姜黄素抑制视网膜新生血管的实验研究

目的:观察姜黄素对视网膜新生血管的抑制作用.方法:高氧诱导幼鼠建立视网膜新生血管模型.治疗组玻璃体腔注射姜黄素;对照组注射等量生理盐水.组织切片计数突破视网膜内界膜血管内皮细胞核;免疫组化检测视网膜VEGF的表达.结果:治疗组视网膜新生血管数减少,视网膜VEGF表达较对照组明显减少,两者差异显著.结论:姜黄素可以有效抑制视网膜新生血管(CNV)形成.     

葛根素抑制视网膜新生血管机制的初步研究

目的：研究葛根素对氧诱导大鼠视网膜新生血管VEGF和PECAM-1表达影响,进一步探讨其对新生血管的抑制作用。 方法：建立氧诱导大鼠新生血管模型,并分成空白组,葛根素小剂量组及葛根素大剂量组（每组4只）,通过荧光素眼底血管造影观察各组新生血管渗漏区域改变,免疫荧光染色观察PECAM-1表达,ELISA测定玻璃体VEGF表达量。 结果：新生血管渗漏程度、PECAM-1,VEGF表达随葛根素剂量增加而减少,与空白组比较,葛根素小剂量玻璃体液中 VEGF 表达明显降低（ p<0.001), 且葛根素大剂量组降低程度明显增大(p<0.001)。 结论：葛根素可通过抑制VEGF及PECAM-1表达,抑制氧诱导大鼠视网膜新生血管增生。     

曲安奈德抑制早产儿视网膜病变视网膜新生血管的实验研究

目的:早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)是一种严重影响早产儿生存质量的疾病,目前对ROP的防治研究着重于抑制视网膜新生血管的形成,本实验通过建立高氧诱导的早产儿视网膜病变的动物模型,探讨长效糖皮质激素类药物曲安奈德在抑制视网膜新生血管方面的作用。方法:选择鼠龄为7 d的C57 BL/6 J幼鼠60只,分为大、小剂量治疗组和正常及高氧对照组。大、小剂量治疗组一眼玻璃体腔内分别注射曲安奈德5μl及2.5μl,对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(BSS)作为对照。血管灌注法视网膜铺片,观察视网膜血管情况;视网膜组织切片HE染色观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目。结果:高氧环境对照组与正常环境对照组相比,视网膜有大量新生血管形成,说明高氧诱导的早产儿视网膜病变动物模型制作成功;药物治疗组与高氧对照组相比视网膜血管分布规则、密度减少,且突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少(P<0.001)。大、小剂量治疗组相比差异不明显(P>0.05),视网膜组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。结论:曲安奈德有抑制视网膜新生血管形成的作用。     

抗血管内皮细胞生长因子抗体抑制视网膜新生血管化

目的：研究抗血管内皮细胞生长因子抗体对视网膜新生血管化的抑制作用。方法：以75%氧气和25%氮气的高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立缺血性视网膜病变模型,应用不同浓度抗血管内皮细胞生长因子抗体进行玻璃体腔内注射,在组织切片上计数和比较正常和实验条件下以及不同浓度药物注射后视网膜新生血管芽细胞核数。结果：缺血性视网膜病变小鼠模型有较多的视网膜新生血管芽细胞核数,而玻璃体内注射抗血管内皮细胞生长因子抗体的小鼠视网膜新生血管芽细胞核数明显减少（两组用药组与高氧对照组间P均〈0.01）,特别是大剂量用药组减少54.61%。结论：抗血管内皮细胞生长因子抗体能有效抑制视网膜的新生血管化。     

雌激素对高氧诱导新生鼠视网膜病变中血管生成和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨雌激素对高氧诱导新生鼠视网膜病变中血管生成和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法将Wistar新生鼠随机分为4组：正常对照组、高氧诱导组、高氧对照组和高氧雌激素组。采用高氧诱导法建立早产儿视网膜病变模型,对后两组分别皮下注射17β-雌二醇及磷酸盐缓冲溶液,视网膜苏木素-伊红染色,计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数;免疫组织化学染色,观察视网膜中TNF-α的表达。结果在第5天,各组视网膜切片中突破内界膜的新生血管内皮细胞核数及视网膜TNF-α的表达与正常对照组比较,无明显变化;在第10天,高氧诱导组和高氧对照组视网膜突破内界膜的新生血管内皮细胞核数明显增多,高氧雌激素组则明显减少。免疫组织化学显示高氧诱导组和高氧对照组视网膜中TNF-α的表达增强,而高氧雌激素组则明显减弱。结论在高氧诱导新生鼠视网膜病变中,TNF-α在视网膜上的表达增强,雌激素可抑制视网膜新生血管形成,对TNF-α的抑制可能是其机制之一。     

定量氧致SD大鼠视网膜新生血管模型的制备

目的建立可进行定量研究的视网膜新生血管大鼠模型,为今后视网膜新生血管相关疾病的机制及药物干预研究提供稳定的模型。方法80%高氧环境下饲养新生7 d的SD大鼠,持续5 d后返回正常空气环境中,另一组同龄幼鼠置于正常空气环境中饲养作为对照,鼠龄17 d时处死幼鼠,取眼球做组织切片雪夫高碘酸-苏木素染色,观察并计数突破视网膜内界膜且与内界膜有联系的视网膜新生血管内皮细胞核数。结果与正常对照组相比,高氧诱导组大鼠玻璃体腔内出现视网膜新生血管且管腔扩张。组织切片见实破内界膜且与内界膜相连的视网膜新生血管内皮细胞核数,高氧诱导组平均每张切片为(98.68±10.13)个,两组相比差别有显著统计学意义(P<0.01)。结论该大鼠模型中视网膜新生血管的发生与相对缺氧有关,模型具有可重复性强,可定量研究的优点,是进行视网膜新生血管发生机制及药物干预研究的合适模型。     

高氧对新生鼠视网膜血管的影响

目的观察高氧对新生鼠视网膜血管的影响。方法新生Wistar大白鼠40只,建立高氧诱导的新生鼠模型,心脏墨汁灌注进行视网膜形态学观察,并进行视网膜主干血管直径测量、视网膜周边血管复盖率测定及视网膜新生血管计数。结果视网膜主干血管直径高氧组明显小于空气对照组（P〈0.01）;视网膜周边血管复盖率和视网膜新生血管数量高氧组明显高于空气对照组（P〈0．01）。结论高氧诱导视网膜血管的改变可能是早产儿视网膜病变的病因之一。     

降糖明目胶囊对糖尿病视网膜新生血管抑制作用的观察

目的观察降糖明目胶囊对STZ-糖尿病小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病小鼠模型。实验小鼠随机分为正常对照组、STZ模型对照组、降糖明目胶囊治疗大、中、小剂量组(分别为临床用药的18、9、4.5倍),每天灌胃给药。在诱发糖尿病后第3、7、30天和第60天,测空腹血糖,并称体质量。在诱发后第80天,进行视网膜血管计数及病理观察。结果模型组小鼠体质量明显降低,空腹血糖明显升高,视网膜内血管计数增高,视网膜节细胞神经纤维层增厚,节细胞核排列紊乱;降糖明目胶囊大、中、小剂量治疗组可显著缓解体质量减轻症状,大、中剂量组还对小鼠空腹血糖的升高有明显的抑制作用,大、中、小剂量组可使视网膜内血管计数较STZ-糖尿病小鼠明显降低,视网膜节细胞神经纤维层改变不明显。结论降糖明目胶囊对STZ诱发糖尿病小鼠的视网膜新生血管增生有抑制作用。     

凉血活血药物对氧诱导小鼠视网膜新生血管实验中HIF-1和NF-κB的影响

目的 探讨凉血活血药物对视网膜新生血管的干预及其作用机理.方法 通过氧诱导C57BL/6幼鼠的方法建立视网膜新生血管的动物模型.随机分为正常对照组、模型对照组、凉血活血药物高、低剂量组.计数视网膜切片中突破血管内界膜的内皮细胞核数;免疫组织化学检测HIF-1和NF-κB在视网膜中的表达情况.结果 氧诱导后,幼鼠血管内皮细胞核数目明显增加,HIF-1、NF-κB明显上调,与正常对照组比,差异有统计学意义(P＜0.05),提示视网膜新生血管动物模型成功;各治疗组血管内皮细胞核数目减少、HIF-1、NF-κB下调,与模型组比,差异有统计学意义(P＜0.05);提示凉血活血药物对视网膜新生血管有抑制作用.结论 凉血活血药物可抑制视网膜新生血管的形成.     

高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中血管生成素2及酪氨酸激酶受体表达的研究

目的研究高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中血管生成素2(Ang-2)及酪氨酸激酶(Tie-2)受体表达。方法高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜缺血性病变动物模型。将30只小鼠分为2组:正常组;高氧组。视网膜切片HE染色,计数各组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数,并加以比较。于鼠龄17d取各组小鼠视网膜及前增生的血管膜,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量测定Ang-2及Tie-2受体mRNA的表达。结果吸入高氧鼠每只眼均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞,发生率为100%。高氧组Ang-2及Tie-2受体mRNA表达分别为对照组的3.7倍(P<0.05)、4.1倍(P<0.05)。结论血管抑素能有效抑制高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成,但并不影响VEGF的合成和分泌,其抗血管新生作用可能为抑制VEGF功能发挥。     

核因子Kapp-B特异性抑制剂对早产大鼠高氧性视网膜病的影响

目的:探讨核因子Kapp-B(NF-κB)抑制剂舒血宁对早产大鼠高氧性视网膜病的影响.方法:选择早产大鼠36只随机分为3组,高氧组、干预组、空气组.其中高氧组和干预组均吸入浓度≥90％氧,7d后返回空气5d;空气组置同一室内空气中.干预组腹腔注射经生理盐水20倍稀释的舒血宁0.15 ml·10 g-1·d-1,高氧组和...     

色素上皮衍生因子对鼠视网膜新生血管形成的保护作用

目的本课题通过小鼠视网膜新生血管动物模型观察玻璃体内注入色素上皮衍生因子(PEDF)对视网膜新生血管形成的影响,并探讨其治疗作用。方法选取鼠龄为7天的健康昆明小鼠28只(56只眼),随机分为4组:正常组、高氧组、PEDF干预组和对照生理盐水组,每组7只。正常对照组鼠在正常空气环境中饲养,其余3组鼠置于氧箱中,建立高氧诱导的视网膜新生血管动物模型。正常组鼠不做任何处理,PEDF干预组幼鼠在出生后第12天向玻璃体腔内注射PEDF 1μl,而对照生理盐水组注射相同体积的生理盐水。各组小鼠均在出生后第17天处死,摘除眼球制作标本,进行组织病理学观察。在光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目。采用CD31分子免疫组化方法鉴别视网膜内界膜与血管内皮细胞。结果正常对照组标本HE染色未见突破内界膜的内皮细胞核,高氧组和对照生理盐水组标本可见较多的突破内界膜的内皮细胞核,与正常组比较差异具有显著性(P<0.05),PEDF干预组的数目明显少于高氧组和对照生理盐水组,差异均具有显著性(P<0.05),且未见明显药物毒性反应。CD31分子免疫组化染色证实突破内界膜的细胞为血管内皮细胞。结论玻璃体内注入一定剂量的PEDF,能够有效抑制高氧诱导下的小鼠视网膜新生血管形成,PEDF有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

曲安奈德对核因子-κB、血管内皮生长因子在大鼠视网膜新生血管中表达的影响

目的:探讨曲安奈德对核因子-κB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠视网膜新生血管病变中表达的影响。方法:选择7 d SD幼鼠40只,其中30只大鼠建立氧诱导的视网膜新生血管病变模型,10只置于正常环境中。30只大鼠中20只大鼠出氧箱后给予玻璃体腔内注射曲安奈德1μl(0.04 mg),对侧眼注射平衡盐溶液(balanced saltsolution,BSS)作为对照,分为高氧+药物治疗组和高氧+BSS液对照组,每组20只眼;另10只大鼠作为高氧对照组。视网膜组织切片HE染色,免疫组织化学法检测NF-κB及VEGF的表达。结果:高氧+药物治疗组与高氧对照组及高氧+BSS组相比,新生血管内皮细胞核数目明显减少(P0.01),高氧+药物治疗组的NF-κB及VEGF的表达均低于高氧对照组及高氧+BSS组(P0.05)。VEGF表达升高的同时,NF-κB的表达呈升高趋势。结论:曲安奈德明显抑制NF-κB及VEGF的表达,即有抑制新生血管形成的作用,NF-κB与VEGF的表达呈正相关,在新生血管形成过程中起协同作用。     

厄多司坦对癫痫大鼠海马神经元损伤的保护作用及对氧化应激的影响

目的：探讨厄多司坦对癫痫大鼠海马神经元的保护作用,研究癫痫大鼠海马神经元凋亡与氧化应激的关系。方法：30只SD大鼠随机分为正常对照组、戊四氮组及厄多司坦组,每组10只。利用腹腔内注射戊四氮制作癫痫模型,厄多司坦组大鼠行腹腔内注射厄多司坦预处理。观察大鼠行为表现;用比色法检测大鼠海马丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;HE染色和TUNEL方法在光镜下观察神经元损伤情况。结果：与戊四氮组比较,厄多司坦组大鼠癫痫发作时间较明显缩短（P<0.05）,SOD及GSH-Px活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,MDA含量明显降低（P<0.01）,大鼠海马嗜酸性神经元显著减少（P<0.01）,TUNEL阳性细胞数显著减少（P<0.01）。癫痫组（戊四氮组与厄多司坦组）大鼠TUNEL阳性细胞数量与SOD活性呈负相关（r=－0.482,P<0.05）,与MDA含量呈正相关（r= 0.875,P<0.01）。结论：厄多司坦可能通过降低癫痫发生时氧化应激水平,减少癫痫发作时间,减轻神经元损伤程度,起到保护神经的作用。     

三七对酒精性肝病防治作用的研究

目的 观察三七对酒精性肝病的防治作用.方法 70只SD雄性大鼠随机分为正常组10只,模型组、三七高剂量组、三七低剂量组和硫普罗宁组各15只;以56度红星二锅头5g/(kg·d)、玉米油2ml/(kg·d)和吡唑27.2 mg/(kg·d)每天1次灌胃,连续14周建立酒精性肝病模型,同时分别以1.2g/(kg·d)和0.6g/(kg·d)的三七粉和100mg/(kg·d)的硫普罗宁灌胃进行干预,均连续14周.全自动生化仪测定各组大鼠血脂、血清肝功能水平,ELISA法检测透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)含量,常规HE及Masson染色光镜观察肝组织的脂肪变、炎症及纤维化程度.结果 模型组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度、血清CHOL、HDL-C、LDL-C、AST、ALT、HA、LN水平均较正常组明显增高(P＜0.01,P＜0.05),但血清TG水平则无明显升高(P＞0.05).三七高低剂量组、硫普罗宁组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度、血清AST、ALT、血清HA、LN水平较模型组明显减轻(P＜0.01,P＜0.05),但血清TG、CHOL、HDL-C、LDL-C水平与模型组比差异无显著性差(P＞0.05).结论 (1)采用白酒-玉米油-吡唑混合液灌服大鼠14周能成功复制ALD模型,表现肝组织脂肪变和炎细胞浸润、血脂紊乱、血清肝功能及肝纤维化指标升高.(2)三七可明显减轻酒精性肝病大鼠肝组织脂肪变和炎症程度,改善血清肝功能和纤维化指标.     

双黄连对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护机制

目的从抗氧化的作用途径探讨双黄连对缺血再灌注肝脏损伤大鼠的治疗作用及其机制.方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为五组以25%乌拉坦6 mL/kg腹腔注射,麻醉后固定：（1）正常对照组（n=10）;（2）肝缺血再灌注组（n=10）,复制肝I/R模型（缺血30 min,再灌注6 h）;（3）双黄连低、中、高剂量组（n=30）,术前30 min鼠股静脉分别缓慢推注双黄连注射液低剂量（1 mL/kg）、中剂量（3 mL/kg）、高剂量（10 mL/kg）,复制肝I/R模型.6 h后取各组大鼠新鲜血液,并处死取肝左叶;HE染色光镜下观察肝组织病理形态学变化,生物化学方法检测血清谷丙转氨酶（ALT）含量,以及肝脏组织匀浆丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）和超氧化物歧化酶（SOD）活性.结果 （1）肝组织病理形态学变化：肝I/R组肝脏淤血明显,以门静脉为中心向周边呈放射状排列,肝细胞可见不同程度的肿胀变性和气球样变性,偶尔有点状出血,晚期则主要以肝细胞局灶性坏死和片状坏死为主;双黄连各剂量组均表现为肝损伤程度明显降低呈正相关;（2）血清ALT含量显示：与正常对照组比较,肝I/R组ALT含量明显增高（P〈0.05）;与肝I/R组比较,双黄连各剂量组ALT含量均降低（P〈0.05）;（3）生化指标显示：与正常对照组比较,肝I/R组肝脏组织NO、MDA含量及NOS活性均增高（P〈0.01）,而SOD活性明显降低（P〈0.01）;与肝I/R组比较,双黄连各剂量组肝组织NO、MDA含量及NOS活性均降低（P〈0.05）,而SOD活性显著提高（P〈0.01）.结论双黄连注射液静脉给药能提高肝脏内相关抗炎、抗氧化机制,从而减轻肝I/R损伤程度.     

RCS大鼠视网膜色素变性过程中内源性干细胞激活的初步研究

目的研究遗传性视网膜色素变性大鼠(Royal College of Surgeon's rat,RCS rat)在视网膜变性发展过程中是否有内源性视网膜干细胞(retinal stem cells,RSCs)激活.方法RCS-p (视网膜含色素的变性大鼠)按出生后视网膜变性的发展状况分为变性早期(RCS 15 d)、中期(RCS 30 d)、晚期(RCS 90 d)3个时相点,分别采用相应时期的RCS-rdy p (视网膜含色素的正常大鼠)作为对照组(control groups,C15 d,C30 d,C90 d),每组4只8眼,对各组视网膜切片进行免疫荧光组织化学(抗Chx10)实验,以鉴定视网膜干细胞;进一步采用Western blot检测各组视网膜神经上皮总蛋白中Chx10表达.结果①各正常组及变性15 d大鼠视网膜各层抗Chx10免疫荧光检测均为阴性,变性中、晚期视网膜光感受细胞层部位Chx10免疫荧光阳性;②Western blot检测各变性组视网膜神经上皮总蛋白中Chx1O均有表达,但变性中期Chx10表达显著高于早期和晚期(P＜0.05).结论 RCS大鼠变性过程中视网膜感光细胞层出现视网膜干细胞激活.     

Pulsinelli四血管法大鼠全脑缺血模型制作方法的改进

目的探讨改进大鼠Pulsinelli四血管法全脑缺血模型的制作方法。方法健康雄性SD大鼠60只随机分为对照组10只、假手术组10只和模型组40只。模型组大鼠在Pulsinelli四血管闭塞法全脑缺血模型的基础上采用3阶段制作,第1阶段:游离双侧颈总动脉,备线,缝合皮肤;第2阶段:沿第1颈椎内斜向上的神经来寻找翼突孔,用尖端磨得细长的电烙铁分2次灼烧双侧椎动脉;第3阶段:24 h后夹闭颈总动脉10 min。假手术组除不凝闭椎动脉和不夹闭颈总动脉外,其他操作与模型组相同。对照组不做任何处理。结果大鼠造模成功27只,造模成功率为67.5%,模型制作成功的动物存活率为96.3%。苏木素-伊红染色显示对照组大鼠与假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐,细胞无水肿、变性;模型组大鼠海马CA1区大量神经元变性坏死。结论采用此改进的手术方法可有效提高大鼠Pulsinelli四血管法全脑缺血模型制作成功率和动物存活率。