脉冲强磁场对小鼠H22肝癌杀伤作用的形态学研究

由于宿主的控制和癌细胞的反控制都和生物电磁现象有关.因此,近年来有关磁场对癌细胞生长分裂影响的研究引起了人们的关注[1-3].我们在原有研究的基础上[4-7],选用脉冲强磁场对接种H22肝癌的昆明小鼠进行实验研究,通过对组织形态学改变,特别是对其超微结构形态学的改变进行观察,探讨脉冲强磁场对肿瘤杀伤效应及有关机制.     

交变脉冲强磁场对肺癌细胞杀伤物实验研究

目的 为证实磁场对恶性肿瘤杀伤作用。方法 应用交变脉冲强磁场对接种Ｌｏｕｉｓ肺癌的６０只昆明小鼠作肿瘤杀伤的对比实验研究。结果 通过组织学和抑癌检测证实：交变脉冲强磁场能选择性杀伤癌细胞，在治疗后２４小时内就可以见到癌细胞出现空泡变性，核固缩、破裂、溶解、坏死。随着时间推移坏死更加明显。同时还证实这种磁场对正常细胞和组织没有损伤。     

脉冲强磁场对膀胱肿瘤BIU-87细胞生长相关基因表达的影响

目的 研究脉冲强磁场对人膀胱肿瘤BIU-87细胞生长相关基因表达的影响.方法 将体外培养的人膀胱肿瘤BIU-87细胞分为磁场组及对照组.磁场组细胞给予脉冲强磁场干预(磁场强度为8 T,频率为15 Hz),每天持续干预2 h;对照组细胞亦置于相同环境中,但未给予曝磁处理.分别于实验进行24 h、48 h及72 h后采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)、促凋亡基因(Bax)及凋亡促进因子-3(caspase-3)mRNA表达,采用流式细胞仪检测Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白表达.结果 实验进行24 h、48 h及72 h后,发现磁场组Bcl-2 mRNA及蛋白表达在上述各时间点均较对照组明显降低,Bax mRNA及蛋白表达均较对照组显著增强(P＜0.05);caspase-3 mRNA及蛋白表达在上述各时间点组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 脉冲强磁场能抑制膀胱肿瘤BIU-87细胞生长,促其凋亡,其机制可能与脉冲强磁场促进Bax mRNA及蛋白表达、抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达有关.

Abstract：

Objective To estimate any influence of strong pulsed magnetic fields on the expression of growth-related genes in human bladder cancer BIU-87 cells. Methods Human BIU-87 cells were cultured in vitro and randomly divided into a magnetic field group and a control group. Each group was further divided into 24 h, 48 h and 72 h sub-groups. The magnetic field group cells were exposed to an 8 T magnetic field pulsed at 15 Hz for 2 h every day. The control group cells also placed on the same environment, but not exposed to any strong, pulsed magnetic field. The expression of B cell lymphoma/leukemia gene-2 (Bcl-2) mRNA, Bax mRNA and caspase-3 mRNA was measured with RT-PCR, and flow cytometry was used to evaluate the expression of the Bcl-2, Bax and caspase-3 genes of the tumor cells in vitro. Results The expression of Bax mRNA and protein was significantly higher in the cells exposed to the magnetic field than in the control groups. The expression of Bcl-2 mRNA and protein was significantly less. The expression of caspase-3 mRNA and protein in the two groups showed no significant differences.Conclusions A strong, pulsed magnetic field can inhibit the growth of bladder tumor BIU-87 cells and promote their apoptosis. The mechanism is probably related with the magnetic field promoting Bax mRNA and protein expression and inhibiting Bcl-2 mRNA and protein expression.     

低频脉冲强磁场发生仪及其生物学效应研究

强脉冲磁场发生仪采用先蓄能，后瞬间释放能量的工作方式，仪器分蓄能、能量转换、控制、显示和接口5个功能块。该发生仪可产生磁感应强度最大值为0．1～2．5T，周期从10^-3—10s可调的脉冲磁场。该仪器已用于刺激人体运动神经，检测运动神经的传导速度；辐照小鼠，检测白细胞数的变化；辐照离体人血，检测血液流变特性的变化等生物效应研究，得到了一些有意义的结果。使用结果表明，该仪器操作方便、性能可靠，可长时间稳定运行。通过进一步开发，该仪器可在磁场生物效应的科学实验及其他领域中得到广泛应用。     

雷公藤红素对人肥大细胞白血病细胞系HMC-1作用的实验研究

目的探讨雷公藤红素对人肥大细胞白血病的作用及机制。方法以人肥大细胞白血病细胞系ＨＭＣ１细胞为靶细胞,观察雷公藤红素对ＨＭＣ１细胞凋亡的诱导作用。结果①０．１２～１．００μｍｏｌ／Ｌ雷公藤红素可以引起ＨＭＣ１细胞凋亡,表现为细胞呈凋亡形态学改变,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳出现梯形条带,流式细胞仪分析ＨＭＣ１细胞在Ｇ１期前出现凋亡峰;②凋亡率随药物浓度的增加及作用时间的延长而递增;③促进Ｇ１期细胞进入Ｓ期,使Ｓ期细胞比例升高,随后凋亡率升高,Ｓ期细胞下降,两者呈负相关（Ｐ＜０．０１）;④雷公藤红素可使ＨＭＣ１细胞ｂａｘ、ｃｍｙｃ表达增加,ｂｃｌ２表达下降。结论雷公藤红素可有效地诱导ＨＭＣ１细胞凋亡,凋亡主要发生在Ｓ期,凋亡的发生与其上调促进凋亡基因ｂａｘ、ｃｍｙｃ和下调抑凋亡基因ｂｃｌ２的表达有关。     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病细胞系的作用

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)对两种慢性粒细胞白血病(CML)细胞系有无作用及作用机制。实验选用了两种不同的CML细胞系KU812和MEG—01及两种其它白血病细胞系U937和PL21，加入不同浓度的As2O3(0．2，2和10μmol/L)，在不同时间计数活细胞数，观察细胞形态，并以TUNEL法和DNA凝胶电泳检测细胞有无凋亡的发生；同时检测0．2μmol/L As2O3作用时细胞表面CD4，CD13，CD33，CD19，CD11b，CD14和CD7的变化，并通过RT—PCR检测细胞bcr—abl水平及caspase—3的变化。研究结果发现，不同浓度的As2O3对4种细胞系的作用不同，10μmol／L时4种细胞系均会发生细胞凋亡，2μmol／L时则仅CML细胞系KU812和MEG—01会产生凋亡，0．2μmol／L时4种细胞系均不发生凋亡。在培养24小时后，4种细胞系表面的CD34，CD13，CD33，CD19，CD11b，CD14和CD7等均无明显改变。RT—PcR检测bcr—abl的水平发现在2种CML细胞系中无明显改变，其caspase—3的活性较对照细胞均有所增加。结论：As203在较高浓度下可诱导4种白血病细胞系产生凋亡，在2μmol／L仅可诱导CML来源的两种细胞系产生凋亡，CML细胞系As203较其它两种细胞系敏感，其作用机制与caspase—3有关。     

脉冲强磁场诱导体外新生大鼠神经干细胞向神经元方向分化

目的探讨脉冲强磁场对体外新生大鼠神经干细胞（NSCs）向神经元方向分化的作用。 方法体外分离培养新生3d内的SD大鼠脑室下区的NCSs,无血清培养14d后,随机分为实验组和对照组。实验组置于脉冲强磁场条件下用前期探索的促增殖参数（0.1Hz、4T、8次）进行干预,每次脉冲放电20ms。对照组置于相同条件下但不做干预处理。干预后第1天,采用10%胎牛血清诱导贴壁分化,显微镜下观察不同时间段细胞形态学变化;贴壁分化后第7天,通过免疫荧光染色、蛋白免疫印迹法（Western Blot）及实时定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测NCSs分化后第7天神经元βⅢ微管蛋白（TUJ1）及星形胶质细胞相关特异性标志神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。 结果干预后,免疫荧光染色示实验组TUJ1阳性细胞数为（33.4±5.1）%,较对照组［（26.5±7.0）%］明显增多(P<0.05),实验组的GFAP阳性细胞率［（23.9±5.0）%］较对照组［（36.2±2.2）%］明显减少 (P<0.05)。RT-PCR检测显示,实验组TUJ1的mRNA表达量是对照组的（1.682±0.086）倍,GFAP的mRNA相对表达量是对照组的（0.590±0.157）倍,且组间差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测结果与RT-PCR检测一致,实验组TUJ1蛋白表达较对照组增多,GFAP蛋白表达较对照组减少。 结论脉冲强磁场具有促进NCSs向神经元分化,并抑制其向星形胶质细胞分化的作用。     

白血病细胞系来源的树突状细胞诱导及其抗肿瘤免疫功能研究

树突状细胞（DC）在抗肿瘤免疫反应中起关键作用，但大多数白血病病病人有DC功能缺陷，在外体扩增DC并增强其抗肿瘤免疫功能及以DC为基础的肿瘤疫苗是对白血病有效的免疫治疗方法，为了探讨由不同的髓性白血病细胞诱生DC的条件及其抗白血病反应，选用HL－60，K562和THP－1细胞与不同的细胞因子组合诱生DC，以光学和电子显微镜术观察形态特征，用流式细胞术和单克隆抗体检测细胞表型，以同种混合淋巴细胞反应观察刺激淋巴细胞增殖，用^51Cr释放法检测诱生细胞的细胞术和单克隆抗体检测细胞表型，以同种混合淋巴细胞反应观察刺激淋巴细胞增殖，用^51Cr释放法检测诱生细胞的细胞毒作用，用ELISA法测定DC培养及DC＋血单个核细胞培养的血清中IL－12及INF－γ的量，结果表明，由K562，HL－60和THP－1细胞诱生的DC具有村突状细胞的形太学特征，细胞表达DC的表面分化抗原，其中GM－CSF＋IL－4＋TNF-γ刺激HL－60－DC和THP－DC和GMCSF＋IL－4＋IL－12刺激的K562－DC中有抗原表达。3种细胞诱生的DC对混合淋巴细胞反应CTL反应有强刺激细胞因子能诱导髓性白细胞产生DC，不同细胞需要不同的细胞因子和培养条件，这些DC表达抗原呈递细胞的表型具有刺激T淋巴细胞增殖和诱导CTL反应以及分泌IL－2和促进T细胞分泌INF－γ的作用。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对白血病细胞系HL-60细胞作用的研究

本研究探讨VEGF ASODN抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达作用及其与白血病细胞凋亡的关系。用阳离子聚合物介导硫代修饰VEGF ODN转染体外培养白血病细胞系HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR检测VEGF mRNA表达,以细胞形态学,凝胶电泳,流式细胞术观察细胞凋亡。结果显示：反义组与错义组、空白对照组相比,在细胞增殖抑制率和VEGF mRNA的表达水平方面均具有显著性差异（p〈0.05）;错义组与空白对照组相比无统计学差异（p〉0.05）。反义组可见细胞皱缩,颗粒增多,核固缩并出现细胞碎片,而错义组、空白对照组细胞轮廓清楚,胞体透亮,生长旺盛;反义组有凋亡梯形带,错义组和空白对照组仅见1条DNA条带;反义组细胞凋亡率达19.46%,与错义组、空白对照组相比具有显著性差异（p〈0.05）;错义组与空白对照组相比,无统计学差异（p〉0.05）。VEGF ASODN联合VP16的细胞凋亡率与等同条件单用VP16组相比有统计学差异（p〈0.05）;且凋亡率具有时间和剂量依赖关系。结论：VEGF ASODN能抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达,诱导白血病细胞的凋亡,抑制增殖,且增强VP16对白血病细胞诱导凋亡作用,两者联合效应具有相加作用。     

Wnt/β-catenin通路在脉冲强磁场促神经干细胞增殖中的作用初探

目的:摸索抑制神经干细胞(NSCs)中β-catenin表达的合适条件,为获得抑制β-catenin表达的NSCs做准备。利用抑制β-catenin表达的NSCs,探索wnt/β-catenin通路在脉冲强磁场促NSCs增殖中的作用。方法:取新生的SD大鼠双侧侧脑室下的NSCs,然后用无血清培养基培养14d。利用RNAi原理构建β-catenin shRNA慢病毒载体及阴性慢病毒载体,并转染NSCs,确定合适的感染复数(MOI)值。将NSCs分为阴性组(阴性病毒转染组)和实验组(β-catenin shRNA病毒转染组),并用4T、0.1Hz、8次的脉冲强磁场干预。在用脉冲强磁场干预后的1d、7d,采用CCK8法检测阴性组和实验组的NSCs增殖情况。结果:β-catenin shRNA序列在MOI=10时,对NSCs中β-catenin的抑制效果最好。阴性病毒组在脉冲强磁场干预后1d、7d时NSCs增殖最明显(P0.05),而实验组在干预前后NSCs增殖水平无明显变化。结论:wnt/β-catenin通路在脉冲强磁场促NSCs增殖中起作用。     

冲强磁场联合姜黄素对诱导膀胱肿瘤细胞BIU-87凋亡的影响

目的：观察脉冲强磁场联合姜黄素引起膀胱肿瘤细胞BIU-87凋亡的作用。方法：将体外培养的膀胱肿瘤细胞癌株BIU-87随机分为A、B和C 3组。A组为空白对照组,B、C组均经姜黄素处理,C组处理后置于脉冲强磁场中干预（8T,15HZ）,每天2 h。分别于干预后的第1、2、3天时采用显微镜观察肿瘤细胞形态、MTT法检测肿瘤细胞生长抑制率。结果：与A组比较,肿瘤细胞显微镜下处理后的B、C组,均出现典型的凋亡细胞形态,以C组表现更加明显;MTT检测,B、C组肿瘤细胞生长抑制率明显上升（均P〈0.01）,且呈时间依赖关系,第1-3天肿瘤细胞增殖抑制率B组明显低于C组（18.6%、40.6%、51.4%与26.9%、50%、61.4%,P〈0.01）;结论：脉冲强磁场联合姜黄素可促进膀胱肿瘤细胞的凋亡和抑制其生长。     

头部脉冲磁疗对脑卒中偏瘫患者康复的影响

目的:观察经头颅负极性低频脉冲磁疗对脑卒中偏瘫患者康复过程的影响。方法:脑卒中偏瘫患者60例,将低频交变电脉冲磁治疗仪的5个治疗导体分别置于患者前额、双侧颞叶和小脑对应的头皮投影位置,治疗20 min,每天1次;同时给予针灸和肢体运动功能康复治疗。结果:60例患者综合治疗10-35 d后,MAS评分与治疗前比较明显提高(34.83±9.28、18.48±10.76,P<0.01);≥75岁年龄段患者MAS评分明显低于<75岁的患者(P<0.01);发病1 d与发病45 d才开始接受治疗的患者比较差异无显著性意义;合并有糖尿病的患者对疗效无明显影响。结论:低频脉冲磁疗能直接透过颅骨作用于脑细胞和脑血管,改善脑组织的供血、供氧和神经细胞的代谢环境,与其它康复措施相结合,更有利于脑卒中偏瘫的康复。     

痰热清注射液对急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞系生物学活性的抑制作用及其机制

本研究探讨痰热清注射液体外对人急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞系生物学活性的影响及其作用机制。将痰热清注射液倍比稀释成1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512,共9个浓度组,处理增殖期Molt4细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况;应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度(IC50);分别采用PI染色法和PI/Annexin V双染法,通过流式细胞术检测Molt4细胞周期及凋亡的变化;采用实时定量PCR方法分析痰热清注射液处理Molt4细胞后凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的表达量变化。结果表明:痰热清注射液对Molt4细胞增殖具有抑制作用,1:2至1:16稀释浓度的细胞毒性大,细胞基本死亡;抑制作用呈剂量依赖性,IC50为1:142稀释浓度。痰热清注射液1:32浓度处理72小时Molt4细胞处于S期的数量明显减少(p<0.05),凋亡细胞比例明显增加(p<0.05);同时,caspase3表达升高和bcl-2表达明显减低(p<0.05)。结论:痰热清注射液可抑制Molt4细胞系增殖、促进其凋亡,其机制可能是通过减少S期细胞,下调bcl-2基因和上调caspase3基因而实现。     

低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响及其作用机制的初步研究

【目的】初步探讨低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响和作用机制。【方法】将培养的细胞分为常氧对照组、低氧8h组、低氧12h组、低氧24h组。MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western-blot方法分别检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)在mRNA和蛋白水平的表达、激光共聚焦显微镜观察HIF-1α核转位现象。【结果】①相对于对照组,低氧8h组、低氧12h组和低氧24h组细胞存活率明显下降(P<0.01),并且随着低氧时间的延长存活率逐渐下降,各组之间的差异有显著性(P<0.01);②HIF-1α mRNA和蛋白在对照组有少量的表达,随着低氧时间的延长,其表达增加(P<0.05);③相对于对照组,低氧组细胞内HIF-1α的表达增加,并且向核内转移,随着低氧时间的延长核内HIF-1α逐渐增多。【结论】低氧可通过影响HIF-1α的表达和调节其活性而达到抑制U937细胞株增殖的作用。HIF-1α介导的信号传导通路在白血病细胞的发生和增殖过程中可能起到关键的调控作用。     

米哚妥林对急性白血病细胞株HL-60细胞抑制效应的研究

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂米哚妥林(PKC412)对HL-60细胞株增殖和凋亡的影响及作用机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度PKC412对HL-60细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法鉴定PKC412对HL-60细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测BCL-2、P53基因的mRNA表达,Western blot...     

静磁场对骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响

目的研究0.25 T、0.35 T、0.42 T 静磁场持续或间歇曝磁对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖及骨向分化的影响。方法全骨髓贴壁筛选法分离MSCs,取第三代MSCs采用强度分别为0.25 T、0.35 T、0.42 T静磁场持续曝磁或间歇曝磁,CCK-8 法检测各组细胞增殖活力,并观察0.35 T连续曝磁后MSCs碱性磷酸酶活性、骨钙素含量。结果细胞经过磁场处理后,与对照组相比,细胞增殖活力均降低,连续曝磁第7 天效果最为显著(P<0.001),而0.25 T、0.35 T间歇曝磁第2~8 天持续表现出显著抑制效应(P<0.001)。0.35 T持续曝磁后,MSCs碱性磷酸酶活性和骨钙素水平均增高(P<0.05)。结论0.25 T、0.35 T、0.42 T静磁场连续曝磁或间歇曝磁均可抑制MSCs增殖,0.35 T连续曝磁能促进MSCs向成骨细胞方向分化。     

The Effects of Nuclear Magnetic Resonance Imagers on External and Implantable Pulse Generators

This study evaluates the effect of nuclear magnetic resonance (NMR) scanning on pacemaker function. It must be emphasized that each manufacturer's pulse generators and each pacing modality may behave differently and, therefore, require individual evaluation. According to our results, patients with pacemakers should have their pacing activity monitored continuously during scanning with the NMR 1500 gauss imaging system. External pulse generators should be set to the asynchronous mode and placed outside the NMR image volume but within the radiofrequency (RF) shield. Implanted pacemakers should be verified for type and mode of operation. All implantable pulse generators evaluated reverted from the demand to the asynchronous mode within the magnetic field of the scanner. There was no observable damage to the discrete pacemaker components that were tested. In vivo testing of implantable single-chamber pulse generators did not significantly alter the pacemaker's operating parameters. Changes in stimulation rate analogous to the RF field pulse rate were seen. In single-chamber devices the resultant rate was a multiple of the RF frequency, changing to a value less than the normal asynchronous magnetic rate. With more sophisticated dual-chamber devices the results varied. With VDD pacing during RF scanning, the cardiac stimulation rate increased to a value analogous to the RF field modulation period. More extensive in vivo testing using different models of pulse generators of various manufacturers is needed to identify specific device susceptibility to the RF, time variance and steady-state magnet fields. From these data a comprehensive statement about NMR scanning of patients with implanted pacemakers can be made.     

辣椒素对K562细胞增殖影响的研究

[目的]研究辣椒素对慢性粒细胞性白血病(CML)细胞株K562细胞增殖的影响.[方法]常规培养K562细胞,以MTT、^3H-TdR掺入法及流式细胞术观察细胞增殖情况.[结果]辣椒素能促进K562细胞代谢MTT,增加其^3H的掺入率,并呈现剂量依赖性.在100μg/L时,流式细胞术显示,辣椒素可促进K562细胞由静止期进入DNA合成期.[结论]辣椒素能刺激K562细胞的分裂增殖,并呈剂量依赖性.     

中药复方君子汤对白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响

本研究探讨中药复方君子汤（FFJZ）对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的生物学特点及其可能的作用机制。应用细胞形态学、台盼蓝拒染法观察细胞生长状态;四氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果表明：一定浓度范围的FFJZ作用于K562细胞后,随FFJZ药物浓度的升高其对K562细胞生长的抑制率明显增加（p〈0.01）,其半数抑制浓度（IC50）约为5.6mg/ml。在FFJZ浓度为4mg/ml时,细胞凋亡以早期凋亡为主,而至8mg/ml组时晚期凋亡比例显著增多,与未加药组比较有显著差异（p〈0.01）。结论：在体外FFJZ一定浓度范围内可以抑制白血病K562细胞的生长增殖,诱导其凋亡并呈浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

南瓜蛋白抗人慢性髓系白血病细胞系K562的作用研究

本研究观察南瓜蛋白(Cucurmosin,CUS)在人慢性髓系白血病(CML)K562细胞-NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤和白血病模型体内抗肿瘤活性。采用建立K562-NOD/SCID小鼠皮下移植瘤和白血病模型,分别使用二种模型评价CUS在小鼠体内的抗K562活性。结果表明,给药剂量为0.5 mg/kg和1 mg/kg的CUS对人CML皮下移植瘤的抑瘤率分别为53.45%和59.43%;而剂量为0.25 mg/kg和0.5 mg/kg的CUS给药组小鼠的生存时间分别为39.8±5.5 d和43.4±6.6 d,抑瘤率分别为24.9%和36%。结论:CUS对小鼠体内人CML细胞系K562具有显著的抑制作用。