人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响

背景：前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。 目的：观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。 方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组：①空白组：不加其他处理因素继续培养36 h。②β-淀粉样蛋白组：培养24 h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12 h。③预处理组：先加入人参皂苷Rb1预处理24 h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12 h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。 结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396] 和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。     

β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景：通过调节神经干细胞分化过程中的tau蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果。 目的：观察β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响。 方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396] 、Tau[pS262] 及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况。 结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396] 和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25~35可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1可以逆转β-淀粉样蛋白25~35的作用。提示β-淀粉样蛋白25~35和人参皂苷Rb1通过调节GSK-3β的活性对tau蛋白的磷酸化水平产生调控作用。     

人参皂苷Rg1通过调节GSK-3β/PP2A活性减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨人参皂苷Rg1是否通过调节GSK-3β/PP2A活性而减轻凝聚态Aβ25～35诱导的胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化.方法 选用孕期(18±2)d的SD大鼠,分离纯化胎鼠皮层神经元.实验分为阴性对照组、模型组、LiCl处理组、Rg1预处理组.阴性对照组不加任何处理因素;模型组用20μmol/L Aβ25～35作用于皮层神经元12h;LiCl处理组用10mmol/L LiCl和20μmol/L Aβ25～35共同作用于皮层神经元12h;Rg1预处理组分别用5、10、20、40、80μmol/L Rg1预处理皮层神经元24h,再加入20μmol/L Aβ25～35作用12h.通过免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测皮层神经元Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK-3β)表达水平,通过非放射性免疫法检测皮层神经元蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性.结果 模型组Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均增加,但PP2A的活性不受影响;LiCl处理组和Rg1预处理组,Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均降低(P＜0.05).在Rg1预处理组中,以20μmol/L Rg1预处理后Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的表达水平下降最为明显,而且PP2A的活性明显增强(P＜0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过上调PP2A活性和下调GSK-3β活性从而减轻凝聚态Aβ25～35所诱导的皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化.     

Tau蛋白过度磷酸化诱导Aβ生成抑制THP-1细胞ABCA1的表达

目的：探讨过度磷酸化Tau蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用及其可能机制。方法：体外培养人单核细胞系THP-1,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞,建立人盐洗血小板与THP-1（人单核细胞）源性巨噬细胞共孵育生成泡沫细胞的体外模型。免疫细胞化学法检测过磷酸化Tau蛋白和β淀粉样蛋白的生成。用岗田酸（OA）诱导其Tau蛋白过磷酸化,Western blot观察Tau蛋白T231和S396两个位点磷酸化程度及β淀粉样蛋白水平,RT-PCR法检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）mRNA表达水平。结果：OA引起Tau蛋白剂量依赖的过度磷酸化,并增加β淀粉样蛋白的生成,同时下调ABCA1 mRNA水平的表达（P〈0．05）。结论：Tau蛋白过度磷酸化诱导β淀粉样蛋白的生成并下调ABCA1 mRNA水平的表达,可能是动脉粥样硬化斑块形成和发展的机制之一。     

人参皂苷Rb1减轻Aβ25～35所致新生神经细胞损伤

目的 研究β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导新生大鼠神经细胞中蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡及人参皂苷Rb1对此作用的干预效应。方法 从新生大鼠海马分离神经干细胞（NSCs）体外培养,诱导分化7 d后收获新生神经细胞,分3组：Aβ25~35组的培养基中加入20 μmol/L Aβ25~35处理12 h;Rb1+Aβ25~35组先在含10 μmol/L Rb1的培养基中预处理24 h后,再用20 μmol/L Aβ25~35处理12 h;对照组不加任何其他处理因素。RT-PCR和免疫细胞化学法检测各组新生神经元的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和磷酸化Tau蛋白的表达。结果 Aβ25~35处理组与对照组相比,糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和细胞周期蛋白依赖性激酶5（CDK-5）的mRNA表达增加,蛋白磷酸酶2A（PP2A）的mRNA表达减少;荧光显微镜下活化型GSK-3β(pY279, 216)表达增加,PP2A表达降低;微管相关蛋白Tau（pS396）和Tau（pS262）的阳性细胞率明显增高。Rb1预处理可以显著降低Aβ25~35引起的上述蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和Tau改变。结论 Aβ25~35诱导体外分化的新生大鼠神经细胞的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡和Tau蛋白过度磷酸化,人参皂苷Rb1可减轻Aβ25~35引起的上述作用。     

阿尔茨海默病与β-淀粉样蛋白相关性研究现状

阿尔茨海默病(AD)是一种中枢神经系统变性病,常伴随有认知障碍、记忆力减退、人格改变等。AD的病因和发病机制尚不明确,由β淀粉样蛋白沉积(amyloid-β,Aβ)所积聚的细胞外老年斑(SP),tau蛋白过度磷酸化产生的神经细胞内神经原纤维缠结(NFT)和神经元丢失伴胶质细胞增生是AD发生的病理学基础。本文综述归纳了AD与Aβ相关性的最新进展情况。     

大鼠海马内注射β淀粉样蛋白促进神经细胞增殖

目的观察脑内β淀粉样蛋白(β-amyloid,AB)沉积对神经细胞增殖的影响。方法将Aβ_(1-42)定位注射至大鼠双侧海马,对照组注射反序列Aβ_(42-1)或PBS。腹腔注射Brdu标记增殖细胞。用免疫组化和免疫荧光检测溴脱氧尿苷(Bromodeoxyuridine,Brdu)标记细胞和doublecortin(DCX)阳性细胞。结果海马内注射Aβ_(1- 42)后引起海马齿状回颗粒下层(subgranular zone,SGZ)和侧脑室下层(subventricular zone,SVZ)Brdu标记细胞及DCX阳性细胞显著增加(P<0.01)。双免疫荧光分析表明许多Brdu标记细胞表达DCX。结论Aβ沉积可以促进脑内的神经细胞增殖,提示这种现象可能为阿尔茨海默病的一种代偿性应答。促进神经细胞增殖的措施对于治疗阿尔茨海默病具有重要的价值。     

β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能及tau蛋白异常磷酸化的影响

为了探讨β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能和tau蛋白异常磷酸化的影响,本文在海马注射Aβ25-35建立阿尔茨海黙病(AD)大鼠模型的基础上,通过行为学检测、HE染色、免疫组化和免疫蛋白印迹技术对动物的学习能力、组织的病理改变和tau(pS202)、tau(pT231)和tau-5的表达情况进行了分析。在行为学检测中,Aβ注射组大鼠在穿梭箱实验中的主动回避次数和被动回避次数减少,失败次数增多,而在Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期和游泳距离延长。HE染色显示Aβ注射组大鼠海马CA1、CA3、齿状回的神经细胞数目减少;而免疫组化和免疫印迹结果显示注射组tau(pS202)阳性细胞明显增加,tau(pS202)、tau(pT231)和tau-5蛋白表达增加。以上结果提示海马内注射Aβ25-35可引起大鼠学习记忆功能下降,可能与神经细胞减少,tau蛋白异常磷酸化增多有关。     

β-淀粉样蛋白对体外培养的神经干细胞作用研究

目的：观察β-淀粉样蛋白(Aβ)对体外培养的大鼠神经干细胞的作用。方法：取E13 d的Wistar胚胎大鼠脑组织，体外进行培养、传代、鉴定后，加入β-淀粉样蛋白，利用台盼兰拒染法细胞计数及MTT法观察细胞增殖及细胞活力，利用流式细胞术观察凋亡程度，同时观察加入β-淀粉样蛋白后，分化状态神经干细胞（加入10％胎牛血清）的变化。结果：当Aβ浓度大于25μmol/L时，能明显抑制神经干细胞的增殖及活力，同时引起神经干细胞的明显凋亡。而在12.5 μmol/L时就能抑制分化状态神经干细胞突起的延伸。结论：Aβ抑制神经干细胞的增殖分化并可致神经干细胞凋亡，可能是Alzheimer’s病的发病原因之一。     

β淀粉样蛋白1-42对大鼠海马神经元树突棘的影响

目的:研究β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对于原代培养的大鼠海马神经元树突棘形态和数量的影响.方法:将原代培养的新生大鼠海马神经元随机分为对照组(control)和Aβ1.42处理组(Aβ1-42),用浓度为500 nmol/L的Aβ1-42处理细胞,应用免疫荧光染色检测树突棘上大脑发育调节蛋白(drebrin)的...     

大鼠海马内注射β淀粉样蛋白1-40抑制铜蓝蛋白表达

目的:通过检测阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马铜蓝蛋白(glycan-phosphatidyli-nositol ceruloplasmin,GPI-Cp)的变化,探讨AD时脑铁增高的机制。方法:取雄性(290±10)g SD大鼠,经海马内注射(amyloid beta-peptide 1-40,Aβ1-40)建立AD模型,于1、2、3和4周取各组大鼠脑组织,分离海马,用RT-PCR检测GPI-Cp mRNA表达情况,免疫组织化学染色检测GPI-Cp蛋白表达情况。结果:海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞、室管膜细胞均有GPI-Cp的mRNA和蛋白表达;而海马的锥体细胞仅轻度表达,颗粒细胞不表达。注射Aβ1-40后,模型组海马GPI-Cp mRNA和蛋白表达均随着时间延长逐渐降低,具有统计学意义(P<0.01)。结论:海马内注射Aβ1-40可引起大鼠海马GPI-Cp表达减少,GPI-Cp表达减少可能是AD时脑铁增高的原因。     

β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病神经细胞凋亡的关系

阿尔茨海默病性痴呆(dementia Alzheimer disease，AD)亦称老年性痴呆(senile dementia)由Alosis Alzheimer。于1907年首先描述，是一种伴有常染色体缺陷，以记忆减退，认知障碍，人格改变为特征的脑退行性疾病。由于缺乏有效的治疗措施，在发达国家和我国，AD已成为继心脏病、癌症和中风之后     

阿尔茨海默病发病机制中β淀粉样蛋白对星形胶质细胞和神经细胞α7尼古丁受体的影响

目的 探讨阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）患者脑组织和高表达β淀粉样蛋白前质蛋白（APP）转基因小鼠脑组织中α7尼古丁受体亚型的改变,以及β淀粉样蛋白（Aβ）对体外培养的星形胶质细胞和神经细胞中α7尼古丁受体亚型蛋白表达的影响。方法 选取尸解后AD患者脑组织和高表达APP转基因小鼠脑组织,用免疫组织化学方法（ABC法）检测人脑组织中胶质细胞和神经细胞α7尼古丁受体的表达,用Westernblot方法测定小鼠脑组织中α7尼古丁受体蛋白含量;体外培养星形胶质细胞和神经细胞,用不同浓度的A1325-35进行处理,然后用Westernblot方法测定细胞中α7尼古丁受体蛋白水平。结果 AD患者脑组织中星形胶质细胞数量增多,并密集于老年斑周围;AD患者脑组织表达d7尼古丁受体的星形胶质细胞增多,而表达α7尼古丁受体的神经元减少;高表达APP转基因小鼠脑组织中胡尼古丁受体蛋白水平升高49％;用不同浓度的Aβ25-35处理培养细胞后,星形胶质细胞中胡尼古丁受体蛋白水平增高（达38％）,而神经细胞中胡尼古丁受体蛋白水平减少可达32％。结论 神经元α7尼古丁受体减少可能与AD患者智力障碍的发生有关,而过多Aβ刺激星形胶质细胞后所引起的胶质细胞胡尼古丁受体表达增多则可能是一种神经保护性代偿方式。     

远志皂苷减轻Aβ1-40诱导的AD大鼠脑神经元tau蛋白Ser396位点的过度磷酸化

目的:探讨远志皂苷对β-淀粉样肽_1-40(Aβ_1-40)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠脑神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:大鼠右侧海马CA1区注射Aβ_1-40建立AD模型,并用远志皂苷(18.5 mg/kg、37.0 mg/kg和74.0 mg/kg)对大鼠进行灌胃治疗;免疫组织化学染色法观察大脑神经元中总tau蛋白、p-tau(Ser³⁹⁶)、蛋白激酶A(PKA)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)蛋白的表达;蛋白免疫印迹技术检测大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化以及PKA、PP2A蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,Aβ_1-40组大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化水平和PKA蛋白的表达水平显著升高,而PP2A蛋白的表达水平明显降低。与Aβ_1-40组相比,远志皂苷各治疗组大鼠大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化水平和PKA蛋白表达水平下降明显,而PP2A蛋白表达水平显著升高。结论:远志皂苷可能是通过下调PKA蛋白表达量,上调PP2A蛋白表达量,减轻AD大鼠脑神经元中tau蛋白Ser³⁹⁶位点的过度磷酸化,使神经细胞免遭Aβ_1-40的毒害。     

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的 观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果.方法 取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内.移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像.移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只.结果 嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05).结论 嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助.     

白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制。方法采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12h,继之用25μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）以及采用DHE探针测定荧光强度间接反映胞内活性氧（ROS）含量,以评价白藜芦醇对细胞氧化损伤的保护作用。结果受β淀粉样损伤的细胞存活率明显下降（P〈0.05）,而用10、100μmol/L白藜芦醇预处理则能提高该细胞的存活率（P〈0.05）,但1μmol/L白藜芦醇预处理的细胞存活率并无明显变化;荧光检测显示,蛋白损伤使得荧光强度增高（P〈0.05）,1μmol/L白藜芦醇处理组荧光强度大于阳性对照组,其余各组荧光强度均小于阳性对照组（P〈0.05）;蛋白损伤可导致细胞LDH漏出量增加（P〈0.05）,1μmol/L白藜芦醇使得LDH漏出增加（P〈0.05）,而10、100μmol/L白藜芦醇处理组,细胞LDH漏出量明显减少（P〈0.05）。结论星形胶质细胞受到β淀粉样蛋白损伤后,白藜芦醇能减少LDH的漏出及有效降低胞内ROS水平,从而显示对星形胶质细胞具有保护作用。     

β-淀粉样蛋白对衰老模型大鼠脑海马神经元的毒害作用

研究β－淀粉样蛋白（β－AP）对衰老大鼠海马神经元的影响。采用D－半乳糖（D－gal)建立衰老动物模型，海马内微注射β－AP，检测各组大鼠Y－迷宫分辨学习和一次性被动回避反应的变化，并测定海马超氧化物歧化酶（SOD）活性，丙二醛（MDA)含量，Na^ -K^ -ATP酶活性和海马线粒体膜流动性。可见β－AP加上D－gal组大鼠学习记忆能力，与只用β－AP或D－gal组比较有显著性差异；与β－AP或D－gal组比较Na^ -K^ -ATP酶活性显著降低，MDA含量显著增加，海马线粒体膜流动性显著降低。结果表明，β－AP与D－gal联合使用可导致衰老大鼠脑海马自由基损伤加重，学习记忆能力显著减弱。     

人参皂苷Rg1对脂多糖诱导的C6细胞株淀粉样前体蛋白和脑啡肽酶表达的影响

目的:为寻找治疗阿尔茨海默病的有效药物,探讨人参皂苷Rg1对脂多糖(LPS)诱导的C6细胞株淀粉样前体蛋白(APP)和脑啡肽酶(NEP)表达的影响。方法:应用MTT比色法检测一定剂量LPS(100 mg·L^-1)和不同浓度人参皂苷Rg1(2.5、5、10、20 μmol·L^-1)对C6细胞存活率的影响,应用RT-PCR观察细胞中APP、NEP表达的变化。结果:LPS作用于C6细胞株,C6细胞存活率下降,细胞内APP的表达增加,NEP的表达降低。人参皂苷Rg1能提高LPS处理的C6细胞存活率,使细胞内APP的表达降低,NEP的表达升高。结论:LPS造成细胞损伤和细胞内APP表达增加、NEP表达降低,人参皂苷Rg1对LPS造成的细胞毒性具有拮抗作用,可减弱LPS引起的细胞内APP表达增强,减轻LPS对细胞内NEP表达的抑制。     

β淀粉样蛋白对培养海马神经元NMDA受体亚单位磷酸化及其亚细胞定位的影响

目的:探讨在β淀粉样蛋白(Aβ)突触毒性作用下,N-甲基-D-天(门)冬氨酸受体(NMDA)受体亚单位的磷酸化状态及其在细胞不同部位的表达与分布,推测其所诱导突触功能紊乱的作用机制。方法:原代培养的大鼠海马神经元加入Aβ(10μmol/L)1 h后,免疫荧光检测加药组和对照组近胞体段10μm树突上PY1325NR2A和PY1472 NR2B总表达量及突触内表达量的变化。结果:Aβ作用1 h后与对照组比较,PY1325 NR2A及PY1472 NR2B表达量均显著减少;突触内PY1325 NR2A的表达量显著增加,而PY1472 NR2B表达量没有明显变化。结论:NMDA受体亚单位的磷酸化参与Aβ的突触毒性作用,提示磷酸化后的NR2A、NR2B功能可能发生变化,即NR2A可能由保护作用变为毒性作用,而NR2B则相反。