尕代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞及成熟细胞系生长特性的比较

目的通过对原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞及成熟细胞系生长特性进行比较,为类风湿关节炎（RA）研究用细胞提供多重选择。方法分离培养原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞,传至第三代,与成熟细胞系镜下观察细胞形态。此外,以相同细胞数接种,观察细胞增殖速度。结果形态上原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞与成熟细胞系有所差别,且增殖速度细胞系快于原代细胞。结论成熟细胞系可在一定程度上反映原代细胞的状态,并用于RA相关疾病研究。     

Wnt调控类风湿性关节炎研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种主要以持续关节组织滑膜增生、软骨侵蚀、关节损坏为主要特征的累及多关节的系统性疾病,发病机制不明。滑膜衬里层成纤维样滑膜细胞(FLS)在RA发病机制中起关键作用。Wnt通路广泛参与细胞癌变和肿瘤细胞的侵袭、转移等,在肿瘤的发病机制中发挥重要调控作用。Wnt通路同样调控了RA的发生发展,下调RA Wnt和Fz表达能够抑制FLS活化、增殖,提示Wnt通路Wnt蛋白可能是潜在的RA治疗靶点。     

雷公藤甲素对类风湿关节炎患者滑膜成纤维样细胞增殖的体外抑制作用研究

目的:研究雷公藤甲素(TP)对体外培养的类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法:从5例RA患者的膝关节置换术或滑膜切除术中获得滑膜组织,经分离、培养、鉴定得到FLS后分别与0(空白对照)、50、100、200 nmol/ml TP共孵育24、48、72 h。采用MTT法检测TP对FLS增殖的影响,计算增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:50、100、200 nmol/ml TP对FLS的增殖抑制率为17.46%~52.56%,且抑制作用与药物浓度呈正相关。与空白对照组比较,100、200 nmol/ml TP作用后G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,差异有统计学意义(P<0.05);200 nmol/ml TP可诱导细胞凋亡。结论:TP对RA患者体外培养的FLS具有一定的增殖抑制作用并可诱导其凋亡,这可能是TP治疗RA的机制之一。     

成纤维样滑膜细胞能量代谢异常关键分子在类风湿关节炎中的研究进展

代谢组学研究显示类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者代谢紊乱。然而,与RA相关单个类型细胞的代谢特征却很少被报道。成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)是关节滑膜处主要的细胞类型,通过侵袭关节软骨,导致关节破坏。在炎症组织微环境中,RA-FLS葡萄糖、脂质、氨基酸等关键营养素的代谢发生改变,这些代谢变化参与了FLS异常活化和滑膜炎症。该文总结了近年来关于RA-FLS能量代谢异常关键分子的研究进展,为阐明RA病理机制及发现新的药物靶点提供依据。     

IL-27及其在类风湿关节炎中的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种以滑膜过度增生、血管翳形成,最终导致软骨、骨及关节结构破坏为主要表现的系统性自身免疫病。各种细胞因子、免疫细胞及成纤维样滑膜细胞(FLS)在其炎性发展及关节破坏过程中起着重要角色。研究表明白细胞介素-27(IL-27)可以调节上述免疫细胞的增殖、分化,提示它可能通过不同的作用机制参与类风湿关节炎的发生、发展及转归。本文就IL-27及其在类风湿关节炎中的研究进展作一综述。     

几种新型小分子核糖核酸与类风湿性关节炎关系的研究进展

目的:为临床治疗类风湿性关节炎(RA)提供思路和参考。方法:以"小分子核糖核酸""类风湿关节炎""microRNAs""miRNAs"等为关键词,组合查询2006-2013年万方数据库和PubMed数据库中有关小分子核糖核酸(microRNAs或miRNAs)和RA的研究文献,对miRNAs在RA中的研究进展进行综述。结果与结论:共查询到文献130篇,其中有效文献29篇。共有11种miRNAs和RA关系的研究,包括miRNA-221/222、miRNA-323-3p、miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-223、miRNA-24、miRNA-26a、miRNA-125a-5p、miRNA-18a、miRNA-34a、miRNA-203等。其在人RA或动物RA模型的滑膜组织或滑膜细胞中均有不同程度的表达;加强对miRNAs与RA关系的研究,对明确RA的发病机制具有重要意义,同时也可为临床提供治疗或诊断的潜在靶点。     

两种方法分离培养类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞的比较

目的比较体外分离培养成纤维样滑膜细胞（FLS）的方法。方法滑膜组织来自关节镜清洗术的活动期类风湿关节炎患者,分别采用消化酶培养法、组织块培养法分离培养FLS。采用倒置相差显微镜以及流式细胞术对第3～4代FLS进行鉴定。结果 2种原代分离培养的方法均可成功培养出FLS。传代可使FLS达到形态学上的纯化要求,倒置相差显微镜观察均符合FLS的形态结构特征,流式细胞术检测示CD44以及CD90呈强阳性,CD55呈弱阳性。组织块法培养法FLS成功率较高,细胞游出时间较早,细胞损伤小。结论组织块培养法适合于FLS的培养,第3～4代细胞的数目、活性及纯度符合进一步实验的要求。     

诃子抗类风湿性关节炎的药效物质基础及药理作用研究

目的:为进一步研究诃子抗类风湿性关节炎(RA)的药效物质基础及药理作用机制提供参考。方法:以"诃子""类风湿性关节炎""药理""Rheumatoid arthritis""Terminalia chebula"等为关键词,组合查询自建库起至2017年5月1日在PubMed、Web of Science、Embase、中国知网、维普等数据库中的相关文献,从RA的发病机制及病理过程、西药和中药治疗RA的现状、诃子抗RA的药效物质基础和药理作用等方面进行综述。结果与结论:共检索到相关文献261篇,其中有效文献39篇。RA发病机制复杂,目前尚无特效治愈药。化学药与生物制剂的治疗目标为使疾病缓解或处于低疾病活动状态;中药则以祛风除湿、通络止痛为治疗原则。酚酸类化合物和萜类化合物是诃子发挥抗RA的主要药效物质基础。诃子具有镇痛抗炎、调节免疫、诱导细胞凋亡和保护软骨等多方面的抗RA药理作用,既可改善RA症状也可控制RA病程发展。目前关于诃子抗RA的药效物质还缺乏系统性基础研究,主要集中于酚酸类成分,且大多属于药效学的观察研究,缺乏较为深入的机制探讨。     

基于FLS细胞ERK信号通路机制的THD抗CIA作用

目的:研究沙利度胺(thalidomide,THD)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型CIA大鼠血清炎症因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮细胞生长因子(vascular endo-thelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-1,-2,-9(matrix metalloproteinase-1,-2,-9,MMP-1,-2,-9)表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,探讨THD治疗RA的可能机制。方法:采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,通过免疫组化观察大鼠关节滑膜血管新生(微血管密度,MVD)情况;THD治疗后用West-ern Blot法检测IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1,-2,-9表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS;用Western Blot法检测不同浓度的THD处理后的CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK表达情况。结果:CIA大鼠造模成功,通过THD治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子IL-1β、TNF-α的表达,较造模组分别降低了56%,48%;并能降低血管新生相关因子VEGF、MMP-1,-2,-9表达,较造模组分别降低了52%,52%,13%,33%。并减轻了CIA大鼠的关节炎症及关节滑膜的血管新生;在原代培养CIA大鼠滑膜细胞中THD对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,不同浓度的THD作用于FLS,可使p-ERK表达降低(P<0.05),低、中、高浓度的THD组p-ERK分别降低了54%,70%,84%。结论:THD能够调节炎症因子和血管新生相关因子的表达,从而发挥抗炎及抗血管新生的作用,其机制可能与调节ERK信号转导通路有关。     

miR-142-3P靶向ADAM17对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞活性的影响及其作用机制研究

目的:研究微小R-142-3P(miR-142-3P)靶向解聚素金属蛋白酶17(ADAM17)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)活性的影响及其作用机制.方法:购买12份类风湿关节炎-外周血单个核细胞(RA-PBMC),随机分为4个RA-PBMC组,每组3份,3份正常人外周血单个核细胞(PBMC)记为正常PB...     

针对类风湿关节炎分子靶点的治疗药物研究进展

治疗类风湿关节炎(rheum atoid arthritis,RA)的药物虽有很多,但由于RA的发病机制和病因还没有完全阐明,目前还没有一种药物能够根治RA。随着对炎症过程的认识不断深入,特别对信号转导路径的认识,人们一直努力找寻一些调理疾病进程的具有特异性的干扰信号转导路径新的治疗药物。TNF-α阻断剂和IL-1受体拮抗剂等细胞因子拮抗剂在临床试验中治疗RA起到明显的效果。调节滑膜细胞G蛋白-AC-cAMP和Ras-MAPKs信号通路是中药白芍总苷和木瓜总苷发挥抗滑膜细胞增殖的重要分子机制。该文将对一些以细胞因子、炎症介质、细胞表面抗原、信号转导为靶点的药物研究情况进行综述。     

佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞模型建立及特征分析

目的建立佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞(AAFLS)原代培养方法及其特性分析,探讨AA-FLS作为RA体外研究细胞模型的可行性。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)免疫SD大鼠,建立佐剂型关节炎大鼠模型,取大鼠双侧膝关节滑膜组织进行原代细胞培养,显微镜下观察细胞形态;免疫细胞化学方法鉴定细胞;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA方法测定细胞上清中TNF-α和IL-1β水平;Hochest 33258法检测细胞凋亡状态;Western bolt方法检测AA FLS细胞线粒体凋亡通路重要调控蛋白Bcl-2和Bax及Pro-caspase-3和Cleave-caspase-3水平的表达。结果胶原酶法分离获得的滑膜成纤维细胞经传代纯化,呈梭形的细胞占0.95以上,免疫细胞化学鉴定显示滑膜成纤维细胞vimentin表达呈阳性,CD68表达为阴性;AA模型大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性较正常大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性明显提高,细胞凋亡率降低;在培养的细胞上清中TNF-α和IL-1β水平明显升高;线粒体凋亡通路调控蛋白Bcl-2水平明显升高,而Bax蛋白表达水平明显降低,同时AA-FLS细胞中pro-caspase-3表达量增加。结论 AA-FLS具有增殖活跃、凋亡抑制和分泌高水平促炎性细胞因子的生物特性,可作为体外筛选抗RA药物的细胞模型。     

金雀异黄素对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡及其机制的研究

目的研究金雀异黄素(Genistein,Gen)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其PI3K/AKT信号转导通路的影响。方法采用0、50、100、200μmol.L-1的Gen处理FLS 24、48、72 h,采用MTT法检测Gen对FLS增殖的影响;免疫印迹(Western blot)法检测Gen对CIA大鼠FLS凋亡蛋白bcl-2、bax表达的影响;West-ern blot法检测不同浓度的Gen处理后的CIA大鼠FLS中AKT和p-AKT表达情况。结果 50、100、200μmol.L-1的Gen均能抑制CIA大鼠FLS的增殖,且能够调节CIA大鼠FLS凋亡蛋白的表达,呈剂量依赖性关系;Gen对细胞中AKT蛋白表达无影响,不同浓度的Gen作用于FLS 72 h后p-AKT表达均有降低(P<0.05)且随Gen浓度的增加p-AKT表达逐渐降低。结论 Gen能够调节CIA大鼠FLS增殖与凋亡的平衡,其作用机制可能与下调PI3K/AKT信号传导通路的酪氨酸激酶,抑制AKT的磷酸化有关。     

3-溴丙酮酸通过AMPK/mTOR信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡/自噬失衡的作用北大核心CSCD

目的基于AMPK/mTOR信号通路探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡、自噬的调控作用和机制。方法使用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导体外培养的大鼠FLS来构建类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型。MTT实验检测TNF-α诱导FLS以及3-BrPA治疗FLS的适宜浓度,划痕实验和Transwell实验检测3-BrPA对FLS迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术和JC-1线粒体膜电位实验检测FLS的凋亡情况,mCherry-EGFP-LC3B过表达质粒检测FLS自噬流变化,Western blot检测FLS凋亡/自噬相关蛋白及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果3-BrPA(15μmol·L^(-1))明显抑制了TNF-α(25μg·L^(-1))刺激下FLS的增殖、迁移和侵袭。此外,还促进FLS凋亡、下调FLS线粒体膜电位并阻断FLS的自噬流。Western blot检测结果显示,相比于TNF-α组,3-BrPA上调caspase-3、Bax、P62和p-mTOR/mTOR的表达,下调LC3B、Beclin1、Bcl-2和p-AMPK/AMPK的表达。结论3-BrPA能够在体外调节大鼠FLS凋亡/自噬失衡来抑制其异常活化,其机制可能与抑制AMPK/mTOR信号通路有关。     

Ang-2和VEGF在类风湿关节炎滑膜组织中的表达研究

目的研究Ang-2和VEGF在类风湿关节炎滑膜组织中的表达及其对类风湿关节炎血管新生和病情进展的意义。方法选取34例RA和30例OA患者的滑膜组织，分别用免疫组化方法检测Ang-2和VEGF在类风湿关节炎滑膜组织中的表达水平及二者的相关性。结果RA滑膜组织衬里层与衬里下层的成纤维细胞、巨噬细胞样细胞、血管内皮细胞均见Ang-2和VEGF的阳性表达分布，两者比较，阳性细胞的染色程度、染色细胞数与分布范围大致相等。RA患者滑膜Ang-2和VEGF表达水平明显高于对照组。结论Ang-2和VEGF与RA的发生、发展密切相关，VEGF可能通过上调Ang-2促进RA的血管新生．阻抗Ang-2和VEGF有望成为类风湿关节炎治疗新的靶点。     

蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞Bax、Bcl-2的影响

目的观察蜂毒注射液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(类风湿关节炎-FLS)B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)m RNA和蛋白的影响,探讨蜂毒注射液治疗类风湿关节炎的作用机制。方法滑膜组织取自行关节置换或关节镜手术的4名活动期类风湿关节炎患者,分离出FLS并原代培养,逆转录–聚合酶链反应(RT-PCR)观察Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测Bax、Bcl-2蛋白水平的变化。结果与对照组比较,蜂毒注射液4、8、16 mg/L组能促进Bax mRNA表达(P<0.05),蜂毒注射液8、16 mg/L组抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.05、0.01);蜂毒注射液4、8、16 mg/L组提高Bax蛋白水平,降低Bcl-2蛋白水平(P<0.05、0.01),且有一定的剂量相关性。结论蜂毒注射液可能通过抑制Bcl-2蛋白、促进Bax蛋白的表达,达到促进类风湿关节炎-FLS凋亡的作用。     

儿茶素对IL-1α诱导佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的:研究儿茶素(catechin,Cat)对重组大鼠白细胞介素1α(rIL-1α)诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响,并探讨其部分机制。方法:采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠AA模型,分离培养大鼠成纤维样滑膜细胞,用MTT法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(R IA)测定FLS产生PGE2和cAMP水平。结果:选择10 ng.mL-1为rIL-1α的最佳刺激浓度,Cat(100,50,25 mg.mL-1)体外给药可不同程度地抑制rIL-1α对AA大鼠FLS的促增殖反应,明显下调升高的PGE2的水平,明显上调降低的cAMP水平。结论:rIL-1α可以促进AA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2,Cat能明显逆转rIL-1α对FLS的影响。     

低分子量肝素干扰免疫细胞黏附类风湿性关节炎滑膜细胞的体外研究

目的:研究低分子量肝素(LMWH)对免疫细胞黏附类风湿性关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)的影响和初步机制,探讨LMWH在RA抗炎应用中的可行性。方法:用流式细胞仪定量计数法研究LMWH在体外干扰健康人外周血单核细胞(PBMC)黏附RAFLS的作用。用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测体外培养的RAFLS中血管诱导生成因子61(CYR61)表达格局。结果:在FLS培养系统中加入PBMC时,PBMC明显黏附于FLS。当加入LMWH时,PBMC对于FLS的黏附减少,表现为脱落PBMC数量增加。随着加入LMWH剂量增加,脱落PBMC数量相应增加。结论:RA患者滑膜组织高表达CYR61分子。LMWH能抑制RAFLS和PBMC的黏附,且呈剂量依赖性。LMWH干扰PBMC黏附FLS的作用与竞争结合了CYR61上的硫酸肝素位点有关。     

HMGBl结合白细胞介素-1β及脂多糖对RA患者FLS增殖、炎症因子分泌的影响

目的:HMGBl结合白细胞介素-1β及脂多糖对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、炎症因子分泌影响。方法:将120例RA患者分作A、B、C3组,每组各40例,A组用小剂量HMGBl结合白细胞介素-1β及脂多糖联合检查,B组为中等剂量,C组为大剂量,对比3组检测结果。结果:3组FLS呈增值现象,但组间比较无统计学意义,P0.05;3组IL-6、IL-8、MMp-3均增加,组间对比有统计学意义,P0.05。结论:HMGBl结合白细胞介素-1β及脂多糖,会促使RA患者FLS增殖、炎症因子分泌。     

中医药介导OPG/RANK/RANKL信号通路防治类风湿关节炎的研究进展

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种临床常见的以滑膜炎为主的自身免疫性疾病。炎性细胞因子和破骨细胞刺激滑膜组织增生、炎症反应、骨质破坏及关节功能障碍等，在RA的致病因素中占据关键位置。本文对中药单体及其提取物、中药复方及制剂、中药配伍，以及中医治疗通过调控骨保护蛋白（osteoprotegerin,OPG）/NF-κB受体激活因子（receptor activator of NF-κB, RANK）/NF-κB配体激活因子（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）信号通路干预RA的相关研究进行综述。结果表明，中药中的有效分子机制不同，但是可以起到调控信号通路的作用，刺激成骨细胞活性，抑制炎性细胞因子分泌，减少破骨细胞分化，从而防治RA，为中医药多靶点、多途径治疗RA提供理论依据。