HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr在控制性超排卵小鼠围着床期子宫内膜表达的研究

目的:检测同源框基因HOXA-10、HOXA-11以及雌激素受体Esr2、孕激素受体Pgr在控制性超排卵(COH)小鼠围着床期子宫内膜中的表达,探讨COH对子宫内膜容受性的影响。方法:将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为模型组(GnRH-a+HMG+HCG)和对照组(生理盐水),每组15只,造模成功后,计算子宫脏器指数,光学显微镜观察子宫内膜组织学变化;应用RT-PCR和Real-time PCR方法检测小鼠子宫内膜中HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr mRNA的表达。结果:模型组围着床期小鼠子宫脏器指数较对照组显著降低(P<0.05),子宫内膜发育延迟,子宫内膜成熟度及厚度降低;模型组小鼠HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达较对照组显著下降(P<0.05),而Esr2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:COH引起HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达下降,Esr2mRNA表达升高,致使围着床期内膜准备不足,子宫内膜容受性下降。     

Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

经后增殖方和促黄体方能诱导超促排卵小鼠子宫内膜中整合素β_3的表达

目的:观察益气血补肝肾方对控制性超促排卵小鼠子宫内膜组织中整合素β3表达的影响。方法:将实验小鼠随机分为COH模型组、中药治疗组和对照组。进入实验后,中药治疗组每日给予中药灌胃,其余小鼠以等量生理盐水代替。COH模型组和中药治疗组给予GnRHa降调节,PMSG+hCG促排。每组分别于孕第1日(pd1)、pd2、pd4、pd5、pd6处死10只动物,取子宫内膜采用实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹的方法分别在mRNA和蛋白水平定量检测子宫内膜整合素β3表达情况。于妊娠第8日(pd 8)剖腹取各组小鼠子宫(每组10只),观察胚泡着床情况。结果:整合素β3在各组小鼠子宫内膜中呈周期性的表达,从孕第1日(pd 1)开始整合素β3表达逐渐增强,pd 4显著增加,pd 6表达开始减弱。与COH模型组相比,中药治疗组小鼠子宫内膜中整合素β3表达增强,两者相比有统计学意义(P<0.05);整合素β3在中药治疗组和对照组中的表达水平相近,两者相比无统计学意义(P>0.05)。COH模型组pd 8的平均胚胎着床数与中药治疗组和对照组相比,明显减少(P<0.05),而中药治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:益气血补肝肾方可诱导小鼠子宫内膜中整合素β3的表达,并提高超促排卵小鼠的胚胎着床率,提示该方可能具有改善子宫内膜容受性的作用。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。     

肿瘤抑制基因p16~(INK4A)在小鼠早孕子宫内膜中的表达

目的:初步探讨p16INK4A在胚胎着床过程中的作用。方法:采用实时FQ-PCR和免疫组织化学技术分别检测未孕(d0)及孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜p16INK4AmRNA及其蛋白的表达。结果:实时FQ-PCR显示妊娠子宫内膜组织p16INK4A的mRNA表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增强的趋势,到孕d5达到最高。免疫组化显示p16INK4A蛋白在子宫内膜的表达及规律与实时FQ-PCR的结果一致。结论:小鼠胚胎着床过程中p16INK4A诱导的小鼠子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎着床的重要机制之一。     

不同条件下小鼠围着床期子宫内膜整合素α_v和Le~y寡糖的表达

目的:探讨促排卵药、胚胎本身及孕后激素等条件对小鼠子宫内膜整合素av和Ley寡糖的表达及对着床窗开放的影响。方法:将成年雌鼠分为对照和实验两大组。对照组为自然受孕;实验组为用促排卵药后受孕,其中一部分为假孕,另一部分为事先行一侧输卵管结扎。各组分别于孕2-7 d取子宫标本2份,一份石蜡包埋行HE染色和免疫组化染色测定Ley寡糖,另一份于-80℃保存,冰冻切片行免疫组化染色测定整合素av。结果:①对照组于孕7 d,大部分小鼠子宫外观即见明显胚胎着床,显微镜下从孕5 d起出现子宫内膜间质的蜕膜反应,但实验组无1例有此变化。②整合素av在小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内表达。对照组的表达于孕4 d达高峰,而各实验组的表达高峰均推迟1-2 d,且表达水平较对照组明显减弱(P <0.05)。结扎侧和未结扎侧子宫内膜整合素av的表达高峰无明显差异。③Ley寡糖在小鼠着床期表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮表面,其表达两组间无明显差异,不同妊娠天数之间的表达亦无明显差异。在对照组,于孕4 d开始Ley寡糖在子宫内膜间质有表达,孕6 d达高峰,而实验组未见一定的规律。结论:①小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内整合素av的表达与子宫内膜着床窗的开放一致。②促排卵药能抑制小鼠子宫内膜着床窗期整合素av的表达,延迟着床窗的开放;孕     

促血管生成素-1,-2基因在小鼠着床期子宫内膜的表达

目的:检查Ang-1/-2蛋白在小鼠胚胎着床期子宫内膜的分布及mRNA的表达,以研究Ang-1/-2基因在胚胎着床过程中所起的作用和生物学意义。方法:取D2,D4,D6和D8昆明种小鼠子宫内(蜕)膜,分别用免疫组织化学S-P法和原位杂交技术,检查着床期子宫内膜中Ang-1/-2蛋白的表达及其mRNA的转录水平。并用计算机图像分析技术检测不同时期子宫内膜中Ang-1/-2表达的平均光密度值。结果:免疫组化显示,Ang-1蛋白在基质细胞、上皮细胞和血管壁中表达,而Ang-2蛋白则在腺上皮细胞及基质细胞中表达,两者随着妊娠天数的增加而表达增强(P<0·01)。原位杂交显示,Ang-1mRNA自D2起即表达于基质细胞中,D4血管壁胞浆中也出现阳性表达;而Ang-2mRNA自D2起则表达于基质细胞和腺上皮,D4血管壁胞浆中也出现阳性表达。Ang-1/-2mR-NA表达强度在D6,D8逐渐增加。平均光密度值差异有显著性(P<0·01)。结论:Ang-1/-2基因在小鼠胚胎着床期血管新生和血管重塑过程中起重要作用,从而有助于囊胚成功着床。     

H0xa-10在人月经周期分泌中期子宫内膜腺上皮表达下降

目的对同源异型框基因Hoxa-10在月经周期各阶段人子宫内膜的表达形式进行观察.方法通过原位杂交方法测定了5例增殖期、9例分泌期的人子宫内膜Hoxa-10的表达.结果Hoxa-10基因在人子宫内膜均有表达.但在各周期阶段,其表达的强度和部位却有所不同.首次发现Hoxa-10在对应于着床期的分泌中期以及分泌晚期子宫内膜腺上皮的表达明显降低或不表达.结论Hoxa-10在人类着床过程中可能具有重要功能.     

Asoprisnil抗小鼠孕卵着床效果及对子宫内膜容受性的影响

目的:探讨Asoprisnil抗小鼠孕卵着床的效果及其对小鼠着床窗期子宫内膜容受性的影响。方法:将孕第1日小鼠随机分成4组,分别为Asoprisnil低(5μg/g)、中(10μg/g)、高(20μg/g)剂量组和对照组,每组22只,于孕第1~3日每日灌胃给药1次,对照组以体积分数1%羧甲基纤维素钠替代,第5日每组处死孕鼠5只取子宫组织,HE染色观察子宫内膜形态学改变,免疫组织化学S-P法检测子宫内膜PCNA表达。第8日处死余下的孕鼠,计数着床点数。结果:①Asoprisnil高、中和低剂量组的妊娠率分别为11.76%、35.29%和76.47%,与对照组(94.12%)比较差异有统计意义(P<0.001)。②Asoprisnil高、中、低剂量组着床胚泡数第50百分位数(P50)分别为13(10.5~14)、10(0.5~11)和0(0~12),与对照组0(0~0)比较差异均有统计学意义(P<0.001)。③对照组围着床期子宫内膜腺体弯曲折叠,为复层高柱状上皮细胞;基质细胞蜕膜变,细胞大且排列疏松,胞质丰富透亮;内膜中腺体和血管丰富。Asoprisnil组子宫内膜腺体为单层或者复层上皮细胞;内膜基质细胞蜕膜变不明显,基质细胞较小,排列致密;腺体和血管增生不明显。④围着床期小鼠子宫内膜腺体和基质中均有PCNA表达。内膜腺体中Asoprisnil高、中、低剂量组PCNA表达强度(AIOD)分别为0.15±0.01、0.16±0.03和0.14±0.02,与对照组(0.21±0.03)比较差异有统计学意义(P<0.001)。Asoprisnil高、中、低剂量组内膜基质细胞中PCNA表达强度(AIOD)分别为0.17±0.01、0.18±0.03和0.17±0.02,与对照组(0.15±0.02)比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Asoprisnil能显著抑制着床窗期子宫内膜腺体增殖,促进子宫内膜基质细胞增殖,但阻止基质细胞蜕膜化,降低子宫内膜容受性而发挥抗小鼠胚胎着床效应,显示出潜在的子宫内膜靶向避孕前景。     

卵巢慢反应患者控制性超促排卵相关因素分析:一项多中心回顾性研究

目的探讨控制性超促排卵(COH)过程中发生卵巢慢反应可能的相关因素。方法回顾性分析2014年1月—2016年1月期间于兰州大学第一医院、新疆佳音医院、青海省人民医院、银川市妇幼保健院、广西玉林市妇幼保健院进行促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长方案体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的144例卵巢慢反应患者的临床资料,与132例卵巢正常反应患者(正常对照组)进行对比。结果与正常对照组相比,慢反应组患者体质量指数(BMI)、促甲状腺激素(TSH)较高,降调节及促排卵时间较长,促性腺激素(Gn)使用后7d平均卵泡直径偏小,雌二醇(E_2)、黄体生成素(LH)低,hCG注射日E_2低,IVF双原核(2PN)卵裂率较高,临床妊娠率低,差异均有统计学意义(P0.05)。患者年龄、不孕年限、基础卵泡刺激素(FSH)、LH、催乳素(PRL)、E_2、基础卵泡数、hCG注射日孕酮(P)、获卵率、胚胎质量、胚胎种植率、流产率、宫外孕率、继续妊娠率及取消移植率组间均无统计学差异(P0.05)。结论卵巢慢反应可能与患者BMI过高、甲状腺功能降低及GnRH-a过度抑制相关,较长的Gn天数仍可使慢反应患者获得较好的妊娠结局。     

全部胚胎冷冻对不同促排卵方案患者临床应用的探讨

目的分析不同超促排卵方案新鲜胚胎移植和冻融胚胎移植的临床妊娠结局,探讨全部胚胎冷冻技术在临床应用中的价值。方法回顾性分析行胚胎移植的525个周期患者的临床资料,其中253个周期为新鲜胚胎移植周期,272个周期为同期的复苏胚胎移植周期。纳入的促排卵方案包括促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长方案组(A组)和GnRH-a短方案组(B组)。分别比较两组中新鲜胚胎移植和冻融胚胎移植(FET)的妊娠结局,以及新鲜胚胎移植周期和复苏胚胎移植周期中2种方案妊娠结局。结果 A组中,新鲜胚胎移植周期(A1组)和FET周期(A2组)的临床妊娠率分别为45.95%和47.71%(P0.05);B组中,新鲜胚胎移植周期(B1组)和FET(B2组)的临床妊娠率分别为27.94%和46.30%(P0.05);A1组和B1组的受精率和可用胚胎率组间无统计学差异(P0.05),A组的平均获卵数、临床妊娠率和胚胎种植率显著高于B组(P0.05);A2组和B2组的临床妊娠率和胚胎种植率均无统计学差异(P0.05)。结论 FET并不能显著改善长方案患者的临床妊娠结局,但可显著提高短方案组的临床妊娠率,提示短方案患者可考虑采用全部胚胎冷冻。     

不同控制促排卵方案对子宫腺肌病患者体外受精-胚胎移植结局的影响

目的:探讨不同控制性超促排卵方案对子宫腺肌病患者IVF-ET结局的影响。方法:回顾性分析146例子宫腺肌病患者的192个IVF-ET周期,根据控制性超促排卵(COH)方案分为GnRH-a短方案组(A组,87个周期)、长方案组(B组,34个周期)和超长方案组(C组,71个周期)。比较分析各组的卵巢刺激与胚胎移植结局。结果:3组间年龄及不孕年限无统计学差异(P>0.05);hCG注射日A组LH水平显著高于B、C组,差异显著(P<0.05);各组间获卵数、优质胚胎数、胚胎移植数等无统计学差异(P>0.05);C组的子宫体积在应用长效GnRh-a后明显缩小,差异显著(P<0.05)。促性腺激素(Gn)使用总量C组显著高于A组和B组,差异显著(P<0.05)。临床妊娠率C组(42.6%)显著高于A组(22.4%)和B组(25.8%)(P<0.05)。结论:超长方案可获得与短方案和长方案同样的优质胚胎数,并可提高子宫腺肌病患者IVF-ET临床妊娠率,但Gn用量增加。     

降调节联合人工周期方案在冻融胚胎移植周期中的应用

目的:探讨降调节联合人工周期方案对冻融胚胎移植助孕周期临床妊娠结局的影响。方法:收集到行冻融胚胎移植助孕治疗的297个周期,按不同内膜准备方案分组,133例降调节联合人工周期为降调节组,164例行单纯人工周期为人工周期组进行比较分析,同时对部分2种方案均实施过的同一患者进行自身对照分析,并对影响降调节联合人工周期的妊娠结局进行多因素回归分析。结果:患者的年龄、不孕年限、基础FSH、体质量指数(BMI)、内膜厚度、移植胚胎数、优质胚胎数、优质胚胎率、多胎率、异位妊娠率、早期流产率组间均无统计学差异(P>0.05)。降调节组的临床妊娠率、胚胎着床率分别为42.11%(56/133)、24.32%(81/333),显著高于人工周期组的29.88%(49/164)、13.83%(52/376),差异有统计学意义(P<0.05)。自身对照分析显示患者的内膜厚度、优质胚胎率均无统计学差异(P>0.05),但降调节联合人工周期的临床妊娠率[52.17%(24/46)]显著高于单纯人工周期的[13.04%(6/46)],差异有统计学意义(P<0.05)。另外,Logistic回归分析显示,优质胚胎数、手术史可影响妊娠结局。结论:在临床上,对于既往有盆腔手术史、多次冻融周期助孕失败史的患者,可试行降调节联合人工周期方案进行助孕。     

卵巢过度刺激综合征高风险患者单囊胚移植的应用

目的:探讨在卵巢过度刺激综合征(OHSS)高风险患者中移植单囊胚的妊娠结局。方法:回顾分析2009年8月至2011年8月在我中心助孕的患者,OHSS高风险患者中移植单囊胚者为囊胚组(136例)、移植D3天新鲜胚胎者为胚胎组(142例)、全部胚胎冷冻后择期行冻融胚胎移植者为冷冻组(155例),分析组间临床特征、超促排卵情况、胚胎质量、妊娠率、着床率、多胎率、中重度OHSS发生率。结果:3组间的临床特征、超排卵情况、胚胎形成情况均无统计学差异(P>0.05)。3组间着床率、临床妊娠率、多胎妊娠率、中重度OHSS发生率均有统计学差异(P<0.05)。单囊胚移植组的着床率(51.47%)高于其他两组,临床妊娠率(51.47%)高于冻融胚胎组,多胎率(1.43%)明显低于其他两组,中重度OHSS发生率(0.74%)低于胚胎移植组,与冻融胚胎组无明显差异。结论:单囊胚移植在保证较高妊娠率的同时显著降低了多胎妊娠率,但并未增高OHSS发生率。     

A study of the controlled ovarian hyperstimulation using GnRH agonist and pure FSH in in vitro fertilization-embryo transfer and gamete intrafallopian transfer program

The present study was undertaken to examine controlled ovarian hyperstimulation (COH) during an IVF-ET/GIFT program with GnRH agonist (GnRH-a) and pure FSH and with the conventional method. Pituitary desensitization was induced with a subcutaneous injection of GnRH agonist (leuprolide acetate) in 20 patients undergoing COH for oocyte recovery. These 20 patients had previously dropped out of our IVF-ET/GIFT program because of a low estradiol response or premature LH surge. Comparisons were made among the menstrual cycles of 20 drop-out patients, the same patients' cycles after GnRH-a and pure FSH administration (GnRH-a group), and the cycles of 20 non-drop-out patients (control group). After treatment with GnRH-a and pure FSH, Estradiol levels were increased (GnRH-a cycles:previous cycles, 1,520 +/- 416 pg/ml:416 +/- 209.1 pg/ml), while the premature LH surge was decreased (GnRH-a cycles:previous cycles, 2:12). Moreover, the number of follicles at the day of hCG injection was increased (GnRH-a group: control group, 4.6 +/- 1.3:3.4 +/- 1.5). However, the fertilization rates for the GnRH-a group and the control group did not differ markedly, though the pregnancy rate was increased slightly in the former (GnRH-a group:control group, 25%:15%). In conclusion, it was seen that COH using GnRH-a and pure FSH contributed to a better ovarian response and suppression of LH surge in patients who had previously dropped out of the IVF-ET/GIFT program using conventional ovarian stimulation.     

使用促性腺激素释放激素激动剂过程中妊娠的临床分析

目的 研究在控制性超促排卵(COH)使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)过程中妊娠的临床结局。方法 回顾性分析我中心4 988例体外受精或卵母细胞质内单精子显微注射受精与胚胎移植(IVF/ICSI-ET)长方案超促排卵使用GnRH-a过程中妊娠的21例临床资料。结果 在使用GnRH-a过程中21例妊娠,妊娠发生率为0.42%(21/4 988)。其中宫内孕19例,2例足月分娩健康新生儿;8例妊娠中;7例自然流产,自然流产发生率为33.33%(7/21);2例异位妊娠,异位妊娠发生率为9.52%(2/21);2例失访。结论 在COH中使用GnRH-a可导致意外妊娠,GnRH-a对妊娠结果无不良影响、无胎儿致畸作用,且有良好的妊娠结局。     

促性腺素释放素拮抗剂在体外受精-胚胎移植中的LH峰抑制

目的:探讨促性腺素释放素拮抗剂(GnRHA)在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中应用的效果。方法:回顾性分析使用GnRHA方案的306个IVF-ET周期(实验组)和使用常规促性腺素释放素激动剂(GnRHa)长方案266个IVF-ET周期(对照组)。结果:实验组Gn用量少于对照组,但无显著性差异;GnRHA用药时间明显少于GnRHa;实验组平均获卵数、中、重度OHSS发生率明显低于对照组;优质胚胎移植率明显高于对照组。而二组受精率、卵裂率、优质胚胎移植率、胚胎冷冻率、种植率、妊娠率均无统计学差异。二组均无LH峰提早出现。结论:GnRHA为我们提供了一种安全的控制性超排卵方案,并可有效抑制LH峰过早出现。     

Ultrashort gonadotropin-releasing hormone agonist (GnRH-a) protocol in comparison with the long-acting GnRH-a protocol and menotropin alone.

OBJECTIVE: To compare the in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) outcome of a 3-day gonadotropin-releasing hormone agonist (GnRH-a) administration: ultrashort protocol with the outcome of long-acting GnRH-a cycles or human menopausal gonadotropin (hMG) alone. DESIGN: Ninety-two cycles of the ultrashort protocol were matched with 92 cycles with long GnRH-a and with 92 hMG cycles. SETTING: The IVF-ET program. MAIN OUTCOME MEASURES: Amount and duration of hMG treatment, hormonal profile on the day of human chorionic gonadotropin administration, cancellation rate, number of oocytes retrieved, and fertilization and pregnancy rates (PRs) were examined and compared among the three groups. RESULTS: The ultrashort group needed a higher number of hMG ampules than the hMG group but significantly less than in the long GnRH-a regimen. The number of oocytes in the ultrashort protocol was the same as in the long GnRH-a, but the number of embryos per retrieval was significantly lower than with the long GnRH-a protocol and similar to that found in the hMG group. The ultrashort protocol yielded 10% PR per cycle and 17% per replacement, significantly lower than with the long GnRH-a protocol, 26% and 36%, respectively, but also lower than in the hMG one, namely 13% and 28%. CONCLUSION: The ultrashort protocol, although being convenient and having some advantages found in the long GnRH-a protocol, is inferior in its outcome compared with the two other protocols.