龙岩市水产品中副溶血性弧菌污染状况及分子特征研究

目的了解龙岩市水产品中副溶血性弧菌污染状况及菌株毒力基因携带和分子分型特征。方法 2013年6月-10月分别从福建省龙岩市某2家超市采集鱼、贝壳和海藻等标本,参照GB/T 4789.7—2008分离、鉴定副溶血性弧菌;对副溶血弧菌分离株进行tlh、tdh和trh基因检测;并用限制性内切酶SfiⅠ酶切后进行PFGE分子分型,用Bio Numerics4.0软件进行聚类分析。结果从287份水产品中检出副溶血性弧菌97株,检出率为33.8%,其中贝壳类的带菌率最高,为42.4%;97株副溶血性弧菌tlh基因均为阳性,tdh和trh基因均为阴性。经SfiⅠ酶切后电泳,97株副溶血弧菌分为88个不同的PFGE型。结论龙岩市水产品副溶血性弧菌污染较严重,卫生部门应采取有效措施防止由水产品引起的副溶血性弧菌食源性疾病;PFGE结果显示水产品中分离的副溶血性弧菌分型呈多态性,与水产品种类、采样时间、采样地点没有关联。     

金华市淡水产品中副溶血性弧菌污染状况及PFGE分型研究

目的 了解金华市淡水产品中副溶血性弧菌的污染状况,运用脉冲场凝胶电泳技术对分离到的副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采集金华市具有代表性的农贸市场和超市出售的淡水产品,进行副溶血性弧菌的分离与鉴定;应用荧光定量PCR的方法检测毒力基因tdh和trh并进行PFGE聚类分析。结果 150份淡水产品中共检出受到副溶血性弧菌污染的样品64份,阳性率为42.7%;64株副溶血性弧菌分成9个血清群,流行优势血清群为O1、O11;分离到的菌株均没有检测到毒力基因tdh和trh;PFGE共分为54个带型,呈多态性,菌株相似度在52.3%～100%。结论 金华市淡水产品中副溶血性弧菌污染较为严重,应加强淡水产品的监测;PFGE分子分型结果表明,不存在当地淡水产品溶血性弧菌流行趋势。     

对一起副溶血性弧菌食物中毒的调查研究

目的:分析副溶血性弧菌菌株之间的相关性,提供食物中毒鉴定的实验室依据。方法:7株副溶血性弧菌基因组DNA经Not Ⅰ酶切,标准菌株用Xba Ⅰ酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱。结果:7株副溶血性弧菌被分为一种脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)图谱,通过分子量分析显示,在100%的相似性水平,7株细菌谱型属于同一个群,且均为食物中毒患者分离株。结论:研究发现脉冲场凝胶电泳分型技术重复性高,在食物中毒分子流行病学研究中有较大的应用前景,为卫生行政部门提供可靠的实验室依据。     

宁波地区海产品中副溶血性弧菌分布与研究

目的了解宁波地区海产品中副溶血性弧菌的分布,菌株血清型、PFGE型别及产毒基因等特征,为防控副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法用PCR筛检与GB法相结合方法分离细菌;用标准血清和PFGE对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;用K-B法进行耐药性测定。结果从3 525份海产品中检出1460株副溶血性弧菌,检出率为41.42%;象山、宁海检出率分别为73.72%和70.69%,与其他县(市)区差异有统计学意义(χ2=42.694,P<0.01);560株副溶血性弧菌分出10个血清群,0∶6群和0∶5群为流行优势血清群;菌株对氨苄西林耐药率达92.64%,但对常用抗生素均敏感;450株副溶血性弧菌检出5株带tdh的,阳性率为1.11%,未检出trh毒力基因。依据PGFE带型差异将330株副溶血性弧菌分为29个型。结论在海产品中副溶血性弧菌带菌率较高,是引发疾病的高危食品;菌株的流行优势群型较分散;可用常用抗生素治疗;菌株带tdh和trh毒力基因较低,根据该特征可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类。     

甬沪两地海产品中副溶血性弧菌携带与分型

目的:了解宁波和上海两地市售海产品中副溶血性弧菌污染情况以及菌株的流行优势型和毒力等.方法:用PCR快速筛检与GB法相结合方法分离海产品中副溶血性弧菌;用血清学和PFGE方法对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;结果:从3 740份海产品中分离出1 507株疑似副溶血性弧菌,检出率为40.29％,其中宁波地区检出率为41.42％,上海地区检出率为21.86％;菌株的生化反应典型,560株副溶血性弧菌分出10个血清群,有30株VP未被分型,分型率为95.06％,377株副溶血性弧菌分出29个PFGE型;497株副溶血性弧菌检出7株带tdh毒力基因的副溶血性弧菌,均未检出trh毒力基因,检出率为1.41％.结论:宁波、上海海产品中副溶血性弧菌携带率较高,是诱发副溶血性弧菌疾病的原因食品.菌株的血清型和PFGE型较分散,其流行优势群与致病性副溶血性弧菌的相关性不明显;菌株带tdh和trh毒力基因较低,与病人分离株有明显差别,根据该特征,可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类,便于分析和检测.     

352株副溶血性弧菌菌群菌型分布结果分析

[目的]了解深圳市南山区引起食物中毒的副溶血性弧菌的菌群菌型分布及近年来动态变化.[方法]细菌分离方法按国家标准GB/T4789-2003常规进行,菌群菌型血清凝集鉴定,采用日本生物研究所的74种副溶血性弧菌标准诊断血清.[结果]在352株副溶血性弧菌中,有299株副溶血性弧菌可分型,可分型率为84.9%(299/352);不定型有53株.占 15.1%(53/352).在各群中O3群别为优势株,占总菌株的60.5%(213/352);O1菌群43株,占12.2%(43/352).血清分型以K6型别为主,占 57.1%(201/352);K25型35株,占 9.9%(35/352).[结论]2004~2007年间深圳市南山区引起食物中毒的副溶血性弧菌以O3群K6型别为主.     

副溶血性弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的:探讨深圳市龙岗区由副溶血性弧菌O3:K6型引起食物中毒的分子流行病学研究和同源性分析.方法:收集不同地区、不同时期食物中毒事件的副溶血性弧菌菌株,并从7宗相同血清型O3:K6的溶血性弧菌菌株中,每宗取1株副溶血性弧菌进行生化鉴定、血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果:7株副溶血性弧菌,它们的血清型均为O3:K6,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析结果显示,有2株副溶血性弧菌图谱一致,具有高度的同源性;5株副溶血性弧菌为紧密相关.结论:通过PFGE分子分型的方法了解到该血清型O3:K6的副溶血性弧菌菌株之间具有紧密相关和高度的同源性,表明副溶血性弧菌血清型O3:K6是该地区引起腹泻的主要菌型.     

2016—2019年北京市海淀区副溶血性弧菌血清型、毒力基因及分子分型研究

目的　综合分析北京市海淀区副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分型结果,并找出其相关性,从而掌握海淀区副溶血性弧菌的流行特征。方法　对2016—2019年北京市海淀区检出的63株副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因检测和PFGE分型试验。结果　海淀区副溶血性弧菌最优势流行株的血清型为O3:K6,毒力基因组合为tlh+tdh+,占比69.8%（44/63）;63株副溶血性弧菌经PFGE聚类分析得到37种带型,各带型之间相似度为84.8%～100.0%,其中,61株副溶血性弧菌聚集形成5个簇（带型相似度≥90%）;4年间共出现了8次一定时间内（发病日期间隔≤90 d）分离得到的菌株血清型、毒力基因和PFGE带型均一致的情况。结论　海淀区副溶血性弧菌的污染来源相对固定且单一。副溶血性弧菌血清分型和PFGE之间无特殊相关性;毒力基因相同的菌株,PFGE带型相似度更高。     

65株副溶血性弧菌分子分型及耐药特征分析

目的了解副溶血性弧菌分子分型及耐药特征,为防控副溶血性弧菌引起的肠道腹泻病及临床治疗用药提供基础数据。方法收集2017年不同时间、不同区域分离的65株副溶血性弧菌,进行毒力基因检测、药敏试验,PFGE分型。结果65株副溶血性弧菌,tdh携带率为100%,trh基因全部菌株阴性。65株副溶血性弧菌对氨苄西林敏感率为43.1%,对磺胺异恶唑敏感率为36.9%,对阿奇霉素和头孢西丁敏感率分别为95.4%和98.5%,对其他13种抗菌药敏感率达到100.0%。65株副溶血性弧菌的PFGE图谱分为51个PFGE型别,不同PFGE型别的相似系数介于7.08%~94.87%,同一带型2株菌以上的带型有10个。结论副溶血性弧菌分离株主要携带tdh基因,副溶血性弧菌对氨苄西林、磺胺异恶唑、阿奇霉素头孢西丁这4类抗生素有耐药性。副溶血性弧菌菌株的PFGE型别呈多态性,同时存在2株以上的聚集簇,对于患者相关PFGE图谱成簇的菌株应加强流行病学调查和溯源工作。     

实时荧光定量PCR联合检测诺如病毒和副溶血性弧菌的方法建立与应用

目的建立实时荧光定量PCR法联合检测诺如病毒和副溶血性弧菌的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒和副溶血性弧菌tlh基因设计特异性引物。通过调整引物浓度和优化反应条件,建立多重荧光定量PCR检测体系,对方法的灵敏度和特异性进行验证。结果多重荧光定量PCR检测方法对诺如病毒、副溶血性弧菌、轮状病毒、沙门菌、志贺菌、大肠杆菌O157等样本进行检测,未发生交叉反应。结论本研究建立的实时荧光定量PCR法同时检测诺如病毒和副溶血性弧菌灵敏度高、特异性好,能用于食品携带病原微生物和感染性腹泻暴发中诺如病毒和副溶血性弧菌的检测。     

PFGE法分析多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒

目的:对从食物中毒样品中分离到的7株副溶血性弧菌作常规鉴定及脉冲场凝胶电泳(PFGE)同源性分析,以明确致病因子。方法:按GB/T4789.7-2008进行副溶血性弧菌分离、生化鉴定、神奈川试验、血清分型;Pulse-Net PFGE分子分型标准实验室操作方法作同源性分析。结果:7株副溶血性弧菌分成三个血清型,即O3∶K6型5株,O4∶K8型和O1∶K56型各1株,分别属于三种不同的PFGE条带型,其中6株菌神奈川试验阳性。结论:这次食物中毒可能为以O3∶K6型为主的不同克隆群副溶血性弧菌混合感染所致。     

我国食物中毒副溶血性弧菌流行株血清型及分子分型现况

副溶血性弧菌是引起细菌性食物中毒的主要致病菌,严重影响着公众健康,该菌包含多种血清型和不同的分子型别,不同的型别其引起食物中毒的概率和流行的频率有很大的差异.在我国公开发表的文献中,有许多副溶血性弧菌引起食物中毒的检测报道和研究,但对于其血清型和毒力基因的研究局限于某个省份或地区,缺乏全国性的总结.本文将全面检索国内的文献数据库,从我国副溶血性弧菌食物中毒地区分布、分离株的血清型、分子型别、毒力基因及大流行菌群方面对我国近年来的研究现状作一综述.     

环境样品中病原性副溶血性弧菌高效检出法

〔目的〕为了提高环境样品中病原性副溶血性弧菌的检出率。〔方法〕采用PCR法、免疫磁珠法和神奈川现象培养基三者结合使用。〔结果〕分别从一份海水和一份海泥中检出了产生TDH ,神奈川现象阳性的副溶血性弧菌 ,血清型为O3 :K6。该血清型与同期发生的副溶血性弧菌食物中毒患者检出率最高的副溶血性弧菌血清型相同。经SfiⅠ ,NotⅠ限制性内切酶处理后 ,脉冲场凝胶电泳比较 ,一份海水与一名患者分离菌株、一份海泥与两名患者分离菌株的条带相同 ,表明为同一克隆派生而来。同时也说明食物中毒的发生与污染了TDH阳性O3:K6副溶血性弧菌的海水有关。〔结论〕该方法解决了用一般细菌培养分离方法很难从引起食物中毒的环境样品中检出病原性副溶血性弧菌的困扰 ,也为研究TDH阳性副溶血性弧菌在环境中的分布及由其引起的食物中毒的预防提供了重要依据。     

腹泻标本分离的副溶血性弧菌的PFGE分型与tdh毒力基因的检测

目的了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的检出情况,探讨流行优势型,分析副溶血性弧菌的毒力基因携带,从而了解疾病发生的诱因,为控制副溶血性弧菌引起的疾病提供依据。方法选择2017年5-10月分离培养腹泻患者标本中的病原菌;质谱仪鉴定出副溶血性弧菌菌株;利用脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链式反应(PCR)检测菌株毒力基因。结果 108份腹泻患者的粪便标本中培养分离副溶血性弧菌42株,检出率为38.89%(42/108)。PFGE分为12个型别,优势型为A1型,占59.52%(25/42)。tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌38株,阳性率为90.48%(38/42)。结论腹泻患者中副溶血性弧菌检出率较高,PFGE分型方法准确性高、特异性高、重复性好、结果易判读,致病性的菌株带型集中。患者中分离得到的副溶血性弧菌大多为带毒株,具有致病能力。     

副溶血性弧菌引起食物中毒的微生物学诊断的研究

目的：为快速诊断由副溶血性弧菌引起的食物中毒和血清群，采取芯片扫描和血清学分群进行研究。方法：取食物中毒患者肛拭、污染环境涂抹样、食品等进行副溶血性弧菌分离鉴定。分离到菌株进行血清学分型和芯片扫描诊断。结果：330份样品，分离到62株（18．79％）副溶血性弧菌，其中：肛拭样品250份，阳性59份（23．60％），涂抹样品52份，阳性3份（5．77％）。血清分型表明，3株副溶血性弧菌血清型为01型；3株副溶血性弧菌血清分型为03型。菌株进行芯片扫描能显示副溶血性弧菌阳性反应。结论：实验研究表明，16起由副溶血性弧菌食物中毒事件，主要血清型为01型和03型。病原体悬液用芯片扫描能特异性地获得确切的结果。     

副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的用脉冲场凝胶电泳方法绘制副溶血性弧菌食物中毒分离株的DNA指纹图谱,分析各菌株间的同源性关系。方法 55株食物中毒来源的副溶血性弧菌基因组DNA经限制性内切酶NotI酶切,用脉冲场凝胶电泳方法获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果实验得到55株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱,可大致分为30种PFGE图谱。聚类分析显示,在大约90%的相似性水平上,有38株菌的PFGE图谱属于同一个克隆群,为2007-2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型。结论闵行地区存在遗传谱系密切相关的副溶血性弧菌流行克隆。脉冲场凝胶电泳方法是分析副溶血性弧菌同源性的有效方法 ,有助于追溯传染源。     

副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型研究在河北省建立副溶血性弧菌DNA指纹图谱基因库，以便将来对不同来源的副溶血性弧菌DNA图谱进行即时比较，确定同源性，进而确定食源性疾病的传染源、传播途径、流行范围等，为从根本上防止食源性疾病的发生提供技术基础。方法对从各类水产品中分离出的副溶血性弧菌NotⅠ进行脉冲场凝胶电泳。结果65株副溶血性弧菌经PFGE方法分型共跑出64个DNA指纹图谱，按照各图谱在聚类图所成的自然类别及亲缘关系的远近，将64个图谱分为11个大的聚类群。并且各群间相似性系数〈56．6％。提示各菌株间亲缘关系较远，同源污染的可能性较小。结论PFGE分型结果与菌株的水产品种类、采样时间、地点都没有任何相关，说明当时当地以及在水产品种类上都不存在流行趋势。     

食物中毒菌——副溶血性弧菌(嗜盐菌)系统研究〔Ⅴ〕副溶血性弧菌几种分解酶与毒力关系

前言某些细菌在它生长发育过程中,能够分泌出许多酶。这些酶类中,某些是与致病性有关,如葡萄球菌的凝固酶、磷酸酶与该菌株的毒力有密切关系。又如Esselmann等曾测定了各种革兰氏阴性细菌是有卵磷脂酶,并讨论了该酶与毒力的关系。宫本报告了副溶血性弧菌与角质素分解的关系。这些结果都提供了细菌分泌的酶与毒力的关系,因此可以考虑在副溶血性弧菌中探讨二者之间的关系。关于副溶血性弧菌的毒力,徐辉等于1963年已经报告,本文主要就副溶血性弧菌的一般生化性状、磷酸酶、角质素、     

2013-2014年大连市食源性疾病主动监测中分离的副溶血性弧菌病原特征

目的了解2013-2014年本地区副溶血性弧菌的病原学特征,为临床用药提供依据;同时与各地优势脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别进行比较,揭示其流行与发展趋势的规律。方法依据GB/T 4789.7-2008进行副溶血性弧菌生化鉴定,同时用荧光定量PCR方法进行复核;采用微量稀释法进行药敏实验;菌株基因组DNA经限制性内切酶Sfi I酶切,用PFGE方法获得电泳图谱,利用Bio Numerics软件对图谱进行同源性分析。结果 88株副溶血性弧菌荧光定量PCR均检出副溶血性弧菌核酸;所有菌株对8种抗生素均敏感;88株菌的DNA指纹图谱可大致分为38种PFGE图谱,经Bio Numerics软件分析分为A~H 8个群,其中F群为优势群。结论荧光定量PCR方法与常规培养法结合是缩短副溶血性弧菌检出时间、提高检出率的有效方法;从大连市患者粪便中检出的副溶血性弧菌对临床常用的8种抗生素尚无耐药情况且亲缘关系较近。     

通州区水产品污染副溶血性弧菌和其引起腹泻情况的调查研究

目的:了解北京市通州区水产品污染副溶血性弧菌情况和由其引起食源性腹泻的危险性。方法:监测本区内超市、菜市场及餐饮业水产品中副溶血性弧菌的污染情况;对引起食物中毒的可疑样品和医院肠道门诊腹泻病人的粪便进行副溶血性弧菌分离鉴定;对部分所分离菌株进行毒力检测(神奈川试验和脲酶试验)、血清分型和rDNA(核糖核酸)指纹图谱分析,并进行同源性比较。结果:(1)超市、菜市场水产品副溶血性弧菌阳性检出率35.0%,餐饮部门阳性率8.6%,总阳性率22.7%;(2)从2家餐饮单位的可疑食物中毒样品(水产品和凉拌菜)中分离出4株副溶血性弧菌;(3)检测303份腹泻病人的粪便,分离出腹泻病原菌76株,排在前三位的是副溶血性弧菌33株,占腹泻病原菌的43.42%,以6～10月份最多;各种沙门菌16株,占21.05%;第三是志贺氏菌13株,占17.11%。(4)对其中27株副溶血性弧菌检测其毒力基因tdh(神奈川试验)全部阳性t,rh基因(脲酶试验)有3株阳性(从食品中分离),其余全部阴性;27株副溶血性弧菌分别属于17个不同的血清型r,DNA指纹图谱分为22个核糖型。提示除由一起食物中毒病人粪便中分离的6株菌外,其余各菌株间同源污...