胎儿头皮毛囊内黑素细胞HMB-45和NKI/beteb的表达

目的：观察黑素细胞在胎儿头皮内的定位。方法：获取胎儿头皮（胎龄7月,畸形引产,死亡2h）,制备冰冻切片,分别用HMB-45和NKI/beteb抗体进行免疫荧光染色和免疫组化染色,激光共聚焦显微镜和倒置显微镜观察摄片。结果：NKI/beteb阳性细胞主要位于胎儿头皮的毛囊外根鞘隆突区,也见于毛球处、表皮基底部。HMB-45阳性细胞主要存在于毛球部、毛母质和表皮基底部,外根鞘区表达则阴性。结论：胎儿头皮毛囊内存在不同状态的黑素细胞,位于毛囊外根鞘隆突区的黑素细胞是黑素母细胞。     

Cajal间质细胞在大鼠慢传输便秘模型结肠中的变化

目的研究Cajal间质细胞（ICC）与慢传输型便秘（STC）的关系。方法用复方地芬诺酯灌胃的方法建立大鼠慢传输便秘模型（STC组）,Westernblot法测定STC组与对照组大鼠升结肠和降结肠组织ICC的特异性标志物c—kit变化情况,利用其与对应的内参B—actin灰度值的比值作为各组c—kit蛋白相对含量。结果STC组大鼠日均粪便量为（1．3±0．7）g／100g,比对照组的（1．6±0．9）g／100g明显减少,差异有统计学意义（t=10．798,P〈0．05）。STC组首粒黑粪排出时间为（461．6±150．8）min,较对照组大鼠的（351．3±119．9）min显著延长（t=2．291,P〈0．05）。STC组与对照组升结肠c—kit灰度比平均值分别为0．277±0．077和0．576±0．081（t=10．719,P〈0．05）;降结肠c—kit灰度比平均值分别为0．280±0．075和0．571±0．079（t=10．700,P〈0．05）;c．kit在STC组升结肠和降结肠的表达均下调,差异均有统计学意义。结论ICC在升结肠和降结肠的减少可能对慢传输型便秘的发生与发展有一定作用。     

干细胞因子及肥大细胞与肾脏纤维化的研究进展

干细胞因子（stem cell factor，SCF）又称为干细胞生长因子（stem cell growth factor，SCGF）、肥大细胞生长因子（mast cell growth factor，MGF）、steel（SL）factor和c—kit蛋白配体（c—kit ligand，KL），是1990年来发现的一种重要的造血生长因子。SCF主要由骨髓基质细胞（包括脂肪细胞、成纤维细胞和内皮细胞）产生。干细胞因子受体（SCFR）即C—kit，表达于多种干细胞和肥大细胞，SCF必须在C-kit存在时才能起生物学作用。近年来许多研究表明肥大细胞与多种肾脏疾病的肾纤维化相关。SCF对肥大细胞在组织中的募集和促进组织纤维化的病理过程中所起的作用引起了人们的极大关注。本文主要就SCF与肥大细胞的关系及在肾脏纤维化中所起作用作一介绍。     

CYLD蛋白在皮肤附属器肿瘤中的表达和比较研究

目的:研究CYLD蛋白在毛发上皮瘤、毛母细胞瘤和汗管瘤等皮肤附属器肿瘤中的分布、表达特征,探索皮肤附属器肿瘤的发病机理。方法:收集毛发上皮瘤、毛母细胞瘤和汗管瘤患者皮损,进行CYLD蛋白免疫组织化学染色,并通过IPP软件测定平均光密度值进行半定量分析。结果:毛发上皮瘤组、毛母细胞瘤组的平均光密度值均低于正常人毛囊对照组(P0.001),但毛发上皮瘤组和毛母细胞瘤组CYLD蛋白平均光密度值比较,差异无统计学意义(P0.05)。汗管瘤组的平均光密度值低于正常人汗腺对照组(P0.001)。结论:CYLD蛋白表达于正常角质形成细胞(基底层和颗粒层为主)、毛囊、汗腺和皮脂腺的细胞质和细胞核周围区域;毛发上皮瘤、毛母细胞瘤、汗管瘤的肿瘤组织中CYLD蛋白表达水平均显著下降,提示这三种皮肤附属器肿瘤的致病机理可能与CYLD蛋白表达下调有关。     

IFN-γ对大鼠创面愈合中Smad7表达的影响

目的：将干扰素γ（IFN-γ）应用于大鼠创面,观察创面肉芽组织的生长、成纤维细胞数目,分析IFN—γ对Smad7的影响。方法：选取成年SD大鼠127只,建立大鼠创伤模型。实验分成A、B、C、D、E共5组,每组25只。A组为生理盐水溶剂对照组,B组为IFN—γ 500U／ml溶剂剂量组,C组为IFN—γ 1000U／ml溶剂剂量组,D组为2000U／ml溶剂剂量组,E组为空白组,正常对照组2只,为未损伤的正常大鼠。分别于创伤第3、7、10、14、21日随机选取各组5只大鼠采用过量麻醉处死,剪取创面肉芽组织,分别行HE常规染色,在光学显微镜下观察新生肉芽组织厚度、计数成纤维细胞数。行免疫组化染色,在光学显微镜下观察肉芽组织中Smad7的表达情况。结果：各时间点A、B组肉芽组织厚度较C、D组致密且厚（P〈0．001）,E组肉芽组织厚度介于A、B组和C、D组之间,（P〈0．05）;200倍光镜下,目测计数成纤维细胞,伤后第3、21天,各组别成纤维细胞数量无差异（P〉0．05）,伤后第7、10、14天,A、B组成纤维细胞数量比C、D、E组明显增多（P〈0．001）;通过图像分析检测Smad7平均灰度和平均光密度。Smad7在伤后第3天、第14天表达较强,在C、D组中各时相的表达强于A、B、E组（P〈0．001）,但c组和D组、A组和B组组间比较无差异（P〉0．05）。结论：干扰素γ（IFN—γ）可使新生肉芽组织生长缓慢、成纤维细胞数量减少,延长创面愈合时间,并可使大鼠皮肤创面中Smad7表达增强。     

原癌基因c-kit突变在胃肠道基质瘤临床预后中的意义

目的 探讨c—kit基因突变对胃肠道基质瘤（GIST）的发病及在临床病理和预后中的意义。方法 采用聚合酶链反应单链构象多态性技术（PCR—SSCP）方法检测106例GIST中c-kit基因突变的情况，并对其中的57例进行临床随访。结果全组基因突变率为45．3％（48／106）；良性GISTc-kit基因突变率为4．9％（2／41），恶性GISTc—kit基因突变率为70．8％（46／65），c-kit基因突变阳性组的1，3，5年生存率及中位生存期均明显低于突变阴性组。对肿瘤大小、肿瘤性坏死、浸润程度、核分裂象计数、核异型性等指标的比较，突变阳性组和阴性组均存在显著差异（P〈0．005）。邻近组织的侵袭及肿瘤的转移、复发的发生率突变阳性组均明显高于突变阴性组。结论 c—kit基因突变在GIST的发生发展中可能发挥着重要作用，可以作为判断GIST患者临床预后的一个重要指标。     

c-kit受体在黄褐斑中的表达

目的:检测c-kit受体在色素性疾病中的表达,初步认识c-kit受体在黄褐斑色素沉着发生机制中的作用。方法:取黄褐斑(实验组)皮损,以黑变病(对照组1)及炎症后色素沉着(对照组2)皮损为对照,利用免疫组化二步法,检测c-kit受体在黄褐斑、黑变病及炎症后色素沉着皮损中的分布与表达,使用显微图像分析法,进行染色后的病理图像形态学定量分析,检测各组标本中c-kit受体的平均积分光密度(OPTDM),并进行统计学分析。结果:c-kit的阳性表达产物定位于表皮基底层黑素细胞、角质形成细胞胞浆或细胞膜表面及毛囊周围,黄褐斑组中c-kit平均积分光密度值1.18±0.38明显高于黑变病0.38±0.08及炎症后色素沉着0.42±0.07组差异显著(P<0.01),而后两者无明显差异(P>0.01)。结论:c-kit受体在黄褐斑皮损中的表达较在黑变病及炎症后色素沉着皮损中的表达显著增高,c-kit受体在黄褐斑色素沉着中可能起重要调控作用。     

小肠旋毛虫感染对结肠黏膜表皮钙黏附素的影响及机制研究

目的研究旋毛虫T．spiralis感染对小鼠结肠黏膜表皮钙黏附素（E—cadherin）的影响及其作用机制。方法选择BALB／c小鼠和STAT6基因敲除（Th2缺乏）的STAT6-／-小鼠,分为T．spiralis感染组和无感染的对照组,每组中BALB／c小鼠和STAT6-／-小鼠各5只。感染7d后直肠灌注辣根过氧化物酶（HRP）,灌注后0、60和120min分析小鼠血液中HRP水平以检测结肠通透性;随后处死小鼠,取小鼠结肠,免疫荧光染色观察小鼠结肠黏膜中E—cadherin的分布,Westernblot检测小鼠结肠黏膜中E—cadherin的表达,ELISA法检测肠系膜淋巴结中IL．4的表达。结果感染组BALB／c小鼠血清HRP水平较对照组显著增高（P〈0．05）：而STAT6-／-小鼠感染组与对照组血清血清HRP水平差异无统计学意义（尸〉0．05）。BALB／c小鼠感染组结肠上皮细胞中E．cadherin均位于细胞质,而在对照组中位于细胞膜;同时,感染组E．cadherin表达水平明显较对照组降低。而STAT6-／-小鼠感染组与对照组中E．cadherin的分布和表达均无明显变化。BALB／c小鼠感染组肠系膜淋巴结IL。4水平为（193．0±12．5）ng／ml。明显高于BALB／c小鼠对照组和STAT6-／-小鼠感染组[（21．0±2.3）ng／ml和（15．0±3．1）ng／ml;均P〈0．05]。结论T．spiralis感染能够导致小鼠结肠上皮E—cadherin分布和表达的改变,其作用机制可能是通过诱导Th2的分泌来实现。     

罗格列酮对阿霉素肾小球硬化大鼠肾脏Ⅳ型胶原表达的影响

目的：探讨罗格列酮对阿霉素诱导的肾小球硬化大鼠肾脏Ⅳ型胶原表达的影响。方法：SD大鼠随机分成3组：对照组,模型组（阿霉素硬化组）,罗格列酮治疗组。采用单侧肾切除联合两次尾静脉注射阿霉素的方法建立肾小球硬化大鼠模型。HE染色后在光镜下观察各组大鼠肾脏组织病理学改变,并计算肾小球硬化指数,免疫组化方法检测各组大鼠肾组织中Ⅳ型胶原的表达情况。结果：肾小球硬化指数分别为模型组（158.27±38.46）,治疗组（92.52±29.58）,对照组（15.85±8.12）,治疗组硬化程度较模型组明显减轻,差异具有统计学意义（P〈0.05）;各组大鼠肾组织Ⅳ型胶原的表达：模型组和治疗组大鼠肾组织Ⅳ型胶原表达明显强于对照组,Ⅳ型胶原的积光度、染色面积、平均光密度显著升高,差异有统计学意义（P〈0.01）;治疗组大鼠肾组织Ⅳ型胶原表达低于模型组,Ⅳ型胶原的积光度、染色面积、平均光密度显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：罗格列酮可通过抑制Ⅳ型胶原的表达,减轻肾小球硬化,从而发挥其肾脏保护作用。     

三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞的影响

目的：研究三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞形态及酪氨酸酶活性的影响。方法：采用胶原酶和胰酶两步消化法,分离培养毛囊内黑素细胞。多巴氧化法测酪氨酸酶活性,硝酸银染色观察细胞形态的变化。结果：三种人工合成寡核苷酸序列可以显著增强酪氨酸酶活性（P〈0.05）;银染色细胞显示CpG-1826和CpG-2006组胞体变得肥大,黑素化明显,树突增多,与对照组相比有显著差异。结论：部分人工合成寡核苷酸序列可促进毛囊黑素细胞的酪氨酸酶活性和树突增加,为白癜风皮损复色的研究奠定基础。     

男性型秃头患者头皮雌,雄激素受体的检测及头发移？…

目的 研究头皮局部性激素水平在男性型秃发发生机理中的作用。方法 自１９９６－１９９８年应用荧光素类固醇激素结合法,对８例男性型秃发患者的正常生发区和秃发区的雌,雄激素受体进行对比检测,同时对自体头发移植术后供,受区头皮再生检测。结果 秃发区头皮外毛根鞘,皮脂腺及毛乳头中的雄激素受体阳性细胞百分率明显高于正常生发区,秃发区外毛根鞘中雌激素受体阳性细胞百分率明显高于正常生发区,而毛乳头中则低于正常生发     

人毛囊外根鞘细胞的分离及培养

目的 建立毛囊外根鞘细胞的分离和培养方法.方法 利用中性蛋白酶分离得到单个毛囊,采用组织块法和消化法进行细胞培养,倒置显微镜、扫描及透射电镜观察细胞形态,培养各代细胞做生长曲线,RT-PCR检测干细胞相对特异性标识分子K15和细胞分化标识分子外皮蛋白的mRNA表达情况.结果 组织块法和消化法均能培养出毛囊外根鞘细胞,并可传代培养,组织块法细胞生长慢,不易汇合,消化法细胞增殖快.各代细胞中K15和外皮蛋白mRNA均有表达.结论 消化法适合毛囊外根鞘细胞的体外培养,该方法的建立为进一步分离纯化培养毛囊干细胞奠定了基础.     

角蛋白在头皮中的分布及其在干细胞研究中的意义

目的：研究不同类型角蛋白（Cytokeratin，CK）在头皮及毛囊结构中表达分布情况。方法：将头皮病理切片和游离培养的毛囊使用不同类型角蛋白抗体进行免疫组化染色，检测角蛋白的分布情况。结果：CK15主要分布在毛囊隆突部，部分毛囊外根鞘最外层也有一定的表达；CK19主要分布在汗腺、毛囊外根鞘最外层和皮肤的基底层；CK16在表皮层和毛囊外根鞘均有阳性表达；CK10主要分布在头皮表皮的基底上层和皮脂腺腺泡的最外层。结论：不同类型角蛋白在头皮和毛囊结构中具有明显差异性，CK19和CK15阳性表达细胞可能具有干细胞特性。     

男性雄激素源性脱发患者毛囊干细胞增殖和凋亡的初步研究

目的:了解男性雄激素源性脱发(androgenetic alopecia,AGA)患者毛囊干细胞增殖和凋亡情况.方法:对来自15例男性AGA患者和3例正常人的头皮,采用双重免疫荧光的的方法检测毛囊干细胞增殖和凋亡.结果:CK15标记的毛囊干细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性细胞率由高到低依次为:正常对照组、患者枕部、脱发过渡区和脱发区,除脱发过渡区与脱发区间比较无显著性差异(P＞0.05)外,其它各组间比较,均有显著性差异(P＜0.05).各组毛囊中CK15阳性的细胞中均无TUNEL阳性细胞,TUNEL阳性细胞主要分布于内毛根鞘,总的TUNEL阳性细胞率在各组间无明显差异(P均＞0.05).结论:毛囊干细胞增殖活性下降可能参与男性AGA的脱发过程.     

白癜风患者免疫球蛋白、补体及补体活化成分的变化

目的:探讨免疫因素在白癜风发生中的作用。方法:应用散射比浊法检测了23例白癜风患者和对照组30例健康人血清IgG、IgA、IgM、C3和C4水平,同时检测了18例白癜风患者皮损处疱液、21例白癜风患者正常皮肤疱液和对照组12例健康人皮肤疱液中IgG、IgA、IgM、C3和C4的含量,应用免疫组织化学两步法检测9例白癜风患者皮损和对照组10例健康人皮肤C5b-9沉积情况。结果:白癜风患者血清IgG、IgA、IgM、C3和C4水平与对照组无显著性差异,三组疱液间各项指标亦无显著性差异(P值均>0.05);白癜风皮损表皮C5b-9沉积显著高于正常皮肤(P<0.01)。结论:白癜风皮损表皮中存在异常的免疫反应,该反应可能与白癜风的发生、发展密切相关。     

游离毛囊体外培养模型构建及形态学检查的实验研究

目的：构建游离毛囊体外培养模型，观察离体培养人头皮毛囊形态变化。方法：在Williams E无血清培养基中，建立离体人头皮毛囊培养模型；通过倒置显微镜观察毛囊的形态变化；目镜测微器测量毛囊长度；3H-TdR掺入检测毛囊DNA合成率；组织学检测用冰冻切片光镜观察和电镜切片透射电镜观察。结果：毛囊有不同程度的生长，随时间后移形态结构由清晰逐渐变为模糊；冰冻切片HE染色后在光学显微镜下可清楚分辨出毛囊的结构；培养3天毛囊的内外根鞘中可见凋亡细胞，内皮根鞘较外皮根鞘明显多见。结论：在离体培养人头皮毛囊时，Williams E无血清培养基是合适的选择，该模型也是筛选促进或抑制毛发生长药物的良好模型；离体培养毛囊组织学检测用冰冻切片可以简化步骤；透射电镜可以用来观察离体培养的毛囊的形态和超微结构的变化，也可以用来协助观察细胞凋亡的状况。目镜测微器测量毛囊长度简单可行，辅以3H—TdR掺入则更为客观。     

大鼠毛囊细胞构建组织工程全层皮肤

目的:以大鼠毛囊细胞为种子细胞培养组织工程皮肤。方法:分离培养新生SD大鼠毛囊外根鞘细胞和真皮鞘细胞,以这两种细胞为种子细胞构建全层组织工程全层皮肤。结果:成功构建了具有表皮层和真皮层的组织工程皮肤。结论:毛囊细胞可以用作种子细胞来构建组织工程全层皮肤。     

利用毛囊干细胞和成纤维细胞重建全层皮肤的研究

目的建立利用毛囊干细胞和成纤维细胞进行全层皮肤重建的实验方法.方法取美容手术切取的头皮组织,K19免疫荧光染色定位毛囊干细胞,消化、分离、体外培养,以胶原-成纤维细胞聚合物为基质,采用气-液界面对第2代毛囊干细胞立体培养14 d,建立全层皮肤培养模型,并行组织学及K1免疫荧光染色观察.结果K19免疫荧光染色定位毛囊干细胞存在于毛囊外根鞘处,与成纤维细胞联合体外气-液界面立体培养14 d,获得的皮肤类似物,可见真皮基底膜形成,表皮多层上皮有序、多角形排列,上层细胞出现角化,真皮部成纤维细胞均匀分布于胶原基质中,角质细胞形成分化特异标志物K1染色阳性.结论毛囊外根鞘处的毛囊干细胞具有高增殖能力并向表皮细胞分化,可成功利用毛囊干细胞和成纤维细胞进行皮肤重建,为临床应用奠定基础.     

Uterine epithelioid leiomyosarcomas with clear cells: reactivity with HMB-45 and the concept of PEComa

In this study, we investigated HMB-45 expression in epithelioid uterine leiomyosarcomas with clear cell areas. From 12 epithelioid leiomyosarcomas, we selected 5 that had: 1) clear cell areas and 2) spindle cell areas that were at least focally positive for desmin and caldesmon. The patients' ages ranged from 47 to 82 years (mean 64 years). Presenting symptoms were uterine bleeding (three), abdominal pain (one), and a pelvic mass (one). There was no history of tuberous sclerosis or lymphangioleiomyomatosis. One patient had stage II disease, one stage III, and three stage IV. All were treated with total abdominal hysterectomy and bilateral salpingo-oophorectomy. Two received radiotherapy, and three were also treated with chemotherapy. The tumors ranged in size from 4 x 3 x 3 cm to 10 x 7 x 6 cm; all had significant cellular atypia, areas of coagulative necrosis, and between 10 and 90 mitoses per 10 high power fields. Vascular invasion was seen in three cases. The epithelioid component varied from 50% to 90% in each case; and the percentage of clear cells was < 1% in one case, 5% in one case, and 10% to 80% in three cases. Smooth muscle actin and desmin were positive in all cases. Four cases were positive for HMB-45 only in the clear cell areas. The tumor with < 1% of clear cells was negative for HMB-45. All were negative for S-100 and c-kit. Three patients died of disease at 9, 30, and 32 months; one patient is alive with progressive disease at 6 months, and one patient (stage II disease) is alive with no evidence of disease at 8 months. Unequivocal uterine epithelioid leiomyosarcomas may have clear cells positive for HMB-45. These tumors might belong to the group of lesion designated as PEComas; however, it is advisable to designate them as uterine leiomyosarcomas. In uterine smooth muscle tumors, some epithelioid cells most likely undergo clear cell changes and become positive for HMB-45. It would be advisable to perform this stain in all epithelioid smooth muscle tumors of the uterus.