分娩发动前后胎盘中白细胞抗原G1 mRNA和NK细胞的变化

目的:检测胎盘及蜕膜组织中白细胞抗原G1(HLA-G1)mRNA和NK细胞在足月妊娠分娩发动前后的变化,探讨其在分娩发动中的作用。方法:通过RT-PCR法检测足月妊娠晚期未临产组(剖宫产组)和临产组胎盘组织中HLA-G1 mRNA的表达,并用免疫组织化学方法测定蜕膜中NK细胞的数量。结果:与未临产组相比临产组胎盘组织中HLA-G1 mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);临产组蜕膜中NK细胞数量明显多于未临产组(P<0.05)。结论:分娩发动时胎盘组织表达HLA-G1mRNA下降,蜕膜组织中NK细胞数量明显增多,推测HLA-G1表达下降激活NK细胞可能参与了分娩发动。     

早孕绒毛组织中HOXA7、9、10基因的表达及米非司酮对其的影响

目的:探讨米非司酮抗早孕的作用机理。方法:因非意愿妊娠要求终止妊娠的正常早孕妇女60例,分为3组,分别为常规负压吸宫对照组、负压吸引术前服用米非司酮100mg组和150mg,每组20例。运用RT-PCR及免疫组织化学方法检测各组绒毛组织中HOXA7、9、10mRNA和蛋白的表达。结果:①正常早孕绒毛组织在mRNA和蛋白水平均可见HOXA7、9、10基因的表达,表达主要在滋养细胞胞质,间质少量表达。②不同剂量的米非司酮均可以降低绒毛组织中HOXA7、9、10mRNA及蛋白的表达量,但对不同基因的降表达程度有所不同。150mg米非司酮对早孕绒毛组织中HOXA7、10基因的降表达作用明显大于100mg米非司酮(P<0.01)。服用不同剂量米非司酮后的早孕绒毛组织中HOXA7、9、10蛋白的表达位置仍以滋养细胞胞质为主,间质少量表达。结论:HOXA7、9、10基因表达于正常早孕绒毛组织中,服用米非司酮后可降低其表达,呈一定的剂量依赖性,但未改变蛋白的表达位置。米非司酮的抗早孕作用可能是通过对绒毛组织中HOXA7、9、10基因的调控来达到的,且以150mg的米非司酮作用明显。     

临产前后子宫平滑肌组织中G蛋白偶联受体30的表达及其临床意义研究

目的 探讨G蛋白偶联受体30（GPR30） mRNA和蛋白在临产前、后子宫平滑肌组织中的表达及其与分娩发动的相关性。方法 2011年3月至2012年3月在青岛市市立医院选取临产前进行选择性剖宫产的足月妊娠妇女作为未临产组（n=40）,自然临产进入产程活跃期后进行急症剖宫产的足月妊娠妇女作为临产组（n=50）,于剖宫产术中取少量子宫平滑肌组织,采用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测两组子宫平滑肌组织中GPR30 mRNA和蛋白的表达量;并于术前取静脉血,采用放射免疫法测定血清中雌二醇（E2）、雌三醇（E3）以及孕酮（P）的含量。结果 实时荧光定量PCR方法检测临产组和未临产组子宫平滑肌组织中均有GPR30 mRNA表达,临产组样本△Ct为3.08±0.35,未临产组样本△Ct为4.02±0.67,差异具有统计学意义（P＜0.05）,用双△Ct法进行相对定量分析,临产组GPR30 mRNA表达量是未临产组的1.92倍。Western blot技术检测临产组和未临产组子宫平滑肌组织中均有GPR30蛋白表达,临产组GPR30蛋白相对表达量4.06±0.25明显高于未临产组1.94±0.23,差异有统计学意义(P＜0.05)。临产组血清E2、E3浓度[（7882.41±921.76）pmol/L,（544.12±15.58）nmol/L]均显著高于未临产组[（5210.72±873.13）pmol/L,（326.36±12.26）nmol/L]。结论 足月妊娠分娩发动时GPR30高表达可能参与介导雌激素对子宫收缩的调节作用。     

白介素β1及凝血酶降低孕早期蜕膜细胞同源框A10基因的表达

目的:探讨炎症及出血导致流产的作用机制。方法:选择复发性流产(RSA)及正常妊娠孕6~10周的蜕膜组织各10例,并在体外分离培养正常妊娠的蜕膜细胞,加入雌、孕激素、白介素β1(IL-β1)及凝血酶处理后,用实时荧光定量RT-PCR及Western blotting检测RSA患者、正常妊娠者蜕膜组织及培养处理的各组蜕膜细胞内的同源框A10(HOXA10)的表达情况。结果:1HOX A10基因在孕早期蜕膜细胞中有表达;与正常妊娠者相比,RAS患者蜕膜组织HOXA10的表达明显下降(P0.05)。2雌、孕激素处理组的蜕膜细胞HOXA10 mRNA的表达显著增加(P0.05),是未处理组的9.5倍。3进一步加入IL-β1或凝血酶后,HOXA10 mRNA表达显著下降(P0.05);与雌、孕激素组相比,分别下降89.5%和74.9%。结论:1 HOXA10基因在孕早期蜕膜细胞中有显著表达,在RAS患者中的表达显著下降。2雌、孕激素促进HOXA10的表达,而IL-β1及凝血酶抑制HOXA10的表达。     

细胞因子IL-6mRNA与IL-10mRNA在早产合并绒毛膜羊膜炎胎盘组织中的表达水平及意义

目的:研究白细胞介素-6 mRNA(IL-6 mRNA)和白细胞介素-10 mRNA(IL-10 mRNA)在早产合并绒毛膜羊膜炎孕妇胎盘组织中的表达水平,探讨IL-6及IL-10在妊娠中的作用,以及其在早产合并绒毛膜羊膜炎中的变化及意义。方法:取足月分娩及早产孕妇部分胎盘胎膜组织做病理检查,根据病检结果分为3组:早产感染组20例、早产非感染组20例和足月组20例。采用二步法RT-PCR法测定3组胎盘组织中IL-6 mRNA和IL-10 mRNA的表达。结果:早产感染组胎盘组织中IL-6 mRNA表达水平明显高于早产非感染组和足月组,差异有显著性(P<0.05);而IL-10 mRNA表达水平明显低于另外两组,差异有显著性(P<0.05)。结论:感染可引起细胞因子IL-6 mRNA、IL-10 mRNA在胎盘组织中的表达发生改变,推测IL-6可促进分娩发动,使妊娠提前终止,而IL-10在维持正常妊娠中可能起重要作用。     

水通道蛋白9在人胎盘和胎膜中的表达

目的 检测正常人胎盘与胎膜中水通道蛋白9（aquaporin 9，AOP9）的表达。方法 收集5例足月剖宫分娩的胎盘和胎膜样本，运用RT—PCR方法从mRNA水平检测AQP9在胎盘与胎膜的表达；运用免疫组织化学和Western印迹方法检测AQP9蛋白在胎盘与胎膜中的表达。结果 RT—PCR结果显示AQP9mRNA在胎盘和胎膜均有表达；Western印迹显示两条带在相对分子量为30kD及45kD左右；免疫组织化学显示AQP9表达于胎盘的合体滋养细胞、羊膜上皮细胞及平滑绒毛膜滋养细胞。结论 AQP9在母胎液体交换、胎儿代谢物的排出及羊水平衡等的分子机制中可能发挥重要作用。     

子宫平滑肌组织中RhoA及Rho激酶的表达与分娩发动的关系

目的 探讨子宫平滑肌组织中RhoA及Rho激酶的表达变化及其在分娩发动中的作用.方法 选择2007年2至12月在中南大学湘雅二医院妇产科住院分娩的足月临产产妇20例(临产组),足月未临产产妇20例(未临产组);同期因宫颈上皮内瘤变行子宫切除术的患者20例为对照组.应用实时荧光定量RT-PCR技术和蛋白印迹法检测3组妇女子宫平滑肌组织中RhoA和Rho激酶亚型ROCKⅠ mRNA及其蛋白的表达水平,并对子宫平滑肌组织中RhoA mRNA及蛋白与ROCKⅠ mRNA及蛋白的表达水平行相关性分析.结果 (1) 3组妇女子宫平滑肌组织中RhoA mRNA和ROCKⅠmRNA的表达水平,临产组分别为(3.51±0.56)×10-3和(4.07±0.66)×10-3;未临产组分别为(2.75±0.52)×10-3和(2.71±0.52)×10-3;对照组分别为(2.11±0.54)×10-3和(2.01±0.23)×10-3.临产组产妇子宫平滑肌组织中RhoA mRNA和ROCKⅠ mRNA的表达水平均高于未临产组和对照组, 差异有统计学意义(P<0.01);3组间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)3 组妇女子宫平滑肌组织中RhoA蛋白和ROCKⅠ蛋白的表达水平,临产组分别为0.72±0.23和0.56±0.14;未临产组分别为0.64±0.17和0.42±0.16;对照组分别为0.46±0.15和0.29±0.08.RhoA蛋白在3组中的表达两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05).临产组和未临产组产妇子宫平滑肌组织中ROCKⅠ蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)3组妇女子宫平滑肌组织中RhoA mRNA表达与ROCKⅠ mRNA的表达水平呈正相关关系(r=0.73,P<0.01);3组妇女子宫平滑肌组织中RhoA蛋白表达与ROCKⅠ蛋白表达水平也呈正相关关系(r=0.37,P<0.01).结论 子宫平滑肌组织中RhoA及Rho激酶水平升高与产妇分娩发动密切相关.     

钙网蛋白介导的凋亡在早期先兆流产过程中的作用

目的探讨不同表达水平的钙网蛋白(calreticulin,CRT)与先兆流产的关系。方法 (1)分别应用免疫组织化学法、Western blotting和q PCR检测早期正常妊娠(n=35,均因非意愿妊娠而要求人工流产)及早期先兆流产患者人工流产后的蜕膜和绒毛组织中CRT蛋白及mRNA的表达。(2)分别转染合成并经检测的质粒m Emerald-CRT与CRT-siRNA至BeWo细胞中,检测CRT及Caspase-3的表达。结果免疫组织化学可见CRT阳性信号定位于绒毛两层滋养层细胞的胞质和胞膜上,先兆流产组染色比正常早孕组深、面积大;q PCR与Western blotting检测CRT表达量在先兆流产组明显高于正常早孕组,先兆流产组中mRNA表达量为正常早孕组的1.2倍(P0.05)。q PCR与Western blotting检测CRT与Caspase-3表达量在质粒(m Emerald-CRT)转染组高于对照组,质粒转染组中CRT及Caspase-3的表达量分别是对照组的3.5倍与2倍(P0.05),在si-RNA组低于对照组,对照组中CRT及Caspase-3的表达量分别si-RNA组的5倍与2倍。结论早期先兆流产的发生可能与CRT在绒毛和蜕膜组织中的高表达并介导凋亡相关。     

子痫前期胎盘组织中尾型同源框基因2的表达及意义

目的研究子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘组织中尾型同源框基因2(CDX2)表达与早孕绒毛和正常足月妊娠者之间的差异及其临床意义。方法选取2015年9月—2016年4月期间于本院分娩的PE孕妇30例,选择同期早孕妊娠孕妇30例和正常足月妊娠妇女30例。采用Real-time PCR方法检测患者的胎盘组织CDX2 m RNA的表达,Western blotting及免疫组织化学方法检测胎盘组织中蛋白的表达及蛋白定位。结果 (1)RT-PCR技术显示,PE患者胎盘组织中CDX2 m RNA的表达水平(0.385±0.065)低于早孕妊娠(1.880±0.235)和正常足月妊娠组(1.015±0.184),差异有统计学意义(P0.05)。(2)Western blotting显示,PE患者胎盘组织中CDX2蛋白表达水平(0.276±0.029)显著低于早孕妊娠组(0.658±0.059)和正常足月妊娠组(0.478±0.136),差异有统计学意义(P0.05)。(3)免疫组织化学SP法显示,正常早孕妊娠、正常妊娠者胎盘和PE胎盘组织均有CDX2表达,主要表达在合体滋养细胞细胞质中,在PE中CDX2表达明显降低。结论 CDX2下调可能参与PE的发病,提示其可能参与了滋养细胞的增殖、侵润和胎盘形成。     

STAT3介导表观遗传学调控对子痫前期发病的作用及临床分析

目的:探讨滋养细胞STAT3基因介导表观遗传学调控对子痫前期(PE)发病的作用及临床分析。方法:选择2017年1月至2019年7月在南方医科大学附属花都医院产科住院分娩的孕妇120例,其中60例PE妊娠被纳入PE组,60例正常足月妊娠被纳入正常对照组。分娩前ELISA检测血清,分娩后取胎盘组织进行HE染色、免疫组织化学、Real time-PCR和Western blot检测、全基因组甲基化测序(WGBS)、RNA-seq、Microarray分析、基因富集分析(GSEA)、甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP-Seq)。采用t检验和单因素方差分析,对数据进行统计分析。结果:两组胎盘中绒毛滋养细胞与绒毛外滋养细胞均表达有DNMT1、STAT3、PTEN及TSC2蛋白。与正常对照组相比,PE组血清中STAT3、PTEN、TSC2蛋白表达量显著降低,而DNMT1升高;胎盘组织中STAT3 mRNA、PTEN mRNA及TSC2 mRNA表达均降低,而DNMT1 mRNA升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。WGBS结果显示PE组和正常对照组DNA甲基化水平比较,DNMT1(34...     

早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2基因及其蛋白表达

目的研究早期自然流产患者绒毛肿瘤转移抑制基因KiSS-1与基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)mRNA及蛋白的表达,探讨其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测30例正常早期妊娠和30例早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2的mRNA及蛋白水平,用明胶酶谱分析法检测上述样本孵育液MMP-9、MMP-2的酶活性。结果(1)自然流产患者绒毛组织中MMP-9及MMP-2mRNA表达水平低于正常早期妊娠组(P<0.05),KiSS-1mRNA的表达高于正常早期妊娠组差异有统计学意义(P<0.05);(2)Westernblotting分析显示自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2蛋白表达低于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05),KiSS-1蛋白表达高于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05);(3)明胶酶谱分析结果显示,自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2酶活性低于正常早期妊娠者差异有统计学意义(P<0.05)。结论自然流产患者绒毛促浸润基因MMP-9、MMP-2mRNA及其蛋白表达水平降低,同时抑制浸润基因KiSS-1mRNA及其蛋白表达增加,造成滋养细胞浸润能力下降,可能与自然流产的发生有关。     

细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:初步探讨早孕母胎界面细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的作用。方法:26例妊娠35-49d先兆流产患者,采用RT-PCR法及Western blotting法、免疫组化法检测绒毛、蜕膜组织SOCS3的表达,并以30例正常早孕者作对照。结果:①绒毛、蜕膜组织均表达SOCS3,但先兆流产组SOCS3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②绒毛中的SOCS3表达于滋养细胞和绒毛间质,蜕膜中的SOCS3主要位于蜕膜腺体及间质细胞,二组SOCS3表达定位一致。结论:母胎界面SOCS3可能在早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与先兆流产的发生、发展有关。     

Meis1在子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜中的表达研究

目的:初步探索HOXA10的辅因子(Meis1)与子宫内膜异位症(EMs)患者不孕和发病的相关性。方法:采用免疫组织化学方法进行组织学定位并进行半定量分析,采用Westernblot-ting方法在蛋白水平上进行定量分析,检测EMs不孕患者异位和在位子宫内膜中Meis1的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,Meis1在异位内膜和在位内膜中仅有弱表达,而在正常同期内膜中呈较明显的阳性表达,差异显著(P<0.01);比较Meis1在分泌中期在位内膜与正常内膜中的表达,差异亦有显著性(P<0.01)。Westernblotting显示,Meis1在分泌中期在位内膜中仅有弱表达,而在同期正常内膜中呈高表达(P<0.001)。结论:Meis1在EMs患者分泌中期在位内膜中低表达,可能是影响子宫内膜容受性的建立,从而影响胚胎着床导致不孕的重要因素之一。同时,Meis1在异位内膜中的低表达说明异位内膜可能对体内雌、孕激素正常调控具有抵抗性,异位内膜细胞具备了对抗凋亡的能力,提示Meis1可能参与了EMs的发生与发展。     

胎盘绒毛血管生成状况及VEGF、MMP-2和MMP-9表达与早期自然流产的关系

目的:探讨VEGF、MMP2和MMP9表达变化对胎盘绒毛血管生成的影响及与早期自然流产的关系。方法:选用CD34作为微血管标记物,应用免疫组化检测30例早期自然流产病例(自然流产组)和20例早期人工流产病例(人工流产组)胎盘绒毛微血管密度(MVD);RT-PCR检测胎盘绒毛VEGFmRNA的表达;酶谱分析法测定MMP-2和MMP-9的表达。结果:自然流产组VEGF121mRNA表达及MVD均明显低于人工流产组(P<0.01)。相关分析显示,两组中VEGF121mRNA相对表达量与MVD值均呈显著正相关(rθ=0.9794,rλ=0.9183)。自然流产组酶原型MMP-9的表达量显著低于人工流产组(P<0.01),激活型MMP-2的表达量显著高于人工流产组(P<0.01)。结论:孕期胎盘绒毛内VEGF121mRNA低表达所致的血管生成障碍以及MMP-2和MMP-9表达失调可能共同参与了早期自然流产的发生发展过程。     

重度子痫前期胎盘组织中NFAT5表达与围生儿结局的相关性研究

目的:探讨核转录因子5(NFAT5)在重度子痫前期(sPE)胎盘中的表达及其与围生儿结局的相关性。方法:收集2015年1月至2016年1月在郑州大学第三附属医院行剖宫产分娩的sPE孕妇(试验组)60例。选取同期非PE行剖宫产术的孕妇60例作为对照组。免疫组化法检测胎盘组织中NFAT5表达;RT-PCR法检测胎盘组织中NFAT5 mRNA表达。对胎盘中NFAT5 mRNA水平与围生儿结局进行相关分析。结果:sPE组的新生儿体重、胎盘重量、Apgar评分及分娩孕周均低于对照组(P均0.05)。两组胎盘中NFAT5蛋白多位于胎盘滋养细胞的胞核与胞质中,绒毛间质细胞内有少量表达。sPE组的NFAT5蛋白和mRNA表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(t=-40.434,P=0.001;t=-6.696,P=0.001)。sPE组的NFAT5 mRNA相对表达量与新生儿出生体重、胎盘重量、分娩孕周均呈负相关(r分别为-0.554,-0.698,-0.612,P均0.05),与孕妇体重指数(BMI)呈正相关(r=0.630,P=0.012)。结论:sPE组胎盘组织中NFAT5表达水平升高,与围生儿不良结局有关。     

Altered placental glutathione peroxidase mRNA expression in preeclampsia according to the presence or absence of labor

Increased placental oxidative stress in preeclampsia (PE) has been associated in part to a decrease in glutathione peroxidase (GPX) antioxidant activity. However, it is not clear if GPX mRNA expression is affected in PE, and how the presence of labor may impair this expression. In this study, we characterized by quantitative PCR, in situ hybridization and immunohistochemistry, the expression of four GPX (GPX1 to 4) in the placenta of normotensive (NP; n = 23) and PE pregnancies (n = 25) according to mode of delivery: vaginal delivery (with labor) or cesarean (without labor); the tissue layer: amnion-chorion (AC) and villi; and the sampling site: peri-insertion or peripheral. Concomitantly, oxidative stress markers mRNA expression, HSP70 and HO-1 were measured. All GPX mRNA and protein were detected in all layers of the placenta and sampling sites. In absence of labor, GPX1 is more expressed near the umbilical cord than at the periphery of the villi (p = 0.037). At the periphery of AC membranes, GPX2 was more expressed in PE than in controls in presence of labor (p = 0.037). Interestingly, GPX4 mRNA level was clearly deficient in the PE villi in presence or absence of labor (p < 0.0473). Also, the GPX4 expression in PE was lower than controls in AC membranes in presence of labor (p = 0.0007). Oxidative stress markers, HSP70 and HO-1, were higher in PE placental membranes than in controls in absence of labor (p < 0.011). HSP70 was also upregulated in PE placental membranes in presence of labor (p = 0.034). Correlations between stress markers and GPX mRNA expression were mostly present in AC membranes in presence of labor in NP. Most of the latter correlations were lost in PE. In conclusion, our results suggest that the reported decrease in GPx activity and increased oxidative stress in PE placental villi may be attributed in part to GPX4 independently of the presence or absence of labor.     

Identification of arginase in human placental villi

l-Arginine is the common substrate for arginase and nitric oxide synthase (NOS). Arginase converts l-arginine to urea and ornithine, which is the principal precursor for production of polyamines required for cell proliferation. Human placenta expresses endothelial NOS (eNOS) in syncytiotrophoblasts, but the expression of arginase has not been fully elucidated. Our aim was to investigate the expression and distribution patterns of arginase-I (A-I) and arginase-II (A-II) in human placental villi in the first trimester and at term using immunohistochemistry, RT-PCR and Western blot analysis. The arginase enzyme activity in placental villi was also measured. Immunohistochemistry showed different distribution patterns of the arginase isoforms during gestation: A-I was observed only in cytotrophoblasts, while A-II was observed in both cytotrophoblasts and syncytiotrophoblasts. RT-PCR and Western blot analysis showed expression of A-I and A-II in the first trimester and at term in human placental villi. Expression of A-II and arginase activity was greater in the first trimester than at term. Differentiation of cytotrophoblasts into syncytiotrophoblasts may be associated with l-arginine metabolism through modulation of l-arginine availability for eNOS and A-I. And elevated arginase activity in the early gestational period may be responsible for proliferation of trophoblasts by increasing polyamines production. These results suggest that the l-arginine-ornithine-polyamine and l-arginine-nitric oxide pathways play a role in placental growth and development.     

波形蛋白在子痫前期蜕膜组织中的表达及其意义

目的:探讨波形蛋白在子痫前期蜕膜组织中的表达及意义。方法:采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blotting和免疫组织化学技术分别对晚发型重度子痫前期(A组)及早发型重度子痫前期(B组)和正常足月妊娠妇女(对照组,C组)各10例的波形蛋白mRNA及蛋白进行测定。结果:波形蛋白主要表达于蜕膜细胞的胞膜、胞浆及间质。荧光实时定量PCR,Western blotting和免疫组化表达等各方法验证结果显示:波形蛋白mRNA及蛋白在C组蜕膜组织中表达最高;B组中次之;A组中最低,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:波形蛋白表达下调可能参与子痫前期的病理过程,并且波形蛋白下调的程度同子痫前期发病的早晚有关。