成虫三氯醋酸抽提抗原金标免疫渗滤法诊断日本血吸虫病及考核疗效的研究

目的探讨成虫三氯醋酸抽提抗原(AWA-TCA)金标免疫渗滤法在日本血吸虫病诊断和疗效考核中的潜在应用价值.方法用三氯醋酸提取AWA-TCA,以此抗原为探针,建立金标免疫渗滤法(AWA-TCA-DIGFA),检测血吸虫病人血清中特异性抗体,并与可溶性虫卵抗原金标免疫渗滤法(SEA-DIGFA)作平行对照.结果AWA-TCA-DIGFA和SEA-DIGFA平行检测146人份慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为96.6%和97.3%,两者差异无显著性(P＞0.05);检测100人份健康人血清,仅1份两法检测均呈弱阳性,特异性为99.0%;43人份治后6个月病人血清中,AWA-TCA-DIGFA检出33份阳性,抗体阴转率为23.3%(10/43),SEA-DIGFA检出35份阳性,阴转率为18.6%,两者差异无显著性(P＞0.05);两法检测36份治后12个月病人血清,抗体阴转率分别为80.6%(29/36)和58.3%(21/36),两者差异有显著性(P＜0.05).检测其他蠕虫病人血清60人份,除与2例并殖吸虫病人血清有交叉反应外,其余均为阴性.结论AWA-TCA-DIGFA用于诊断血吸虫病,其敏感性和特异性与SEA-DIGFA相近,且有更好的疗效考核价值.     

以快速斑点免疫金银染色方法诊断华支睾吸虫病和进行流行病学调查

用快速斑点免疫金银染色法Dot—IGSS检测了103例粪检虫卵阳性的华支睾吸虫病人血清中特异性抗体,全部(100％)皆显示阳性反应。30例正常人和116例其它寄生虫病人,全部皆为阴性结果,无任何假阳性和交叉反应出现。对68例经吡喹酮特效治疗1—2个月后的病人,检测抗体,其阴转率为22.1％(15例)。用本法进行流行病学调查,除对虫卵阳性者进行抗体检测外,还对41例皮试阳性、虫卵阴性组     

Dot-ELISA检测血吸虫病人循环抗原及抗体的研究

用Dot-ELISA平行检测日本血虫病人循环抗原及抗体。循环抗原测定结果表明,30例急性血吸虫病人、51例慢性血吸虫病人及30例经吡喹酮治疗后5～6年的病人血清的阳性率分别为86.7%、78.4%及23.3%。30例华枝睾吸虫病人血清未出现交叉反应。40例健康人血清中有1例出现弱阳性反应。抗体测定结果表明,上述急性、慢性及治疗后病人血清的阳性率分别为100.0%、96.1%及30.0%;平均效价为1:367.6、1:181.7及1:9.8。有2例华枝睾吸虫病人出现交叉反应,其效价均为1:80,健康人均为阴性。循环抗原与抗体测定结果大多数相一致。     

单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫病人循环抗原

制备抗日本血吸虫排泄分泌抗原单克隆抗体(McAb),应用于斑点酶联免疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原.血吸虫病人血清的阳性率为80.9％(152/188),其中EPG为1～24、25～99和≥100的病人检出率分别为76.8％、86、6％和100％。血吸虫病人经吡喹酮治疗1年以上粪检阴性者50例,均为阴性.并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人、丝虫病人和健康人血清均为阴性.McAb-Dot-ELISA操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。     

循环抗体与循环抗原组合检测诊断血吸虫病的应用观察

目的探讨血吸虫病循环抗原与循环抗体组合检测的诊断效能以及在血吸虫病疫区中的应用价值。方法采用夹心ELISA法和间接ELISA法对不同类型人群的血清标本进行循环抗原和抗SEAIgG抗体检测,比较抗原抗体组合检测的敏感性、特异性,以及在重疫区的检测效果。结果循环抗原与循环抗体平行检测敏感性和特异性分别为97.9%、92.2%;序列检测敏感性和特异性分别为76.0%、99.2%。对血吸虫病疫区粪检阳性人群平行检测阳性率为94.6%(35/37),序列检测阳性率为67.6%(25/37);疫区粪检阴性人群平行检测阳性率为69.8%(97/139),序列检测阳性率为39.6%(55/139)。结论组合检测方案中平行检测在重疫区对有效检出病人具有更高的应用价值。     

单克隆抗体检测囊虫病人循环抗原及其在疗效考核中的应用

用单克隆抗体致敏绵羊红细胞作反向间接血凝试验，检测７７例囊虫病人血清循环抗原，阳性率为６４．９％；３０例正常人血清的假阳性率为０；２２例华支睾吸虫病人、２４例包虫病人和１７例弓形虫病人的交叉反应率分别为４．６％、４．２％和１１．８％。结果表明，该法较为敏感、特异，且稳定可靠、简单易行，尤适于在基层医疗单位推广应用。检测经治疗１～１０个疗程囊虫病人血清中循环抗原和抗体，发现随着疗程的增加循环抗原的消失明显快于抗体，且大部分患者的循环抗原和其临床症状、体征同时消失。表明循环抗原的检测对囊虫病的诊断和疗效考核有一定的实用价值。     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫rSjCTPI表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗rSjCTPI单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统,以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的SEA-ELISA比较。结果获得了一株抗rSjCTPI的单克隆抗体,其抗体同型为IgG1。P-M-ELISA检测急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为100%、91.7%、0、0和0。而SEA-ELTSA为100%、98.3%、6.69%、10%和20%。P-M-ELISA法对30例同批血吸虫病人治疗前的阳性率和治愈后4个月的阴转率分别为100%和30%;而SEA-ELTSA分别为100%和10%。结果表明,应用抗rSjCTPI单抗检测血吸虫病人循环抗原的P-M-ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并有一定的疗效考核价值。     

人唾液、尿液中弓形虫抗原抗体的检测

目的探讨用唾液、尿液替代血清进行弓形虫感染免疫学诊断的可行性。方法用ELISA法对血清进行弓形虫循环抗原(CAg)、IgM、IgG抗体的检测,取上述各项免疫学指标阳性的血清样本80例,并随机抽取3项指标均为阴性的血清样本102例,分别与其唾液和尿液标本在同一反应板上同步进行测定,比较其阳性和阴性符合率。结果(1)554份血清样本中,CAg、IgM和IgG3项的阳性率分别为4.51%(25/554)、3.61%(20/554)、6.32%(35/554)。(2)唾液中检出IgM抗体阳性16例,与血清的阳性符合率为80%(16/20),检测CAg、IgG抗体均为阴性。(3)检测尿液中的抗原抗体均无一例阳性。结论采用唾液标本检测弓形虫IgM抗体,在弓形虫感染的诊断及流行病学调查中均具有一定的应用前景。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

南方地区低CD4~+T淋巴细胞艾滋病病人筛查马尔尼菲蓝状菌抗原和隐球菌荚膜抗原的临床意义

目的探讨我国南方地区低CD4~+T淋巴细胞(简称CD4细胞)艾滋病病人接受高效抗反转录病毒治疗(HAART)前筛查马尔尼菲蓝状菌抗原和隐球菌荚膜抗原(CrAg)的临床意义。方法以广州市第八人民医院236例艾滋病病毒1型阳性且CD4细胞100个/μL的初诊病人为研究对象,检测其外周血马尔尼菲蓝状菌特异性甘露糖蛋白(Mp1p)和半乳甘露聚糖(GM)及CrAg,分析这些检测抗原的临床意义。结果 236例病人,男194例,女42例,平均年龄(41.21±13.13)岁,CD4细胞计数均100个/μL,中位数24个/μL。检测Mp1p阳性者46例(19.49%),GM阳性38例(16.10%),CrAg阳性8例(3.39%)。CD4细胞计数50个/μL组与≥50个/μL组比较,有临床症状组与无症状组比较,其外周血Mp1p和GM抗原阳性率更高(P均0.05),但CrAg抗原检出率无明显差异(P均≥0.05)。共44例Mp1p阳性、38例GM阳性及8例CrAg阳性病人接受病原检测,分别97.73%(43/44)、78.95%(30/38)发现马尔尼菲蓝状菌,62.50%(5/8)发现新型隐球菌。共131例Mp1p阴性、137例GM阴性及167例CrAg阴性病人接受病原检测,分别4.58%(6/131)与13.87%(19/137)发现马尔尼菲蓝状菌,无一例发现新型隐球菌。Mp1p阳性组和CrAg阳性组1年时的死亡率明显高于阴性组(P均0.05),但外周血GM阳性组和阴性组12周及1年时的死亡率无明显差异(P均≥0.05)。结论我国南方低CD4细胞艾滋病病人接受HAART前筛查马尔尼菲蓝状菌抗原和CrAg,有助于早期诊断和治疗,降低死亡率。     

抗旋毛虫肌肉期幼虫排泄分泌物中46-58kDa蛋白IgM和IgG抗体的研究

目的寻求简便、快速、可靠的方法,用于旋毛虫病的诊断及疗效考核。方法建立检测抗旋毛虫肌肉期幼虫排泄分泌物(TsL1-ES)中46-58kDa蛋白抗体的斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),并对患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究。结果旋毛虫病患者治疗前血清中特异IgM和IgG抗体的检出率分别为94.83%(55/58)和91.38%(53/58);正常人血清(100份)、囊虫病(25份)、血吸虫病(20份)、肺吸虫病(20份)及蛔虫病(22份)病人血清均未检出该两类特异性抗体。52例两类抗体均阳性的旋毛虫病患者经有效药物治疗后3个月、6个月、1年、1.5年连续采血,经DIGFA检测连续观察的结果表明,IgM抗体出现较早,阴转较为明显和迅速,治疗后3月的阴转率达46.15%(24/52),1年的阴转率可达88.46%(46/52);而IgG抗体则出现较晚,阴转缓慢,治疗后1.5年的阴转率仅为23.08%(12/52)。结论DIGFA为检测抗TsL1-ES中46-58kDa蛋白抗体的有效方法,检测IgM抗体可用于诊断及疗效考核,而IgG抗体的检测不宜用来判断疗效。     

抗Jo-1抗体在多发性肌炎/皮肌炎中的临床研究

目的摇对69例多发性肌炎/皮肌炎(PM/MD)病人抗Jo-1抗体进行检测,了解抗Jo-1抗体阳性与PM/DM临床症状的相关性及对PM/DM的诊断价值。方法应用免疫印迹(IBT)法检测PM/DM病人中的抗Jo-1抗体,对抗Jo-1抗体阳性血清进行免疫双扩散(ID)检测,两者抗Jo-1抗体均阳性者为抗Jo-1抗体阳性组,其他为抗Jo-1抗体阴性组,前瞻性比较PM/DM抗Jo-1抗体阳性组和抗Jo-1抗体阴性组的临床特征。结果本组中抗Jo-1抗体阳性占32%,抗Jo-1抗体阳性患者出现肺间质病变(ILD)、多关节炎/多关节痛、肺部感染和雷诺现象分别为18例(82%)、18例(82%)、17例(77%)、7例(32%);与抗Jo-1抗体阴性组比较,差异有显著性(P<0.05)。另外,在阳性组出现吞咽困难1例(5%),而阴性组为15例(32%),两组相比差异有显著性(P<0郾05)。结论抗Jo-1抗体阳性组PM/DM患者的肺间质病变及多关节炎症状突出,合并肺部感染的概率高,而肌痛或肌无力症状较轻,出现吞咽困难症状概率较低;阴性组出现吞咽困难症状概率较阳性组高。     

48例原发性肝癌患者血清丙型辟炎抗体检测

为探讨PHC与丙型肝炎的关系．采用ELlSA方法检测4B例0PHC及106例非肝病患的扰HCV抗体及HBV-M．结果显示PHC组中抗HCV抗体阳性2l例(43.8％)．对照组14例(13．2％．P＜0.01)HBV-M阳性45例(93．8％)．对照组50例(47．2％．P＜0．01)。HBV-M阳性PHC病人中．HBsA8、HBeAb及HBeAb三项阳性21例(46．7%)．HAg、HBeAg及HBcAb三项阳性7例(15．5％)，HBsAg及HBcAb二项阳性5例(11.1％)．HBV-M阴性PHC患中，抗HCV抗体阳性2／3例(66．7%)．HBV-M阳性PHc病人中．抗HCV抗体阳性19／45例(42．2%．P＜0．05)；HBsAg阳性PHC病人中，扰HCV抗体阳性14／38例(36．8%),HBsAg阴性病人中，扰HCV机体阳性7／10例(70．0％．P＜0．05)。在抗HCV抗体阳性PHC患中，3个月前有明确输血史8例(38．1%)．以上结果提示在我国，PHC与丙型肝炎有关，在HBV-M阳性患中，HBaAg、HBeAb及HBcAb兰项阳性患发生PHC可能性最大。     

日本血吸虫4类循环抗原和抗体的检测对感染兔疗效考核价值研究

目的观察感染家兔在治疗前后血清中循环抗原和循环抗体的动态变化情况。方法采用日本血吸虫4株单克隆抗体3D8,5C7,SM21－3及SM38m（靶抗原分别为肠相关多糖蛋白抗原、肠相关蛋白抗原、虫卵抗原和成虫表膜抗原）作为捕获抗体,用斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）检测4类循环抗原,与常规ELISA检测IgG抗体比较。结果感染日本血吸虫家兔在经硝唑咪治疗后1～2个月,循环抗原基本转阴,而IgG抗体一直维持较高水平。结论循环抗原具有较好的疗效考核价值,IgG抗体不具有疗效考核作用。     

华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价

目的应用华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白(rCs2)建立2种华支睾吸虫病免疫学检测方法,并进行初步评价。方法以可溶性rCs2作为诊断抗原,建立间接ELISA检测方法,并研制胶体金免疫层析检测(GICA)动力流体型试条,检测血清中的特异性抗体。采用ELISA法和GICA试条共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性患者、15例日本血吸虫病患者、15例卫氏并殖吸虫病患者和13例猪囊尾蚴病患者的血清,以及33份健康人血清。为进一步评价诊断价值,8只新西兰兔各感染600个华支睾吸虫囊蚴,随机均分为感染组和治疗组,感染第56天,治疗组各兔给予吡喹酮治疗[150 mg/(kg.d)×2 d],用ELISA法和GICA法检测两组兔0~44周抗rCs2特异性抗体的消长。结果 ELISA法的敏感性为71.4%(25/35),特异性为93.4%(71/76),总符合率为86.5%(96/111),与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病和猪囊尾蚴病患者血清的交叉反应阳性率分别为1/15、1/15和1/13。GICA试条检测法的敏感性为85.7%(30/35),特异性为92.1%(70/76),总符合率为90.1%(100/111)。经EL...     

RhE抗原检测及同型输注在临床输血中的意义

目的:检测并分析RhE抗原及RhE抗原阴性患者输注抗原阳性血液产生抗-E抗体情况,为临床合理用血提供依据。方法:对2016-01-01-2016-09-30我院2 395例输血患者血样进行ABO血型及RhD,RhC,RhE抗原检测,并做不规则抗体筛查检测及鉴定;对RhE阴性输血患者输注的血制品进行RhE抗原检测;对RhE阴性输血后不规则抗体筛查试验阳性的患者血样进行抗体鉴定。结果:2 395例输血患者中,RhE抗原阴性率45.1%(1 081/2 395),抗筛阳性率1.3%(31/2 395),其中抗-E抗体占58.1%(18/31)。RhE阴性患者输注RhE阳性血后产生抗-E抗体占1.4%(5/352)。结论:对输血患者进行ABO和RhD匹配的同时,进行RhE抗原匹配十分必要。     

阿德福韦治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者的初步观察

目的观察阿德福韦治疗HBeAg阴性、HBV DNA阳性慢性乙型肝炎的疗效。方法选择HBeAg阴性、HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者46例和HBeAg阳性、HBV DNA阳性慢性乙型肝炎47例。两组病例均口服阿德福韦10毫克,每日1次,治疗2年(实际平均完成11.8个月)。结果HBeAg阴性组和HBeAg阳性组病例ALT复常率在治疗结束时为82.6%(38/46)、85.1%(40/47),停药3个月时为32.6%(15/46)、31.9%(15/47)。HBV DNA阴转率在治疗结束时为30.4%(15/46)、29.8%(14/47),停药3个月时为13%(6/46)、12.8%(6/47),两组之间无显著性差异(P>0.05)。结论阿德福韦治疗HBeAg阴性和HBeAg阳性慢性乙型肝炎的近期疗效一致,但是在停药后两组大部分病例都复发。     

FA—ELISA检测血吸虫病人短程抗体试剂盒近期疗效考核价值的研究

目的进一步评价日本血吸虫虫卵组分抗原(107～121 kDa)酶联免疫吸附试验(FAELISA)试剂盒的近期(治愈后2、4个月)疗效考核价值.方法非感染季节现场筛选粪阳病人61例,分别在吡喹酮治疗前及治疗后2、4个月做加藤氏法粪检和FA-ELISA、SEA-ELISA,配对比较不同感染度病人阴转率.结果治疗前FA ELISA的检出率为93.44%,SEA-ELISA为98.36%;治愈后2个月和4个月病人FA-ELISA的阴转率分别为40.35%和54.38%,SEA-ELISA则为1.67%和3.33%,两种方法间差异非常显著.FA-ELISA对重感染病人(EPG＞100)的阴转率分别为22.2%(2/9)和33.3%(3/9),显著低于轻感染者.结论FA ELISA短程抗体诊断试剂盒对治愈后2个月、4个月者同样有较高疗效考核价值,而病人的感染度似可影响阴转率.     

结核分枝杆菌特异性38kD多肽抗原提纯及其血清学诊断价值的研究

目的提纯结核分枝杆菌特异38kD多肽抗原,建立基于38kD多肽抗原(P38)的斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测结核病人血清标本,评价38kD多肽用于结核病血清学诊断抗原的实际价值。方法采用超声破碎、SDS-PAGE、切胶浸泡回收法提取结核分枝杆菌H37Rv株的38kD多肽抗原。建立以38kD多肽为包被抗原的DIGFA(P38-DIGFA),并检测147例临床确诊的活动性肺结核病人血清标本。同时建立以结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)为包被抗原的DIGFA(LAM-DIGFA)作为对照。结果结核分枝杆菌H37Rv株38kD多肽抗原提取物经SDS-PAGE后仅显示为单一的条带,并可与临床确诊的肺结核病人阳性血清标本呈阳性免疫印迹反应。P38-DIGFA和LAM-DIGFA检测肺结核病人血清标本的总阳性率分别为84.4%(124/147)和76.2%(112/147),其中59份痰涂片及培养均阳性的肺结核病人血清标本P38-DIGFA和LAM-DIGFA阳性率分别为88.1%(52/59)和84.7%(50/59),88份痰涂片及培养均阴性的肺结核病人血清标本P38-DIGFA和LAM-DIGFA阳性率分别为81.8%(72/88)和70.5%(62/88),60例气管炎病人血清标本阳性率分别为13.3%(8/60)和6.7%(4/60),120例健康人血清标本阳性率分别为5.8%(7/120)和5.0%(6/120)。各P38-DIGFA和LAM-DIGFA检测阳性率之间均无显著性差异。结论结核分枝杆菌38kD多肽作为抗原用于结核病血清学检测时,其敏感性和特异性与LAM相似,可应用于研发结核病血清学诊断试剂盒。     

两种抗原检测弓形虫病IgM的效果

目的观察弓形虫P30重组抗原及可溶性抗原检测弓形虫病IgM的效果。方法建立斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。采用2种抗原分别包被在两条硝酸纤维素膜（NC）上,与待检血清中的相应IgM抗体结合,通过金标记兔抗人IgM直接显色,以检测弓形虫病IgM。2种抗原的DIGFA分别检测弓形虫IgM抗体阳性、类风湿、支原体肺炎、血吸虫病人和正常人血清。结果两种抗原建立的DIGFA检测试剂共检测5种血清样本166份,其中弓形虫感染IgM抗体阳性病人血清38份,弓形虫P30DIGFA敏感性为92.1%（35/38）,可溶性抗原DIGFA敏感性为81.6%（31/38）,差异无统计学意义（P〉0.05）。正常人群对照血清63份,检测全部阴性,特异性为100%。检测类风湿病人血清30份、血吸虫病人血清25份及支原体肺炎病人血清10份,仅类风湿病人血清出现阳性交叉反应,其中弓形虫P30DIGFA阳性2例,可溶性抗原DIGFA阳性3例。结论弓形虫P30重组抗原检测弓形虫病人血清IgM的DIGFA试剂可用于临床早期或急性期弓形虫病的诊断。