大鼠平滑肌细胞和平滑肌祖细胞的体外培养及二者间表型转化的初步研究

目的探讨体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）和平滑肌祖细胞（SPC）的方法,并初步比较不同培养条件下大鼠SPC对VSMC表型转化的影响。方法原代培养细胞,通过蛋白印迹实验fWesternBlot）检测平滑肌α-肌动蛋白（α-SMA）鉴定VSMC,SPC培养后经流式细胞术鉴定分选贴壁细胞CD14和CD105双阳性表达细胞继续培养为SPC,通过SPC与VSMC共培养以及利用Transwell装置条件培养、空白对照3种条件干预后,应用WesternBlot法分别测定三组骨桥蛋白水平变化．以检测并初步比较不同条件下SPC对VSMC表型转化的影响。结果两种细胞分别原代培养后,WesternBlot鉴定VSMC,结果显示α-SMA表达呈阳性;鉴定SPC免疫细胞化学染色α-SMA表达呈阳性,且流式细胞仪分析显示CD14和CD105呈双阳性表达。与空白对照相比,两种细胞共同培养和条件培养时VSMC表达骨桥蛋白水平明显升高,共同培养较条件培养骨桥蛋白水平升高效果更为明显。结论SPC对VSMC的表型由收缩型向合成型转变具有一定作用,SPC通过直接作用与旁分泌作用不同程度地增强了VSMC的表型转化;对比发现。两细胞直接接触培养时VSMC表型转化的影响更为明显（P〈0．05）。     

口山酮抑制肝星状细胞活化作用及其机制研究

目的研究去甲基雏菊叶龙胆酮（DMB）对肝星状细胞（HSC）活化的影响及其机制。方法培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,分别加入1、3或10μM DMB孵育12-48 h。细胞组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;酶联免疫吸附试验测定I型胶原的合成;逆转录PCR检测转化生长因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）mRNA水平。结果体外培养的HSC-T6表现为激活状态,表达α-SMA和合成I型胶原。处理DMB能显著降低体外培养的HSC-T6表达α-SMA细胞数目和I型胶原的合成,且呈浓度依赖性。而且,DMB能浓度依赖性降低HSC TGF-β1和CTGF mRNA水平。结论DMB能抑制HSC的活化,其作用与抑制TGF-β1-CTGF促纤维化通路有关。     

二氧化硅影响人肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的实验研究

目的 探讨二氧化硅（SiO2）体内体外影响人肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况.方法 体内实验以SiO2灌注的大鼠矽肺模型为研究对象,实验组32例（7、14、21和28d各8例）,对照组32例.免疫组化法检测肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达;体内实验以人肺成纤维细胞（HLF-02）为研究对象,分别用SiO2刺激的体外小鼠腹腔巨噬细胞系（RAW264.7细胞）上清液、SiO2未刺激的RAW264.7细胞上清液、SiO2悬液以及转化生长因子β1（TGF-β1）作用24 h,免疫印迹法检测α-SMA的表达变化情况.结果 （1）染尘28 d大鼠肺组织有表达α-SMA阳性的肌成纤维细胞出现.（2）RAW264.7细胞上清液（SiO2）可诱导HLF-02细胞α-SMA的表达,而TGF-β1可明显上调α-SMA表达.（3）单纯SiO2悬液对HLF-02细胞α-SMA的表达没有影响.结论 肌成纤维细胞与矽肺纤维化进展有关;体外条件下肌成纤维细胞的出现不是SiO2直接作用的结果,而与SiO2活化巨噬细胞分泌的介质TGF-β1有关.     

福辛普利对大鼠肾小球系膜细胞增殖及转化生长因子β1表达的影响

目的观察新型血管紧张素转化酶抑制剂（angiotension—converting enzyme inhibitor，ACED——福辛普利（fosinopril，FOS）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell，GMC）增殖及转化生长因子（transforming growth factor，TGF）β1表达的影响。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞，鉴定后3～10代用于实验。实验分为5组：对照组（Ctrl组）、脂多糖刺激组（LPS组）、福辛普利高、中、低剂量组（分别为FOS1组、FOS2组和FOS3组），分别于24h和48h两个时间点甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法测定各组细胞增殖情况；于6h，12h，24h后酶联免疫测定（enzyme—linked immunosorbent—assay，ELISA）法测定细胞培养上清液中转化生长因子β1蛋白的表达量，荧光半定量RT～PCR法检测转化生长因子β1mRNA表达的变化。结果脂多糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖，福辛普利可抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖；正常培养的大鼠肾小球系膜细胞均有一定量的转化生长因子β1蛋白分泌和mRNA表达；LPS组在各时间点转化生长因子β1蛋白分泌和mRNA表达均高于Ctrl组（P〈0．01），而FOS1组、FOS2组、FOS3组转化生长因子β1蛋白分泌和mRNA表达均低于LPS组（P〈0．01）。结论脂多糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖。福辛普利可抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖。福辛普利能够从蛋白水平和mRNA水平抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1的表达，为福辛普利的肾脏保护作用提供理论依据。     

PPAR-γ激动剂Troglitazone对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达的影响

目的　研究PPAR -γ激动剂Troglitazone对高浓度葡萄糖作用的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的影响。方法　用高浓度葡萄糖和不同浓度Troglitazone作用大鼠肾小球系膜细胞 ,ELISA法检测上清液中mPGEs浓度。结果　 5 %葡萄糖可使体外培养的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平明显增高 ( P <0 0 5 ) ;10～ 2 0nmol/L的Troglitazone可明显抑制 5 %葡萄糖诱导的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高 (P <0 0 5 )。结论　高浓度葡萄糖可诱导体外培养的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平明显增高 ,PPAR -γ激动剂Troglitazone可明显抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高     

基因转染Smad7对高糖介导大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨Smad7对高糖介导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法体外培养转染Smad7的大鼠近端肾小管上皮细胞株（NRK52E细胞），分为强力霉素（Dox）诱导组和未加强力霉素的对照组，前者予Dox诱导24h后，给予高糖刺激，后者不加Dox诱导。采用免疫细胞化学方法检测P-Smad2／3核转位情况；Western blot方法检测Smad7、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏素（E-cadherin）蛋白的表达水平。结果成功构建了Dox调控的可上调表达Smad7的NRK52E细胞。NRK52E细胞在基础状态下可表达低水平P-Smad2／3（16．1％），与对照组比较，上调表达Smad7显著抑制高糖介导的NRK52E细胞P-Smad2／3核转位（30．3％掷58．5％，P〈0．01）。抑制α-SMA蛋白的表达，逆转高糖介导的NRK52E细胞E-Cadherin蛋白的下调表达。结论基因转染上调表达Smad7可通过抑制Smad2／3的活化和核转位而阻抑高糖介导的肾小管上皮细胞转分化。     

TNFα增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达受PKCα调控

目的 通过研究蛋白激酶Cα（PKCα）参与调控肿瘤坏死因子α（TNFα）增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3RI）表达的信号机制,揭示TNFα引起肝肾综合征肾小球滤过率（GFR）下降的分子机制.方法 选择大鼠系膜细胞株（GMCs）进行体外培养.按TNFα处理GMCs的不同时间点,分为对照组（D）、TNFα-2 h组、TNFα-4 h组、NFα-8 h组、TNFα-24 h组,另设2组分别为Sanfingol-8 h组（S）、TNFα＋ Sanfingol共培养8h组（TS）,共6组.应用免疫细胞化学染色、Western blot、Real time-PCR检测方法,观察TNFα孵育的GMCs中IP3RI表达的变化.结果 免疫细胞化学染色发现：IP3RI主要分布于GMCs的胞浆内,对照组阳性信号较弱,TNFα处理各组棕褐色阳性信号增强,以TNFα-8 h组最明显.Western blot分析发现：TNFα-4 h组、TNFα-8 h组、TNFα-24 h组与对照组差异有统计学意义（4 h：1.82±0.63,8 h：2.95±0.66,24 h：2.48±0.72,D：1±0.02,F=9.24,P＜0.05）.其中TNFα-8 h组、TNFα-24 h组IP3RI表达最高（P＜0.05）.S组、TS组与对照组差异无统计学意义（S：1.39 ±0.65,TS：1.35±0.37,P＞0.05）.Real time-PCR发现：TNFα处理各时间点组与对照组相比IP3 RI表达均明显增加,差异有统计学意义（2 h：3.35±1.97;4 h：3.16±1.35,8 h：3.70±1.76;24 h：4.49±1.70,D：1±0.01,F=6.167,P＜0.05）. TNFα各处理组组间差异无统计学意义（P＞0.05）.S组、TS组与对照组比较差异无统计学意义（S：1.53±0.79,TS：1.32±0.38,P＞0.05）.结论 IP3 RI主要分布于GMCs的胞浆内,TNFα可增加肾小球系膜细胞IP3 RI蛋白、mRNA的表达,并可被PKCα抑制剂Sanfingol所阻断,这可能是肝肾综合征时TNFα引起GFR下降的重要信号机制.     

整合素αvβ3在IgA肾病肾组织中的表达和意义

目的探讨整合素αvβ3在IgA肾病（IgAN）患者肾组织中表达及其,临床意义。方法免疫组化法检测53例IgAN患者肾组织整合素αvβ3、纤维连接蛋白（Fn）和结缔组织生长因子（CTGF）的表达,并与病理和临床指标进行相关性分析。结果αvβ3表达：随病变程度加重,肾小球毛细血管袢表达逐渐增强,并在系膜细胞,上皮细胞,部分肾小球新月体表达;Ⅰ-Ⅳ级病变肾小球αvβ3表达的阳性率分别为（16．18±0．98,19．58±0．99,28．35±1．99,17．72±2．17）％,Ⅲ级达峰值,Ⅳ级反而降低（P〈0．05）;表达强度与血IgA水平呈正相关（r=0．52～0．79,P〈0．05）。Ⅰ-Ⅲ级病变时,肾小球内αvβ3与尿蛋白、肾小球硬化率、肾间质CTGF及小球内Fn表达呈正相关（P均〈0．05）。纤维蛋白相关抗原（FRA）阳性、IgA或Fn毛细血管袢和系膜区沉积组肾小球内αvβ3表达高于、eGFR低于单纯系膜区沉积组（P均〈0．05）。结论整合素αvβ3与IgAN细胞外基质的异常沉积和肾小球硬化有关,其高表达可能示预后不良。     

结缔组织生长因子在胃硬癌形成机制中的作用

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）表达与胃癌大体分型的关系，并探讨其在胃硬癌间质纤维化形成中的作用。方法采用免疫组化染色SP方法，检测28例胃硬癌（胃硬癌组）、30例胃非硬癌（非硬癌组）及30例癌旁良性胃组织（对照组）中CTGF及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，应用苦味酸-天狼猩红染色方法检测Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维在以上三组中的表达。结果胃硬癌组中CTGF、Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的表达水平均明显高于非硬癌组及对照组（P〈0．01）；与对照组相比，非硬癌组中CTGF、Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的表达显著增强（P〈0．01）；CTGF的表达与胃壁组织的纤维化程度呈正相关（P〈0．01）；α-SMA在胃硬癌组与非硬癌组中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）；α-SMA表达与CTGF、Ⅰ型及Ⅲ型胶原纤维的含量无明显相关性（P〉0．05）。结论CTGF在以胶原纤维性间质增生为特点的胃硬癌形成过程中起促进作用，成肌纤维细胞不是胃硬癌纤维化间质的主要来源细胞。     

糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子的表达

目的 探讨糖尿病肾病时肾小管上皮细胞转化的现象以及肝细胞生长因子（HGF）在其中可能发挥的作用。方法 腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型，采用免疫组化检测角蛋白18（CKl8）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、HGF的表达；流式细胞术检测α-SMA、HGF的表达；原位杂交检测HGFmRNA的表达；Western印迹检测肝细胞生长因子受体（c-met）的表达。结果 糖尿病组较对照组CK18的表达降低，α-SMA的表达上升，HGF、c-met、HGFmRNA在8周时表达上升，之后其表达逐渐减少。结论糖 尿病时，肾小管上皮细胞亦可发生表型转化，转化为肌成纤维细胞。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。