41℃及两者合并作用的B16细胞经血行播散后肺内成瘤灶数的变化。实验结果表明：单独吐温或41℃温热对实体瘤的生长，荷瘤小鼠的存活时间及血行播散肺内成瘤灶数均无明显影响．而两者合并作用可明显抑制实体瘤的生长，并明显延长荷瘤小鼠的生存时间及减少血行播散肺内成瘤灶数。实验证明；吐温80合并41℃温热有明显的实体瘤抑瘤效应．而且较安全，为开展新的温热肿瘤治疗提供动物实验依据。     

吐温80及温热对荷瘤鼠肿瘤坏死因子的影响

ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠经腹接种Ｂ１６黑色素瘤细胞建立荷瘤鼠模型，经静脉注射吐温８０及腹部４１℃温热，于处理后１周和２周测定肿瘤坏死因子（ＳｅｒｕｍＴｕｍｏｒＮｅｅｒｏｓｉｓＦａｅｔｏｒ，ＳＴＮＦ）活性及血清唾液酸含量，并观察作用后荷瘤鼠死亡率，结果显示，荷瘤鼠ＳＴＮＦ活性及唾液酸含量持续保持相对高水平（正常ＢＡＬＢ／Ｃ鼠ＳＴＮＦ活性检测不出；唾液酸含量〈５０ｍｇ／ｍｌ）。单独以吐温８０处理和吐温８０合并     

BALB／C小鼠黑色素瘤肿瘤模型的建立及对荷瘤鼠的影响

目的建立小鼠不同部位黑色素瘤模型，为不同研究目的提供合适的动物肿瘤模型。方法接种B16小鼠黑色素瘤细胞于BALB／C小鼠足部、腹腔和尾静脉，建立移植瘤模型和肺部转移瘤模型。观察B16实体瘤的形态学特点，接种细胞数与肿瘤生成的关系，肿瘤生长对小鼠生存时间、血清肿瘤坏死因子（sTNF）和唾液酸（SA）的影响。结果足部接种5X10瘤细胞后10天，肿瘤进入对数生长，成瘤率近100％；腹腔接种瘤细胞数大于5000个／只，成瘤率与接种细胞数成正比；接种3X10细胞／只，10天后在小鼠腹壁和肠系膜可见散在黑色素瘤结节，荷瘤鼠sTNF和SA水平明显高于正常小鼠，且与肿瘤的大小和数量成正比，小鼠平均存活59天；尾静脉接种后3周，肺部可见大小不等转移瘤灶，两肺平均瘤灶数可达192.11士92。结论B16黑色素瘤细胞株在BALB／C小白鼠具有很高的成瘤率和转移特性，且较C57／B16小黑鼠模型具有方便、稳定和观察容易等优点，是一较理想的模型。     

磁流体热疗治疗小鼠恶性黑色素移植瘤的实验研究

目的:探讨磁流体高温热疗对小鼠恶性黑色素瘤的治疗作用。方法:接种B16F10黑色素瘤细胞悬液于C57/BL6小鼠的背部皮下,当肿瘤长至直径为(0.8±0.1)cm时,将20mg磁流体直接注射到肿瘤内部,24h后在交变磁场下加温(50℃,10min),间隔24h,连续治疗3次,观察磁流体热疗后肿瘤体积的变化、瘤体的病理变化、对肿瘤生长及小鼠生存期的影响。结果:加温治疗后,部分(4/7)小鼠的瘤体完全消失,实验组肿瘤没有消失的小鼠平均生存(20.333±7.881)d,瘤体消失的小鼠生存>70d;组织学检查肿瘤细胞呈凋亡、坏死样改变。结论:磁流体热疗能有效的抑制小鼠恶性黑色素瘤的生长,延长荷瘤小鼠生存期,为其成为皮肤黑色素瘤的有效治疗手段提供了实验依据。     

β-胡萝卜素增强小鼠对同基因肿瘤的免疫应答

给接种 B_(16)黑色素瘤的 C57BL/6小鼠行β-胡萝卜素灌胃,每日10mg/kg。20天后,取小鼠脾细胞和B_1~6黑色素瘤细胞混合注入健康 C57BL/6小鼠皮下,观察肿瘤生长情况并检测脾细胞增殖活性和腹腔巨噬细胞的细胞毒活性。实验组和对照组小鼠肿瘤大小无显著性差异,但实验组肺部瘤转移灶数明显低于对照组;实验组脾细胞增殖活性和巨噬细胞细胞毒活性明显高于对照组。提示β-胡萝卜素可增强小鼠的抗肿瘤免疫功能。     

新城疫病毒HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研究

目的 :探讨HN基因在NDV抗肿瘤上发挥的作用。方法 :以pVAX1为表达载体构建了含NDVHN基因的pVHN核酸疫苗 ,以脂质体介导方法在体外转染OS732细胞 72h后 ,用 3,5 二羟基甲苯法测定OS732细胞膜唾液酸含量的变化。 6周龄BALB/c鼠左后肢皮下接种 2× 10 6个S180肿瘤细胞 ,分别于肿瘤接种后的第 7天 (肿瘤直径为 2～ 3mm)和第 17天瘤内注射 10 0 μg核酸重组体 ,同时设pVAX1对照组和单纯荷瘤对照组。荷瘤鼠经治疗后框窦采血 ,分离血清 ,测定血清唾液酸含量。取脾 ,采用FACS方法测定淋巴细胞亚群数量的变化。结果 :pVHN体外转染OS732细胞后 ,能显著降低细胞表面唾液酸含量 (P <0 .0 5 )。pVHN应用于荷瘤鼠显著降低血清中唾液酸含量 (P <0 .0 5 ) ,引起CD8+ T淋巴细胞亚群数量的增加 (P <0 0 5 )。结论 :单独HN基因在体外转染能够降低肿瘤细胞表面唾液酸含量 ,体内表达后引起T淋巴细胞亚群数量改变。     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

CD80 CD86和CD137L基因联合表达对小鼠肝癌种植模型肿瘤免疫原性的影响

目的探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达对肿瘤免疫原性的影响。方法按接种变异瘤株不同,将BALB／C小鼠随机分成A组（H22．Wt细胞）、B组（H22-neo细胞）、C组（H22-CD80／CD86^＋细胞）、D组（H22．CD137L^＋细胞）、E组（H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞）5组,建立H22．BALB／C小鼠荷肝癌模型,A、B组为对照组。观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、荷瘤鼠存活率及肿瘤增殖情况。通过复种试验观察转基因对H22变异株免疫原性和机体免疫保护作用的影响。结果E组首次接种成瘤率仅有50．0％,显著低于其余4组（P〈0．01）。首次接种后,C组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制,有2只荷瘤鼠肿瘤完全消退。E组肿瘤生长所受抑制较C组更为明显,肿瘤峰值体积显著小于C组,且有3只荷瘤鼠肿瘤完全消退。其余3组荷瘤鼠未见肿瘤完全消退。与A、B、D组相比,C、E组荷瘤鼠生存率显著改善（P〈0．01）,而C、E两组荷瘤鼠生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。复种试验表明,C、E组荷瘤鼠再次成瘤率低于对照组,E组与C组差异也有统计学意义（P〈0．01）;第3次接种后,E组成瘤率显著低于C组（P〈0．01）。E组中5只首次接种未成瘤的小鼠,于第21天重复接种H22-Wt细胞,小鼠100％排斥肿瘤,于第56天第3次接种H22／Wt细胞,小鼠仍然100％排斥肿瘤。结论CD80＋CD86和CD137L单独或者联合表达均可显著降低野生型H22细胞株致瘤性,CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著改善了野生型H22细胞的免疫原性。     

氟尿嘧啶壳聚糖缓释剂瘤内注射治疗小鼠肝癌的实验研究

目的探讨生物可降解氟尿嘧啶壳聚糖注射胶用于肿瘤内局部给药的抗肿瘤活性,为临床应用提供实验依据.方法80只小鼠随机分为8组,分别瘤内注射氟尿嘧啶壳聚糖胶、壳聚糖空白胶、氟尿嘧啶注射液及腹腔注射氟尿嘧啶注射液.观察荷瘤鼠肿瘤生长、荷瘤鼠给药前、后血象及给药后肿瘤组织凋亡指数.结果瘤内注射氟尿嘧啶壳聚糖缓释液组小鼠(60mg/kg,qw×2)肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于氟尿嘧啶腹腔注射给药组,并呈现良好的量效关系.结论瘤内应用氟尿嘧啶壳聚糖缓释剂的抗肿瘤效果优于局部和全身单纯氟尿嘧啶给药,有重要研发价值.     

5-FC/CD 自杀基因疗法结合热休克蛋白-多肽复合物瘤苗治疗小鼠黑色素瘤的研究

 目的　研究 5 -氟尿嘧啶 /胞嘧啶脱氨酶 (5 FC/ CD)基因疗法与热休克蛋白 -多肽复合物 (HSP- PC)瘤苗免疫疗法联合抗肿瘤效果。方法　将携带 CD基因的重组腺病毒注射到小鼠黑色素瘤体内 ,腹腔注射 5 - FC,同时皮下接种 HSP70 - PC。结果　经联合治疗后 ,70 %荷瘤小鼠肿瘤体积缩小、消退 ,小鼠存活期延长 ,肿瘤组织明显坏死 ,炎症细胞、CD+4 及 CD+8T细胞浸润明显。结论5 - FC/ CD基因疗法结合 HSP- PC瘤苗免疫疗法抗小鼠黑色素瘤作用显著 ,具有临床应用前景。     

丹参注射液对lewis肺癌小鼠移植瘤生长转移及VEGF表达的影响

目的:观察不同浓度丹参注射液对lewis肺癌小鼠移植瘤生长转移及肿瘤血管内皮细胞生长因子表达的影响.方法:将荷lewis肺癌的C57BL小鼠,分别腹腔注射不同浓度的丹参注射液[(5,10,20,40,80)g/kg]、环磷酰胺(CTX)、生理盐水,检测小鼠的肺部转移灶数和移植瘤的体积、重量及血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:丹参各剂量组对荷瘤小鼠瘤重均有抑制作用,在实验范围内无明显的剂量依赖关系,与生理盐水组比较,丹参各剂量组差异无显著性(P>0.05).CTX组对荷瘤小鼠瘤重抑制较明显,与生理盐水组比较,差异有显著性(P<0.05).丹参各剂量组对荷瘤小鼠肿瘤体积有不同程度的抑制,但无明显的剂量依赖关系,与生理盐水组比较,丹参各组差异无显著性(P>0.05).CTX组对荷瘤小鼠肿瘤体积抑制较明显,与生理盐水组比较,差异有显著性(P<0.01).丹参各剂量组的肺转移灶数目均低于生理盐水组,但差异无显著性(P>0.05),CTX组肺转移灶数目低于生理盐水组,差异有显著性(P<0.01).丹参各剂量组对荷瘤小鼠移植瘤VEGF的表达与生理盐水组比较,差异无显著性(P>0.05),CTX组移植瘤VEGF的表达与生理盐水组比较,差异无显著性(P>0.05).丹参各剂量组对荷瘤小鼠脾、胸腺指数的影响与生理盐水组比较,差异无显著性(P>0.05),CTX组脾、胸腺指数与生理盐水组比较,差异无显著性(P>0.05).结论:不同浓度的丹参注射液对荷瘤小鼠的瘤重、瘤体积及肺部转移灶无明显的抑制或促进作用,对肿瘤转移相关因子VEGF的表达无影响.     

沸腾卡铂溶液瘤内注射治疗实验性肝癌的研究

目的:探索肿瘤局部注射高温化学药物治疗肝癌的新方法。方法:将不同浓度的卡铂溶液加热至60℃、80℃和100℃,检测加热前后其含量(高效液相色谱法)、pH值及紫外吸收光谱的变化。建立BALB/c鼠肝癌皮下移植瘤模型,瘤内注射沸腾卡铂溶液(A组)、室温卡铂溶液(B组)、沸腾蒸馏水(C组)和室温蒸馏水(对照组),观测肿瘤生长曲线、瘤灶消失率和病理组织学改变。结果:卡铂溶液加热至上述温度持续20min后,含量、pH值及紫外吸收光谱基本无变化。注射沸腾液体时瘤体中心温度超过80℃,边缘为53℃。注射后A组肿瘤100%(16/16)消失,无复发,与各组均有显著性差异(P<0.01)。C组肿瘤曾一度全部消失,但75%复发(12/16)。B组无瘤灶消失,但肿瘤倍增时间较对照组明显延长(P<0.01)。组织学检查见A、C组在注射后早期瘤灶大片坏死,边缘残存变性瘤细胞。21天后A组瘤灶细胞全部坏死,C组复发者大量癌细胞增长。B组瘤灶呈灶性坏死,残存瘤细胞较多。结论:卡铂溶液在沸腾状态下仍可保持化学性质稳定,瘤内注射通过高温直接杀癌和热效应增强卡铂杀伤效果的双重作用,能够完全灭活肝癌组织。     

携带TIP30与人IFN-γ 基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及抗腺样囊性癌的初步研究

目的:研究锚定表达GM-CSF的小鼠黑色素瘤作为肿瘤疫苗的有效性.方法:GM-CSF基因嵌合GPI信号肽修饰序列实现在B16小鼠黑色素瘤细胞表面的锚定表达,研究锚定修饰的B16细胞于同源C57BL/6小鼠的成瘤性及诱导抗肿瘤免疫的效果.结果:抑瘤实验结果表明,锚定修饰GM-CSF的肿瘤细胞免疫原性增强,成瘤性明显下降;成瘤率为58.8%,而肿瘤对照组为100%.活瘤苗接种实验结果显示锚定修饰的肿瘤细胞可以预防肿瘤的发生,肿瘤发生率仅为20%,说明抗肿瘤的免疫应答有记忆性,能够有效地防止野生型肿瘤细胞的攻击.结论:锚定修饰GM-CSF的肿瘤细胞可以诱导抗特异性的抗肿瘤反应,这种设计可以应用于肿瘤疫苗的研究中.     

小柴胡汤合并放疗对C_(57)/BL荷瘤小鼠的实验研究

目的 研究荷瘤小鼠放疗合并中药小柴胡汤对瘤体的病理学变化。方法 对C_(57)/BL小鼠63只,随机分为9组,每组7只鼠,设空白对照组(即未移植肿瘤组),实验对照组(即移植瘤未予处理组)、小柴胡汤治疗组、用6mev电子束单纯照射组(又分10,15,20Gy3个剂量组)和小柴胡汤联合照射组(10、15、20Gy3个剂量组)。照射后10d取瘤组织光镜观察病理学的变化。结果 荷瘤鼠经不同方法治疗后肿瘤形态学的变化。小柴胡汤联合20Gy照射组明显优于其他各组的效果。结论 小柴胡汤联合照射增强抗肿瘤效果。     

小紫胡汤合并放疗对C57／BL荷瘤小鼠的实验研究

目的 研究荷瘤小鼠放疗合并中药小柴胡汤对瘤体的病理学变化.方法 对C57/BL小鼠63只,随机分为9组,每组7只鼠,设空白对照组(即未移植肿瘤组),实验对照组(即移植瘤未予处理组)、小柴胡汤治疗组、用6mev电子束单纯照射组（又分10，15，20Gy3个剂量组）和小柴胡汤联合照射组（10、15、20Gy3个剂量组）。照射后10d取瘤组织光镜观察病理学的变化。结果 荷瘤鼠经不同方法治疗后肿瘤形态学的变化。小柴胡汤联合20Gy照射组明显优于其他各组的效果。结论 小柴胡汤联合照射增强抗肿瘤效果。     

紫松果菊对荷瘤小鼠的抑瘤作用及产生肿瘤坏死因子的影响

目的:探索紫松果菊对荷瘤小鼠的抑瘤及产生肿瘤坏死因子( TNF) 的作用。方法:测量小鼠荷S180瘤株前后体重及瘤重,微量NAG释放法测血清TNF。结果:紫松果菊对小鼠S180没有抑瘤效应,但能明显降低荷瘤小鼠产生TNF 的水平。结论:紫松果菊有抑制小鼠产生TNF 的作用,因此可能具有抗炎和抗过敏的作用。     

芦荟提取物C诱生小鼠肿瘤坏死因子的研究

目的 :研究芦荟提取物C(aloeextractC ,AE C)在BALB C鼠体内诱导产生肿瘤坏死因子 (tu mornecrosisfactor ,TNF)。方法 :连续 5d给小鼠注射AE C ,第 6天取血分离血清 ,应用结晶紫染色法测其TNF活性 ,观察经AE C诱生的鼠血清对多种瘤细胞的杀伤作用 ,杀伤作用的持续时间和对温度的敏感性及血清不同稀释度的杀伤效果。结果 :AE C能诱导小鼠产生TNF α ,与对照组比较作用明显 (P <0 0 1) ;并且对多种靶细胞有显著的杀伤作用 ;TNF活性 2 4h达高峰 ,第 4天下降明显 ,5d接近正常水平 ;血清标本稀释至 2 0 0倍时 ,仍具有较强的杀伤活性 ;诱生后的TNF有一定的温度敏感性。结论 :芦荟提取物C有诱生BALB C鼠产生肿瘤坏死因子的作用     

基因重组人HSP73抗体的制备及对肿瘤细胞在温热作用后HSP70表达的检测

目的用基因工程方法表达、提纯人热休克类似蛋白73(HSP73),制备抗体,检测吐温80协同41℃温热对肿瘤细胞HSP70表达的影响.方法用人HSP73基因构建原核细胞表达载体pETHSP73,在大肠杆菌BL21中用半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经电泳法和ATP亲和层析法提取HSP73并作检测.用提纯蛋白免疫新西兰兔,制备抗HSP70多克隆抗体,测定其活性,用此抗体作免疫组化法观察41℃温热和吐温80协同时BGC-823胃癌细胞及B16黑色素瘤细胞的热休克蛋白70(HSP70)表达情况.结果人基因重组构建的pETHSP73能很好地在大肠杆菌中表达出分子量为73kD的蛋白.两种提纯方法均能有效提取表达蛋白,用3a3单抗作Westrn blot检测证明该蛋白具有人HSP70的抗原活性,所得蛋白氨基酸测定和N端测序的结果与有关报道一致.以此蛋白制成的抗体活性可达18000以上.并可检测出吐温80合并温热有明显抑制肿瘤细胞SHP70表达的作用.结论2.1kb的基因片段构建的高表达载体能很好表达人HSP73活性蛋白.该蛋白免疫新西兰兔所得多克隆抗体具有很高抗人和鼠HSP70活性.用该抗体免疫组化法检测表明吐温80协同41℃温热可明显抑制肿瘤细胞HSP70的表达和耐热性的产生.     

苓甲抗癌复方提取物在荷瘤小鼠中抗肿瘤免疫应答机制

目的:初步探究苓甲抗癌复方提取物(LAM)在荷瘤小鼠中抗肿瘤免疫应答机制.方法:LAM治疗荷瘤小鼠,检测小鼠生长、瘤块体积与重量的变化;流式细胞术和ELISA分析小鼠脾脏中Treg细胞、NK细胞和各种细胞因子;Western blot分析LAM对Treg细胞相关蛋白作用.结果:LAM抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,引发肿瘤坏死,抑制肿瘤促增殖蛋白Ki67的表达,降低血液中CA153的含量;降低脾脏中Treg细胞比例和血清中TGF-β与IL-10的含量,提高IL-2、IFN-γ、穿孔素、颗粒酶B的含量和NK细胞的比例.结论:LAM抑制肿瘤的生长,并抑制Treg细胞的数量与功能,提高机体的免疫功能.