顺铂增强前列腺癌细胞肿瘤坏死因子-α敏感性的研究

目的:探讨顺铂(CDDP)增强肿瘤坏死因子- α(TNF- α)诱导PC- 3M细胞凋亡的可能机制。方法:比较TNF- α、CDDP单用和两药按不同给药顺序联用时对人前列腺癌细胞PC -3M的杀伤作用,并检测白介素- 1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)的表达水平。结果:50μg/L TNF -α和1 mg/L CDDP对PC 3M的抑制率分别仅为(7.83±1.26)%和(8.12±1.54);亚毒性浓度(1 mg/L)CDDP作用24 h后,再给予亚毒性浓度(20μg/L) TNF- α,抑制率(71. 52±3.23)%和晚期凋亡细胞率(56.60±5.86)%均较TNF -α组显著增加,同时给药或先TNF -α后CD -DP,抑制率和凋亡细胞无明显增加;20μg/L -TNF α作用后,细胞内cFLIP平均光吸收度值(A)较对照组明显增加,而1 mg/L CDDP使cFLIP平均A值显著降低。结论:PC -3M细胞对TNF -α不敏感,亚毒性浓度CDDP预处理使PC -3M细胞获得TNF -α敏感性,其致敏作用可能是通过下调cFLIP的水平而产生的。     

糖尿病大鼠椎间盘中白介素-1α和肿瘤坏死因子-α的含量变化

目的 :测定糖尿病大鼠椎间盘组织中白介素 1α (IL 1α)和肿瘤坏死因子 α (TNF α)的含量变化 ,并对其意义进行探讨。方法 :3 6只SD大鼠随机分为 2组 ,每组 18只 ,处理组用腹腔单次注射链脲佐菌素溶液 (strep tozotocin ,STZ)造成糖尿病。分别在第 1、 3、 4个月时 ,采用免疫酶联法 (ELISA法 )测定椎间盘组织中IL 1α和TNF α。结果 :在 3个不同时期 ,糖尿病组中IL 1α和TNF α的含量均明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。糖尿病组中IL 1α和TNF α的含量在 3个不同时期差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :糖尿病时 ,椎间盘组织中IL 1α和TNF α的含量明显增加 ,并维持在较高水平 ,这可能与造成糖尿病患者椎间盘突出术后效果相对差有关     

急性重症胆管炎大鼠肝组织高迁移率族蛋白-1对肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨急性重症胆管炎（ACST）大鼠肝组织高迁移率族蛋白1（HMG-1）改变及其对肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的调节作用。方法通过制作ACST大鼠模型，正丁酸钠干预，不同时相点检测肝组织HMG-1及TNF-α表达，同时观察肝功能及结构改变。结果ACST组12-24h肝组织HMG-1和TNF-amRNA表达均显著增强（P〈0．05或0．01）。正丁酸钠处理可显著抑制ACST后12-24h肝组织HMG-1mRNA表达（P〈0．01），并明显下调肝组织TNF-αmRNA表达及TNF-α水平（P〈O．05或0．01），同时血清谷丙转氨酶（ALT）水平显著降低（P〈0．05或0．01），肝脏的病理形态得到明显改善。结论ACST大鼠肝组织HMG-1表达可促进局部TNF-α的合成与释放，从而诱导ACST大鼠急性肝功能损害。     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS-398对紫外线诱导的永生化人类角质形成细胞白介素-1α和α肿瘤坏死因子表达的影响

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX -2)抑制剂NS-398对长-中波紫外线诱导的永生化人类角质形成细胞(HaCaT)白介素1α(IL-1α)、a肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响,探讨NS398对人类皮肤光损伤的保护作用机制.方法 将传代培养的HaCaT细胞分为单纯照光组、NS-398 干预组和空内对照组.单纯照光组用长-中波紫外线(UVA-UVB)照射,NS-398干预组预先用不同浓度NS-398处理后接受长-中波紫外线照射,空白对照组常规条件下培养不做处理.用酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测各组细胞上清液中IL-1α、TNF-α的表达.结果 单纯照光组IL-1α、TNF-α表达量明显高于空白对照组;NS 398干预组IL-1α、TNF-α表达量明显低于单纯照光组,且呈NS-398浓度依赖性.结论 NS-398能够抑制紫外线照射下HaCaT细胞IL -1α、TNF-α表达,从而可能对人类皮肤光损伤具有保护效应.     

肿瘤坏死因子α对脂多糖诱导的肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的 观察脂多糖(LPS)体外作用于大鼠肝星状细胞(HSC)时肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和结缔组织生长因子(CTGF)表达变化,探讨TNF-α对LPS诱导的HSC中CTGF表达的影响.方法 用一步密度梯度离心法分离大鼠HSC,体外培养LPS处理HSC,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同LPS浓度处理的HSC CTGF mRNA表达水平,并用ELISA双抗体夹心法测定TNF-α浓度.结果 TNF-α水平随LPS浓度增加而增加,LPS可上调CTGF mRNA的表达,TNF-α浓度及CTGF mRNA表达水平呈一定的平行关系.结论 LPS可上调HSC中CTGF mRNA表达,该过程可能是通过TNF-α介导的.     

急性重症胆管炎大鼠肝组织高迁移率族蛋白-1对肿瘤坏死因子-表达的影响

目的 探讨急性重症胆管炎(ACST)大鼠肝组织高迁移率族蛋白1(HMG-1)改变及其对肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的调节作用.方法 通过制作ACST大鼠模型,正丁酸钠干预,不同时相点检测肝组织HMG-1及TNF-α表达,同时观察肝功能及结构改变.结果 AGST组12～24 h肝组织HMG-1和TNF-a mRNA表达均显著增强(P＜0.05或0.01).正丁酸钠处理可显著抑制ACST后12～24 h肝组织HMG-1 mRNA表达(P＜0.01),并明显下调肝组织TNF-α mRNA表达及TNF-α水平(P＜0.05或0.01),同时血清谷丙转氨酶(ALT)水平显著降低(P＜0.05或0.01),肝脏的病理形态得到明显改善.结论 ACST大鼠肝组织HMG-1表达可促进局部TNF-α的合成与释放,从而诱导ACST大鼠急性肝功能损害.     

正常妊娠与自然流产小鼠模型蜕膜组织和血清中肿瘤坏死因子及其受体的表达

目的比较正常妊娠与自然流产小鼠模型蜕膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及其受体1(TNFR1)和血清可溶性肿瘤坏死因子受体1(sTNFR1)的表达,探讨其与不明原因自然流产的关系。方法建立正常妊娠小鼠模型CBA×BALB/C和自然流产模型CBA×DBA/2。采用免疫组化SABC法测定两组模型孕13 d蜕膜组织TNF-α、TNFR1表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两组模型孕13 d血清sTNFR1表达水平。结果与正常妊娠模型相比,自然流产模型蜕膜组织中TNF-α、TNFR1表达显著升高(P<0.01);血清sTNFR1表达水平也高于正常妊娠模型(P<0.05)。结论TNF-α、TNFR1、sTNFR1可能与自然流产的发生发展有关。某些病理情况引发的蜕膜TNF-α、TNFR1表达增加也许是自然流产发生的原因之一,sTNFR1水平升高可能对妊娠具有自我保护和自我稳定的生理意义。     

橙皮苷对急性肝损伤模型小鼠肿瘤坏死因子 α和干扰素 γ表达的影响

目的 研究橙皮苷对刀豆蛋白A（Con A）致小鼠急性肝损伤的保护作用及其对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（IFN-γ）表达的影响。方法72只SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机均分为正常对照组、模型对照组和橙皮苷组。橙皮苷组给小鼠连续灌胃橙皮苷悬浊液1 000 mg.kg-1,灌胃10 d,模型对照组灌胃等量0. 5%羧甲基纤维素钠,模型对照组和橙皮苷组均用Con A诱导小鼠急性肝损伤模型,测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）的含量;苏木精 伊红（HE）染色检查肝组织病理变化,反转录 聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肝组织TNF-α和IFN-γ mRNA水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清TNF-α和IFN-γ水平。结果橙皮苷预处理后,与模型对照组比较,橙皮苷组ALT和AST水平显著降低（P<0. 01）,肝细胞坏死及炎性细胞浸润明显减轻,肝组织TNF-α和IFN-γ mRNA表达明显下调（P<0. 01）。橙皮苷组血清TNF-α和IFN-γ水平2 h分别为（717. 05±205. 22）,（611. 06±92. 82）pg.mL-1,6 h分别为（811. 56±167. 47）,（786. 19±215. 44）pg.mL-1。橙皮苷组TNF-α和IFN-γ水平较模型对照组明显降低（P<0. 01）,但Con A注射6 h,橙皮苷组TNF-α水平与模型对照组比较,差异无统计学意义（P＞0. 05）。结论橙皮苷预处理对Con A致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用机制与其抑制TNF-α和IFN-γ的表达有关。     

信号转导及转录激活子1和3抑制剂对高迁移率族蛋白B1诱导鼠巨噬细胞合成肿瘤坏死因子α的影响

目的探讨信号转导及转录激活子1(STAT1)和3抑制剂对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导巨噬细胞合成肿瘤坏死因子α(TNFα)的影响。方法取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞置24孔培养板中(1×106细胞/孔),培养3d后以HMGB1刺激,采用氟达拉滨(Fludarabine,STAT1特异性抑制剂)及雷帕霉素(Rapamycin,STAT3特异性抑制剂)进行干预。观察HMGB1刺激与肿瘤坏死因子αmRNA表达和蛋白释放的时效、量效关系,Fludarabine和Rapamycin处理对TNFαmRNA表达和蛋白释放的影响。结果(1)HMGB1可导致大鼠腹腔巨噬细胞TNFα基因表达明显升高,于攻击后24h达峰值,至36h减弱。HMGB1的用量为10μg/ml时,TNFα基因表达明显增强;(2)HMGB1可诱导大鼠腹腔巨噬细胞TNFα蛋白早期释放,4h即可达到高峰,8h后减弱。随着HMGB1刺激剂量从5μg/ml增大到25μg/ml,TNFα蛋白释放持续增强;(3)Fludarabine和Rapamycin可抑制大鼠腹腔巨噬细胞TNFα基因表达,但不能影响TNFα蛋白的释放。结论STAT1和STAT3抑制剂可显著下调巨噬细胞由HMGB1诱导的TNFα基因表达,但不能影响其早期(<24h)蛋白释放。     

热休克蛋白90抑制杀伤效应剂对PC-3M细胞的研究

目的：观察热休克蛋白90（HSP90）抑制剂对前列腺癌PC3M细胞增殖活性、细胞周期和凋亡的影响，初步探讨其作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度的HSP90抑制剂对PC3M细胞增殖的影响；采用细胞免疫化学测定HSP90抑制剂对PC3M细胞HER-2表达的影响；采用流式细胞分析术（FCM）检测细胞凋亡和细胞周期。结果：高浓度（500nmol／L）HSP90抑制剂可杀伤PC3M细胞，低浓度（10、50、125、250nmol／L）条件下则主要发挥生长抑制作用。HSP90抑制剂可使PC3M细胞HER-2表达水平降低，并在500nmol／L浓度时诱导细胞凋亡。结论：HSP90抑制剂较为明显地抑制PC-3M细胞生长，并在高浓度时杀伤癌细胞；其作用机制可能与下调HER-2的表达有关。     

热休克蛋白90抑制剂对PC-3M细胞杀伤效应的研究

目的:观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂对前列腺癌PC-3M细胞增殖活性、细胞周期和凋亡的影响,初步探讨其作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的HSP90抑制剂对PC-3M细胞增殖的影响;采用细胞免疫化学测定HSP90抑制剂对PC-3M细胞HER-2表达的影响;采用流式细胞分析术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期.结果:高浓度(500 nmol/L)HSP90抑制剂可杀伤PC-3M细胞,低浓度(10、50、125、250 nmol/L)条件下则主要发挥生长抑制作用.HSP90抑制剂可使PC-3M细胞HER-2表达水平降低,并在500 nmol/L浓度时诱导细胞凋亡.结论:HSP90抑制剂较为明显地抑制PC-3M细胞生长,并在高浓度时杀伤癌细胞;其作用机制可能与下调HER-2的表达有关.     

苏拉明对前列腺癌PC-3M细胞生长的影响

目的 :观察苏拉明对激素非依赖性前列腺癌 (HRPC)PC 3M细胞生长、细胞周期和凋亡的影响 ,初步探讨其作用机制。　方法 :锥虫蓝活细胞拒染法和四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法检测不同浓度小牛血清 (2 %、5 %、1 0 % )、不同浓度的苏拉明 (1 0、50、1 0 0、2 0 0 μmol/L)对PC 3M细胞增殖的影响 ;流式细胞术 (FCM )测定苏拉明对PC 3M细胞增殖周期分布和凋亡的影响。　结果 :高浓度 (2 0 0 μmol/L)苏拉明可杀伤PC 3M细胞 ,低浓度 (1 0、50、1 0 0μmol/L)条件下则主要发挥生长抑制作用。高浓度 (1 0 % )小牛血清存在时苏拉明仍可发挥抑制和杀伤作用 ,但较低浓度 (5 %、2 % )小牛血清时弱。苏拉明可使PC 3M细胞发生细胞周期G0 /G1 期阻滞 ,并在 2 0 0 μmol/L浓度时诱导细胞凋亡。　结论 :苏拉明较为明显地抑制PC 3M细胞生长 ,并在高浓度时杀伤癌细胞 ;除抑制或阻断细胞因子和生长因子调控的增殖作用外 ,可能参与阻滞细胞周期分布和诱导细胞凋亡     

Survivin对PC-3细胞微小RNA表达的影响

目的 检测Survivin抑制后PC-3细胞微小RNA( miRNAs)表达谱的变化,探讨Survivin与相关miRNAs之间的关系.方法 利用负载Survivin短发夹RNA (shRNA)重组腺病毒( pGSadeno-sur shRNA),体外转染PC-3细胞,96 h后,收集细胞提取RNA,检测miRNA表达谱的变化.结果 共有650个miRNAs表达信号在雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞中可以被检测到,有9个miRNAs的表达信号水平高于1000,其中的6个miRNAs表达谱同实验组比较差异有统计学意义(P＜0.01).实验组与空白对照组比较有75个miRNAs表达差异有统计学意义(P＜0.01),其中42个表达上调、33个表达下调;阴性对照组与实验组比较有27个miRNAs表达差异有统计学意义(P＜0.01),其中22个表达上调、5个表达下调;实验组与空白对照组及阴性对照组比较均表达上调的miRNAs有15个,表达下调的miRNA有1个.结论 抑制PC-3细胞中Survivin的表达对miRNAs 表达谱有明显影响,为明确相关miRNAs在PC-3细胞中的作用提供新线索.     

短发夹状RNA对PC-3M细胞端粒酶逆转录酶基因表达和端粒酶活性的影响

目的:研究短发夹状RNA(shRNA)对PC 3M细胞中端粒酶逆转录酶(hTRT)基因表达及端粒酶活 性的影响。方法:构建针对hTRT基因的shRNA表达质粒psilencer TRT,在质脂体介导下转染人前列腺癌PC 3M细胞,应用RT PCR及免疫组织化学检测hTRTmRNA及蛋白表达水平,应用SYBR Green染色法检测端粒 酶活性的变化。结果:重组体psilencer TRT转染细胞24h和48h后显著下调hTRTmRNA及蛋白水平,作用 48h后,其抑制率分别为85.39%和79.17%,较空白对照组差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着时间的延 长,端粒酶活性亦有明显下降(P<0.01)。结论:利用短发夹状RNA干扰技术能有效抑制靶基因的表达,为前 列腺癌的基因治疗提供新思路。     

HSP 70反义寡核苷酸逆转LNCaP和PC-3m细胞耐药性的研究

目的：探讨热休克蛋白（HSP70）反义寡核苷酸逆转入前列腺LNCaP及PC－3m耐药性的作用。方法用MTT法和成集落试验测定了10μmol/L,HSP70反义寡核苷酸作用后不同浓度阿霉素、丝裂霉素C对LNCaP和PC－3m生长抑制率的影响。结果10μmol/LHSP70反义寡核苷酸可以显著增加4－12μg/ml阿霉素和10－100μg/ml丝裂霉素－C对PC－3m的生长抑制率以及0．01－0．08μg/ml阿霉素和1－6μg/ml丝裂霉素C对LNCaP的生长抑制率,差别有显著性意义（P＜0．05）。抑制率均超过505。结论HPS70与前列腺癌细胞的耐药性有关;HSP70反意义（P＜0．05）。报制率均超过505。结论HSP70与前列腺部细胞的耐药性有关;HSP70反义寡核苷酸可以特异性地逆转二种不同生物学特性的前列腺癌细胞的耐药性。为临床前列腺癌化疗提供了新方法。     

双氢青蒿素对前列腺癌细胞PC-3M生长的影响及其机制探讨

目的:观察双氢青蒿素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M细胞凋亡和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的双氢青蒿素分别作用于PC-3M细胞48 h,MTT法检测细胞生长活性;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分光光度法检测细胞凋亡过程中caspase-3、caspase-8活性变化;半定量RT-PCR法检测PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达;Western印迹法检测细胞VEGF蛋白表达。结果:双氢青蒿素能显著抑制PC-3M细胞的增殖,与对照组(0μmol/L)的细胞凋亡率(2.92±0.45)%相比,各剂量组(25、50、100μmol/L)的细胞凋亡率[(8.85±0.74)%,(12.83±0.84)%,(18.65±1.24)%]显著增加,caspase-8[(0.47±0.05)U/μg vs(1.22±0.15)U/μg,(1.76±0.07)U/μg,(2.91±0.24)U/μg]、caspase-3[(0.44±0.07)U/μg vs(0.95±0.08)U/μg,(1.48±0.14)U/μg,(2.92±0.45)U/μg]活性显著增加,呈剂量依赖性(P<0.01)。PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达和蛋白表达呈剂量依赖性降低。结论:双氢青蒿素能显著抑制体外PC-3M细胞的生长,并促进其凋亡,机制可能与增加凋亡蛋白酶和抑制VEGF表达有关。     

基因干扰技术抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP基因mRNA表达并诱导细胞凋亡

目的研究人前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP基因干扰后其mRNA表达水平及细胞凋亡的效果。方法设计、构建多个针对90K/Mac-2BP的干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA),转染前列腺癌PC-3细胞,筛选出对90K/Mac-2BP基因干扰效率最高的90K/Mac-2BP siRNA,采用RT-PCR、Western blot技术检测90K/Mac-2BP mRNA及蛋白表达,酶标仪测定PC-3细胞的增殖,流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡率。结果实验组和对照组前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA的表达强度分别为(19.23±1.33)%、(46.34±1.26)%,细胞凋亡率分别为(16.64±1.18)%、(2.52±0.19)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。表明构建的表达载体有效抑制了90K/Mac-2BP mRNA表达并诱导细胞凋亡。结论 RNA干扰可有效抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA和蛋白表达,并诱导细胞凋亡。     

蓝舌病毒湖北株对人前列腺癌PC-3细胞杀伤效应的研究

目的体外实验研究蓝舌病毒湖北株3（BTV-HbC3）对人前列腺癌PC-3细胞的杀伤效应并且初步探讨BTV-HbC3靶向性溶瘤的机制。方法观察PC-3细胞感染BTV-HbC3后所致的病变效应（CPE）变化;透射电镜观察细胞感染病毒后超微结构的变化;CCK-8法研究病毒致细胞病变效应的特征;DNA Ladder分析病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪检测病毒对PC-3细胞凋亡的影响。结果 BTV-HbC3感染PC-3细胞后可见到明显的细胞效应;透射电镜发现胞浆内有大量病毒颗粒和典型细胞凋亡的形态变化;CCK-8法检测到病毒明显抑制细胞生长;DNA Ladder分析见阶梯状条带;流式细胞仪检测到明显细胞凋亡的存在,可见明显的亚二倍体峰。结论 BTV-HbC3在体外可有效地杀伤PC-3细胞,并能诱导其凋亡。